средство, обладающее ангиотропным действием (варианты)

Формула изобретения

1. Средство, обладающее ангиотропным действием, характеризующееся тем, что оно содержит селенофосфолипокумаринопротеин, представляющий собой две полипептидные А- и В-цепи, первая из которых состоит из 20 аминокислот, а вторая из остатков 29 аминокислот, соединенных дисульфидным мостиком по остаткам цистеина, при этом селен образует связи между аминокислотами валином и лейцином, между глутаминовыми кислотами и две диселенидные связи между А- и В-цепью, а кумарины, полученные путем экстракции из бобовых, злаковых, гречишных, присоединены к карбоксильным группам боковых кислот - остаткам глутаминовой и/или аспарагиновой кислот и/или к С-концевым карбоксильным группам, при этом молярное соотношение протеин:фосфолипид:селен: кумарин составляет 1:1:8:4 соответственно.

2. Средство, обладающее ангиотропным действием, характеризующееся тем, что оно содержит селенофосфолипокумаринопротеин, охарактеризованный в п.1, к карбоксильным группам боковых цепей и/или концевого углерода которого присоединены флавоноиды, полученные путем экстракции из хвоща полевого, горца птичьего, при этом молярное соотношение протеин: селен: кумарин: флавоноиды составляет 1:1:8:4:5 соответственно.

3. Средство, обладающее ангиотропным действием, характеризующееся тем, что оно содержит селенофосфолипокумаринопротеин, охарактеризованный в п.1, к которому по карбоксильным группам (-СОО) глутаминовой кислоты и, возможно, пролина, а также С-концевым группам присоединены катионы кальция (Са²⁺), по аминогруппам (-NH₃ ⁺) гистидина, аргинина и N-концевой группе присоединены дигидроортосиликат-анионы (H₂SIO₄ ^2-) к А- и/или В-цепям одной или соседних молекул селенофосфолипокумаринопротеина, при этом молярное соотношение протеин: фосфолипид: селен: кумарин: Са²⁺:Н₂SIO ₄ ^2- составляет 1:1:8:4:8:4 соответственно.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано при лечении облитерирующих заболеваний сосудов конечностей, характеризующихся сужением просвета сосудов, нарушением кровообращения и возникновением трофических нарушений в тканях, в частности при облитерирующем атеросклерозе, облитерирующем тромбангиите, диабетическом артериите (диабетических ангиопатиях).

Как известно, заболевания сосудов конечностей сопровождаются нарушением кровообращения и представляют одно из самых распространенных заболеваний. Средства, используемые для устранения поражений периферических сосудов, направлены на улучшение микроциркуляции и обладают ангиопротекторным, антиагрегантным, и фибринолитическим действием. В то же время применение блокаторов кальциевых каналов, разнообразных спазмолитиков, ганглиоблокаторов, а также блокаторов альфа-адренорецепторов не сопровождается выраженным биологическим и терапевтическим эффектом и не в состоянии предотвратить развитие облитерирующего ишемического процесса. Кроме того, использование этих препаратов вызывает такие побочные явления, как головная боль, диарея, тошнота, рвота, покраснения кожи, тахикардия, различные аллергические реакции. В значительном числе случаев существуют и противопоказания к употреблению этих препаратов - в их числе сердечная недостаточность, заболевания легких, нарушения функции печени и др. В связи с тем что эти лекарственные средства не обладают физиологическим действием на микроциркуляторное русло, они не в состоянии предотвратить развитие ишемического процесса и восстановить капилляроэндотелиальную систему (А.Т.Бурбелло, А.В.Шабров, П.П.Денисенко в книге "Современные лекарственные средства", СПб., Москва, 2002, стр.108-117).

В свете представленных данных возникает вопрос о создании биологически активных ангиотропных лекарственных веществ, оказывающих непосредственное действие на эндотелиальную систему микроциркуляторного русла, не обладающих побочными эффектами и воспринимаемых тканями организма как естественное органическое средство.

Как известно, все кровеносные сосуды выстланы эндотелиальными клетками, которые обладают неограниченной способностью изменять свою численность и расположение в соответствии с локальными требованиями. Данная система клеток обладает большой способностью к гибкой адаптации в системе жизнеобеспечения с разветвлениями во всех областях тела. Без этой главной функции эндотелиальных клеток процессы метаболизма и заживления ткани были бы невозможны. Кроме того, следует учесть, что эндотелиальные клетки выделяют ряд гормонов через базальную и апикальную мембраны, а также секретируют ряд факторов роста, принимающих активное участие в ангиогенезе-васкулотропин, тромбоспондин и др. Гормоны эндотелиокапилляров, так же как и факторы роста, участвуют в пролиферации эндотелия, образовании трубки сосуда, синтезе коллагена, адгезивных белков и, что особенно важно, образовании базальной мембраны. Кроме того, клетки эндотелия секретируют ряд хемотаксических факторов, что обеспечивает адгезию, а также миграцию иммунокомпетентных клеток из сосудов в ткань, что обеспечивает регуляцию объема локального кровотока и проницаемость капилляров. (Ноздрачев А.Д. и др., Начала физиологии, СПб., 2001, стр.572-574).

В связи с этим при создании селеновых протеиновых органических веществ необходимо прежде всего учитывать действие селена как активного микроэлемента, участвующего в процессе структурирования молекулы, а также активную роль фосфолипопротеина, играющего важную роль в свертывающей системе крови. Так как при облитерирующих заболеваниях сосудов конечностей непосредственное участие принимает весь комплекс фосфолипопротеинов, усиливающий свертывание крови, в ангиотропнодействующую молекулу лекарственного средства необходимо ввести фосфолипопротеин, корригирующий процесс свертывания крови, нормализуя тем самым внутреннюю систему свертывания. Как фосфолипопротеиновая, так и липопротеиновая системы крови, взаимно дополняя друг друга, будут участвовать в формировании ферментных компексов, осуществляющих взаимодействие факторов свертывания с коллагеном самих сосудов (Р.Шмидт, Г.Тевс; в книге "Физиология человека", том 2, Москва: Мир, 1996, стр.433-436). Поэтому молекула селенонофосфолипопротеина как матрица ангиотропного органического вещества должна быть направлена прежде всего на регуляцию процесса свертывания крови.

В формировании гомеостатической регуляции свертывания крови одну из важных ролей выполняют ионы кальция, которые совместно с факторами плазмы формируют ферментный комплекс. Кроме того, активация факторов 11 и 9, участвующих в свертывании крови, невозможна без ионов кальция, косвенно связанного путем протеолиза с фактором 10. Следует учитывать также активную роль ионов кальция в активации протеинкиназы и фосфорилирования белков; в данном случае ионы кальция способствуют передаче гормональных сигналов через мембранные рецепторы (Биохимия. Под ред. Е.С.Северина, ГЭОТАР-медия, 2005 г., стр.550-557). Не менее важную роль в формировании жизнедеятельности коллагеновой системы микроциркуляторного русла играет и кремний. Как известно, в наиболее высоких концентрациях кремний содержится в соединительной ткани - стенках сосудов, связках, костях и других видах тканей. Особенно важна роль кремния как структурного элемента самой соединительной ткани. Кремний в виде различных соединений находится в большинстве тканей тела человека, влияя на обмен липидов и образование костной ткани. В связи с этим роль кремния в жизнедеятельности коллагеновой системы сосудов крайне велика. (А.В.Скальный, И.А.Рудаков Биоэлементы в медицине. - Москва: Мир, 2004 г., стр.136-139).

Селен как активный микроэлемент участвует в жизнедеятельности тканевых структур организма, особенно коллагеновой системы. Известно также действие его на активацию фибробластов и ретикулоэндотелиальную систему. В связи с этим он может непосредственно влиять на процессы ангиогенеза, то есть формирование капилляров путем отпочковывания эндотелиальных клеток от стенки существующего малого сосуда. В процессе ангиогенеза внедряющиеся эндотелиальные клетки должны отвечать на сигнал, который подает ткань, требующая притока крови. Под действием фосфолипопротеиновых веществ и селена эндотелиальные клетки во время ангиогенеза секретируют активатор плазминогена, который позволяет им прокладывать путь в базальной мембране родительского капилляра или венулы. Одновременное действие селена и фосфолипопротеина на фибробласты приводит к выделению кислого фактора роста фибробластов и основного фактора роста фибробластов. Помимо выраженного действия их на эндотелиальные клетки они стимулируют пролиферацию фибробластов и клеток ряда других типов. Учитывая иммунотропное действие селена на макрофаги и тучные клетки, происходит выделение всех ангиогенных факторов в процессе заживления и роста ткани (Б.Албертс, Д.Брей и др. в книге "Молекулярная биология клетки", Том 3, Москва: Мир, 1994 г. стр.156-169).

Из растительных веществ, обладающих избирательным действием на микроциркуляторную систему и являющихся природными органическими средствами, наибольший интерес представляют донник лекарственный и хвощ полевой.

Действие донника лекарственного основано на присутствии в нем кумаринов и флавоноидов, особенно кумариносодержащих веществ. Как установлено, действие препаратов из этого растения распространяется главным образом на сосудистую систему. Доказано, что благодаря доннику капиллярная резистентность повышается и проницаемость капилляров снижается. Главная область применения данных растительных препаратов - заболевания вен, в частности варикоз сосудов ног и геморрой. В монографии, разработанной комиссией Государственной службы Здравоохранения Германии в рубрике применения донника и его препаратов указано: "Внутреннее применение: нарушения при хронической венозной недостаточности, такие как чувство боли и тяжести в ногах, ночные судороги в икрах, зуд и отеки, как вспомогательное средство при лечении тромбофлебита, посттромботического синдрома, геморроя и лимфостаза. Наружное применение: ушибы, растяжения и поверхностные кровоизлияния". (Маннфрид Павлов. Энциклопедия лекарственных растений. - Москва: Мир, 1998 г., стр.115-116). В свете представленных данных становится очевидной важная роль кумаринов донника в лечении сосудистой и венозной недостаточности.

Не меньший интерес в плане ангиотропного действия представляют препараты хвоща полевого, содержащего кремниевую кислоту и флавоноиды. Особенно характерно его благотворное действие на соединительную ткань и капиллярную систему (Маннфрид Павлов Энциклопедия лекарственных растений. - Москва: Мир, 1998 г., стр.297-198). Фармакологическое действие флавоноидов состоит в регуляции физиологического действия капилляров, так как они могут повышать их проницаемость при атеросклерозе и тем самым способствуют снижению и нормализации артериального давления. Кроме того, они оказывают спазмолитическое действие - расширяют капилляры, снижают давление крови, расширяют коронарные сосуды и, что самое важное, уменьшают свертываемость крови (Лекарственные растения, Энциклопедический справочник, Киев, 1991 г., стр.15).

Представленные сведения говорят о том, что создание нового класса лекарственных веществ, обладающих ангиотропным действием, должно основываться на структуре и топологии присутствующих в организме активных биомолекул, представленных ионами селена, фосфолипидами, протеиновыми органическими веществами и, самое главное, должны содержать ангиотропные растительные вещества - кумарины и флавоноиды. Новые лекарственные средства по своему строению и механизму действия должны стереохимически, то есть биологически и химически, соответствовать тем веществам организма человека, которые непосредственно осуществляют процесс ангиогенеза и могут использоваться как ангиотропные лекарственные средства.

Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента лекарственных средств - создание нового класса селеновых ангиотропных фосфолипопротеиновых органических веществ, применение которых не будет сопровождаться побочными действиями и вызывать системный лечебный эффект на кровеносную систему - активацию эндотелиальных клеток и окружающих их соединительную ткань.

Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом и представляющая собой следующие варианты.

Первый вариант средства ангиотропного действия содержит селенофосфолипокумаринопротеин, представляющий собой две полипептидные А- и В- цепи, первая из которых состоит из 20 аминокислот, а вторая из остатков 29 аминокислот, соединенных дисульфидным мостиком по остаткам цистеина, при этом селен образует связи между аминокислотами валином и лейцином, между глутаминовыми кислотами и две диселинидные связи между А- и В-цепью, а кумарины, полученные путем экстракции из бобовых, злаковых, гречишных, присоединены к карбоксильным группам боковых кислот - остаткам глутаминовой и/или аспарагиновой кислот, и/или к С-концевым карбоксильным группам, при этом молярное соотношение протеин : фосфолипид : селен : кумарин составляет 1:1:8:4 соответственно.

Второй вариант средства ангиотропного действия содержит селенофосфолипокумаринопротеин, к карбоксильным группам боковых цепей и/или концевого углерода которого присоединены флавоноиды, полученные путем экстракции из хвоща полевого, горца птичьего, при этом молярное соотношение протеин : фосфолипид : селен : кумарин : флавоноиды составляет 1:1:8:4:5 соответственно.

Третий вариант средства ангиотропного действия содержит селенофосфолипокумаринопротеин, к которому по карбоксильным группам (-СОО) глутаминовой кислоты и, возможно, пролина, а также С-концевым группам присоединены катионы кальция (Са⁺), по аминогруппам (-NH ₃ ⁺) гистидина, и N-концевой группе присоединены дигидроортосиликат - анионы (H₂ SO₄ ^2-) к А- и В-цепям одной или соседних молекул селенофосфолипокумаринопротеина, при этом молярное соотношение протеин : фосфолипид : селен : кумарин : Ca⁺ : H₂SO ₄ ^2- составляет 1:1:8:4:8:4 соответственно.

Лекарственное средство, обладающее ангиотропным действием, включает низкомолекулярный белковый компонент, полученный путем экстракции органическими растворителями с последующим высушиванием субстанции и растворением в 60-90% спирте - протеиноорганическое вещество, с введением в него селена, полученного вследствие термолиза селеномочевины и фосфолипидов (фосфоглицерол). Смесь подобных веществ помещают и выдерживают в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле 20-30 ГГц в течение 5 минут. Полученное лекарственное вещество представляет селеновое фосфолипопротеиновое органическое средство, являющееся матрицей ангиотропных селенопротеиновых веществ, в одном миллилитре данного комплекса содержится 30-40 мг субстанции протеина, фосфолипидов и селена 1:1:8.

Для получения селенофосфолипопротеина (SeФЛП) в качестве исходного материала используют зеленую массу белковосодержащих растений, например злаковых, бобовых, листьев кукурузы и др., предварительно высушенных и измельченных. С помощью экстракции эфиром, этиловым спиртом или димексидом из полученного сырья извлекают растительный белок - протеин. Белковый экстракт выпаривают и производят лиофильную сушку; изготовленный порошок растворяют в 60-90%-ном этиловом спирте, после чего вводят селен, полученный термолизом селеномочевины из расчета 20-24 мкг на 1 мл раствора и фосфолипид при молярном соотношении протеин : селен : фосфолипид - 1:8:1. В качестве фосфолипида употребляют фосфоглицерол; синтез препарата осуществляют в электромагнитном высокочастотном поле (мощность 5·10 ^-3 Вт/см², частота 20-30 ГГц в течение 5 минут).

Молекула селенофосфолипопротеина представляет собой две полипептидные альфа- и бета-цепи протеина, соединенные дисульфидным мостиком по остаткам цистеина (альфа-цепь состоит из остатков 20 аминокислот, бета - из остатков 29 аминокислот).

Селен, введенный в растительный протеин после термолиза селеномочевины, образует связи между аминовыми кислотами валином и лейцином, связи между глутаминовыми кислотами и две диселенидные связи между альфа- и бета-цепью. К селенопротеину через концевые карбоксильные группы альфа- и бета-цепей и, возможно, боковые карбоксильные группы присоединен фосфоглицерол. При всех физиологических значениях рН селенофосфолипопротеин ионизирован. Заряженными являются С- и N-концевые группы и связанные с альфа-углеродными атомами боковые цепи, содержащие карбоксильную (-СОО^-) или аминогруппу (-NH₃ ⁺ ).

1. Средство селенофосфолипокумаринопротеин - SeФЛКуП - включает в себя молекулу селенофосфолипопротеина, к которой присоединен кумарин к карбоксильным группам боковых кислот - остаткам глутаминовой и/или аспарагиновой кислот и /или к С-концевым карбоксильным группам через сложную эфирную связь. Молекула селенофосфолипокумаринопротеина представляет собой две полипептидные альфа- и бета-цепи, соединенные дисульфидным мостиком по остаткам цистеина (альфа-цепь состоит из 20 аминокислот, бета - из остатков 29 аминокислот). Селен, полученный путем термолиза селеномочевины, образует связи между аминовыми кислотами валином и лейцином, связи между глутаминовыми кислотами и две диселенидные связи между альфа- и бета-цепью. Молярные соотношения SeФЛКуП - протеин 1 : фосфолипид 1 : селен 8 : кумарин 4.

2. Средство селенофосфолипокумаринофлавонопротеин - SeФЛКуФлП - включает в себя молекулу селенофосфолипокумаринопротеина, к карбоксильным группам боковых цепей и/или концевого углерода которой присоединены биологически активные флавоноиды.

Молекула селенофосфолипокумаринофлавонопротеина представляет собой две полипептидные А- и В-цепи, соединенные дисульфидными мостиком по остаткам цистеина (альфа-цепь состоит из 20 аминокислот, бета - из остатков 29 аминокислот). Селен, полученный путем термолиза селеномочевины, образует связи между глутаминовыми кислотами и двумя диселенидными связями между альфа- и бета-цепью. Молярные соотношения SeФЛКуФлП - протеин 1:фосфолипид 1:селен 8:кумарин 4:флавоноиды 5.

3. Средство кальция дигидроортосиликат селенофосфолипокумаринопротеин включает ионизированный селенофосфолипокумаринопротеин, к которому по карбоксильным группам (-СОС^- ) глутаминовой кислоты (и, возможно, пролина) и С-концевым группам присоединены катионы кальция (Са²⁺), по аминогруппам (NH₃ ⁺ ) гистидина, аргинина и N-концевой группе присоединены дигидроортосиликатанионы (H₂SIO₄ ^2-) к А- и/или В-цепям одной молекулы или соседних молекул селенофосфолипокумаринопротеина. Молярные соотношения данной молекулы SeФЛКуП: Ca²⁺: H ₂SO₄ ^2- протеин 1: фосфолипид 1: селен 8: кумарин 4: Ca²⁺ : H₂SIO₄ ^2-4.

Примеры получения селеновых фосфолипокумаринопротеиновых средств.

Пример 1. Способ получения селенофосфолипокумаринопротеина.

К селенофосфолипопротеину добавляют необходимое количество кумарина, полученного путем экстракции из кумариносодержащих растений - бобовых, злаковых, гречишных. Смесь выдерживают в электромагнитном высокочастотном поле (мощность 5·10 ^-3 Вт/см², частота 20-30 ГГц).

Пример 2. Способ получения селенофосфолипокумаринофлавонопротеина.

К селенофосфолипокумаринопротеину добавляют необходимое количество флавоноидов, полученных путем экстракции из флавоносодержащих растений - хвощ полевой, горец птичий. Смесь выдерживают в электромагнитном высокочастотном поле (мощность 5·10^-3 Вт/см², частота 20-30 ГГц).

Пример 3. Способ получения кальция дигидроортосиликат селенофосфолипокумаринопротеина. К селенофосфолипокумаринопротеину добавляют необходимое количество водного раствора дигидроортосиликата кальция, предварительно подвергнутого электролизу и гидролизу. Смесь выдерживают в электромагнитном высокочастотном поле (мощность 5·10^-3 Вт/см, частота 20-30 ГГц).

Приводим клинические случаи использования различных вариантов селенопротеиновых ангиотропных средств у больных с облитерирующими заболеваниями сосудов конечностей.

Пример 1. С.А. 64-х лет. Диагноз - облитерирующее заболевание сосудов ног, последствие ампутации голени правой ноги.

Считает себя больным на протяжении 15 лет, когда впервые отметил появление неприятных болевых ощущений и утомляемости в ногах. Только через 5 лет после начала заболевания был диагностирован облитерирующей эндартериит. Один раз в год проводилось медикаментозное лечение спазмолитиками и ганглиоблокаторами в сочетании с бальнеотерапией. Тем не менее по мере развития болезни нарастала симптоматика поражения сосудов ног - боли стали сочетаться с трофическими нарушениями в пальцах и тканях стопы справа. Через 10 лет от начала болезни была ампутирована голень правой ноги в верхней трети, так как трофические нарушения приняли необратимый характер. Одновременно появились симптомы нарушения кровообращения и в левой ноге - пальцы ног стали синюшними, холодными на ощупь, что сопровождалось выраженным болевым синдромом. Ультразвуковая диагностика выявила почти полную окклюзию крупных сосудов в подколенной ямке и задней большеберцовой артерии. Несмотря на наличие выраженного болевого синдрома и трофических нарушений больной отказался от операции и дал согласие на применение селенопротеинового ангиотропного средства.

В течение 4 месяцев больному внутривенно вводился 1 мл селенофосфолипокумаринопротеина с 10 мл теплого физиологического раствора. Через полтора месяца от начала лечения отметил уменьшение болей в левой ноге и изменение ее цвета. К концу 3 месяца лечения почти полностью исчезли боли в левой ноге, потеплели пальцы и восстановился естественный цвет кожи. Через 4 месяца больной был консультирован сосудистым хирургом, который отметил клиническое улучшение и нецелесообразность хирургического вмешательства.

Пациент дал согласие на повторный курс лечения. Ультразвуковая диагностика показала некоторое восстановление проходимости магистральных сосудов левой ноги. В данном клиническом случае выявлен относительно благоприятный терапевтичекий эффект при применении селенопротеинового ангиотропного вещества, содержащего кумарины.

Пример 2. Больная Т.Н., 56 лет. Диагноз - начальные явления облитерирующего атеросклероза сосудов ног.

Считает себя больной на протяжении последних 5 лет, когда отметила появление неприятных ощущений в ногах с утомляемостью при ходьбе и физических нагрузках. Применение спазмолитиков и ганглиоблокаторов сопровождалось благоприятным терапевтичеким эффектом. Однако в течение последних 2 лет заболевание обострилось - неприятные ощущения в области икр и голеней сочетались с отеком ног и непереносимостью к холоду. Ультразвуковая дагностика выявила незначительные нарушения проходимости в магистральных сосудах обеих ног. При объективном исследовании отмечалось снижение пульса в дорзальных артериях стоп и задних большеберцовых артериях в области медиальных лодыжек.

С согласия больной проведен курс лечения селенопротеиновым ангиотропным средством - селенофосфолипокумаринофлавонопротеином. В течение 3 месяцев внутривенно вводился 1 мл указанного выше средства с 10 мл теплого физиологического раствора. Уже через месяц больная отметила значительное клиническое улучшение, а к концу лечения констатировала исчезновение болей в области ног, потепление их и устранение отеков. В приведенном случае выраженный клинический эффект наступил от применения ангиотропного средства, содержащего одновременно кумарин и флавоны.

Пример 3. Больной В.Ж., 59 лет. Диагноз - облитерирующее заболевание сосудов ног с синдромом перемежающейся хромоты.

Считает себя больным на протяжении 7 лет, когда впервые отметил появление болей в области икр во время длительной ходьбы. Через 3 года от начала заболевания был определен диагноз облитерирующего заболевания сосудов ног. Неоднократно лечился в стационарах и амбулаторно с применением спазмолитиков, ганглиоблокаторов в сочетании с сероводородными и углекислыми ваннами. Через 5 лет от начала болезни отметил сильные боли в ногах при ходьбе, быструю утомляемость и перемежающуюся хромоту - через каждые 5-7 минут останавливался на 2-3 минуты ввиду приступов болей в области икр обеих ног. Болевые ощущения сопровождались сильным зудом кожи ног в области задних большеберцовых артерий, в связи с чем расчесывал кожу ног до крови. Ультразвуковая диагностика выявила почти полную облитерацию артерий подколенной ямки и задних большеберцовых артерий.

С согласия больного проведен курс лечения селенопротеиновым ангиотропным веществом - кальция дигидроортосиликат селенофосфолипокумаринопротеином. В течение 4 месяцев каждый день больному внутривенно вводилось 2 мл вышеуказанного препарата с 20 мл теплого физиологического раствора. Через полтора месяца лечения больной отметил исчезновение зуда кожи ног, значительное уменьшение болей в икрах во время ходьбы, временные интервалы возникновения перемежающейся хромоты увеличились до 15-20 минут. Через 4 месяца больной констатировал полное исчезновение болей в области икр и восстановление силы мышц ног во время ходьбы. Ультразвуковая диагностика показала частичное восстановление проходимости крупных магистральных сосудов. В данном случае выраженный клинический эффект обусловлен сочетанным действием дигидроортосиликат кальция и селенофосфолипокумаринопротеина.