способ коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией лозартана и резвератрола при l-name-индуцированном дефиците оксида азота

Формула изобретения

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий введение лозартана, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию эндотелия ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-L-аргинин-метилового эфира крысам линии Wistar в дозе 25 мг/кг и на 7 день от начала эксперимента вводят внутрижелудочно лозартан в дозе 6 мг/кг и внутрибрюшинно резвератрол в дозе 2 мг/кг однократно в сутки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью лозартана, относящегося к антагонистам рецепторов ангиотензина II (AT 1-подтип), описанный В.С.Зодионченко, Т.В.Адашевой, А.П.Сандомирской в статье "Дисфункция эндотелия и артериальная гипертензия: терапевтические возможности", Русский медицинский журнал, том 10, 2002, с.11-16, который заключается в пероральном приеме препаратов этой группы у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком способа является косвенный механизм действия лозартана при эндотелиальной дисфункции, связанный со стимуляцией AT 2 подтипа рецепторов ангиотензина II и реализующийся вследствие брадикинин зависимого пути эндотелиопротекции, в то время как одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргинин-NO, приводящее к нарушению продукции оксида азота (NO), активность которой при применении только лозартана остается недостаточно компенсированной. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-NO, которое связанно в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью лозартана неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование лозартана, относящегося к антагонистам рецепторов ангиотензина II (AT 1-подтип), и активатора NO-синтазы резвератрола.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением лозартана в дозе 6 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением и активатора NO-синтазы резвератрола в дозе 2 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как резвератрол является активатором фермента NO-синтазы, посредством которой образуется NO в сосудистом эндотелии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ.

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1=1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и лозартана (6 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к оптимальному снижению показателей исходных значений АД (САД - 192,2±10,5, ДАД - 138,2±2,4 мм рт.ст.), а в экспериментах, где еще дополнительно вводился резвератрол (2 мг/кг внутрибрюшинно), отмечалось потенциирование гипотензивного действия, так как исходные цифры АД были ниже: САД - 144,1±4,9, ДАД - 117,2±3,4 мм рт.ст. (таблица 1).

Таблица 1. Динамика показателей АД и ЧС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции лозартаном с использованием резвератрола.
Группы животных	Функциональные пробы	САД, мм рт.ст.	ДАД, мм рт.ст.	ЧСС, уд. в мин
Интактные	Исходные	137,7±3,7	101,9±4,3	420,0±9,0
	ЭЗВ с АХ	84,3±4,5	38,7±2,8	416,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	83,0±3,7	42,1±4,4	415,0±10,0
Получавшие L-NAME (25 мг/кг)	Исходные	190,3±6,7*	145,0±3,9*	428,0±11
	ЭЗВ с АХ	110,6±5,2*	82,8±6,6*	426,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	88,7±4,7	50,8±4,2	426,0±13,0
L-NAME(25 мг/кг)+лозартан (6 мг/кг)	Исходные	192,2±10,5*	138,2±2,4*	381,0±9,0
	ЭЗВ с АХ	90,0±7,8*	51,7±5,0*	365,0±8,0
	ЭНЗВ с НП	95,5±8,9	55,5±5,5	378,0±12,0
L-NAME+лозартан (6 мг/кг) +резвератрол (2 мг/кг)	Исходные	144,1±4,9**	117,2±3,4**	371,0±14,0
	ЭЗВ с АХ	76,4±3,8**	40,2±4,1**	355,0±11,0
	ЭНЗВ с НП	76,0±5,4	39,1±2,8	375,0±12,0
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+лозартан

Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на введение АХ. Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только лозартан, это отношение соответствовало значению 2,5±0,3, а в группе с дополнительным введением к лозартану активатора NO-синтазы резвератрола - 1,8±0,2 (таблица 2).

Таблица 2. Показатели,отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME с лозартаном в дозартаном в сочетании с резвератором.
Группы животных	Функцио- нальные пробы	Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)	Время сосудистой реакции (с)	Площадь сосудистой реакции (усл.ед.)	Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП
L-NAME +лозартан	АХ	91,7±4,7	29,7±1,9	1348,9±79,8	2,5±0,3
	НП	106,0±11,2	74,8±8,6	3523,4±135,9
L-NAME +лозартан+ резвератрол	АХ	73,9±4,8	38,3±3,1	1436,5±161,4	1,8±0,2*
	НП	79,0±6,0	71,5±7,6	2682,3±154,3
- р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+лозартан

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции лозартана при сочетанном его применении с резвератролом.