фармацевтическая композиция, содержащая габапентин или его аналог и альфа-аминоамид, и ее применение в качестве анальгетика

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция для лечения боли у млекопитающего, содержащая габапентин или прегабалин или их фармацевтически приемлемую соль, и -аминоамид, выбранный из группы, состоящей из (S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамида, (R)-(-)-2-[4-бензилоксибензиламино]-3-фенил-N-метилпропанамида и (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-N-метилпропанамида, в виде одного изомера или в виде их смеси, или их фармацевтически приемлемой соли, где -аминоамид и габапентин, или прегабалин или их фармацевтически приемлемая соль находятся в соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED₅₀, где соотношение находится в пределах соответственно от примерно 1:1 до примерно 9:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:9.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, где -аминоамид и габапентин или прегабалин находятся в соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED ₅₀, где соотношение находится в пределах соответственно от примерно 1:1 до примерно 3:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:3.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая габапентин или его фармацевтически приемлемую соль и -аминоамид или его фармацевтически приемлемую соль.

4. Фармацевтическая композиция по п.2, содержащая габапентин или его фармацевтически приемлемую соль и -аминоамид или его фармацевтически приемлемую соль.

5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, содержащая габапентин или его фармацевтически приемлемую соль, и где -аминоамид представляет собой (S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамид или его фармацевтически приемлемую соль.

6. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-5 для получения лекарственного препарата для лечения боли.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей габапентин или его аналог и -аминоамид, и ее применению в качестве анальгетика. Конкретнее, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей габапентин, или прегабалин, или тиагабин и -аминоамид, полезной при лечении боли.

Как правило, боль купируют введением анальгетиков, которые снижают восприятие боли повышением порога болевой чувствительности и/или изменением ее восприятия.

Несмотря на то что большое число болевых синдромов подвергается лечению доступной терапией, было установлено, что хронические невропатические болевые синдромы, которые возникают в результате повреждения периферических нервов, имеют низкую чувствительность к двум основным группам анальгетиков: опиоидам и нестероидным противовоспалительным средствам (НПВС).

При поиске альтернативных видов лечения было установлено, что противосудорожные средства проявили себя в качестве возможных препаратов для фармакологических вмешательств (McQuay et al., "Anticonvulsant drug for the management of pain: a systematic rewiew", Br. Med. J., 311: 1047, 1995).

Среди нового поколения противоэпилептических средств (AED), используемых для лечения невропатической боли, 1-(аминометил)циклогексануксусная кислота, также известная как габапентин (в последующем GBP), аминокислота в структурном отношении близкая к -аминомасляной кислоте (в последующем ГАМК), занимает особое положение наряду с ее структурными аналогами, такими как прегабалин (Tremont et al., "Anticonvulsants for neuropathic pain syndromes: mechanisms of action and place in therapy". Drugs, 60 (5): 1029-52, 2000) и тиагабин (Field et al., "Evaluation of Gabapentin and S-(+)-3-Isobutylgaba in a rat model of postoperative pain", J. Pharmacol. Exp. Ther.; 282(3): 1242-4, 1997) по частоте и широте применения.

Сообщалось, что GBP эффективен на различных моделях боли на животных, у которых он блокирует позднюю тоническую фазу ноцицепции, индуцированной формалином, снимает аллодинию у крыс с невропатией, индуцированной наложением лигатуры на седалищный нерв (Pan et al., "Gabapentin suppresses ectopic nerve discharges and reverses allodynia in neuropathic rats", J. Pharmacol. Exp. Ther.; 288(3): 1026-30, 1999), а также в клинике, где он купирует невропатическую боль, невропатию при диабете и постгерпетическую невралгию (Rosner et al., "Gabapentin adjunctive therapy in neuropathic pain states", Clin. J. Pain; 12(1): 56-8, 1996).

Однако GBP вызывает у пациентов целый ряд побочных эффектов, таких как атаксия, одышка, тошнота и сонливость, что ограничивает его применимость (утвержденный Управлением по санитарному надзору за продуктами питания и лекарственными препаратами (FDA) список NDA 21-216, NDA 20-235/S-015, NDA 20-882/S-002, NDA 21-129/S-005; Rowbotham et al., "Gabapentin for the treatment of postherpetic neuralgia. A randomized controlled trial", JAMA 280 (21): 1831-1836, 1998; Backonja et al., "Gabapentin for the symptomatic treatment of painful neuropathy in patients with diabetes mellitus. A randomized controlled trial", JAMA 280(21): 1837-1842, 1998).

Основываясь на этом, было бы желательно изыскать другие соединения с антиноцицептивным механизмом действия, отличные от и/или дополнительные к одному из GBP или его аналогам, в результате чего GBP или его аналоги можно было бы использовать в более низких дозах, уменьшая проявление известных побочных эффектов, но сохраняя при этом его анальгетические свойства или еще лучше усиливая их.

Несмотря на то что GBP был разработан в качестве структурного аналога ГАМК, оказалось, что он не оказывает прямого «ГАМК-ергического» действия и не влияет на поглощение или метаболизм ГАМК. Для объяснения антигипералгического действия GBP результаты предварительных исследований указывали на возможное воздействие GBP на Ca⁺⁺-зависимые каналы при взаимодействии с /2- -субъединицей. Экспериментальные данные подтвердили участие Са⁺⁺-зависимых каналов в патофизиологии боли. Таким образом, действие GBP на данные каналы может вносить существенный вклад в его антиноцицептивный эффект.

Противосудорожные препараты, такие как габапентин, сочетали с нетоксичными блокаторами рецепторов N-метил-d-аспартата (NMDA). Подобные композиции описывали в качестве пригодных для лечения невропатической боли. Например, в заявке WO 98/07447 раскрывается комбинация противосудорожного препарата в количестве, ослабляющем невропатическую боль, включая габапентин, ламотригин, вальпроевую кислоту, топирамат, фамотидин, фенобарбитал, дифенилгидантоин, фенитоин, мефенитоин, этотоин, мефобарбитал, примидон, карбамазепин, этосуксимид, метсуксимид, фенсуксимид, триметадион, бензодиазепин, фенацемид, ацетазоламид, прогабид, клоназепам, натриевую соль дивальпроекса, инъекционный сульфат магния, метарбитал, параметедион, натриевую соль фенитоина, вальпроат натрия, клобазам, сультиам, дилантин, дифенилан или L-5-гидрокситриптофан, и нетоксичного блокатора NMDA-рецепторов в количестве, усиливающем действие противосудорожного компонента. Однако в данном источнике не указывается на синергическое действие раскрытых композиций.

Противосудорожные препараты в комбинации с НПВС или наркотическими анальгетиками также описаны в качестве пригодных для лечения боли. В заявке WO 99/12537 раскрывается композиция противосудорожных соединений, габапентина или прегабалина, в комбинации с НПВС, напроксеном или с наркотическими анальгетиками. Предлагались комбинации противосудорожных средств и других препаратов с опиоидными анальгетиками (Donnadieu S. et al., Pain Relief, Presse Medicale, 1998, 27/39, 2062-2069). Однако в данных источниках также не указывалось на синергическое действие раскрытых композиций.

В заявке WO 01/13904 описаны комбинации противосудорожных препаратов, включая GBP, с анальгетиком центрального действия, трамадолом, т.е. (1R,2R или 1S,2S)-2-[(диметиламино)метил]-1-[3-метоксифенил]циклогексанолом.

В заявке WO 00/61188 раскрывается фармацевтическая композиция, содержащая блокатор натриевых каналов и габапентин или прегабалин, или их соли, или комбинации; композиция эффективна для лечения, профилактики или ослабления хронической боли или судорог. Среди блокаторов натриевых каналов цитируется ряд аминоамидов, например, таковые раскрытые в патенте США №5449692 (заявка WO 94/22809), заявке WO 97/05102, патенте США №5446066 (заявка WO 94/22808) и патенте США №5236957 (заявка WO 90/14334), хотя композиция, включающая их, нигде не приводится в качестве примера, но в то же время показывается синергическое антиаллодиническое действие габапентина и блокатора натриевых каналов, 4-(4'-фторфенокси)бензальдегида семикарбазона, на модели невропатической боли на крысах по Чангу.

Целью настоящего изобретения является обеспечение композиции, содержащей блокатор Na⁺-каналов, -аминоамид и GBP, или прегабалин, или тиагабин, обладающей улучшенными свойствами для лечения боли.

Также целью настоящего изобретения является обеспечение композиции, содержащей -аминоамид и GBP, или прегабалин, или тиагабин, где комбинация указанных соединений проявляет синергическое действие с использованием меньшего количества каждого из указанных соединений.

Кроме того, отмечают, что не все блокаторы натриевых каналов, активные на модели хронической боли, проявляют синергизм с габапентином.

В настоящее время установлено, что только некоторые известные -аминоамиды или их фармацевтически приемлемые производные, обладающие анальгетической активностью, в комбинации с GBP, или прегабалином, или тиагабином, или их фармацевтически приемлемыми производными, значительно усиливают анальгетические или антиноцицептивные свойства GBP (или прегабалина, или тиагабина), тем самым обеспечивая действительное синергическое действие по сравнению с соответствующими активностями и, следовательно, значительно снижая проявление побочных эффектов GBP (или прегабалина, или тиагабина), что позволяет уменьшить фармацевтически эффективное количество до непредсказуемо низкой дозы.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит комбинацию -аминоамида и GBP (или прегабалина, или тиагабина), где -аминоамид и GBP (или прегабалин, или тиагабин) находятся в соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED₅₀, где соотношение составляет от примерно 1:1 до примерно 30:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:30; предпочтительно от примерно 1:1 до примерно 9:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:9; наиболее предпочтительно от примерно 1:1 до примерно 3:1 или от 1:1 до примерно 1:3.

По первому аспекту настоящего изобретения обеспечена фармацевтическая композиция, содержащая габапентин, или прегабалин, или тиагабин, или их фармацевтически приемлемое производное, и -аминоамид, выбранный из группы, состоящей из (S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамида (внутренний шифр: NW-1029), (R)-(-)-2-[4-бензилоксибензиламино]-3-фенил-N-метилпропанамида (внутренний шифр: NW-1037) и (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-N-метилпропанамида (внутренний шифр: NW-1043);

в этом случае или в виде одного изомера, или в виде их смеси, или их фармацевтически приемлемого производного,

где -аминоамид и габапентин, или прегабалин, или тиагабин, или их фармацевтически приемлемые производные, находятся в соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED ₅₀, где соотношение находится в пределах соответственно от примерно 1:1 до примерно 30:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:30.

Предпочтительно вышеуказанные -аминоамид и GBP (или прегабалин, или тиагабин), входящие в состав фармацевтической композиции по настоящему изобретению, находятся в соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED₅₀, где соотношение находится в пределах соответственно от примерно 1:1 до примерно 9:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:9; наиболее предпочтительно соотношение находится в пределах соответственно от примерно 1:1 до примерно 3:1 или от 1:1 до примерно 1:3.

Второй аспект изобретения касается применения вышеуказанной фармацевтической композиции для получения лекарственного препарата для лечения боли.

Дополнительный аспект данного изобретения относится к способу лечения боли у млекопитающего, включая людей, при его необходимости, включающему введение млекопитающему терапевтически эффективной дозы вышеуказанной фармацевтической композиции.

В частности, млекопитающему, при необходимости указанного лечения, вводят дозу фармацевтической композиции, которая находится в пределах примерно от 0,05 до примерно 50 мг/в день на кг массы тела; фармацевтическая композиция содержит габапентин и -аминоамид, выбранный из группы, состоящей из (S)-(+)-2-[4-(2-фторбензилокси)бензиламино]пропанамида, (R)-(-)-2-[4-бензилоксибензиламино]-3-фенил-N-метилпропанамида и (S)-(+)-2-[4-(3-фторбензилокси)бензиламино]-N-метилпропанамида; в этом случае или в виде одного изомера, или в виде их смеси, или их фармацевтически приемлемого производного, в соотношении габапентина и -аминоамида, основанном на соотношении их соответствующих значений ED₅₀ в пределах от примерно 1:1 до примерно 30:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:30; более предпочтительно от примерно 1:1 до примерно 9:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:9; наиболее предпочтительно от примерно 1:1 до примерно 3:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:3.

Невропатические и хронические боли у млекопитающего, включая людей, могут таким образом ослабляться и лечиться. Примеры болей у млекопитающих, которые можно лечить композицией по изобретению, включают боль, опосредованную ЦНС, периферическую боль, боль, связанную с повреждением костей или мягких тканей, боль, связанную с прогрессированием заболевания, и невропатическую боль, все из которых включают острую боль, вызванную острым повреждением, травмой или хирургической операцией.

В частности, примеры болей, которые можно лечить композицией по изобретению, включают периферические невропатии, такие как тригеминальная невралгия, постгерпетическая невралгия, невропатия при диабете или другие метаболические невропатии, языкоглоточная невралгия, радикулопатия, зубная боль, кластер, мигрень и любая из сосудистых головных болей, и невропатия, вторичная метастатической инфильтрации, болезненное ожирение и боль при ожогах; боль, связанная с ЦНС, после инсульта, случайной травмы или хирургического вмешательства или возникших иначе участков поражения таламуса, и рассеянный склероз. Примеры болей при воспалительных состояниях, которые можно лечить композицией по изобретению, включают ревматоидный аритрит, анкилозирующий спондилит, остеоартрит, бурсит, тендинит и острый артрит при подагре.

«Лечение» в том смысле, в котором этот термин здесь используется, относится к лечению состояния у млекопитающего, в частности человека, и включает:

(i) профилактику возникновения заболевания у субъекта, который предрасположен к заболеванию, но оно еще не диагностировано у него;

(ii) подавление состояния, т.е. остановку его прогрессирования или

(iii) облегчение состояния, т.е. обеспечение регрессии заболевания.

Как GBP (или прегабалин, или тиагабин), так и указанные -аминоамиды и их фармацевтически приемлемые производные в настоящем описании относятся к «активным соединениям».

Кроме того, «фармацевтически приемлемое производное» активных соединений предназначено здесь для включения любого фармацевтически приемлемого метаболита, биопредшественника и/или пролекарства, т.е. соединения, которое имеет структурную формулу, отличающуюся от формулы одного из активных соединений, но которое прямо или опосредованно превращается в условиях in vivo в соединение, имеющее их структурную формулу, при введении млекопитающему, в частности человеку.

Примеры фармацевтически приемлемых производных активных соединений включают аддитивные соли кислоты с неорганическими кислотами, например азотной, соляной, бромистоводородной, серной, перхлорной и фосфорной кислот и тому подобное, или с органическими кислотами, например уксусной, пропионовой, гликолевой, молочной, щавелевой, малоновой, яблочной, винной, лимонной, янтарной, бензойной, коричной, миндальной, метансульфоновой, п-толуолсульфоновой и салициловой кислот и тому подобное.

-аминоамиды, входящие в состав композиции по изобретению и обуславливающие ее анальгетическую активность, в частности, при хронической и невропатической боли у млекопитающих, включая людей, раскрыты соответственно в заявках WO 90/14334 и WO 99/35125, и их можно получить способами, раскрытыми там, и указанные документы включены здесь для сведения, когда это касается получения указанных -аминоамидов.

В фармацевтической композиции по настоящему изобретению -аминоамид, GBP (или прегабалин, или тиагабин) находятся в соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED₅₀, где соотношение варьирует от примерно 1:1 до примерно 30:1 или, напротив, от примерно 1:1 до примерно 1:30; предпочтительно от примерно 1:1 до примерно 9:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:9 и более предпочтительно от примерно 1:1 до примерно 3:1 или от примерно 1:1 до примерно 1:3, в зависимости от получения желаемого результата.

Эксперт в данной области, очевидно, понимает, что несмотря на то, что GBP предпочтительно используется в качестве одного из активных соединений композиции по настоящему изобретению, прегабалин или тиагабин можно использовать вместо GBP в указанной композиции, применяя те же самые концепции и представления, которые составляют основу данного изобретения.

Композицию по изобретению можно получить общепринятыми в данной области способами, например смешением активных соединений с фармацевтически, терапевтически инертными органическими и/или неорганическими носителями. Композиция по изобретению может быть в жидкой форме, например в виде раствора, суспензии, эмульсии, или в твердой форме, например в виде таблеток, пастилок, капсул.

Подходящие фармацевтически, терапевтически инертные органические и/или неорганические носители, пригодные для получения композиции по настоящему изобретению, включают, например, воду, желатин, гуммиарабик, лактозу, крахмал, целлюлозу, стеарат магния, тальк, растительные масла, полиалкиленгликоли и тому подобное. Фармацевтическую композицию по изобретению можно стерилизовать, и она может содержать дополнительные компоненты, хорошо известные специалистам в данной области, например такие, как консерванты, стабилизаторы, смачивающие вещества или эмульгаторы, например жидкий парафин, моноолеат маннида, соли для регуляции осмотического давления, буферы и тому подобное.

Фармацевтическая композиция по изобретению обычно находится в виде единичной лекарственной формы.

Оптимальные терапевтически эффективные дозы для введения может легко определить специалист в данной области, и они будут варьировать в зависимости от конкретной комбинации -аминоамида и GBP (или прегабалина, или тиагабина), количества активных ингредиентов, используемых в синергическом соотношении, основанном на соотношении их соответствующих значений ED ₅₀, эффективности препарата, способа введения и прогрессирования патологического состояния или заболевания, которое подвергается лечению. Кроме того, факторы, связанные с конкретным субъектом, который подвергается лечению, включая возраст, массу субъекта, рацион и время введения, будут приводить к необходимой корректировке дозы до соответствующего терапевтически эффективного уровня.

Как правило, разовая лекарственная форма фармацевтической композиции по изобретению может содержать примерно от 0,2 до 99,8%, предпочтительно примерно от 0,5 до 99,5% по массе каждого из активных соединений в общей смеси активных соединений. Комбинацию двух активных соединений, в общем, можно вводить млекопитающему, при ее необходимости, в широком диапазоне доз в пределах от примерно 0,05 до примерно 50 мг/в день на кг массы тела или, конкретнее, пациенту со средней массой тела 70 кг в дозе от примерно 3,5 мг до примерно 3500 мг/в день.

Кроме того, в объем изобретения входит введение каждого активного соединения композиции по изобретению раздельно. Так, также возможно включать каждое из двух активных соединений в раздельные лекарственные формы с использованием общепринятых в данной области способов, и вводить их либо одновременно либо последовательно.

Другими словами, непредвиденную анальгетическую активность, получаемую композицией по изобретению, можно достичь либо при одновременном, либо при последовательном введении активных соединений.

Путями введения композиции по изобретению может быть как пероральный, так и парентеральный. Композицию следует вводить, по меньшей мере, один раз в день или чаще, если это необходимо, в зависимости от тяжести состояния пациента. Наблюдаемое анальгетическое действие значительно выше, чем таковое в результате аддитивного действия отдельных активных соединений. Преимуществ усиления антиноцицептивного действия много, и они включают снижение дозы GBP или прегабалина, или тиагабина, необходимой для получения анальгезии, с вытекающим отсюда снижением проявления нежелательных побочных эффектов.

Следовательно, разовая доза лекарственной формы фармацевтической композиции по настоящему изобретению, проявляющая синергическую активность, содержит терапевтически эффективную дозу активного ингредиента, которая, как правило, находится в пределах от примерно 3,5 мг до примерно 3500 мг комбинации -аминоамида и GBP (или прегабалина, или тиагабина); предпочтительно от примерно 8 мг до примерно 400 мг; более предпочтительно от примерно 15 мг до примерно 250 мг и наиболее предпочтительно от примерно 18 мг до примерно 90 мг. Например, в 20 мг лекарственной формы фармацевтической композиции, включающей GBP (ED ₅₀=12,40 мг) и NW-1029 (ED₅₀=0,82 мг) соответственно в соотношении 1:3, основанном на соотношении их соответствующих значений ED₅₀, будет находиться примерно 16,7 мг GBP и примерно 3,3 мг NW-1029.

Общие методы

Исследовали совместное введение равноэффективных по антиноцицептивному эффекту доз различных вышеуказанных -аминоамидов (в частности, NW-1029, NW-1037 и NW-1043) и GBP для демонстрации того, что композиция по изобретению дает синергический эффект, который является более высоким, чем эффект каждого из активных соединений при введении их одних, и более высокий, чем можно ожидать при простом сложении эффектов каждого из активных соединений без сопутствующего повышения проявления побочных эффектов. Как уже отмечалось выше, типичными побочными эффектами GBP у животных являются ухудшение двигательной активности и атаксия.

Синергическое антиаллодиническое действие композиции по изобретению и ее влияние на двигательную активность оценивали на крысах с использованием последующих методов.

Тестирование синергизма активных соединений композиции по изобретению проводили согласно методу, разработанному Tallarida R.J., 1992, Pain, 49: 93-97; Tallarida R.J. et al., 1997, Life Sciences, Vol.61, n.26, 417-425; Przesmycki K. et al., 1997, Eur. J. of Pharmacology, 337; 11-17.

Данный метод включает определение общего количества в смеси, необходимого для получения специфического синергического антиаллодинического действия в дозе, составляющей 50% (ED _50смеси), и соответствующего общего количества, которое следует ожидать при простом сложении эффектов (ED _50адд.). В случае, когда установлено, что ED _50смеси<ED_50адд. для определенного фиксированного соотношения, то тогда композиция обладает синергическим антиаллодиническим эффектом. В обоих случаях количества ED _50смеси и ED_50адд. являются произвольными переменными величинами. ED_50смеси определяли по кривой зависимости доза-реакция для определенного фиксированного соотношения компонентов; ED_50адд. рассчитывали по значениям ED₅₀ для отдельных лекарственных препаратов.

Затем значение ED_50смеси статистически сравнивали со значением ED_50адд. : в настоящем описании «достоверно более низкое, чем теоретическое аддитивное значение» (ED_50адд.) указывает на то, что экспериментальное значение ED₅₀ не входит в пределы 95% доверительных интервалов (C.I.) значения ED_50адд.

Другими словами, если фактическое значение ED_50смеси входит в пределы C.I. теоретического значения аддитивной ED_50адд. , то действие композиции будет аддитивными; в противном случае, если значение ED_50смеси композиции будет меньше, чем теоретическое значение аддитивной ED _50адд. (т.е. оно не входит в пределы теоретических C.I.), то имеет место достоверное синергическое взаимодействие между активными соединениями.

Следовательно, значения ED ₅₀ достоверно различаются (Р<0,05) между собой, когда каждое значение ED₅₀ не входит в пределы 95% C.I. другого.

Общий метод А:

Метод тестирования антиаллодинического действия композиции по изобретению

Метод, используемый для обнаружения и сравнения синергического действия композиции по настоящему изобретению, для которого имеется тесная корреляция с эффективностью лечения боли у людей, представляет метод определения аллодинии на модели хронической боли на крысах с моноартритом, индуцированным полным адъювантом Фрейнда (CFA) (Butler et al., "A limited arthritic model for chronic pain studies in the rat", Pain; 48:73-81, 1992).

Животные

Взрослые крысы самцы Вистар (масса тела 175-200 г, Harlan-Nossan, Италия) находились в отдельных клетках со свободным доступом к воде и на обычном рационе при постоянной температуре (22±0,5°С) и относительной влажности (60-70%) с периодом свет-темнота от 6.00 утра до 6.00 вечера.

Модель моноартрита

Воспаление у крыс индуцировали интраплантарным введением полного адъюванта Фрейнда (CFA, Sigma - 100 мкл) в левую заднюю лапу, содержащего убитые тепловой обработкой и высушенные Mycobacterium tubercolosis в смеси жидкого парафина и моноолеата маннида в качестве эмульгатора. Животным контрольной группы вводили 100 мкл минерального масла, неполный адъювант Фрейнда (IFA, Sigma). Введение CFA приводило к образованию локализованного отека и воспаления, появляющихся через 48 ч после инъекции, с прогрессирующим снижением порога рефлекса механического отдергивания.

В течение 8-9 суток перед тестированием давали развиться артриту у каждого животного.

Определение механической аллодинии

Крыс помещали в индивидуальные пластиковые клетки с металлическим дном с отверстиями и давали возможность аклиматизироваться в течение примерно 30 мин. Ряд откалиброванных волосков по von Frey с возрастающей в логарифмическом порядке жесткостью (от 2,83 до 5,88×Log₁₀ изгибающего усилия, г) наносили на лапу по методу сверху-вниз. Каждый волосок располагали перпендикулярно лапе с достаточным усилием для того, чтобы вызвать небольшое сгибание, и держали примерно в течение 2-3 сек. Волосок регистрировали, когда отмечали положительную реакцию (отдергивание, облизывание или дрожание лапы).

Антиаллодиническое действие выражали в виде % МРЕ (максимально возможный эффект) через 2 ч после введения препаратов.

Введение препаратов животным

Всем крысам вводили перорально различные дозы одного -аминоамида, одного GBP, комбинированные дозы -аминоамида и GBP или растворитель. Объем введения составлял 2 мл/кг. Все соединения для введения готовили на растворителе (дистиллированной воде); массы препаратов рассчитывали в расчете на свободное основание. Для композиции по изобретению -аминоамид и GBP (или прегабалин, или тиагабин) взвешивали в расчете на свободное основание в выбранном соотношении их соответствующих значений ED₅₀ и затем растворяли в соответствующем объеме с получением конечной суспензии для введения.

Анализ антиаллодинического действия

Данные представлены в виде среднего значения для 4/6 животных на группу/дозу.

Для установления ED₅₀ использовали несколько доз (обычно 4) каждого соединения в отдельности. Значение ED ₅₀ определяли как дозу, приводящую к 50% снятию механической гипералгезии через 2 ч после введения. Рассчитывали экспериментально установленную ED₅₀ и 95% доверительные интервалы (C.I.) для каждого соединения в отдельности по графику линейной регрессии экспериментальных данных по уравнению y=a+bx.

Затем различные -аминоамиды комбинировали с GBP в различных соотношениях, основываясь на их ранее рассчитанных соответствующих значениях ED₅₀ (неограничивающими примерами соотношений являются соотношения 1:1, 1:3, 1:9 и соответственно 1:1, 3:1 и 9:1) для оценки синергического эффекта.

Затем несколько доз (обычно 4) комбинаций с каждым выбранным соотношением вводили перорально для оценки синергического действия композиции.

Каждая крыса получала только одно лечение.

Общий метод В:

Тест с вращающимся стержнем на крысах

Тест с вращающимся стержнем представляет официальный метод, используемый в качестве прогностического для выявления побочных эффектов со стороны ЦНС у людей, и в частности, нарушения двигательной активности и атаксии.

Неспособность животного удерживаться на вращающемся стержне в течение всего опытного периода указывало на возможность проявления неврологического нарушения (J. Of the American Pharmaceutical Association, 1957, 46(3), 208-209).

Несколько доз (обычно 4-5) каждого соединения в отдельности вводили для определения TD₅₀, т.е. дозы тестируемого соединения, вызывающей падение 50% животных с вращающегося стержня, рассчитанной пробит-анализом. Затем различные -аминоамиды комбинировали с GBP в различных соотношениях, основываясь на их ранее рассчитанных соответствующих значениях TD₅₀ (неограничивающим примером соотношений является соотношение 1:1) для оценки возможного синергического эффекта. Данные представлены в виде среднего значения для 8/10 животных на группу/дозу.

Тест ставили через 120 мин после введения препаратов.

Результаты

В тесте «von Frey» для оценки антиаллодинической активности среднее фоновое значение порога рефлекса отдергивания лапы, полученное на контрольных, не подвергнутых воздействию препаратов крысах, составляло 5,04±0,20 Log[10×изгибающее усилие (мг)]; в противоположность среднее значение порога рефлекса отдергивания у крыс, обработанных CFA, было достоверно ниже: 3,11±0,11 Log[10×изгибающее усилие (мг)]. Введение растворителя (дистиллированной воды) не оказывало антигипералгического действия на воспаленных лапах.

-аминоамидами, которые вводили одни и в сочетании с GBP, были NW-1029, NW-1037, NW-1043. В группах находилось по 4/6 животных.

Все соединения, вводимые одни, давали достоверный, зависимый от дозы антиаллодинический эффект (снятие механической гиперчувствительности) на воспаленных лапах.

Значение ED₅₀ , установленное для одного GBP через 2 ч после однократного введения, составляло 12,40 (C.I.: 10,3-14,3) мг/кг (таблица 1).

Значения ED₅₀, установленные для одних NW-1029, NW-1037, NW-1043 через 2 ч после однократного введения, соответственно составляли 0,82 (C.I.: 0,2-4,1), 3,45 (C.I.: 2,3-4,7) и 7,05 (C.I.: 5,8-7,9) мг/кг (таблица 1).

Значения ED ₅₀, полученные экспериментально (ED_50смеси ) по кривой зависимости доза-ответная реакция после совместного введения NW-1029, NW-1037, NW-1043 с GBP в фиксированных соотношениях, также представлены в таблице 1 и сравниваются со значениями аддитивной ED_50адд. В последней колонке в таблице 1 представлены рассчитанные количества каждого ингредиента композиции в экспериментально установленном значении ED_50смеси .

Полученные в эксперименте значения ED _50смеси для композиции NW-1029/GBP по изобретению были ниже, чем высчитанное значение ED_50адд. при всех фиксированных соотношениях доз лекарственных препаратов (см. таблицу 1). Аналогичные данные были получены для двух других соединений NW-1037 и NW-1043 в комбинации с GBP при фиксированном соотношении доз 1:1.

Одновременное введение GBP и активных -аминоамидов, указанных выше, дает антиноцицептивный эффект на модели гипералгезии на животных, который выше аддитивного эффекта.

В противоположность этому, эффекты, полученные в отношении двигательной функции и атаксии, не являются выше аддитивного эффекта, на что указывают результаты, полученные в тесте с вращающимся стержнем (таблица 2). Фактические значения TD₅₀, полученные при введении одних NW-1029 и GBP или композиции по изобретению при соотношении 1:1, на основе их индивидуальных значений TD₅₀, составляют соответственно 470, 430 и 480 мг/кг. Следовательно, приведенные выше данные свидетельствуют и подтверждают, что композиция по изобретению позволяет вводить меньшую дозу GBP (или прегабалина, или тиагабина) для получения высокого антиноцицептивного эффекта и таким образом уменьшить проявление побочных эффектов.

Таблица 1
	ED50 и (C.I.) перорально через 2 ч (мг/кг)		Комбинация препаратов в ED50смеси (мг/кг)
	ED 50адд. (C.I.)	ED50смеси (C.I.)	Тестируемый препарат	GBP
NW-1029	0.82
	(0.2-4.1)
NW-1037	3.45
	(2.4-4.8)
NW-1043	7.05
	(5.8-7.9)
GBP	12.40
	(10.3-14.5)
NW-1029:GBP	11.24	5.65	0.041	5.61
(1:9)	(9.5-12.8)	(4.53-6.2)
NW-1029:GBP	9.51	4.98	0.11	4.87
(1:3)	(9.0-11.2)	(2.5-6.9)
NW-1029:GBP	6.62	3.12	0.19	2.92
(1:1)	(4.7-7.3)	(1.9-4.2)
NW-1029:GBP	3.73	1.52	0.25	1.27
(3:1)	(1.9-4.8)	(0.8-1.7)
NW-1029:GBP	1.98	1.20	0.44	0.75
(9:1)	(1.7-2.4)	(0.7-1.6)
NW-1037:GBP	7.92	4.03	0.87	3.17
(1:1)	(6.5-8.7)	(2.7-5.8)
NW-1043:GBP	9.72	7.76	2.81	4.95
(1:1)	(8.7-10.8)	(4.8-8.1)
ED50смеси = экспериментально установленное значение ED50; C.I. = 95% доверительные интервалы; ED50адд. = теоретически высчитанное значение ЕО50 аддитивного эффекта

Таблица 2
	TD50 перорально через 2 ч (мг/кг)		Комбинация препаратов в TD50смеси (мг/кг)
	TD 50адд. (C.I.)	TD50смеси (C.I.)	Тестируемый препарат	GBP
NW-1029	470
GBP	430
NW-1029:GBP (1:1)	450	480	250.6	229.4
TD 50смеси = экспериментально установленное значение TD 50; TD50aдд. = теоретически высчитанное значение TD50 аддитивного эффекта

Вышеприведенные данные показывают, что композиция по изобретению позволяет вводить GBP в меньшей дозе для получения высокого антиноцицептивного действия, одновременно уменьшая вероятность проявления его побочных эффектов. Следовательно, можно отметить, что введение композиции по изобретению приводит к антиноцицептивному эффекту на модели гипералгезии на животных, который выше аддитивного действия, поскольку фактические значения ED_{50 смеси} для любой приведенной в качестве примера композиции по изобретению не попадают в теоретические пределы C.I.

Следуя тому же экспериментальному протоколу, представленному выше, оценивали ED₅₀ 4-(4'-фтор-фенокси)бензальдегида семикарбазона, после перорального введения одного и в сочетании с габапентином в соотношении 1:1, согласно раскрытию заявки WO 00/61188.

Было установлено, что значения ED ₅₀ одного указанного семикарбазона (14,5 мг/кг - C.I.: 11,9-15,8) и в комбинации с габапентином (13,2 мг/кг - C.I.: 12,1-15,3) достоверно не различаются между собой.

Следовательно, в свете вышепредставленного можно отметить, что не все блокаторы натриевых каналов, активные на модели хронической боли, что было показано сравнительными данными, представленными выше, проявляют синергизм по отношению к GBP, в противоположность тому, что было случайно и достоверно установлено для -аминоамидов NW-1029, NW-1037 и NW-1043, входящих в состав композиции по изобретению.

Последующие иллюстративные примеры фармацевтических композиций по изобретению получены смешением ингредиентов, перечисленных ниже, с использованием обычных методов, известных в области фармации.

Пример 1 ( -аминоамид:GBP в соотношении 1:1)

Капсула содержит:

NW-1029	13,3 мг
GBP	204,4 мг
Тальк	5,7 мг
Кукурузный крахмал	19,6 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	52,0 мг
Стеарат магния	5,0 мг

Пример 2 ( -аминоамид:GBP в соотношении 1:3)

Капсула содержит:

NW-1029	7,7 мг
GBP	341,0 мг
Тальк	5,3 мг
Кукурузный крахмал	20,0 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	23,0 мг
Стеарат магния	3,0 мг

Пример 3 ( -аминоамид:GBP в соотношении 9:1)

Капсула содержит:

NW-1029	31,0 мг
GBP	52,5 мг
Тальк	3,5 мг
Кукурузный крахмал	15,0 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	45,0 мг
Стеарат магния	3,0 мг