сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных
Классы МПК: | A61K39/275 Poxviridae, например вирус оспы птиц A61P31/12 противовирусные средства |
Автор(ы): | Курченко Федор Петрович (RU), Евсеев Александр Михайлович (RU), Балышев Владимир Михайлович (RU), Жестерев Виктор Иванович (RU), Горшкова Татьяна Федоровна (RU), Калантаенко Юрий Федорович (RU), Луницин Андрей Владимирович (RU), Уфимцев Константин Петрович (RU), Михалкин Илья Петрович (RU) |
Патентообладатель(и): | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2005-03-16 публикация патента:
27.09.2006 |
Изобретение относится к области ветеринарии. Целью изобретения является сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, обладающая высокой иммуногенностью, безвредностью, ареактогенностью для овец и коз и низкой себестоимостью. Вирусвакцина включает лиофилизированный вируссодержащий материал, полученный на основе штамма "45G37/35-K" и защитную среду в объемном соотношении 1:1. В качестве защитной среды вирусвакцина содержит среду следующего состава, мас.%: ферментативный пептон - 9,8-10,2; лактоза - 1,8-2,2; дистиллированная вода - остальное. Вакцина безвредна, высокоиммуногенна, стабильна при хранении. 1 з.п. ф-лы.
Формула изобретения
1. Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, включающая вируссодержащий культуральный материал из аттенуированного штамма вируса чумы мелких жвачных и защитную среду, отличающаяся тем, что в качестве вируссодержащего культурального материала вакцина содержит вируссодержащий культуральный материал аттенуированного штамма "45G37/35-K" с титром инфекционной активности 5,0-6,0 lg ТЦД50/см3 и защитную среду при содержании компонентов 1:1.
2. Сухая культуральная вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит защитную среду следующего состава, мас.%:
Ферментативный пептон | 9,8-10,2 |
Лактоза | 1,8-2,2 |
Дистиллированная вода | остальное |
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к разработке вирусвакцины, предназначенной для специфической профилактики чумы мелких жвачных животных.
В неблагополучных по чуме мелких жвачных животных странах для специфической профилактики болезни применяют вирусвакцины, полученные на основе аттенуированных штаммов вирусов чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) и чумы крупного рогатого скота (ЧКРС), которые имеют между собой антигенное родство и генетическое сходство [4, 7, 8, 9, 10].
Имеются также сообщения о разработке инактивированных и рекомбинантных вакцин, которые, однако, не нашли широкого применения в ветеринарной практике [1, 2].
Гетерологичные вакцины, полученные на основе вакцинного вируса ЧКРС, защищают овец и коз от клинического проявления ЧМЖЖ, но не предотвращают размножение в организме вирулентного вируса. В связи с этим авторы не рекомендуют использовать такие препараты для вакцинации мелких жвачных животных [3, 6].
Для специфической профилактики болезни в неблагополучных зонах широко применяют вирусвакцины, которые получают на основе аттенуированного штамма "Nigeria 75/1" вируса ЧМЖЖ и его вариантов [2, 5, 10].
Неблагоприятная эпизоотическая ситуация по ЧМЖЖ в 1990-2003 гг.на территории ряда государств (Индия, Турция, Иран, Ирак, Израиль и др.), имеющих торгово-экономические связи с Россией, и отсутствие в стране вакцины против этой болезни указывали на необходимость разработки средств специфической профилактики против чумы мелких жвачных животных.
Наиболее близкой к предлагаемому изобретению (прототип) является вирусвакцина из штамма "75/1 LK6 ВК2 Vero70", создающая напряженный иммунитет у животных через 21 день после прививки длительностью более одного года [10]. Однако недостатком указанной вирусвакцины является то, что вакцинный вирус культивируют в перевиваемой культуре клеток VERO, которую выращивают на питательной среде Игла MEM с фетальной сывороткой теленка, имеющей высокую стоимость.
Целью изобретения является сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, обладающая высокой иммуногенностью, безвредностью, ареактогенностью для овец и коз и низкой себестоимостью.
Поставленная цель достигается использованием при конструировании вирусвакцины нового вакцинного штамма "45G37/35-К" вируса ЧМЖЖ, выращенного в первичной культуре клеток почки или тестикул ягненка на питательной среде культивирования Игла MEM или ГЛА с сывороткой крови КРС.Ее используют вместо фетальной сыворотки теленка, которая не производится в России и странах СНГ, это значительно снижает себестоимость вакцины.
Вакцинный штамм селекционирован пассированием аттенуированого штамма "45g" в первичных культурах клеток почки и тестикул ягненка и перевиваемой - почки сайги. Штамм безвреден и ареактогенен для овец и коз, обладает высокой иммуногенностью и накапливается в этих культурах клеток в титре 5,0-6,0 lg ТЦД50/см3. Указанный штамм депонирован 14.12.04 г. в качестве производственного в Государственной коллекции штаммов микроорганизмов ФГУ Всероссийского государственного центра качества и стандартизации лекарственных средств и кормов (ФГУ ВГНКИ), имеет регистрационый шифр "45G37/35-K".
Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, включающая вируссодержащий культуральный материал из аттенуированного штамма вируса чумы мелких жвачных животных и защитную среду, при этом в качестве вируссодержащего культурального материала вакцина содержит вируссодержащий культуральный материал аттенуированного штамма "45G37/35-К" с титром инфекционной активности 5,0-6,0 lg ТЦД50/см3 и защитную среду при содержании компонентов 1:1. В качестве защитной среды она содержит среду следующего состава, мас.%: ферментативный пептон 9,8-10,2; лактоза 1,8-2,2; дистиллированная вода - остальное.
Авторами разработаны требования к сухой культуральной вирусвакцине против чумы мелких жвачных животных, которые включают следующие характеристики: титр вакцинного вируса в сухом препарате составляет не менее 4,5 lg ТЦД50/см3; прививная доза вакцины - не менее 1000 ТЦД50; длительность иммунитета - не менее 12 месяцев; срок хранения вакцины при температуре 4±4°С и -40±1°С и ниже - 12 и 24 месяцев соответственно; остаточная влажность 1-4%; в ампулах (флаконах) с вакциной должен быть вакуум.
В примерах конкретного исполнения приведены сведения по изготовлению 2-х опытных серий вирусвакцины и их физико-химические и иммунобиологические характеристики.
Пример 1. Изготовление вирусвакцины
Для приготовления двух серий вирусвакцины используют вируссодержащее сырье, полученное в стационарном монослое первичной культуры клеток почки ягненка на основе штамма "45G37/35-K". Культуру клеток выращивают в питательной среде Игла MEM с 10% сыворотки КРС. Через 72 часа матрасы с культурой клеток (по 10 матрасов на каждую серию вакцины) заражают вирусом в дозе 0,01 ТЦД50/кл и культивируют в течение 7 суток до появления характерного цитопатогенного действия. Через 3-е суток культивирования проводят смену поддерживающей питательной среды. Активность полученного культурального вируса серии 1 составляет 5,7 lg ТЦД50/см3 серии 2-5,5 lg ТЦД50/см3.
Каждую серию вируссодержащего культурального материала (1000 мл) объединяют с таким же количеством (1000 мл) защитной среды, содержащей (мас.%): ферментативного пептона - 10; лактозы - 2; дистиллированной воды - остальное.
Приготовленную технологическую жидкость тщательно перемешивают и расфасовывают в ампулы по 1 см3. Сушку вакцины проводят на сублимационном аппарате ТГ-50, предварительно заморозив смесь до -50°С. Время сушки вакцины серий 1 и 2 составляет 34 и 37 часов соответственно, ампулы с вакциной подвергают вакуумной обработке. Остаточная влажность в вакцине серии №1 и №2 составила 3,0 и 3,2% соответственно. Рост бактериальной и грибной микрофлоры в вакцине не выявлен.
Пример 2. Контроль биологических показателей вакцины.
Полученные серии вирусвакцины изучают по следующим показателям: биологическая активность, безвредность и иммуногенная активность.
Биологическая активность
Титрование вирусвакцины проводят в монослойной пробирочной культуре клеток почки сайги в 3-х повторностях по общепринятой методике. Активность вирусвакцины серии №1 составляла 5,25 ТЦД 50/см3, серии №2-5,0 lg ТЦД50/см 3.
Безвредность
Безвредность каждой серии вирусвакцины изучают на 2-х ягнятах трехмесячного возраста, которым вводят подкожно с внутренней поверхности бедра неразведенную вакцину в объеме 1,0 см3. Все животные оставались клинически здоровыми в течение 21 суток наблюдения.
Иммуногенная активность
Иммуногенную активность вакцины определяют на овцах и кроликах (по 3 головы на каждую серию) по уровню накопления ВН-антител через 14 суток после прививки и по результатам контрольного заражения овец. У привитых вирусвакциной в дозе 1000 ТЦД50 овец не наблюдали повышения температуры тела и признаков болезни, т.е. штамм не был реактогенным. В указанные сроки титр ВН-антител в сыворотках крови животных составил 1:8-1:16.
Привитые овцы не заболели после заражения вирулентным вирусом в дозе 1000 ИД50, тогда как контрольные животные (2 головы) заболели чумой мелких жвачных с проявлением характерных клинических признаков болезни на 5-10 сутки после инфицирования.
Пример 3. Изучение стабильности физико-химических свойств и биологической активности вакцины при хранении.
Сохраняемость сухой вирусвакцины серий №1 и №2 изучают в течение 12 и 24 месяцев хранения при температурах 4±4°С и -40±1°С соответственно. Через указанное время вакцина сохраняла исходную активность, которая для серий №1 и №2 составляла 5,25 lg ТЦД50 /см3 и 5,0 lg ТЦД50/см3 соответственно.
Остаточная влажность оставалась на исходном уровне в вакцине серии №1 - 3,0%, серии №2 - 3,2%, в ампулах сохранялся вакуум.
Таким образом, по иммунобиологическим и физико-химическим показателям испытуемые серии вирусвакцины против чумы мелких жвачных животных соответствовали разработанным требованиям.
Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных с положительным результатом прошла межведомственные комиссионные испытания (с участием ФГУ ВГНКИ) и признана безвредным, высокоиммуногенным и стабильным при хранении препаратом.
Источники информации
1. Abegunde A., Ada F.D. // Bull Anim. Hith. Prod. In Africa, 1977, Vol 25, 3.
2. Berhe G. et al. // Journal of Virology, 2003, Vol.77, 2.
3. Burdin P. // Rev. Elev. Med. Vet. Paes. Trop, 1973, Vol.26, 3.
4. Diallo. A. // Dev Biol (Basel), 2003,114:113-9.
5. Diallo A. et al. // Rev. Elev. Med. Vet. Pays. Trop, 1989, Vol.42.
6. Gibbs E. P. J. et al. Intervirology, 1979, 11.
7. M.H.V. van Regenmortel et al. // Academic Press, 2000, San Diego.
8. Sarkar J. et al. // Vaccine, 2003, Dec 1;21(32).
9. Wosu L.O.I I Studies Res. Vet. Med., 1994, Vol.2
10. Manual of standards for diagnostic tests and vaccines: list A and В discases of mammals, birds and bees. Office International des Epizooties (OIE) world organisation for Animal health. 2000. P. 114-122.
Класс A61K39/275 Poxviridae, например вирус оспы птиц
Класс A61P31/12 противовирусные средства