способ приготовления суспензии фармацевтической композиции на основе субстанции генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека

Формула изобретения

Способ приготовления фармацевтической композиции на основе генно-инженерного инсулина человека для флаконов, включающий получение водной суспензии инсулина с концентрацией 100 МЕ/мл, содержащей дополнительно хлорид цинка, протамина сульфат, натрий фосфорнокислый двузамещенный, глицерин, фенол и метакрезол, проведение стерилизующей фильтрации, розлива целевого продукта и кристаллизации, отличающийся тем, что предварительно готовят при перемешивании буферный раствор с рН 8,3-8,5, содержащий 2,4 г/мл натрия фосфорнокислого двузамещенного, 1,4-1,6 мг/мл мета-крезола, 0,5-0,7 мг/мл фенола, 15-17 мг/мл глицерина и воду, затем готовят раствор инсулина последовательным введением 0,35-0,45мг/мл протамина сульфата, субстанции инсулина человека, 1%-ного водного раствора хлористого цинка из расчета содержания цинка в лекарственной форме 0,025-0,035 мг/100 ME инсулина в воду, подкисленную до рН 3,1-3,3, растворы подвергают стерилизующей фильтрации, смешивают, а кристаллизацию проводят перед розливом выдерживанием полученной композиции при 12-16°С и перемешивании в течение 16-24 ч.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности к получению применяемых в терапии сахарного диабета препаратов инсулина пролонгированного действия, и может быть использовано в медицинской промышленности для изготовления суспензии отечественного генно-инженерного (рекомбинантного) протамина-инсулина человека во флаконах.

Известен способ приготовления суспензии свиного протамина-инсулина с концентрацией 100 МЕ/мл инсулина, предназначенной для розлива в картриджи. По этому способу в картриджи разливают препарат суспензии протамина-инсулина, приготовленной путем смешивания четырех растворов в инъекционной воде, а именно: раствора консервантов фенола и м-крезола; раствора протамина сульфата и глицерина; раствора инсулина и глицерина и фосфатного буферного раствора с последующей кристаллизацией при 20-25°С в течение 72 ч и розливом суспензии протамина-инсулина в картриджи; при этом на стадиях подготовки растворов их стерилизуют с помощью предфильтра с диаметром пор 0,45 мкм и фильтра с диаметром пор 0,22 мкм (патент РФ №2157698, МКИ А 61 К 38/28, опубл. 20.10.2000).

Недостатком способа является длительность процесса.

Известен наиболее близкий к заявленному способ приготовления суспензии генно-инженерного протамина-инсулина человека для картриджей и флаконов с дополнительным введением хлорида цинка и формированием кристаллов суспензии, состоящий в том, что предварительно готовят растворы, содержащие в расчете на 100 ME инсулина: 2,4 мг натрия фосфорнокислого двузамещенного, 0,7-0,8 мг м-крезола и 0,3-0,4 мг фенола (первый раствор); 0,7-0,8 мг м-крезола и 0,3-0,4 мг фенола (второй раствор); 0,3-0,4 мг протамина сульфата и 7,5-8,5 мг глицерина (третий раствор); инсулин, 4,0-40,0 мкг хлорида цинка и 7,5-8,5 мг глицерина (четвертый раствор); далее второй раствор смешивают с третьим и четвертым (пятый раствор), а затем в одну емкость стерильно фильтруют первый раствор и пятый, образовавшуюся взвесь разливают в картриджи и/или флаконы, укупоривают их, обкатывают на них колпачки. Кристаллизацию проводят в обкатанных картриджах или флаконах в течение 48 ч при температуре 15-30°С с четырехчасовым перемешиванием через 24 ч с момента розлива взвеси (патент РФ №2185152, МКИ А 61 К 9/10, опубл. 20.07.2002).

Однако и данный способ является достаточно длительным.

Изобретение решает задачу повышения эффективности технологического процесса приготовления суспензии фармацевтической композиции на основе отечественного генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека, содержащей протамина сульфат, с концентрацией инсулина 100 МЕ/мл, предназначенной для розлива во флаконы.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе приготовления фармацевтической композиции на основе генно-инженерного инсулина человека для флаконов, включающем получение водной суспензии инсулина с концентрацией 100 МЕ/мл, содержащей дополнительно хлорид цинка, протамина сульфат, натрий фосфорнокислый двузамещенный, глицерин, фенол и мета-крезол, проведение стерилизующей фильтрации, розлив и кристаллизацию, предварительно готовят при перемешивании буферный раствор с рН 8,3-8,5, содержащий 2,4 г/мл натрия фосфорнокислого двузамещенного, 1,4-1,6 мг/мл мета-крезола, 0,5-0,7 мг/мл фенола, 15-17 мг/мл глицерина и воду, затем готовят раствор инсулина последовательным введением 0,35-0,45 мг/мл протамина сульфата, субстанции инсулина человека, 1%-ного водного раствора хлористого цинка из расчета содержания цинка в лекарственной форме 0,025-0,035 мг/100 ME инсулина в воду, подкисленную до рН 3,1-3,3, растворы подвергают стерилизующей фильтрации, смешивают, а кристаллизацию проводят перед розливом выдерживанием полученной композиции при 12-16°С и перемешивании в течение 16-24 час.

Технический результат предлагаемого способа - сокращение длительности выдерживания фармацевтической композиции для формирования кристаллов суспензии с 48 час, как в известном способе, до 16-24 час, что повышает эффективность процесса.

Заявленный способ осуществляют следующим образом.

Предварительно готовят при перемешивании буферный раствор с рН 8,3-8,5, содержащий натрий фосфорнокислый двузамещенный, мета-крезол, фенол, глицерин и воду. Затем готовят раствор инсулина путем растворения при перемешивании в воде для инъекций, подкисленной до рН 3,1-3,3, сначала протамина сульфата, затем субстанции инсулина человека, а затем добавляют расчетное количество 1% раствора хлорида цинка. Проводят стерилизующую фильтрацию полученных растворов. Фильтрацию буферного раствора проводят при температуре раствора не выше 20°С на фильтровальной системе «Stericup Filter Units» («Миллипор», США), объем фильтрования 1000 мл, размер пор 0,22 мкм; фильтрацию раствора инсулин-цинк-протамин-сульфат проводят на одноразовой фильтровальной установке «Nalgene» («Nalge Company», США), объем фильтрования 250 мл, размер пор 0,22 мкм.

Отфильтрованный раствор инсулин-цинк-протамин-сульфат медленно вводят в буферный раствор при рН 7,2-7,4, перемешивают полученную суспензию со скоростью 60 об/мин в течение 16-24 час при 12-16°С для формирования кристаллов суспензии и направляют на розлив. Далее раствор разливают во флаконы на автоматическом поршневом медицинском дозаторе (АО «Медлабортехника», Украина).

Предлагаемый способ позволяет приготовить суспензию отечественного протамина-инсулина человека для флаконов эффективным и экономичным способом, при котором сохраняются все физико-химические и биологические свойства препарата (см. табл.). Для препарата получена Фармакопейная статья предприятия ФСП №42-0452-5916-04.

Получаемый препарат позволяет обеспечить здравоохранение новым эффективным и недорогим отечественным антидиабетическим средством и уменьшить проникновение на российский рынок дорогостоящих импортных препаратов инсулина. Срок хранения препарата без ухудшения его свойств составляет 2 года.

Заявленный способ иллюстрируют следующие примеры.

Пример 1.

В стеклянную емкость вместимостью 1,5 л, загружают 2,4 г натрия фосфорнокислого двузамещенного и 200 мл воды для инъекций. Раствор перемешивают до полного растворения соли. Затем вносят 15 г глицерина и перемешивают до однородности. В стакане емкостью 50 мл взвешивают 0,5 г фенола, добавляют 30 мл воды для инъекций, перемешивают и переносят раствор в емкость с натрием фосфорнокислым двузамещенным и глицерином, смывая стакан несколько раз водой для инъекций. В стакане емкостью 50 мл взвешивают 1,4 г м-крезола, добавляют 30 мл воды для инъекций, перемешивают и переносят раствор в емкость с натрием фосфорнокислым двузамещенным, глицерином и фенолом, смывая стакан несколько раз водой для инъекций. Объем полученного буферного раствора доводят водой для инъекций до 700 мл с рН 8,3.

В емкость объемом 500 мл, содержащую 100 мл подкисленной 0,1 N раствором HCl (1 мл) до рН 3,1 воды для инъекций, добавляют 350 мг протамина сульфата и перемешивают до полного растворения. 3, 67 г инсулина (при активности субстанции 27,5 МЕ/мл) суспендируют в 50 мл воды для инъекций, переносят, смывая водой, в емкость с раствором протамина сульфата, подкисляют 0,1 N раствором HCl (25-30 мл) и перемешивают до полного растворения инсулина при рН 3,1. В полученный раствор приливают 5 мл 1%-ного раствора хлористого цинка в расчете на содержание цинка в субстанции 0,3% и содержание в лекарственной форме 0,025 мг/100 ME. Объем раствора доводят до 250 мл.

Проводят стерилизующую фильтрацию полученных растворов.

В емкость вместимостью 1,5 л при перемешивании магнитной мешалкой (со скоростью 60 об/мин) переносят буферный раствор (700 мл, рН 8,3) и медленно приливают к нему раствор инсулина после стерилизующей фильтрации (250 мл, рН 3,1), через 25 минут контролируют рН, который должен быть 7,2-7,4. При отклонении от положенного значения, рН корректируют стерильным раствором 0,1 М соляной кислоты или 0,1 М раствором гидроксида натрия. Устанавливают рН 7,2.

Полученную композицию перемешивают со скоростью 60 об/мин в течение 16 час при 12°С и затем направляют на розлив. Свойства полученного препарата представлены в таблице.

Пример 2.

В стеклянную емкость вместимостью 1,5 л, загружают 2,4 г натрия фосфорнокислого двузамещенного и 200 мл воды для инъекций. Раствор перемешивают до полного растворения соли. Затем вносят 17 г глицерина и перемешивают до однородности. В стакане емкостью 50 мл взвешивают 0,7 г фенола, добавляют 30 мл воды для инъекций, перемешивают и переносят раствор в емкость с натрием фосфорнокислым двузамещенным и глицерином, смывая стакан несколько раз водой для инъекций. В стакане емкостью 50 мл взвешивают 1,6 г м-крезола, добавляют 30 мл воды для инъекций, перемешивают и переносят раствор в емкость с натрием фосфорнокислым двузамещенным, глицерином и фенолом, смывая стакан несколько раз водой для инъекций. Объем полученного буферного раствора доводят водой для инъекций до 700 мл с рН 8,5.

В емкость объемом 500 мл, содержащую 100 мл подкисленной 0,1 N раствором HCl (1-2 мл) до рН 3,3 воды для инъекций, добавляют 450 мг протамина сульфата и перемешивают до полного растворения. 3,67 г инсулина (при активности субстанции 27,5 МЕ/мл) суспендируют в 50 мл воды для инъекций, переносят смывая водой в емкость с раствором протамина сульфата, подкисляют 0,1 N раствором HCl (25-30 мл) и перемешивают до полного растворения инсулина при рН 3,3. В полученный раствор приливают 5 мл 1%-ного раствора хлористого цинка в расчете на содержание цинка в субстанции 0,3% и содержание в лекарственной форме 0,035 мг/100 МЕ. Объем раствора доводят до 250 мл водой для инъекций.

Проводят стерилизующую фильтрацию полученных растворов. В емкость вместимостью 1,5 л при перемешивании магнитной мешалкой (со скоростью 80 об/мин) переносят буферный раствор (700 мл, рН 8,5) и медленно приливают к нему раствор инсулина после стерилизующей фильтрации (250 мл, рН 3,3), через 25 минут контролируют рН, который должен быть 7,2-7,4. При отклонении от положенного значения, рН корректируют стерильным раствором 0,1 М соляной кислоты или 0,1 М раствором гидрооксида натрия. Устанавливают рН 7,4.

Полученную композицию перемешивают со скоростью 80 об/мин в течение 24 час при 16°С и затем направляют на розлив. Свойства полученного препарата представлены в таблице.

Таблица №1 Свойства суспензии генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека во флаконах.
Тесты и нормы			Примеры
			1					2
			После розлива	Через 6 мес.	Через 12 мес	Через 18 мес.	Через 24 мес.	После розлива	Через 6 мес.	Через 12 мес.	Через 18 мес.	Через 24 мес.
Описание	Суспензия белого цвета, при стоянии взвесь оседает. Жидкость над осадком прозрачная, бесцветная. Осадок ресуспендируется при встряхивании		+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
Размер кристаллов	Палочкообразные кристаллы размером более 1 мкм		+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
рН	Потенциометрически	7,2-7,4	7,20	7,25	7,22	7,24	7,28	7,41	7,42	7,40	7,45	7,40
Количество инсулина в надосадочной жидкости	ВЭЖХ, %	Не>1	0,35	0,35	0,36	0,40	0,48	0,21	0,23	0,25	0,31	0,38
Количество дезамидо-инсулина	ВЭЖХ, % А21	Не >1,8	0,32	0,35	0,41	0,53	0,61	0,26	0,31	0,33	0,35	0,43
Высокомолекулярные белки	ВЭЖХ, %	Не>2	0,30	0,32	0,35	0,41	0,41	0,11	0,12	0,15	0,20	0,25
Количеств. определение	ВЭЖХ, %	95-105	103,1	102,95	102,90	102,80	102,2	103,23	103,15	103,12	103,10	103,01
Примечание: + - удовлетворяет требованиям ФСП 42-0452-5916-04