способ получения препарата для повышения резистентности организма животных

Формула изобретения

Способ получения препарата, повышающего резистентность животных, включающий термогидролиз пчелиной перги, отличающийся тем, что осуществляют кислотный термогидролиз пчелиной перги: одну часть пчелиной перги вместе с сотами заливают 5-5,5 частями раствора янтарной кислоты с рН 3,5-4,5, смесь доводят до кипения и выдерживают при температуре 95-100°С 30 мин, горячий раствор фильтруют через марлевый фильтр, затем дробным добавлением 4%-ного раствора едкого натрия доводят рН до 7,0, после чего добавляют дистиллированную воду из расчета, чтобы конечный продукт содержал 25,0±1,0 мг/мл сухих веществ.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к технологии получения биологически активных препаратов, в частности к средствам, повышающим резистентность организма животных.

Известен способ получения средства стимуляции иммунной системы организма, включающий кислотный гидролиз пыльцы (Патент №2048120, МПК А 63 К 1/16, 1995).

Недостатком является то, что это средство, обладая повышенной кислотностью, изначально предназначено для перорального применения при кормлении животных, что не может быть признано рациональным, так как требует использования препарата в большом количестве (2-4%) от суточного потребления корма,

В качестве прототипа взят способ получения препарата, включающего щелочной термогидролиз пчелиной перги, проводимый при температуре 95-100°С 3-4% раствором гидроксида натрия (едкий натрий) в течение 30-45 минут (Патент №2889.1999. Республика Беларусь. Авт. Красочко П.А. и др.).

Недостатком прототипа является то, что конечный продукт имеет щелочную реакцию, в то время как препараты, предназначенные для парентерального введения, должны иметь нейтральную реакцию (рН 7,0). Для устранения вышесказанных недостатков и для получения технического результата изобретения - повышения ростостимулирующих и иммуностимулирутощих свойств препарата - предлагается способ получения препарата, включающий кислотный гидролиз пчелиной перги и инактивацию повышенной кислотности в конечном продукте щелочью.

Новым является то, что для проведения кислотного гидролиза используется раствор янтарной кислоты, при рН 3,5-4,5, а повышенная кислотность гидролизата инактивируется дробным добавлением 4% раствора едкого натрия.

Выбор в отношении раствора янтарной кислоты обусловлен тем, что она обладает уникальными фармакологическими свойствами, в частности способностью повышения иммунобиологической реактивности организма, стимуляции окислительно-восстановительных реакций, профилактировать постинтоксикационные расстройства, регуляции тканевого обмена веществ. В организме янтарная кислота полностью метаболизируется до воды и углекислого газа (Инструкция по применению препарата «Лимонтар» Утверждена Департаментом государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники 18.11.2000 г. Мин. Здравоохранения РФ).

Инактивация повышенной кислотности достигается добавлением к кислотному гидролизату пчелиной перги 3-4% едкого натрия, что позволяет перевести янтарную кислоту (не изменял ее фармакодиагностику) в сукцинат натрия (соль янтарной кислоты).

Опыты показали, что добавление к пчелиной перги раствора янтарной кислотой (рН 3,5-4,5) в соотношении, 1 часть перга и 5 частей раствора, обеспечивает тот же, что и в прототипе, выход конечного продукта при проведении термогидролиза.

Дробное добавление к гидролизату 3-4% раствора едкого натрия позволило инактивировать в нем повышенную кислотность и довести реакцию до нейтральной (рН 7,0) При этом выпадения осадка не наблюдалось.

Таким образом, янтарная кислота была переведена в ее соль - сукцинат натрия. Наличие в конечном продукте - гидролизате пчелиной перги - сукцината натрия, позволяет значительно повысить биологическую активность и, следовательно, иммуностимулирующие свойства препарата,

Пример осуществления способа. Препарат готовили следующим образом. Исходный компонент (пчелиная перга вместе с сотами), одна часть, залили 5-5,5 частями дистиллированной воды. В которую предварительно добавили янтарную кислоту до рН 4,0.

Указанную смесь довели до кипения и выдержали при температуре 95-100°С 30 минут. В горячем состоянии провели фильтрацию раствора через марлевый фильтр. Дробным добавлением 4% раствора едкого натрия довели рН до 7,0. После определения концентрации сухих веществ высчитали необходимое количество добавления дистиллированной воды с тем, чтобы конечный продукт содержал их не менее 25,0±1,0 мг/мл.

Препарат расфасовали по флаконам емкостью 100,0 мл и провели стерилизацию автоклавированием в режиме 1,2-1,3 атмосферы в течение 30 минут.

Контроль препарата провели на стерильность, безвредность, рост и иммуностимулирующую активность.

При контрольном высеве препарата на питательные среды: МПА, МПБ и МПБ под вазелиновое масло и последующей их выдержке в термостате при 37°С в течение 10 дней роста посторонней микрофлоры не наблюдали.

Безвредность препарата проверили на белых мышках массой 20,0±2,0 г. При однократном внутрибрюшинном введении мышам препарата в объеме 0,5 мл (25 мг/кг) гибели или ухудшения состояния их клинического статуса не отмечали (срок наблюдения 10 дней).

Ростостимулирующие свойства изучили на 2-х группах (п=5) месячного возраста морских свинках, которым внутримышечно однократно ввели препарат в дозе 12,5 мг/кг (1 группа) и 25 мг/кг (2 группа). По истечении 30 дней, средняя масса тела растущих морских свинок в 1-й группе была на 15 и во 2-й на 22% выше, чем у их сверстников из контрольной группы.

При изучении иммуностимулирующих свойств препарата установлено, что предварительно проведенная однократная иммунизация мышей со средней массой 20,0±2,0 г, в дозе 0,2 мл (1 группа) и двукратная, с интервалом в 10 дней, в дозе 0,2+0,2 мл (2-я группа), обеспечила защиту их организма при заражении культурой Echerihia coli в дозе 2 LD в 1-й группе у 4 из 7 особей (57,1%) и во 2-й у 5 из 7 особей (71,4%).

Таким образом, установлено, что полученный по новому способу препарат при парентеральном введении имел пониженную токсичность и в дозе 25 мг/кг (в прототипе не более 10 мг/кг) не вызывал ухудшения клинического статуса мышей; оказал положительное влияние на активацию роста морских свинок; повысил антиинфекционную резистентность организма мышек при заражении их смертельной дозой Echerihia coli до 57,1% при однократной иммунизации.