способ очистки правастатина

Формула изобретения

1. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли от примесей аналогов правастатина, который включает проведение экстракции правастатина или его фармакологически приемлемой соли, содержащих примеси аналогов правастатина, органическим растворителем формулы СН₃СО₂R, где R представляет собой алкил, содержащий три или четыре атома углерода).

2. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.1, дополнительно включающий разложение примесей с использованием неорганической кислоты.

3. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из пп.1 и 2, дополнительно включающий разложение примесей с использованием неорганического основания.

4. Способ по п.2 или 3, где фармакологически приемлемой солью правастатина является натриевая соль правастатина, и способ включает удаление соединения формулы (I)

до содержания 0,1 мас.% или менее по отношению к натриевой соли правастатина.

5. Способ по любому из пп.1-3, где R представляет собой н-пропил или н-бутил.

6. Способ по любому из пп.2-5, где неорганическая кислота представляет собой фосфорную кислоту.

7. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из пп.2-6, где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5.

8. Способ выделения или очистки натриевой соли правастатина по любому из пп.4-6, где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше.

9. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает разложение примесей с использованием неорганической кислоты.

10. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.9, дополнительно включающий разложение примесей с использованием неорганического основания.

11. Способ по п.10, где фармакологически приемлемой солью правастатина является натриевая соль правастатина, и способ включает удаление соединения формулы (I)

до содержания 0,1 мас.% или менее по отношению к натриевой соли правастатина.

12. Способ по любому из п.10 или 11, где R представляет собой н-пропил или н-бутил.

13. Способ по любому из пп.9-12, где неорганическая кислота представляет собой фосфорную кислоту.

14. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из пп.9-13, где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5.

15. Способ выделения или очистки натриевой соли правастатина по любому из пп.11-13, где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше.

16. Способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает удаление соединения формулы (I) с использованием неорганического основания.

17. Композиция, содержащая натриевую соль правастатина, которая получена выделением или очисткой по п.2 или 3 и содержит соединение формулы (I)

в количестве 0,1 мас.% или менее по отношению к количеству натриевой соли правастатина.

18. Композиция по п.17, содержащая натриевую соль правастатина, чистота которой составляет 99,5% или более.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение стадии экстракции правастатина и его аналогов с использованием органического растворителя, имеющего формулу CH₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода); к способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение стадии, включающей разложение примесей с использованием неорганической кислоты, и к способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение стадии, включающей разложение примесей с использованием неорганического основания.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, в котором сочетаются две или более стадии, выбранные из вышеуказанных трех стадий.

Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей натриевую соль правастатина, которая производится промышленностью, где соединение, имеющее формулу (I), содержится в количестве 0,1% или ниже к массе натриевой соли правастатина.

Предпосылки изобретения

Правастатин представляет собой соединение, которое описано в качестве ингибитора HMG-CoA-редуктазы в публикации заявки на патент Японии (Kokai) № Sho 57-2240 (патент США №4346227) и имеет следующую формулу (II), и натриевая соль правастатина в настоящее время является промышленно доступной в качестве терапевтического средства для лечения гиперлипидемии.

Помимо правастатина многие соединения, известные в качестве ингибиторов HMG-CoA-редуктазы, например аторвастатин, флувастатин, итавастатин и тому подобное, являются соединениями, которые получают синтетически.

С другой стороны, хотя ловастатин и симвастатин получают ферментацией аналогично правастатину, их получают путем одностадийной ферментации, что отличает их от правастатина, который получают двухстадийной ферментацией. А именно, натриевую соль правастатина получают на второй стадии микробиологической трансформацией предшественника, который получают на первой стадии ферментации.

Penicillium citrinum

Во-первых, когда микроорганизм ферментируют, образуется гораздо больше неожиданных примесей по сравнению со случаем проведения синтеза химической реакцией. Даже несмотря на то что очистку соответственно проводят на каждой стадии, невозможно полностью удалить все примеси и, в частности, особенно трудно удалить примеси при культивировании в большом масштабе для промышленного производства.

С другой стороны, «одним из важнейших факторов для получения безопасного и эффективного фармацевтического препарата является получение высокочистого продукта. Химическое соединение получают производственными способами, такими как химический синтез, из исходных соединений выделением или очисткой указанного соединения, продуцированного микроорганизмом, выделением или очисткой указанного соединения, полученного с использованием генетической рекомбинации клетки. Как правило, если даже используют производственный способ, включая способ генетической рекомбинации, часто трудно получить произведенное химическое соединение, имеющее чистоту, равную 100%, из-за степени чистоты исходных соединений, незавершенности реакций, разложения на стадиях выделения или очистки и тому подобное. Кроме того, что касается фармацевтических препаратов, из уровня знаний в этой области, к которой относится изобретение по настоящей заявке, очевидно, что диагностические средства и терапевтические средства, включающие примеси, могут оказать нежелательное воздействие на диагностику и лечение. И, наконец, важно получить продукт, который является как можно более чистым» [Tokyo High Court: the 302^nd case in Heisei 9 (Gyo-ke); (Judgment on Feb. 17, 2000)].

Кроме того, ингибитор HMG-CoA-редуктазы представляет собой фармацевтический препарат, который вводят в течение продолжительного периода времени для эффективного снижения концентрации холестерина в крови, следовательно, необходимо, чтобы он был особенно высокочистым для того, чтобы максимально снизить проявление побочных реакций.

Следовательно, как описано выше, поскольку правастатин, который получают двухстадийной ферментацией, содержит больше примесей, чем симвастатин и ловастатин, которые получают одностадийной ферментацией, стадия очистки является особенно важной, и продолжают проводиться исследования для поиска способов выделения или очистки высокочистого правастатина удалением примесей.

Авторы настоящего изобретения, в частности, установили, что, когда правастатин получают двухстадийной ферментацией, всегда совместно получают следующее соединение (I):

и кроме того, количество продуцированного вышеуказанного соединения (I) является самым высоким среди примесей, которые образуются при трансформации под действием микроорганизмов с получением правастатина. Однако хотя авторы настоящего изобретения установили, что важным является тщательное удаление вышеуказанного соединения (I) из примесей, образующихся во время производства фармацевтического препарата, для получения высокочистого правастатина, очень трудно отделить вышеуказанное соединение (I) в сравнении с другими примесями, поскольку оно представляет оптический изомер относительно гидроксильной группы в одном из асимметричных атомов углерода правастатина.

Следовательно, имеется потребность в способе, который не являлся бы трудоемким и невыгодным в промышленном отношении, таким как хроматография, не оказывал бы отрицательного влияния на производительность стадий и приводил бы к выделению или очистке правастатина или его фармакологически приемлемой соли до чистоты, которая является такой же высокой, какую получают при очистке хроматографией; и дополнительно требуется простой способ выделения или очистки, при котором можно было бы удалить вышеуказанное соединение (I) и получить высокочистый правастатин.

С другой стороны, известны следующие способы в качестве способов очистки ингибитора HMG-CoA-редуктазы.

(1) Публикация заявки WO 92/16276 (публикация заявки на патент Японии № (Kohyo) Hei 6-506210)

Данная публикация относится к «способу очистки ингибитора HMG-CoA-редуктазы, в котором применяется высокоэффективная жидкостная хроматография, и ингибиторам HMG-CoA-редуктазы, полученным способом очистки».

В способе очистки по данной публикации используется высокоэффективная жидкостная хроматография на стадии очистки ингибитора HMG-CoA-редуктазы. С другой стороны, способ выделения или очистки по настоящему изобретению отличается от способа по публикации тем, что он позволяет получить высокочистый правастатин без применения высокоэффективной жидкостной хроматографии, удалением примесей правастатина с использованием органического растворителя, имеющего формулу CH₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода), такого как н-пропилацетат или н-бутилацетат, и/или удалением примесей их разложением с использованием неорганической кислоты и/или неорганического основания.

Кроме того, способ выделения или очистки по настоящему изобретению, «который включает удаление соединения (I) до количества 0,1% или менее по отношению к массе натриевой соли правастатина», не описан и не предложен.

Между прочим, поскольку для высокоэффективной жидкостной хроматографии требуются большие количества растворителей и в них находятся незначительные количества нелетучих примесей, это становится более серьезным в случае производства в промышленном масштабе. Когда растворители удаляют, пробы будут загрязнены нелетучими примесями. Кроме того, в результате применения большого количества растворителей возникают серьезные проблемы в отношении загрязнения окружающей среды и требуются большие затраты на перегонку.

Следовательно, высокоэффективная жидкостная хроматография является трудоемкой и невыгодной в промышленном отношении, и ее нельзя рассматривать как способ, который подходит для выделения или очистки правастатина в промышленности.

Кроме того, даже если использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию для промышленного производства правастатина, то трудно удалить вышеуказанное соединение (I), которое представляет оптический изомер правастатина, и получить правастатин, имеющий желаемую чистоту.

(2) Публикация заявки WO 99/42601

Данная публикация относится к «способу выделения или очистки, в котором рН концентрированного культурального бульона, содержащего ингибитор HMG-CoA-редуктазы, доводят до 4,5-7,5 кислотой, затем ингибитор HMG-CoA-редуктазы экстрагируют этилацетатом и после лактонизации, если желательно, кристаллизуют с получением ингибитора HMG-CoA-редуктазы, имеющего чистоту, равную 99,6% или выше».

Способ очистки по публикации отличается от способа выделения или очистки по настоящему изобретению тем, что в способе очистки по публикации используется этилацетат в качестве органического растворителя на стадии экстракции правастатина и его аналогов из концентрированного культурального бульона, который содержит правастатин и его аналоги, продуцированные микроорганизмом, в то время как в способе по настоящему изобретению, напротив, используется органический растворитель, имеющий формулу CH₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода), такой как н-пропилацетат или н-бутилацетат.

Кроме того, способом выделения или очистки по настоящему изобретению получают высокочистый правастатин путем осуществления стадии разложения примесей правастатина с использованием неорганической кислоты и/или неорганического основания, тогда как стадия разложения примесей ингибитора HMG-CoA-редуктазы с использованием неорганической кислоты и/или неорганического основания совсем не описана и не предложена в публикации.

Кроме того, способ выделения или очистки по настоящему изобретению, «который включает удаление соединения (I) до количества 0,1% или менее к массе натриевой соли правастатина», совсем не описан и не предложен.

Конечно, способ выделения или очистки правастатина описан в примере 3 публикации. Однако в данном примере чистота правастатина, который экстрагировали этилацетатом, остается на уровне только 70,3% или ниже, и затем несмотря на то что имеется описание его очистки с использованием хроматографии, которая отличается от способа выделения или очистки по настоящему изобретению, чистота получаемого в конечном итоге правастатина не указана вовсе. Следовательно, непонятно, получается ли в конечном итоге правастатин чистым или нет.

Настоящее изобретение относится к:

(1) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли от примесей аналогов правастатина, который включает проведение экстракции правастатина или его фармакологически приемлемой соли, содержащих примеси аналогов правастатина, органическим растворителем формулы СН₃СО₂R (где R представляет собой алкил, содержащий три или четыре атома углерода);

предпочтительно относится к:

(2) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по (1), который дополнительно включает разложение примесей с использованием неорганической кислоты; и

(3) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по (1) или (2), который дополнительно включает разложение примесей с использованием неорганического основания;

(4) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по (2) или (3), где фармакологически приемлемой солью правастатина является натриевая соль правастатина, и способ включает удаление соединения формулы (I)

до содержания 0,1 мас.% или менее по отношению к натриевой соли правастатина;

(5) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из (1)-(3), где R представляет н-пропил или н-бутил;

(6) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из (2)-(5), где указанная неорганическая кислота представляет собой фосфорную кислоту; и

(7) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из (2)-(6), где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5.

(8) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из (4)-(6), где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше;

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(9) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает разложение примесей с использованием неорганической кислоты;

предпочтительно относится к:

(10) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по (9), дополнительно включающий разложение примесей с использованием неорганического основания;

(11) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по (10), где фармакологически приемлемой солью правастатина является натриевая соль правастатина, и способ включает удаление соединения формулы (I)

до содержания 0,1 мас.% или менее по отношению к натриевой соли правастатина;

(12) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по (10) или (11), где R представляет н-пропил или н-бутил;

(13) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из (9)-(12), где неорганическая кислота представляет фосфорную кислоту; и

(14) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по любому из (9)-(13), где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5;

(15) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли любому из (11)-(13), где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше.

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(16) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает удаление соединения формулы (I) с использованием неорганического основания.

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(17) Композиции, содержащей натриевую соль правастатина, которая получена выделением или очисткой, как указано в (2) или (3), и содержит соединение формулы (I)

в количестве 0,1 мас.% или менее по отношению к количеству натриевой соли правастатина;

предпочтительно относится к:

(18) Композиции по (17), содержащей натриевую соль правастатина, чистота которой составляет изобретение.

Настоящее изобретение относится к:

(1) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH₃CO₂R (где R представляет собой алкил, имеющий три или более атомов углерода);

(2) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает разложение примесей с использованием неорганической кислоты; и

(3) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает разложение примесей с использованием неорганического основания;

предпочтительно относится к:

(4) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(1), где R представляет алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3 или 4 атомов углерода;

(5) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(1), где R представляет н-пропил или н-бутил;

(6) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(2), где указанная неорганическая кислота представляет фосфорную кислоту; и

(7) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(2) или (6), где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5.

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(8) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение сочетания экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH ₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода) и разложения примесей с использованием неорганической кислоты;

(9) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение сочетания разложения примесей с использованием неорганической кислоты и разложения примесей с использованием неорганического основания; и

(10) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение сочетания экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH ₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода); разложения примесей с использованием неорганической кислоты и разложения примесей с использованием неорганического основания;

предпочтительно относится к:

(11) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(8) или (10), где R представляет алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3 или 4 атомов углерода;

(12) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(8) или (10), где R представляет н-пропил или н-бутил;

(13) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по одному из пп.(8)-(12), где неорганическая кислота представляет фосфорную кислоту; и

(14) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по одному из пп.(8)-(13), где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5.

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(15) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает проведение сочетания экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH ₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода) и разложения примесей с использованием неорганического основания;

предпочтительно относится к:

(16) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(15), где R представляет алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3 или 4 атомов углерода; и

(17) Способу выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли по п.(15), где R представляет н-пропил или н-бутил.

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(18) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина, который включает удаление соединения формулы (I) так, что количество соединения формулы (I) снижается до 0,1 мас.% или ниже от количества натриевой соли правастатина посредством проведения сочетания экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода) и разложения примесей с использованием неорганической кислоты;

(19) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина, который включает удаление соединения формулы (I) так, что количество соединения формулы (I) снижается до 0,1 мас.% или ниже от количества натриевой соли правастатина посредством проведения сочетания разложения примесей неорганической кислотой и разложения примесей с использованием неорганического основания; и

(20) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина, который включает удаление соединения формулы (I) так, что количество соединения формулы (I) снижается до 0,1 мас.% или ниже от количества натриевой соли правастатина посредством проведения сочетания экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода); разложения примесей с использованием неорганической кислоты и разложения примесей с использованием неорганического основания.

предпочтительно относится к:

(21) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по п.(18) или (20), где R представляет алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3 или 4 атомов углерода;

(22) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по п.(18) или (20), где R представляет н-пропил или н-бутил;

(23) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по одному из пп.(18)-(20), где неорганическая кислота представляет фосфорную кислоту;

(24) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по одному из пп.(18)-(23), где рН на стадии разложения с использованием неорганической кислоты находится в пределах 2-5; и

(25) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по одному из пп.(18)-(23), где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше.

Кроме того, настоящее изобретение также относится к:

(26) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина, который включает удаление соединения формулы (I) так, что количество соединения формулы (I) снижается до 0,1 мас.% или ниже от количества натриевой соли правастатина посредством проведения сочетания экстракции правастатина и его аналогов органическим растворителем, имеющим формулу CH₃CO₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода), и разложения примесей с использованием неорганического основания;

предпочтительно относится к:

(27) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по п.(26), где R представляет алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3 или 4 атомов углерода;

(28) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по п.(26), где R представляет н-пропил или н-бутил; и

(29) Способу выделения или очистки натриевой соли правастатина по одному из пп.(26)-(28), где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше.

Кроме того, настоящее изобретение относится к:

(30) Композиции, включающей натриевую соль правастатина, которая производится промышленностью и содержит соединение формулы (I), количество которого составляет 0,1 мас.% или ниже от количества натриевой соли правастатина;

предпочтительно относится к:

(31) Композиции, включающей натриевую соль правастатина по п. (30), которая производится промышленностью и содержит 99,5% или выше натриевой соли правастатина;

(32) Композиции, включающей натриевую соль правастатина, которую получают выделением или очисткой по одному из пп.(8)-(17), и которая содержит соединение формулы (I), количество которого составляет 0,1 мас.% или ниже от количества натриевой соли правастатина;

(33) Композиции, включающей натриевую соль правастатина по п.(32), где чистота натриевой соли правастатина составляет 99,5% или выше.

В настоящем изобретении «правастатин и его аналоги» означают правастатин, имеющий формулу (II), или его фармакологически приемлемую соль и соединения, которые обладают близкой структурой к вышеуказанной формуле (II), а именно аналог правастатина [например, можно упомянуть вышеуказанное соединение (I)].

Выделение или очистка правастатина или его фармакологически приемлемой соли обычно достигается способами выделения или очистки, описанными ниже.

Вначале культуральный бульон, содержащий правастатин, полученный после окончания культивирования с трансформацией, отделяют от мицелия фильтрованием и/или центрифугированием обычным методом и затем концентрируют с получением концентрированного культурального фильтрата.

Значение рН полученного таким образом концентрированного культурального фильтрата доводят с использованием кислоты, если необходимо, и затем правастатин и его аналоги экстрагируют с использованием органического растворителя, такого как этилацетат, который с трудом смешивается с водой. Например, в публикации заявки WO 99/42601 рН концентрированного культурального фильтрата, содержащего ингибитор HMG-CoA-редуктазы, доводят до 4,5-7,5 (предпочтительно до 5,5-7,5) с использованием кислоты и затем экстрагируют этилацетатом.

Полученные таким образом правастатин и его аналоги собирают из вышеуказанного экстракта обычным методом. Например, вышеуказанный экстракт промывают водой, насыщенным раствором хлорида натрия и тому подобное, к экстракту добавляют гидроокись щелочи и проводят экстракцию и стадию выделения с получением водного раствора соли правастатина в виде обращенного экстрагированного водного слоя. Полученную соль правастатина можно кристаллизовать, если желательно.

Кристаллизацию, которую проводят при необходимости, можно осуществить, как описано ниже, способами, обычно известными в технологии химии органического синтеза [например, способом, описанным в Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A24, 5^th edition (1993), pp. 437-505].

Что касается способа кристаллизации, то, например, правастатин можно получить в виде кристаллической формы добавлением органического растворителя и воды к композиции правастатина или его фармакологически приемлемой соли, его растворением при нагревании и внесением затравки из небольшого количества соли правастатина.

Органическим растворителем, используемым для кристаллизации, является, например, алифатический углеводород, такой как гексан и гептан; ароматический углеводород, такой как толуол и ксилол; сложный эфир, такой как метилацетат, этилацетат, н-пропилацетат и н-бутилацетат; органическая кислота, такая как уксусная кислота; спирт, такой как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол, изобутанол, трет-бутанол, изоамиловый спирт, диэтиленгликоль, глицерин и октанол; кетон, такой как ацетон и метилэтилкетон; простой эфир, такой как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран, диоксан, диметоксиэтан и диметиловый эфир диэтиленгликоля; амид, такой как формамид, диметилформамид, диметилацетамид и триамид гексаметилфосфорной килоты; сульфоксид, такой как диметилсульфоксид, или смешанный растворитель из воды и одного или более вышеуказанных органических растворителей. Смешанный растворитель из воды и одного или более вышеуказанных органических растворителей является предпочтительным, смешанный растворитель из воды и одного или более органических растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и кетонов, является более предпочтительным, и смешанный растворитель из воды, спиртов и сложных эфиров является наиболее предпочтительным.

Способ выделения или очистки по настоящему изобретению начинается с концентрированного культурального фильтрата, полученного обычным способом, и затем его экстрагируют без использования этилацетата, а с использованием органического растворителя, имеющего формулу СН₃СО₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода) на стадии выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли.

«Алкил, имеющий три или более атомов углерода» при определении R в вышеуказанной формуле представляет, например, группу такую, как н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, 2-метилбутил, неопентил, 1-этилпропил, гексил, изогексил, 4-метилпентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил, 1-метилпентил, 3,3-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2,3-диметилбутил, 1-этилбутил и 2-этилбутил. Алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3-6 атомов углерода, является предпочтительным, алкил с линейной или разветвленной цепью, имеющий 3 или 4 атомов углерода, является более предпочтительным, и н-пропил или н-бутил являются наиболее предпочтительными.

Кроме того, способ выделения или очистки по настоящему изобретению также отличается включением стадии разложения примесей правастатина с использованием неорганической кислоты и/или стадии разложения примесей с использованием неорганического основания в способ выделения или очистки вышеуказанного правастатина.

Когда две или более стадии, выбранные из стадии экстракции правастатина с использованием органического растворителя, имеющего вышеуказанную формулу СН₃СО₂R, стадии разложения примесей, находящихся с правастатином, с использованием неорганической кислоты и стадии разложения примесей с использованием неорганического основания, применяются в сочетании, желаемые стадии можно соответственно проводить произвольно в способе выделения или очистки. Конкретные примеры способа выделения или очистки включают:

(а) способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает сочетание стадии экстракции правастатина и его аналогов с использованием органического растворителя, имеющего формулу СН₃СО₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода), и стадии разложения примесей с использованием неорганической кислоты,

(b) способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает сочетание стадии экстракции правастатина и его аналогов с использованием органического растворителя, имеющего формулу СН₃СО₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода), и стадии разложения примесей с использованием неорганического основания,

(с) способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает сочетание стадии разложения примесей с использованием неорганической кислоты и стадии разложения примесей с использованием неорганического основания, и

(d) способ выделения или очистки правастатина или его фармакологически приемлемой соли, который включает сочетание стадии экстракции правастатина и его аналогов с использованием органического растворителя, имеющего формулу СН₃СО₂R (где R представляет алкил, имеющий три или более атомов углерода), стадии разложения примесей с использованием неорганической кислоты и стадии разложения примесей с использованием неорганического основания.

Стадию разложения примесей правастатина или его фармакологически приемлемой соли с использованием неорганической кислоты проводят в присутствии или в отсутствие инертного растворителя (предпочтительно в присутствии) в условиях, при которых рН раствора правастатина или его фармакологически приемлемой соли доводят до 2-5 (предпочтительно 3-4).

«Неорганическая кислота», которую используют при разложении примесей неорганической кислотой, особым образом не ограничивается при условии, что ее используют в виде неорганической кислоты в обычной реакции, и, например, можно использовать бромистоводородную кислоту, соляную кислоту, серную кислоту, перхлорную кислоту, фосфорную кислоту и азотную кислоту. Фосфорная или серная кислоты являются предпочтительными, и фосфорная кислота является наиболее предпочтительной.

Температура реакции и время реакции при разложении примесей неорганической кислотой зависят от значения рН. В основном, когда температура реакции является низкой, требуемое время реакции является длительным, и когда температура реакции является высокой, требуемое время реакции является коротким. Например, температура реакции составляет 20-80°С (предпочтительно 40-60°С), и время реакции находится в пределах от 1 мин до 6 час (предпочтительно от 5 мин до 20 мин).

Несмотря на то что «инертный растворитель», используемый при разложении примесей неорганической кислотой, особым образом не ограничивается при условии, что он используется в виде растворителя, примеры включают спирты, такие как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол, изобутанол, трет-бутанол, изоамиловый спирт, диэтиленгликоль, глицерин, октанол, циклогексанол и метилцеллозольв; воду или смешанный растворитель из воды с вышеуказанными спиртами, предпочтительно воду или смешанный растворитель из воды с вышеуказанными спиртами, и наиболее предпочтительно воду или смешанный растворитель из воды с этанолом.

После реакции правастатин, который является желаемым соединением, собирают из реакционного раствора обычным способом. Например, добавляют органический растворитель, такой как этилацетат, который не смешивается с водой, отделяют слой органического растворителя, содержащий желаемое соединение, слой растворителя промывают водой и растворитель упаривают с получением желаемого соединения. Кроме того, если необходимо, слой растворителя обесцвечивают добавлением активированного угля, активированный уголь удаляют фильтрованием, затем добавляют реагент, который образует соль правастатина, такой как гидроокись натрия, метилат натрия или этилат натрия, и слой концентрируют при пониженном давлении на роторном испарителе и тому подобное с получением соли правастатина.

Стадию разложения примесей правастатина или его фармакологически приемлемой соли с использованием неорганического основания проводят в присутствии или в отсутствие инертного растворителя (предпочтительно в присутствии) в условиях, при которых рН раствора правастатина или его фармакологически приемлемой соли доводят до 10-14.

«Неорганическое основание», которое используют при разложении примесей неорганическим основанием, особым образом не ограничивается при условии, что его используют в виде неорганического основания в обычной реакции. Примеры включают карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат лития, карбонат натрия и карбонат калия; бикарбонаты щелочных металлов, такие как бикарбонат лития, бикарбонат натрия и бикарбонат калия; гидриды щелочных металлов, такие как гидрид лития, гидрид натрия и гидрид калия; гидроокиси щелочных металлов, такие как гидроокись лития, гидроокись натрия и гидроокись калия; алкоголяты щелочных металлов, такие как метилат лития, метилат натрия, этилат натрия и трет-бутилат калия, предпочтительно гидроокиси щелочных металлов, и наиболее предпочтительно гидроокись натрия.

Температура реакции и время реакции при разложении примесей неорганическим основанием зависят от значения рН. В основном, когда температура реакции является низкой, требуемое время реакции является длительным, и когда температура реакции является высокой, требуемое время реакции является коротким. Например, температура реакции составляет -10 - 110°С и время реакции находится в пределах от 15 мин до 200 час.

«Инертный растворитель», используемый при разложении примесей неорганическим основанием, особым образом не ограничивается при условии, что он является инертным для настоящей реакции, и можно использовать растворители, аналогичные инертному растворителю, используемому при разложении примесей неорганической кислотой.

В качестве предпочтительных условий для разложения неорганическим основанием примесей, которые находятся в концентрированном культуральном фильтрате, содержащем правастатин, продуцированный микроорганизмом, рН составляет 11-14 (более предпочтительно 11-12), температура реакции равняется 40-110°С (более предпочтительно 95-105°С), и время реакции находится в пределах от 2 до 24 час (более предпочтительно от 2 до 5 час).

С другой стороны, разложение неорганическим основанием примесей, которые находятся в обращенном экстракте, полученном экстракцией водным раствором щелочи (предпочтительно при рН 8-9) из органического экстракта, который получают экстракцией концентрированного культурального фильтрата, содержащего правастатин, продуцированный микроорганизмом, органическим растворителем в кислых условиях (предпочтительно при рН 4-6), предпочтительно проводят при рН 13-14 (более предпочтительно при 13,5-14), при температуре реакции -10 - 50°С (более предпочтительно при -5 - 5°С) и при времени реакции от 2 до 180 час (более предпочтительно от 20 до 50 час и наиболее предпочтительно от 25 до 35 час).

После реакции правастатин, который является желаемым соединением, собирают из вышеуказанного реакционного раствора обычным способом. Например, добавляют водный раствор кислоты, такой как водный раствор серной кислоты, добавляют органический растворитель, такой как этилацетат, который не смешивается с водой, отделяют слой органического растворителя, содержащий желаемое соединение, слой растворителя промывают водой и тому подобное, и растворитель упаривают с получением желаемого соединения. Кроме того, если необходимо, слой растворителя обесцвечивают добавлением активированного угля, активированный уголь удаляют фильтрованием, затем добавляют реагент, который образует соль правастатина, такой как метилат натрия, этилат натрия или гидроокись натрия, и слой концентрируют при пониженном давлении на роторном испарителе и тому подобное с получением соли правастатина.

Кроме того, способ выделения или очистки по настоящему изобретению может включать стадию кристаллизации полученной соли правастатина, и кристаллизацию можно проводить обычным методом.

Сущность изобретения

Способ выделения или очистки по настоящему изобретению представляет способ получения высокочистого правастатина или его фармакологически приемлемой соли (предпочтительно имеющего чистоту 99,5% или выше) без применения способа, который является трудоемким и невыгодным в промышленном отношении, такого как колоночная хроматография.

Кроме того, вышеуказанное соединение (I) удаляют до количества 0,1% или ниже к массе правастатина способом выделения или очистки по настоящему изобретению.

Промышленная применимость

Когда правастатин или его фармакологически приемлемую соль используют в качестве фармацевтического препарата, сам по себе правастатин или соответствующую смесь правастатина с наполнителями, разбавителями и тому подобное, которые являются фармакологически приемлемыми, можно вводить перорально в виде, например, таблеток, капсул, гранул, порошков или сиропов или вводить парентерально инъекцией или суппозиторием или тому подобное.

Кроме того, можно провести анализ чистоты по настоящему изобретению с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Условия определения ВЭЖХ являются следующими:

А: подвижная фаза: 20% ацетонитрила, 30% метанола, 50% буфера TEAP (0,3% триэтиламина-Н₃РО₄ (рН 3,2));

Длина волны детектирования: УФ 238 нм;

Колонка: колонка с обращенной фазой производства Waters Symmetry С18 3,5 мкм, 4,6 мм × 15 см;

Скорость потока: 1 мл/мин.

В: подвижная фаза: смешанный раствор метанол:вода:ледяная уксусная кислота:триэтиламин (600:400:1:1);

Длина волны детектирования: УФ 238 нм;

Колонка: колонка производства Elmer Optics ERC-ODS-1262, 6 мм × 10 см;

Температура колонки: 30°С;

Скорость потока: 1 мл/мин, или

С: подвижная фаза: смешанный раствор метанол:вода:ледяная уксусная кислота:триэтиламин (450:550:1:1);

Длина волны детектирования: УФ 238 нм;

Колонка: колонка производства Beckman Ultrasphere ODS, 4,6 мм × 15 см, 5 мкм;

Температура колонки: 25°С;

Скорость потока: 1,3 мл/мин.

Примеры представлены ниже, и настоящее изобретение дополнительно специально иллюстрируются, но настоящее изобретение не ограничивается ими.

Пример 1. Экстракция с использованием н-бутилацета из концентрированного культурального фильтрата

(1а) Концентрирование культурального раствора

После окончания превращения под действием микроорганизмов рН 10 л культурального бульона, содержащего правастатин, доводили до 12 гидроокисью натрия, бульон нагревали до 50°С и перемешивали в течение 30 мин. После охлаждения культурального раствора до комнатной температуры добавляли 500 г целита 545 (торговая марка) (производства Celite Corporation) в качестве ускорителя фильтрования для проведения фильтрования. К оставшемуся мицелию добавляли 3 л воды, вновь суспендировали и фильтровали. Два полученных концентрированных раствора объединяли с получением

10 л концентрированного культурального фильтрата.

(1b) Экстракция с использованием н-бутилацетата

После доведения рН полученного концентрированного культурального фильтрата до 5,7 с помощью 25% серной кислоты добавляли 5 л н-бутилацетата и перемешивали для экстракции правастатина. После повторного доведения рН отделенного водного слоя до 5,7 с помощью 75% серной кислоты, добавляли 5 л н-бутилацетата и перемешивали для его экстракции. Полученные н-бутилацетатные слои объединяли и к этому добавляли 2 л водного насыщенного раствора хлорида натрия и перемешивали. 1 л воды добавляли к 8 л экстракта, полученного при отделении верхнего слоя, при перемешивании добавляли 25% гидроокись натрия, рН доводили до 9,5 и затем водный слой отделяли с получением 1 л водного раствора, содержащего натриевую соль правастатина. Чистота натриевой соли правастатина по данным ВЭЖХ (условие А) составляла 90% или выше. Из результатов настоящего примера очевидно, что получена высокочистая натриевая соль правастатина.

Пример 2. Экстракция с использованием пропилацетата из концентрированного культурального фильтрата

Проводили обработку, аналогичную таковой в примере 1, с использованием н-пропилацетата вместо н-бутилацетата с получением водного раствора натриевой соли правастатина. Чистота натриевой соли по данным ВЭЖХ (условие А) составляла 85% или выше. Из результатов настоящего примера очевидно, что получена высокочистая натриевая соль правастатина с использованием н-пропилацетата.

Пример 3. Разложение примесей под действием фосфорной кислоты

К водному раствору, полученному в примере 1 [соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина составляло 9,3% по данным ВЭЖХ (условие А)], добавляли 350 мл этанола, рН доводили до 3,0 фосфорной кислотой и затем смесь перемешивали при 50°С в течение 10 мин. Соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина было равно 0,9% по данным ВЭЖХ (условие А). Из результатов настоящего примера очевидно, что соединение (I) в значительной степени было удалено с использованием фосфорной кислоты.

Пример 4. Разложение примесей под действием серной кислоты

Проводили обработку, аналогичную таковой в примере 3, с использованием серной кислоты вместо фосфорной кислоты.Соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина было равно 3% по данным ВЭЖХ (условие А). Из результатов настоящего примера очевидно, что соединение (I) в значительной степени было удалено с использованием серной кислоты.

Пример 5. Разложение примесей под действием гидроокиси натрия, экстракция и кристаллизация

(5а) Разложение примесей под действием гидроокиси натрия

После нагревания до 100°С 500 мл концентрированного культурального фильтрата правастатина [соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина составляло 12,1% по данным ВЭЖХ (условие В)] добавляли два эквивалента гидроокиси натрия в виде водного раствора (рН 11,3). Затем реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 3 ч, ее охлаждали, рН доводили до 8,5 20% водным раствором серной кислоты при комнатной температуре и получали обработанный щелочью раствор с гидроокисью натрия (содержание натриевой соли правастатина: 56,6 г). Соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина было равно 0,41% по данным ВЭЖХ (условие В). Из результатов настоящего примера очевидно, что соединение (I) в значительной степени было удалено с использованием гидроокиси натрия.

(5b) Экстракция и кристаллизация после разложения примесей под действием гидроокиси натрия

Водный слой отделяли способом, аналогичным таковому в примере (1b), с использованием н-бутилацетата с получением 260 г обработанного щелочью раствора (содержание натриевой соли правастатина: 19 г) с гидроокисью натрия, который получали в п.(5а), и получали водный раствор натриевой соли правастатина. После концентрирования водного раствора натриевой соли правастатина примерно до половины его количества при пониженном давлении, добавляли 77 мл воды и раствор вновь концентрировали при пониженном давлении. Количество жидкости доводили водой таким образом, что объем концентрированного раствора становился в 6 раз больше по отношению к массе правастатина (свободная форма) и смесь охлаждали до 0-5°С, по каплям добавляли 20% водный раствор серной кислоты, свободную кристаллическую форму правастатина осаждали при рН 4,6 с последующим перемешиванием в течение ночи и затем фильтровали. Кристаллы промывали холодной разбавленной серной кислотой (рН 4) с получением сырых кристаллов правастатина (свободная форма).

К сырым кристаллам правастатина (свободная форма) добавляли 63 мл этилацетата и затем кристаллы растворяли при комнатной температуре, рН доводили до 4,5 20% водным раствором серной кислоты при одновременном перемешивании при комнатной температуре. После перемешивания, экстракции и разделения жидкостей к этилацетатному слою добавляли 21 мл воды и вновь проводили разделение жидкостей после экстракции и промывания. Затем добавляли 25 мл этанола к этилацетатному слою, который экстрагировали и промывали, рН доводили до 8,7 6% раствором гидроокись натрия-этанол при одновременном перемешивании при комнатной температуре с получением раствора хлорида натрия. Затеем его кристаллизовали обычным способом и получали 8,95 г кристаллов натриевой соли правастатина. Чистота по данным ВЭЖХ (условие С) натриевой соли правастатина, которую получали данным способом, составляла 99,67%, и соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина равнялось 0,1% по массе.

Из результатов настоящего примера очевидно, что соединение (I) в значительной степени было удалено на стадии разложения примесей под действием гидроокиси натрия и стадии экстракции с использованием н-бутилацетата.

Пример 6. Экстракция н-бутилацетатом, разложение примесей под действием фосфорной кислоты и кристаллизация

К обработанному кислотой раствору, который получали в примере 3, добавляли 25% водный раствор гидроокиси натрия, рН доводили до 12 и реакционный раствор дополнительно перемешивали при 50°С в течение 30 мин. Раствор концентрировали до 1 л на роторном испарителе при пониженном давлении с получением концентрированного раствора, который содержал натриевую соль правастатина. Затем рН полученного концентрированного раствора доводили до 4,0 серной кислотой, правастатин экстрагировали 0,5 л этилацетата и экстракт промывали 0,2 л воды. К раствору экстракта добавляли 5 г активированного угля, смесь выдерживали в течение 10 мин, затем ее фильтровали через фильтровальную бумагу, рН фильтрата доводили до 8,7 25% водным раствором гидроокиси натрия и затем упаривали досуха на роторном испарителе при пониженном давлении с получением 50 г натриевой соли правастатина. Ее кристаллизовали обычным способом с получением 34 г сырой кристаллической натриевой соли правастатина. Сырые кристаллы перекристаллизовывали с использованием растворителя, имеющего тот же состав, с получением 32 г чистых кристаллов натриевой соли правастатина.

Чистота по данным ВЭЖХ (условие А) натриевой соли правастатина, которую получали данным способом, составляла 99,7% или выше, и соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина равнялось 0,1% по массе.

Из результатов настоящего примера очевидно, что соединение (I) было удалено до 0,1% или ниже по массе на стадии экстракции с использованием н-бутилацетата и стадии разложения примесей под действием фосфорной кислоты, и получали высокочистую натриевую соль правастатина.

Кроме того, очевидно, что соединение (I) дополнительно удаляли добавлением стадии разложения примесей под действием гидроокиси натрия к стадии экстракции с использованием н-бутилацетата и стадии разложения примесей под действием фосфорной кислоты, и получали высокочистую натриевую соль правастатина.

Пример 7. Разложение примесей под действием гидроокиси натрия, разложение под действием серной кислоты и кристаллизация

Экстракцию проводили способом, аналогичным таковому в примере (5b), с использованием этилацетата из обработанного щелочью раствора с гидроокисью натрия, который получали в примере (5а), и получали водный раствор натриевой соли правастатина. К полученному раствору добавляли 350 мл этанола, рН доводили до 1,5 серной кислотой с последующим перемешиванием при 20°С в течение 1 ч. Смесь кристаллизовали обычным способом с получением чистых кристаллов натриевой соли правастатина. Соотношение соединения (I)/натриевой соли правастатина по данным ВЭЖХ (условие С) составляло 0,1% или ниже по массе.

Из результатов настоящего примера очевидно, что соединение (I) было удалено до 0,1% или ниже по массе на стадии разложения примесей под действием серной кислоты и на стадии разложения примесей под действием гидроокиси натрия, и получали высокочистую натриевую соли правастатина.

Сравнительный пример 1. Экстракция правастатина этилацетатом

Проводили обработку, аналогичную таковой в примере (1а), с использованием этилацетата вместо н-бутилацетата с получением водного раствора натриевой соли правастатина. Чистота натриевой соли правастатина по данным ВЭЖХ (условие А) составляла примерно 70%.

Когда органическими растворителями, экстрагирующими правастатин и его аналоги из концентрированного фильтрата, являются этилацетат, н-пропилацетат и н-бутилацетат, чистота натриевой соли правастатина (%) является следующей. Из результатов, представленных в таблице ниже, очевидно, что экстракцией н-пропилацетатом или н-бутилацетатом получали более высокочистый правастатин, чем экстракцией этилацетатом.

	Пример (1а)	Пример 2	Сравнительный пример 1
Растворитель для экстракции	н-бутилацетат	н-пропилацетат	этилацетат
Чистота правастатина (%)	>90	>85	Примерно 70