препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный марбург)

Формула изобретения

Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный Марбург), обладающий вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург и используемый для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья для его получения используют гипериммунную сыворотку крови лошадей и представляющий собой 9,0-11,0%-ный раствор иммуноглобулинов гипериммунной сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, содержащий -глобулиновую фракцию в количестве не менее 90,0% от общего содержания белка, в качестве неспецифических примесей содержащий альбумин, - и -глобулиновые фракции в количестве не более 10,0% и остаточный этиловый спирт в количестве не более 4,0%, имеющий величину рН от 7,0 до 7,5 и характеризующийся титром вируснейтрализующих антител не менее 1:2048.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, конкретно к лекарствам и медикаментам (к иммуноглобулинам) для терапевтических целей, и может быть использовано для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей.

Специфические средства профилактики и лечения лихорадки Марбург, являющейся тяжелым лихорадочным заболеванием, протекающим с ярко выраженным геморрагическим синдромом и поражением почти всех органов при летальности до 80% [1], в настоящее время отсутствуют. Лечение заболевших симптоматическое.

Было показано, что при лихорадке Марбург эффективно применение сыворотки реконвалесцентов [2]. Однако наша страна не обладает ее запасами. Кроме того, недостатком сыворотки является то, что она может быть контаминирована вирусами иммунодефицита и гепатита В. Применение такой сыворотки связано с риском инфицирования людей возбудителями инфекционных заболеваний.

Известны данные о разработке лечебно-профилактических препаратов иммуноглобулина против лихорадки Марбург из иммунной сыворотки крови овец и коз, которые представляют собой 12%-ные растворы иммуноглобулинов, выделенных спиртовым методом на холоде из гипериммунной сыворотки коз или овец (прототип) [3, 4]. Препараты содержат гамма-глобулиновую фракцию и примеси в количестве не более 10,0% от общего белка. В случае их применения для экстренной профилактики экспериментальной лихорадки Марбург у животных они проявляли защитные свойства.

Недостатком овец и коз, выбранных в качестве продуцента иммунной сыворотки, является то, что они не обеспечивают необходимого количества иммунной сыворотки, и их сыворотка может оказаться контаминированной посторонними микроорганизмами (например, скрепи у овец). Они также могут быть носителями губчатой энцефалопатии [5], а препараты иммунглобулина, выделенные из сыворотки крови данных животных, могут оказаться источником инфицирования людей возбудителями инфекционных заболеваний при их введении. Ранее уже были предприняты попытки использовать овец, коз, мулов, ослов и крупный рогатый скот для получения гипериммунных сывороток. Однако эти исследования не принесли желаемых разультатов.

Кроме того, препараты иммуноглобулина против лихорадки Марбург из сыворотки крови овец и коз находятся на стадии разработки и исследования свойств экспериментальных образцов, а данные по их эффективности [3, 4] не позволяют однозначно оценить их протективные свойства и возможность использования препаратов для профилактики лихорадки Марбург у людей в случае их специфического поражения.

Ранее было отмечено, что, кроме овец и коз, лошади также реагируют выработкой специфических антител в ответ на их заражение вирусом Марбург [4, 6, 7]. Лошади обладают высокой иммунологической реактивностью и обеспечивают большие объемы сыворотки. Поэтому для получения специфических гипериммунных сывороток, являющихся исходным сырьем для выделения иммуноглобулинов, наиболее часто используют лошадей [8].

Сыворотка крови лошадей лишена недостатков, присущих сывороткам крови овец и коз. В настоящее время лошади остаются общепризнанным продуцентом гипериммунных сывороток и они в основном используются в производственном масштабе. Кроме того, имеется опыт получения препаратов иммуноглобулина против ряда вирусных инфекций из сыворотки крови лошадей [8-10]. На основании этого, в качестве продуцента гипериммунной сыворотки к вирусу Марбург была выбрана лошадь.

Целью данного изобретения является разработка препарата, содержащего иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей жидкого, предназначенного для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей.

Указанная цель достигается за счет способности вируса Марбург индуцировать у животных выработку специфических протективных антител в ответ на их заражение, и использования нативной гипериммуной сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, в качестве сырья для получения препарата.

Сущность изобретения заключается в том, что препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург жидкий, представляет собой 9,0-11,0%-ный раствор иммуноглобулинов гипериммунной сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, обладает вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург и при введении оказывает выраженное профилактическое действие у людей при лихорадке Марбург.

Пример выполнения

Сырьем для получения препарата иммуноглобулина является гипериммунная лошадиная сыворотка, содержащая антитела к вирусу Марбург. Выделение иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, проводят методом спиртового фракционирования на холоде по Кону [11].

Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей, представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость, бесцветную или с желтоватым оттенком, иногда с наличием незначительного, легко разбивающегося при встряхивании осадка, с величиной рН от 7,0 до 7,5 и является 9,0-11,0%-ным раствором иммуноглобулинов сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург. Содержание гамма-глобулиновой фракции в нем составляет не менее 90,0% от количества общего белка. В качестве неспецифических примесей в препарате присутствуют альбумин, - и -глобулины в количестве не более 10,0% и остаточный этиловый спирт, содержание которого не более 4,0%. Препарат обладает вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург, характеризующейся титром вируснейтрализующих антител не ниже 1:2048.

Препарат стерильный, апирогенный и нетоксичный. При внутримышечном введении он оказывает выраженное профилактическое действие при лихорадке Марбург.

По физико-химическим и иммунобиологическим показателям препарат иммуноглобулина лошадиного Марбург соответствует показателям качества коммерческих гетерологичных иммуноглобулинов, выделенных из сыворотки крови лошадей [8] и рекомендован для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей.

Было получено 9 серий препарата иммуноглобулина против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей. Характеристика препаратов представлена в таблице.

Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей, жидкий, (иммуноглобулин лошадиный Марбург) аттестован ГИСК им. Л.А.Тарасевича и одобрен Комитетом МИБП. Нормативно-техническая документация на препарат представлена для рассмотрения в Фармакопейный комитет МЗ РФ.

Таблица Характеристика гетерологичных препаратов иммуноглобулина, полученных из сыворотки крови лошадей
Наименование показателя качества, единица измерения	Величина показателя для препаратов иммуноглобулина
	гетерологичных коммерческих [8]	против лихорадки Марбург (данные по 9 сериям)
Внешний вид	Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком. Допускается наличие незначительного осадка, легко разбивающегося при встряхивании.	Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком. Допускается наличие незначительного осадка, легко разбивающегося при встряхивании.
Концентрация водородных ионов, ед. рН	От 7,0 до 7,5	От 7,0 до 7,5
Количество общего белка, процент	От 9,0 до 11,0	От 9,0 до 11,0
Содержание гамма-глобулиновой фракции, процент	От 70,0 до 95,0 [12]	От 90,0 до 97,4
Содержание остаточного этилового спирта, процент	Не более 4,5	От 1,4 до 3,7
Пирогенность	Апирогенный	Апирогенный
Токсичность	Нетоксичный	Нетоксичный
Стерильность	Стерильный	Стерильный
Срок годности, лет	Не более 3	3

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

1. Muhlberger E., Weik M., Beeker S., Klenk H.D. The replication and transcription strategy of Marburg and Ebola viruses: differences and similarities // Infect. Dis. Rev. - 2000. - Vol.2, №4. - P.251.

2. Stille W., Bohle F., Helm E. et al. Uber eine durch cercopithecus aethiops ubertragene infektions-krankheit / «Grune Meerkatzenkrankheit», «Green Monkey Discase» // Dtsch. Med. Wschr. - 1968. - Bd.93. - S.572-582.

3. Кудоярова Н.М., Кизимов Н.В., Смолина М.П., Дедкова Л.М. Изучение протективных свойств препаратов гамма-глобулинов против вирусов Эбола и Марбург // Актуальные проблемы биотехнологии: Материалы 2-ой отраслевой конференции 25-27 апреля 1990 г., п.г.т. Кольцове, 1990. - С.53-54.

4. Кизимов Н.В., Кудоярова Н.М., Калиберов С.А. и др. Разработка лечебно-профилактических препаратов гамма-глобулина против болезней Марбург, Эбола, Боливийской геморрагической лихорадки // Актуальные вопросы медицинской биотехнологии: Материалы научной конференции, посвященной 85-летию Томского НИИ вакцин и сывороток НПО «Вирион», Томск, 1991. - Ч.2. - С.31-32.

5. Вирусология / Под ред. Б.Филдса - M., 1989. - Т.3. - С.419-430.

6. Краснянский В.П., Пшеничнов В.А. Гончар Н.И. и др. Иммунологические особенности геморрагических лихорадок Марбург и Ласса и перспективы их специфической профилактики // Первый всесоюзный иммунологический съезд, Сочи 16-17 ноября 1989 г.: Тезисы секционных и стендовых сообщений. - M., 1989. - Т.1. - С.226.

7. Гончар Н.И., Пшеничнов В.А., Походяев В.А. и др. Чувствительность к вирусу Марбург различных экспериментальных животных // Вопр. вирусол. - 1991. - №5. - С.435-437.

8. Руководство по вакцинному и сывороточному делу / Под ред. П.Н.Бургасова. - М., Медицина, 1978.

9. Краснянский В.П., Градобоев В.Н., Борисевич И.В. и др. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Ласса // Вопр. вирусол. - 1997. - №2. - С.71-74.

10. Борисевич И.В., Михайлов В.В., Краснянский В.П. и др. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Эбола / Вопр. вирусол. - 1995. - №6. - С.270-273.

11. Cohn E.J., Strong L., Hughes W.L. et al. Preparation and properties of serum and plasma proteins // J. Amer. Chem. Soc. - 1946. - Vol.68, №3. - P.459-475.

12. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов / Под ред. С.Г.Дзагурова, Ф.Ф.Резепова. - М., Медицина, 1975.