новые пятичленные гетероциклы, их получение, их применение и содержащие их фармацевтические препараты

Формула изобретения

1. Соединения общей формулы I

в которой W обозначает R¹-A-C(R¹³ );

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R^о);

А обозначает фенилен;

E обозначает R¹⁰CO;

В обозначает (С₁-С₆ )-алкилен, который может быть незамещенным или

замещенным (С₁-С₆)-алкилом;

R⁰ обозначает в случае необходимости замещенный в арильном остатке (С₆ -С₁₄)-арил-(С₁-С₈)-алкил;

R обозначает Н или (С₁-С₆ )-алкил;

R¹ обозначает X-NH-C(=NH)-(CH₂ )_p;

p = 0;

X обозначает водород, -ОН, (С₁-С₆)-алкоксикарбонил или в случае

необходимости замещенный в арильном остатке феноксикарбонил или

бензилоксикарбонил;

R², R^2a , R^2b обозначают водород;

R³ обозначает R¹¹NH- или СO-R⁵-R⁶-R⁷ ;

R⁴ обозначает двухвалентный (С ₁ -С₄)-алкиленовый остаток;

R⁵ обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной

аминокислоты с липофильной боковой цепью, выбранной из группы,

состоящей из (С₁-С₆)-алкильных остатков, (С₆-С₁₂)-арил-(С₁-С₄ )-алкильных

остатков, в случае необходимости замещенных в арильном остатке, и в

случае необходимости замещенных (С₆-С₁₂)-арильных остатков;

R⁶ обозначает простую связь;

R⁷ обозначает Het;

R¹⁰ обозначает гидроксил или (С₁-С₆)-алкоксигруппу;

R¹¹ обозначает R¹²-NH-С(О), R¹² -NH-С(S) или R^14a-O-C(О),

R¹² обозначает (С₆-С₁₄)-арил-(С₁ -С₆)-алкил, в случае необходимости

замещенный в арильном остатке;

R¹³ обозначает (С₁-С₆)-алкил;

R^14a обозначает в случае необходимости замещенный гетероарил,

гетероарил-(С ₁-С₆)-алкил, в случае необходимости замещенный в

гетероарильном остатке, или R¹⁵;

R ¹⁵ обозначает R¹⁶ или R¹⁶-(С ₁-С₆)-алкил;

R¹⁶ означают остаток 3-12-членного моноциклического или 6-24-членного бициклического или трициклического кольца;

Het означает 5-7-членный моноциклический остаток гетероцикла,

связанного через атом азота в кольце, содержащий в случае

необходимости дополнительный гетероатом из группы, состоящей из

N, O или S;

g и h означают 0 или 1,

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

2. Соединения формулы I по п.1, в которой

W обозначает R¹-A-C(R¹³);

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R°);

E обозначает R ¹⁰CO;

В обозначает двухвалентный остаток метилена или этилена, причем

оба остатка являются незамещенными или замещенными (С₁-С₆)-

алкилом;

R⁰ обозначает в случае необходимости замещенный в арильном

остатке (С₆-С₁₂)-арил-(С ₁-С₄)-алкил;

R обозначает Н или (С₁-С₆)-алкил;

R¹ обозначает X-NH-C(=NH);

X обозначает водород, -ОН, (С ₁-С₆)-алкоксикарбонил или в случае необходимости замещенный в арильном остатке феноксикарбонил или

бензилоксикарбонил;

R², R^2a, R^2b обозначают водород;

R³ обозначает R¹¹NH- или СO-R⁵-R⁶-Het;

R¹⁰ обозначает гидроксил или (С₁-С₆)-алкоксигруппу;

R¹¹ обозначает R¹²-NH-С(О), R¹² -NH-С(S) или R^14a-O-C(О),

R^14a обозначает гетероарил-(С₁-С₂)-алкил, в случае необходимости

замещенный в гетероарильном остатке, или R¹⁵;

R¹⁵ обозначает R¹⁶ или R¹⁶-(С₁-С₄)-алкил;

R¹⁶ означают остаток 5-10-членного моноциклического или

6-14-членного бициклического или трициклического кольца;

Het означает 5-членный моноциклический остаток гетероцикла,

связанного через атом азота в кольце, содержащий в случае

необходимости дополнительный гетероатом из группы, состоящей из

N, O или S,

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех

соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

3. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-3,

в которой R³ обозначает R ¹¹NH- или СO-R⁵-R⁶-Het;

R¹¹ обозначает R¹⁵O-C(О),

R¹⁵ обозначает R¹⁶ или R¹⁶-(С₁ -С₃)-алкил;

R¹⁶ означают остаток 5-6 членного моноциклического или 6-12-

членного бициклического или трициклического остатка

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех

соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

4. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-3,

в которой W обозначает R¹ -A-C(R¹³);

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R^о);

А обозначает фенилен;

E обозначает R¹⁰CO;

В обозначает метилен, который может быть незамещенным или

замещенным (С₁ -С₆)-алкилом;

R⁰ обозначает в случае необходимости замещенный в арильном

остатке (С ₆-С₁₂)-арил-(С₁-С₂ )-алкил;

R обозначает Н или (С₁-С ₄)-алкил;

R¹ обозначает Н₂ N-C(=NH) или СН₃О-СО-NН-C(=NH);

R² , R^2a, R^2b обозначают водород;

R ³ обозначает R¹¹NH- или СO-R⁵-R ⁶-Het;

R¹⁰ обозначает гидроксил или (С ₁-С₄)-алкоксигруппу;

R¹¹ обозначает R¹⁵-O-C(О),

R¹³ обозначает (С₁-С₆)-алкил;

R¹⁵ обозначает R¹⁶ или R¹⁶-(С₁-С₃ )-алкил;

R¹⁶ означают остаток 5-6-членного моноциклического или 6-12-членного

бициклического или трициклического остатка;

Het означает 5-6-членный моноциклический остаток гетероцикла,

связанного через атом азота в кольце, содержащий в случае

необходимости дополнительный гетероатом из группы, состоящей из

O или S;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех

соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

5. Соединения формулы I по пп.1-4, в которой

W обозначает R¹-A-C(R¹³), где А обозначает фенилен;

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R°);

E обозначает R¹⁰ CO;

В обозначает двухвалентный метилен, который может быть

незамещенным или замещенным (С₁-С₆ )-алкилом;

R⁰ обозначает в случае необходимости замещенный в арильном

остатке (С₆-С₁₂ )-арил-(С₁-С₂)-алкил;

R обозначает Н или (С₁-С₄)-алкил;

R ¹ обозначает Н₂N-C(=NH) или СН₃ О-СО-NН-C(=NH);

R², R^2a, R^2b обозначают водород;

R³ обозначает R ¹¹NH- или СO-R⁵-Het;

R⁵ обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной

-аминокислоты с липофильной боковой цепью, причем свободные

функциональные группы могут быть защищены обычными в химии

пептидов защитными группами;

R¹⁰ обозначает гидроксил или (С ₁-С₄)-алкоксигруппу;

R¹¹ обозначает R¹⁵-O-C(О);

R¹³ обозначает (С ₁-С₆)-алкил;

R¹⁵ обозначает R¹⁶ или R¹⁶-(С₁-С₃ )-алкил;

R¹⁶ обозначает остаток 5-6 членного моноциклического или 7-12-членного бициклического или трициклического кольца;

Het означает 5-6-членный моноциклический остаток гетероцикла,

связанного через атом азота в кольце, содержащий в случае

необходимости дополнительный гетероатом в кольце из группы,

состоящей из O и S,

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех

соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

6. Соединения формулы I по пп.1-5, в которой

W обозначает R¹-A-C(R¹³), где А обозначает двухвалентный

фениленовый остаток;

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R°);

E обозначает R¹⁰CO;

В обозначает двухвалентный метилен, который может быть

незамещенным или замещенным (С₁-С ₆)-алкилом;

R⁰ обозначает в случае необходимости замещенный в арильном

остатке (С₆ -С₁₂)-арил-(С₁-С₂)-алкил;

R обозначает Н или метил;

R¹ обозначает Н₂N-C(=NH) или СН₃О-СО-NН-C(=NH);

R², R^2a, R^2b обозначают водород;

R³ обозначает R¹¹NH- или СO-R ⁵-Het;

R⁵ обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной

-аминокислоты с липофильной боковой цепью, причем свободные

функциональные группы могут быть защищены обычными в химии

пептидов защитными группами;

R¹⁰ обозначает гидроксил или (С ₁-С₄)-алкоксигруппу;

R¹¹ обозначает R¹⁵-O-C(О),

R¹³ обозначает (С ₁-С₆)-алкил;

R¹⁵ обозначает R¹⁶ или R¹⁶-СН₂;

R ¹⁶ обозначает циклопентил, циклогексил, 1-адамантил, 2-адамантил

или норадамантил;

Het означает 5-6-членный моноциклический остаток гетероцикла,

связанного через атом азота в кольце, содержащий в случае

необходимости кислород в качестве дополнительного гетероатома в

кольце;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех

соотношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

7. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли, пригодные в качестве лекарственного средства, ингибирующего адгезию.

8. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли, пригодные в качестве противовоспалительных средств.

9. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли, пригодные для применения в терапии или профилактике ревматоидного артрита, воспалительных кишечных заболеваний, системной красной волчанки или воспалительных заболеваний центральной нервной системы.

10. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли, пригодные для применения в терапии или профилактике астмы или аллергий.

11. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли, пригодные для

применения в терапии или профилактике сердечно-сосудистых заболеваний, артериосклероза, рестенозов или диабета, для подавления повреждения трансплантатов органов, для подавления роста опухолей или метастазирования опухолей или для терапии малярии.

12. Соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли, пригодные для применения в качестве ингибиторов адгезии и/или миграции лейкоцитов или в качестве ингибиторов VLA-4-рецепторов.

13. Фармацевтический препарат, обладающий способностью ингибировать адгезию, отличающийся тем, что он содержит одно или несколько соединений формулы I по одному или нескольким пп.1-6 и/или их физиологически приемлемые соли наряду с фармацевтически приемлемыми носителями и/или добавками.

Описание изобретения к патенту

Предметом данного изобретения являются соединения формулы I

в которой В, Е, W, Y, Z, R, R², R^2a , R^2b, R³, g и h имеют приведенные ниже значения.

Соединения формулы I являются ценными активными веществами лекарственных препаратов, которые пригодны, например, для терапии и профилактики воспалительных заболеваний, например ревматоидного артрита, или аллергических заболеваний. Соединения формулы I являются ингибиторами адгезии и миграции лейкоцитов и/или антагонистами адгезионного рецептора VLA-4, принадлежащего к группе интегринов. Они пригодны вообще для терапии или профилактики заболеваний, которые вызваны нежелательным уровнем адгезии лейкоцитов и/или миграции лейкоцитов или связаны с ними, или при которых играют роль взаимодействия клетка-клетка или клетка-матрица, которые основаны на взаимодействии VLA-4-рецепторов с их лигандами. Данное изобретение относится, далее, к способу получения соединений формулы I, их применению в терапии и профилактике указанных патологических состояний и фармацевтическим препаратам, содержащим соединения формулы I.

Интегрины представляют собой группу адгезионных рецепторов, которые играют существенную роль при процессах связывания клетка-клетка и клетка-внеклеточная матрица. Они обнаруживают -гетеромерную структуру и широкое клеточное распространение и высокую степень эволюционной консервативности. К интегринам относятся, например, рецептор фибриногена на тромбоцитах, который прежде всего взаимодействует с RGD-последовательностью фибриногена, или рецептор витронектина на остеокластах, который прежде всего взаимодействует с RGD-последовательностью витронектина или остеопонтина. Интегрины подразделяют на три большие группы, подсемейство 2 с представителями LFA-1, Мас-1 и р150/95, которые, в частности, ответственны за клетка-клеточные взаимодействия иммунной системы, и подсемейства 1 и 3, представители которых, в основном, способствуют прикреплению клеток к компонентам внеклеточной матрицы (Ruoslahti, Annu.Rev.Biochem., 1988, 57, 375). Интегрины подсемейства 1, называемые также VLA-белками (very late (activation) antigen), включают, по меньшей мере, шесть рецепторов, которые специфически взаимодействуют с фибронектином, коллагеном и/или ламинином в качестве лигандов. В VLA-семействе интегрин VLA-4(41) является нетипичным, поскольку его присутствие ограничено, в основном, лимфоидными и миелоидными клетками, и в случае этих клеток он является ответственным за клетка-клеточные взаимодействия со множеством других клеток. VLA-4 способствует, например, взаимодействию Т- и В-лимфоцитов с гепарин-II-связывающим фрагментом фибронектина (FN) плазмы человека. Связывание VLA-4 с гепарин II-связывающим фрагментом фибронектина плазмы основано прежде всего на взаимодействии с последовательностью LDVP. В противоположность рецептору фибриногена или рецептору витронектина VLA-4 не является типичным RGD-связывающим интегрином (Kilger und Holzman, J.Mol.Meth. 1996, 73, 347).

Циркулирующие в крови лейкоциты обычно обнаруживают лишь небольшую аффиность в отношении васкулярных эндотелиальных клеток, которые выстилают кровеносные сосуды. Цитокины, которые выделяются воспаленной тканью, вызывают активирование эндотелиальных клеток и тем самым экспрессию множества поверхностных клеточных антигенов. Они включают в себя, например, адгезивную молекулу ELAM-1 (адгезионную молекулу эндотелиальных клеток 1, также называемую Е-селектином), которая, среди прочего, связывает нейтрофилы, ICAM-1 (молекулу межклеточной адгезии 1), которая взаимодействует с LFA-1 (антигеном 1, ассоциированным с функцией лейкоцитов) на лейкоцитах, и VCAM-1 (молекулу адгезии васкулярных клеток 1), которая связывает различные лейкоциты, среди прочих лимфоциты (Osborn et al., Cell 1989, 59, 1203). VCAM-1 является, как и ICAM-1, членом суперсемейства генов иммуноглобулинов. Идентифицирована VCAM-1 (сначала известная как INCAM-110) в качестве молекулы адгезии, которая индуцируется на эндотелиальных клетках воспалительными цитокинами, такими как TNF и IL-1, и липополисахаридами (LPS). Elices et al. (Cell, 1990, 60, 577) показали, что VLA-4 и VCAM-1 образуют пару рецептор-лиганд, которая способствует прикреплению лимфоцитов на активированном эндотелии. Связывание VCAM-1 на VLA-4 происходит при этом не путем взаимодействия VLA-4 с RGD-последовательностью, поскольку эта последовательность не содержится в VCAM-1 (Bergelson et al., Current Biology, 1995, 5, 615). Но VLA-4 обнаруживается также на других лейкоцитах и через механизм адгезии VCAM-1/VLA-4 также способствует прикреплению других лейкоцитов, иных чем лимфоциты. VLA-4 представляет тем самым единственный пример рецептора интегрина 1, который через лиганды VCAM-1 или фибронектин играет важную роль, как при клетка-клеточных взаимодействиях, так и при взаимодействиях клеток с внеклеточной матрицей.

Индуцируемые цитокином молекулы адгезии играют важную роль при выходе лейкоцитов во вневаскулярные области ткани. Лейкоциты выводятся в воспалительные области ткани клеточными молекулами адгезии, которые экспрессируются на поверхности эндотелиальных клеток и служат в качестве лигандов для белков или белковых комплексов (рецепторов) клеточной поверхности лейкоцитов (понятия лиганд и рецептор могут также применяться vice versa). Лейкоциты из крови должны сначала прикрепиться к эндотелиальным клеткам, прежде чем они смогут переместиться в синовий. Поскольку VCAM-1 связывается с клетками, которые несут интегрин VLA-4 (41), такими как эозинофилы, Т- и В-лимфоциты, моноциты или также нейтрофилы, ему и механизму VCAM-1/VLA-4 приписывают функцию вывода подобных клеток из кровотока в области инфекции и очаги воспаления (Eiices et al., Cell 1990, 60, 577; Osborn, Cell 1990, 62, 3; Issekutz et al., J.Exp.Med., 1996, 183, 2175).

Механизм адгезии VCAM-1/VLA-4 ассоциировали с рядом физиологических и патологических процессов. VCAM-1 экспрессируется, кроме индуцируемого цитокинами эндотелия, также еще и следующими клетками: миобластами, лимфоидными дендритными клетками и тканевыми макрофагами, ревматоидными синовиальными клетками, стимулируемыми цитокинами нервными клетками, париетальными эпителиальными клетками боуменовой капсулы, почечным тубулярным эпителием, воспалительной тканью при отторжении трансплантируемого сердца или почек и тканью кишечника при реакции "трансплантат-против-хозяина". Обнаружено, что VCAM-1 экспрессируется также на таких участках артериального эпителия, которые ранее соответствовали артериосклеротическим бляшкам. Кроме того, VCAM-1 экспрессируется на фолликулярных дендритных клетках лимфатических узлов человека и находится на стромальных клетках костного мозга, например у мыши. Последнее открытие указывает на функцию VCAM-1 в развитии В-клеток. VLA-4, кроме клеток гемопоэтического происхождения, найден также, например, на клеточных линиях меланомы, и механизм адгезии VCAM-1/VLA-4 связывают с метастазированием таких опухолей (Rice et al., Science, 1989, 246, 1303).

Основная форма, в которой находится in vivo VCAM-1 на эндотелиальных клетках и которая представляет собой доминантную форму in vivo, обозначается как VCAM-7D и несет семь доменов иммуноглобулинов. Домены 4, 5 и 6 сходны по их аминокислотным последовательностям с доменами 1, 2 и 3. Четвертый домен у еще одной, состоящей из шести доменов, формы, здесь обозначаемой как VCAM-6D, удален альтернативным сплайсингом. VCAM-6D также может связывать экспрессирующие VLA-4 клетки.

Дополнительные данные относительно VLA-4, VCAM-1, интегринов и адгезионных белков находятся, например, в статьях Kilger und Holzman, J.Mol.Meth., 1995, 73, 347; Elices, Cell Adhesion in Human Disease, Wiley, Chichester 1995, S.79; Kuijpers, Springer Semin.Immunopathol., 1995, 16, 379.

Основываясь на роли механизма VCAM-1/VLA-4 в процессах клеточной адгезии, которые имеют значение, например, при инфекциях, воспалениях или атеросклерозе, была предпринята попытка борьбы с этими болезнями путем вмешательства в эти адгезионные процессы, в частности, например, с воспалительными заболеваниями (Osborn et al., Cell, 1989, 59, 1203).

Одним из способов для этого является использование моноклональных антител, которые направлены против VLA-4. Подобные моноклональные антитела (mАК), которые в качестве антагонистов VLA-4 блокируют взаимодействие между VCAM-1 и VLA-4, известны. Так, например, моноклональные антитела против VCAM-1 и VLA-4 mAK HP2/1 и НР1/3 ингибируют прикрепление экспрессирующих VLA-4 клеток Ramos (клеток, подобных В-клеткам) к эндотелиальным клеткам пупочного канатика человека и к трансфицированным VCAM-1 СOS-клеткам. Также mAK 4B9 ингибирует адгезию клеток Ramos, клеток Jurkat (клеток, подобных Т-клеткам) и клеток HL60 (клеток, подобных гранулоцитам) с COS-клетками, трансфицированными генетическими конструкциями, которые побуждают к экспрессии VCAM-6D и VCAM-7D. Данные in vitro с антителами, направленными против 4-субъединицы VLA-4, показывают, что прикрепление лимфоцитов к синовиальным эндотелиальным клеткам ингибируется, причем эта адгезия играет роль при ревматоидном артрите (van Dinther-Janssen et al., J.Immunol., 1991, 147, 4207).

Опыты in vivo показали, что экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит подавляется моноклональными антителами против 4. Перемещение лейкоцитов в очаг воспаления также тормозится моноклональным антителом против 4-цепи VLA-4. Влияние антител на VLA-4-зависимый механизм адгезии изучали также на модели астмы, чтобы исследовать роль VLA-4 при выводе лейкоцитов в воспаленную легочную ткань (USSN 07/821, 768; ЕР-А-626861). Антитела против VLA-4 ингибируют реакцию поздней фазы и усиленную реакцию дыхательных путей у аллергических овец.

VLA-4-зависимый механизм клеточной адгезии исследовался также на модели воспалительного кишечного заболевания (BD) на приматах. В этой модели, соответствующей язвенному колиту у человека, предоставление антител против VLA-4 показало значительное уменьшение острого воспаления.

Кроме того, удалось показать, что VLA-4-зависимая клеточная адгезия играет роль при следующих клинических состояниях, в том числе следующих хронических воспалительных процессах: ревматоидном артрите (Cronstein und Weissman, Arthritis Rheum., 1993, 36, 147; Elices et al., J. Clin. Invest., 1994, 93, 405), сахарном диабете (Yang et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1993, 90, 10494), системной красной волчанке (Takeuchi et al., J.Clin.Invest., 1993, 92, 3008), замедленных аллергиях (аллергиях типа IV) (Elices et al., Clin.Exp.Rheumatol., 1993, II, S77), множественном склерозе (Yednock et al., Nature, 1992, 356, 63), малярии (Ockenhouse et al., J.Exp.Med., 1992, 176, 1183), артериосклерозе (O’Brien et al., J.Clin.Invest., 1993, 92, 945), трансплантации (Isobe et al., Transplantation Proceedings, 1994, 26, 867-868), различных злокачественных заболеваниях, например меланоме (Renkonen et al., Am. J. Pathol., 1992, 140, 763), лимфоме (Freedman et al., Blood, 1992, 79, 206) и других (Albelda et al., J.Cell Biol., 1991, 114, 1059).

VLA-4-блокирование подходящими антагонистами предоставляет эффективные терапевтические возможности, в частности для лечения, например, воспалительных состояний, включающих астму и IBD. Особая уместность VLA-4-антагонистов для лечения ревматоидного артрита обнаруживается, как уже было сказано, из того факта, что лейкоциты из крови сначала должны прикрепляться к эндотелиальным клеткам, прежде чем они могут выходить в синовиальную жидкость, и что при этом прикреплении играет роль VLA-4-рецептор. Выше уже было указано, что воспалительными агентами индуцируются VCAM-1 на эндотелиальных клетках (Osborn, Cell, 1990, 62, 3; Stoolman, Cell, 1989, 56, 907) и вывод различных лейкоцитов в области инфекции и очаги воспаления. При этом Е-клетки прикрепляются к активированному эндотелию через LFA-1/ICAM-1- и VLA-4/VCAM-1-механизмы адгезии (Springer, Cell, 1994, 76, 301). На многих синовиальных Т-клетках способность связывания VLA-4 для VCAM-1 при ревматоидном артрите повышается (Postigo et al, J.Clin.Invest., 1992, 89, 1445). Дополнительно наблюдали усиленное прикрепление синовиальных Т-клеток к фибронектину (Laffon et al., J.Clin.Invest., 1991, 88, 546; Morales-Ducret et al., J.Immun. 1992, 149, 1424). VLA-4 является также высокорегулируемым как в рамках его экспрессии, так и в отношении его функции на Т-лимфоцитах синовиальной мембраны. Ингибирование связывания VLA-4 с его физиологическим лигандом VCAM-1 и фибронектином позволяет эффективно подавлять и облегчать воспалительные процессы в суставах. Это подтверждается также экспериментами с антителом НР2/1 на крысах Lewis с адъювантным артритом, у которых наблюдали эффективное предотвращение болезни (Barbadillo et al., Springer Semin. Iimnunopathol., 1995, 16, 427). VLA-4 представляет собой также важную терапевтическую молекулу-мишень.

Вышеупомянутые VLA-4-антитела и применение антител в качестве антагонистов VLA-4 описаны в патентных заявках WO-А-93/13798, WO-A-93/15764, WO-A-94/16094, WO-A-94/17828 и WO-A-95/19790. В патентных заявках WO-A-94/15958, WO-A-95/15973, WO-A-96/00581, WO-A-96/06108 и WO-A-96/20216 описаны пептидные соединения в качестве антагонистов VLA-4. Однако, применение антител и пептидных соединений в качестве лекарственных средств имеет недостатки, например недостаточную пероральную применимость, легкую разлагаемость или иммуногенное действие при долгосрочном применении. Поэтому сущствует потребность в антагонистах VLA-4 с благоприятным профилем свойств для использования в терапии и профилактике.

В WO-A-94/21607 и WO-A-95/14008 описаны 5-членные гетероциклические соединения, в ЕР-А-449 079, ЕР-А-530 505 (USA-5 389 614), WO-A-93/18057, EP-A-566 919 (US-A-5 397 796), EP-A-580008 (US-A-5 424 293) и ЕР-А-584 694 (US-A-5 554 594) описаны производные гидантоина, которые обнаруживают ингибирующее агрегацию тромбоцитов действие. В ЕР-А-842 943 (немецкая патентная заявка 19647380.2) описано, что подобные соединения неожиданным образом ингибируют также адгезию лейкоцитов и являются антагонистами VLA-4. Дальнейшие исследования показывают, что также и соединения данного изобретения являются сильными ингибиторами адгезии лейкоцитов и антагонистами VLA-4.

Данное изобретение относится к соединениям формулы I

в которой W обозначает R¹-A-C(R¹³ ) или R¹-A-CH=C;

Y обозначает карбонильную группу, тиокарбонильную группу или метиленовую группу;

Z обозначает N(R⁰), кислород, серу или метиленовую группу;

А обозначает двухвалентный остаток из группы, включающей (C ₁-C₆)-алкилен, (С₃-С₇)-циклоалкилен, фенилен, фенилен-(C₁-C₆)-алкил, (C ₁-C₆)-алкиленфенил, фенилен-(C₂-C ₆)-алкенил или двухвалентный остаток 5-членного или 6-членного насыщенного или ненасыщенного гетероцикла, который может содержать один или два атома азота и может быть одно- или двукратно замещен (C₁-C₆)-алкилом или связанными двойной связью кислородом или серой;

В обозначает двухвалентный остаток (C₁-C₆)-алкилена, который может быть незамещенным или замещенным (C₁-C₈ ) -алкилом, (C₂-C₈)-алкенилом, (C₂ -C₈)-алкинилом, (C₃-C₁₀ )-циклоалкилом, (C₃-C₁₀)-циклоалкил-(C ₁-C₆)-алкилом, возможно замещенным (C₆ -C₁₄)-арилом, возможно замещенным в арильном остатке арилом, возможно замещенным в арильном остатке (C₆ -C₁₄)-арил-(C₁-C₆)-алкилом, возможно замещенным гетероарилом или возможно замещенным в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₆)-алкилом;

Е и Е^a, независимо друг от друга, обозначают тетразолил, (R^dO)₂P(O), HOS(O)₂, R⁹ NHS(O)₂ или R¹⁰CO;

R⁰ обозначает водород, (C₁-C₈)-алкил, (C ₃-C₁₂) -циклоалкил, (C₃-C₁₂ )-циклоалкил-(C₁-C₈)-алкил, (C₆ -C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂ )-трициклоалкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, возможно замещенный (C ₆-C₁₄) -арил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил-(C₁-C ₈)-алкил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₈ )-алкил, Н-СО, (C₁-C₈)-алкил-СО, (C ₃-C₁₂) -циклоалкил-СО, (C₃-C ₁₂) -циклоалкил- (C₁-C₈) -алкил-СО, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-СО, (C₆ -C₁₂)-бициклоалкил- (C₁-C₈) -алкил-СО, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-СО, (C ₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил-СО, возможно замещенный (C₆-C₁₄ )-арил-СО, возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₄) -арил- (C₁-C₈) -алкил-СО, возможно замещенный гетероарил-СО, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₈ )-алкил-СО, (C₁-C₈)-алкил-S(O)_n , (C₃-C₁₂)-циклоалкил-s(O)_n, (C₃-C₁₂)-циклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил-S(O)_n, (C₆-C₁₂ )-бициклоалкил-S(O)_n, (C₆-C₁₂ )-бициклоалкил-(C₁-C₈)-алкил-S(O)_n , (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-S(O) _n, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил- (C ₁-C₈) -алкил-S(О)_n, возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арил-S(O)_n, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкил-S(О)_n, возможно замещенный гетероарил-S(О)_n или возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₈ )-алкил-S(О)_n, причем n равно 1 или 2;

R, R ^a R^b, R^c и R^d, независимо друг от друга, обозначают водород, (C₁-C₈ )-алкил, (C₃-C₈)-циклоалкил, (C₃ -C₈)-циклоалкил-(C₁-C₈)-алкил, возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арил или возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкил;

R¹ обозначает X-NH-C(=NH)-(СН₂)_р или X¹-NH-(СН ₂)_р, причем р равно 0, 1, 2 или 3;

X обозначает водород, (C₃-C₆)-алкил, (C ₁-C₆)-алкилкарбонил, (C₁-C ₆)-алкоксикарбонил, (C₁-C₁₈)-алкоксикарбонил-(C ₁-C₆)-алкоксикарбонил, возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арилкарбонил, возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арилоксикарбонил, (C₆ -C₁₄)-арил-(C₁-C₆)-алкоксикарбонил, который в арильном остатке также может быть замещенным, (R ^dO)₂P(O), циано-, гидрокси, (C₁-C ₆)-алкокси, (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₆)-алкокси, который в арильном остатке также может быть замещенным, или амино;

X¹ имеет одно из значений Х или обозначает R’-NH-C(=N-R’’), причем R’ и R’’, независимо друг от друга, имеют значения X;

R ², R^2a и R^2b, независимо друг от друга, обозначают водород, (C₁-C₈)-алкил, возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₃-C₈ )-циклоалкил или (C₃-C₈)-циклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил;

R³ обозначает R¹¹NH, (C₉-C₁₂)-циклоалкил, (C₉-C₁₂)-циклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил, (C₆-C₁₂ )-трициклоалкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил, CO-N(R^a)-R⁴-E ^a или CO-R⁵-R⁶-R⁷;

причем R³ не может обозначать 1-адамантил, если одновременно W обозначает R¹-A-C(R¹³), R¹-A обозначает 4-амидино-фенил, R¹³ обозначает метил, Z обозначает NH, Y обозначает карбонильную группу, В обозначает СН₂, R и R² обозначают водород, Е обозначает гидроксикарбонил, g равно 0 и h равно 1, и как в отношении асимметричного атома углерода в диоксоимидазолидиновом кольце, так и в отношении атома углерода, который несет остатки R² и R³ , существуют R-форма и S-форма с молярным отношением 1:1;

R⁴ обозначает двухвалентный остаток (C ₁-C₄)-алкилена, который замещен одним остатком из группы, включающей R¹¹NH, (C₉-C ₁₂)-циклоалкил, (C₉-C₁₂)-циклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂ )-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂ )-трициклоалкил и (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил и который может быть дополнительно замещен одним или двумя одинаковыми или различными остатками (C₁-C₄)-алкила;

R⁵ обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной аминокислоты, иминокислоты или азааминокислоты, причем свободные функциональные группы могут быть защищены обычными в пептидной химии защитными группами или они могут присутствовать в виде эфира или амида, или, в случае аминокислоты или азааминокислоты, атом азота N-концевой аминогруппы несет остаток R^b;

R⁶ независимо от R⁵ имеет значения R⁵ или обозначает простую связь;

R⁷ обозначает R ⁶-NH или Het;

R⁸ обозначает (C₃ -C₁₂)-циклоалкил, (C₃-C₁₂)-циклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂ )-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂ )-трициклоалкил или (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил;

R⁹ обозначает водород, аминокарбонил, (C₁-C₁₈)-алкиламинокарбонил, (C₃-C₈)-циклоалкиламинокарбонил, возможно замещенный (C₆-C₁₄)-ариламинокарбонил, (C₁-C₁₈)-алкил, возможно замещенный (C ₆-C₁₄)-арил, в арильном остатке возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арил-(C₁-C₈ )-алкил, (C₃-C₁₂)-циклоалкил, (C₃ -C₁₂)-циклоалкил-(C₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C ₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил или (C₆ -C₁₂)-трицикло-алкил- (C₁-C₈ )-алкил;

R¹⁰ обозначает гидрокси, (C₁ -C₈)-алкокси, (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкокси, который в арильном остатке также может быть замещенным, возможно замещенный (C₆ -C₁₄)-арилокси, (C₁-C₈)-алкилкарбонилокси-(C ₁-C₆)-алкокси, (C₆-C₁₄ )-арилкарбонилокси (C₁-C₆)-алкокси, амино, моно- или ди-((C₁-C₈)-алкил)амино, R ⁸NH или Het;

R¹¹ обозначает R¹² NH-CO, R¹²-NH-CS, R^14aO-CO, R^14b CO, R^14cS(O), R^14dS(O)₂, R ^14eNH-S(O) или R^14fNH-S(О)₂;

R¹² обозначает возможно замещенный (C₆-C ₁₄)-арил, (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкил, который может быть также замещенным в арильном остатке, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁ -C₈)-алкил, (C₂-C₈)-алкенил, (C₂-C₈)-алкинил или остаток R¹⁵ ;

R¹³ обозначает водород, (C₁-C ₆)-алкил, возможно замещенный (C₆-C₁₄ )-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆ -C₁₄)-арил-(C₁-C₈)-алкил, (C ₃-C₈)-циклоалкил или (C₃-C ₈)-циклоалкил-(C₁-C₈)-алкил;

R^14a обозначает возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁ -C₈)-алкил или R¹⁵;

R^14b и R^14d, независимо друг от друга, обозначают возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C ₁-C₈)-алкил или R¹⁵;

R ^14c и R^14e, независимо друг от друга, обозначают (C₁-C₁₈)-алкил, возможно замещенный (C ₆-C₁₄)-арил, (C₆-C₁₄)-арил-(C ₁-C₈)-алкил, который может быть также замещенным в арильном остатке, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁ -C₈)-алкил или остаток R¹⁵;

R ^14f обозначает возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₄)-арил-(C₁-C₈ )-алкил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₈ )-алкил, (C₉-C₁₂) -циклоалкил-(C₁ -C₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил или (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁ -C₈)-алкил;

R¹⁵ обозначает R ¹⁶-(C₁-C₆)-алкил или R¹⁶ ;

R¹⁶ обозначает остаток от 3-членного до 12-членного моноцикла или остаток от 6-членного до 24-членного бицикла или трицикла, причем эти циклы являются насыщенными или частично ненасыщенными и также могут содержать один, два, три или четыре одинаковых или различных гетероатомов в цикле из группы, включающей азот, кислород и серу, и могут быть также замещены одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил и оксо;

Het обозначает остаток связанного через кольцевой атом азота 5-членного до 10-членного моноциклического или полициклического гетероцикла, который может быть ароматическим или частично ненасыщенным или насыщенным и может содержать один, два, три или четыре одинаковых или различных дополнительных гетероатомов в кольце группы, включающей кислород, азот и серу, и который может быть необязательно замещенным на атомах углерода и дополнительных атомах в кольце, причем на дополнительных атомах азота в кольце могут находиться одинаковые или различные остатки R^c, R^cCO или R ^cO-СО в качестве заместителей;

g и h, независимо друг от друга, равны 0 или 1;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех отношениях, а также их физиологически приемлемые соли.

Алкильные остатки могут быть линейными или разветвленными. Это относится также к случаям, когда они включают заместители или включают в качестве заместителей другие остатки, например, в алкоксиостатках, алкоксикарбонильных остатках или арилалкильных остатках. Соответственно, это справедливо и для двухвалентных алкиленовых остатков. Примерами пригодных (C ₁-C₁₈)-алкильных остатков являются: метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, гептил, октил, децил, ундецил, додецил, тридецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил, изопропил, изобутил, изопентил, изогексил, 3-метилпентил, 2,3,5-триметилгексил, втор-бутил, трет-бутил, трет-пентил, нео-пентил. Предпочтительными алкильными остатками являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил. Обе свободные связи в остатке алкилена могут исходить от одного и того же атома углерода или от различных атомов углерода. Примерами остатков алкилена являются метилен, этилен (=1,2-этилен), три-, тетра-, пента- и гексаметилен, 1-метилэтилен и 2-метилэтилен (=1,2-пропилен), 1,1-диметилэтилен, 2,2-диметил-1,3-пропилен, замещенный алкильным остатком метилен, например метилен, который замещен метильной группой (=метилметилен или 1,1-этилен или этилиден), метилен, который замещен этильной группой, изопропильной группой, изобутильной группой или трет-бутильной группой, или метилен, который замещен двумя алкильными остатками, например диметилметилен (=2,2-пропилен или 2-пропилиден).

Алкенильные остатки и алкениленовые остатки, а также алкинильные остатки также могут быть линейными или разветвленными. Примерами алкенильных остатков являются винил, 1-пропенил, 2-пропенил (=аллил), бутенил, 3-метил-2-бутенил, примерами алкениленовых остатков являются винилен или пропенилен. Примерами алкинильных остатков являются этинил, 1-пропинил, 2-пропинил (=пропаргил) или 6-гексинил.

Примерами циклоалкильных остатков являются, в частности, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил и циклододецил, которые также могут быть замещены, например, (C₁-C₄)-алкилом. В качестве примеров замещенных циклоалкильных остатков могут быть названы 4-метилциклогексил и 2,3-диметилциклопентил. То же самое относится к циклоалкиленовым остаткам.

Если R¹⁶ обозначает остаток насыщенного моноцикла, не содержащего гетероатомов в кольце, то речь идет о циклоалкильном остатке, если остаток R¹⁶ содержит один или несколько гетероатомов в кольце, то речь идет о гетероциклическом остатке. 3-членные до 12-членных циклы могут содержать 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 атомов в кольце. Бициклоалкильные остатки, трициклоалкильные остатки и остатки в качестве R ¹⁶ из 6-членных до 24-членных бициклов и трициклов формально получают вычитанием одного атома водорода из бициклов или трициклов. Составляющие основу бициклы и трициклы могут в кольце содержать либо только атомы углерода, речь может идти также о бициклоалканах или трициклоалканах, либо они могут в случае остатка в качестве R¹⁶ содержать также от одного до четырех одинаковых или различных гетероатомов из группы, включающей азот, кислород и серу, речь может идти также об аза-, окса- и тиабицикло- и трициклоалканах. Если содержатся гетероатомы, то предпочтительно один или два гетероатома, в частности атомы азота или кислорода. Это относится также к 3-членным - 12-членным моноциклическим системам. Гетероатомы могут занимать любые положения в бициклической или трициклической структуре, они могут находиться в мостиках или, в случае атомов азота, также в головных частях мостиков. Как бициклоалканы и трициклоалканы, так и их гетероаналоги могут быть полностью насыщенными или содержать одну или несколько двойных связей; предпочтительно они содержат одну или две двойные связи или, предпочтительно, являются полностью насыщенными. Как бициклоалканы и трициклоалканы, так и гетероаналоги, как насыщенные, так и ненасыщенные представители, могут быть незамещенными или в любых пригодных положениях замещенными одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, например одной или двумя оксогруппами и/или, в особенности, одной или несколькими, например одной, двумя, тремя или четырьмя одинаковыми или различными (C₁ -C₄)-алкильными группами, например метильными группами или изопропильными группами, предпочтительно метильными группами. Свободная связь бициклического или трициклического остатка может находиться в любом положении молекулы, остаток может быть также связан через атом головной части мостика или через атом в мостике. Свободная связь может также находиться в любом стереохимическом положении, например в экзо-положении или эндо-положении. То же самое относится и к моноциклическим кольцам.

Примерами основной структуры бициклических систем, из которых может быть получен бициклоалкильный остаток или бициклический остаток в качестве R¹⁶, являются норборнан (=бицикло [2.2.1] гептан), бицикло[2.2.2]октан и бицикло[3.2.1]-октан, примерами содержащих гетероатомы, ненасыщенных или замещенных кольцевых систем являются 7-азабицикло[2.2.1]-гептан, бицикло[2.2.2]окт-5-ен и камфора (=1,7,7-триметил-2-оксобицикло[2.2.1]гептан).

Примерами систем, из которых может быть получен трициклоалкильный остаток или трициклический остаток в качестве R¹⁶, являются Твистан (=трицикло[4.4.0.0^3,8]декан), адамантан (=трицикло [3.3.1.1^3,7]декан), норадамантан (=трицикло- [3.3.1.0^3,7] нонан), трицикло(2.2.1.0^2,6 ] гептан, трицикло[5.3.2.0^4,9] додекан, тpициклo[5.4.0.0 ^2,9]yндeкaн или трицикло[5.5.1.0^3,11]-тридекан.

Предпочтительно бициклоалкильные остатки, трициклоалкильные остатки и бициклические или трициклические остатки в качестве R¹⁶ являются производными соединенных мостиками бициклов или трициклов, также систем, в которых кольца имеют два или более общих атомов. Далее, предпочтительными являются в качестве R ¹⁶ бициклические или трициклические остатки с 6-18 атомами в кольце, особенно предпочтительно с 7-12 атомами в кольце. В частности, кроме того, предпочтительными являются 2-норборнильный остаток, как остатки со свободной связью в экзо-положении, так и остатки со свободной связью в эндо-положении, 2-бицикло[3.2.1]октильный остаток, 1-адамантильный остаток, 2-адамантильный остаток, норадамантильный остаток, например 3-норадамантильный остаток, и гомоадамантильный остаток. Из них предпочтительны 1- и 2-адамантильный остаток.

(C₆-C₁₄)-арильные группы представляют собой, например, фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, бифенилил, антрил или флуоренил; (C₆-C₁₂)-арильные группы представляют собой, например, фенил, нафтил или бифенилил; (C ₆-C₁₀)-арильные группы представляют собой, например, фенил или нафтил. Предпочтительными арильными остатками являются, в частности, 2-бифенилил, 3-бифенилил, 4-бифенилил, 1-нафтил, 2-нафтил и особенно фенил. Арильные остатки, в частности фенильные остатки, могут быть замещены один раз или несколько раз, предпочтительно один раз, дважды или трижды, одинаковыми или различными остатками из группы, включающей (C₁ -C₈)-алкил, в частности (C₁-C₄ )-aлкил, (C₁-C₈)-алкокси, в частности, (C₁-C₄)-алкокси, галоген, нитро, амино, трифторметил, гидрокси, метилендиокси, этилендиокси, циано-, гидроксикарбонил, аминокарбонил, (C₁-C₄ )-aлкоксикарбонил, фенил, фенокси, бензил, бензилокси, (R ^dO)₂P(О), (R^dO)₂P(О)-O-, тетразолил. То же самое относится, например, к таким остаткам, как арилалкил или арилкарбонил. Арилалкильные остатки, в частности, представляют собой бензил, 1- и 2-нафтилметил, 2-, 3- и 4-бифенилилметил и 9-флуоренилметил, далее 1-фенилэтил и 2-фенилэтил, причем все они могут быть также замещенными.

Замещенными арилалкильными остатками являются, например, замещенные одним или несколькими (C₁-C₈)-алкильными остатками, в частности (C₁-C₄)-алкильными остатками, в арильной части бензил и нафтилметил, например, 2-, 3- и 4-метилбензил, 4-изобутилбензил, 4-трет-бутилбензил, 4-октил-бензил, 3,5-диметилбензил, пентаметилбензил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- и 8-метил-1-нафтилметил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- и 8-метил-2-нафтилметил, замещенный одним или несколькими (C₁-C₈)-алкокси-остатками, в частности (C₁-C₄)-алкокси-остатками, в арильной части бензил и нафтилметил, например 4-метоксибензил, 4-неопентилоксибензил, 3,5-диметоксибензил, 3,4-метилендиоксибензил, 2,3,4-триметоксибензил, 2-, 3- и 4-нитробензил, галогенбензил, например 2-, 3- и 4-хлорбензил и 2-, 3- и 4-фторбензил, 3,4-дихлорбензил, пентафторбензил, трифторметилбензил, например, 3- и 4-трифторметилбензил или 3,5-бис(трифторметил)бензил. Но замещенные арилалкильные остатки могут также иметь различные заместители. Замещенные арильные остатки, содержащие названные в качестве примеров замещенные арилалкильные остатки, являются одновременно примерами замещенных арильных остатков.

В монозамещенных фенильных остатках может находиться заместитель в положении 2, положении 3 или положении 4, причем предпочтительны положение 3 и положение 4. В дважды замещенном фениле заместители могут находиться в положении 2,3, положении 2,4, положении 2,5, положении 2,6, положении 3,4 или положении 3,5. Предпочтительно в дважды замещенных фенильных остатках оба заместителя находятся в положении 3,4. Если фенил замещен трижды, то заместители могут находиться в положении 2,3,4, положении 2,3,5, положении 2,3,6, положении 2,4,5, положении 2,4,6 или положении 3,4,5.

То же самое относится к замещенным фениленовым остаткам. Фениленовые остатки могут, например, находиться в виде 1,4-фенилена или в виде 1,3-фенилена.

Фенилен-(C ₁-C₈)-алкил представляет собой, в частности, фениленметил и фениленэтил.

Фенилен-(C₂-C ₆)-алкенил представляет собой, в частности, фениленэтенил и фениленпропенил.

Примеры гетероциклических основных структур, из которых могут быть произведены гетероарильные остатки, 5-членные или 6-членные гетероциклы, моно- или бициклические 5-членные - 12-членные гетероциклы, содержащие один или несколько гетероатомов в кольце, 3-членные - 12-членные моноциклические и 6-членные - 24-членные бициклические и трициклические структуры и 5-членные - 10-членные моноциклы или гетероциклы, представляют собой пиррол, фуран, тиофен, имидазол, пиразол, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, тетразол, пиран, тиопиран, пиридин, пиразин, пиримидин, индол, изоиндол, индазол, хроман, фталазин, хинолин, изохинолин, хиноксалин, циннолин, азепин или бензаннелированные, циклопента-, циклогекса- или циклогептааннелированные производные этих гетероциклов. Остатки могут быть связаны, смотря по обстоятельствам, в любых положениях. Гетероциклы могут быть, смотря по обстоятельствам, в максимально ненасыщенной форме или в частично насыщенной форме (=частично ненасыщенной форме), например в дигидроформе или тетрагидроформе, или в полностью насыщенной форме (пергидроформе). Гетероциклы могут быть замещены, если нет иных указаний, например по одному или нескольким атомам азота (C₁-C₇)-алкилом, например метилом или этилом, фенилом или фенил-(C₁ -C₄)-алкилом, например бензилом, и/или по одному или нескольким атомам углерода (C₁-C₄)-алкилом, галогеном, гидрокси, (C₁-C₄)-алкокси, например метокси, фенил-(C₁-C₄)-алкокси, например бензилокси, оксигруппой. Содержащие азот гетероциклы могут также присутствовать в виде N-оксида.

В частности, гетероарильный остаток является производным 5-12-членного, содержащего одно или несколько ароматических колец гетероцикла, который может содержать один, два, три или четыре одинаковых или различных гетероатома из группы, включающей азот, кислород и серу. Предпочтительно производными 5-членного - 10-членного гетероцикла, также 5-, 6-, 7-, 8-, 9- или 10-членного гетероцикла, особенно предпочтительно 5-членного - 6-членного гетероцикла. Предпочтительно он содержит один, два или три гетероатома, особенно предпочтительно один или два гетероатома. Примерами гетеро-арильных остатков являются пирролил, фурил, тиенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, тетразолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, индолил, изоиндолил, индазолил, фталазинил, хинолил, изохинолил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил или бензаннелированное, циклопента-, циклогекса- или циклогептааннелированное производное этих остатков.

Гетероарильные остатки могут быть замещены однократно или многократно, предпочтительно одно-, дву- или троекратно, одинаковыми или различными остатками из группы, включающей (C ₁-C₈)-алкил, в частности, (C₁ -C₄)-алкил, (C₁-C₈)-алкокси, в частности (C₁-C₄)-алкокси, галоген, нитро, амино, трифторметил, гидрокси, метилендиокси, этилендиокси, циано-, гидроксикарбонил, аминокарбонил, (C₁-C₄ )-алкоксикарбонил, фенил, фенокси, бензил, бензилокси, (R ^dO)₂P(O), (R^dO)₂P(O)-O-, тетразолил.

Подобными гетероарильными остатками являются, например, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, фенилпирролил, например 4- или 5-фенил-2-пирролил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 1-имидазолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, 5-имидазолил, метилимидазолил, например 1-метил-2-, 4- или 5-имидазолил, 1,3-тиазол-2-ил, 1-тетразолил, 5-тетразолил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, N-оксидо-2-, 3- или 4-пиридил, 2-пиразинил, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил, 2-индолил, 3-индолил, 5-индолил, замещенный 2-индолил, такой как, например, 1-метил-, 5-метил-, 5-метокси-, 5-бензилокси-, 5-хлор- или 4,5-диметил-2-индолил, 1-бензил-2 или 3-индолил, 4,5,6,7-тетрагидро-2-индолил, циклогепта[b]-5-пирролил, 2-хинолил, 3-хинолил или 4-хинолил, 1-изохинолил, 3-изохинолил или 4-изохинолил, 1-гидрокси-3-изохинолил (=1-оксо-1,2-дигидро-3-изохинолил), 2-хиноксалинил, 2-бензофуранил, 2-бензотиенил, 2-бензооксазолил или 2-бензотиазолил.

Остатками частично гидрированных или полностью гидрированных гетероциклов являются, например, дигидропиридинил, тетрагидропиридинил, пирролидинил, например 2-, 3- или 4-(N-метилпирролидинил), пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидротиенил, бензодиоксалан-2-ил.

Гетероциклические остатки, обозначенные Het, могут быть незамещенными по атомам углерода и/или атомам азота в кольце или могут быть замещены однократно или многократно, например, дважды, трижды, четырежды или пятикратно, одинаковыми или различными заместителями. Атомы углерода могут быть замещены, например, (С₁-С₈)-алкилом, в частности (С₁ -С₄) -алкилом, (С₁-С₈)-алкокси, в частности (С₁-С₄)-алкокси, галогеном, нитро, амино, трифторметилом, гидрокси, оксо, метилендиокси, циано, гидроксикарбонилом, аминокарбонилом, (С₁-С ₄)-алкоксикарбонилом, фенилом, фенокси, бензилом, бензилокси, (R^dO)₂P(O), (R^dO)₂ Р(O)-О-, тетразолилом. Атомы серы могут быть окислены до сульфоксида или до сульфона. Примерами остатка Het являются 1-пирролил, 1-имидазолил, 1-пиразолил, 1-тетразолил, дигидропиридин-1-ил, тетрагидропиридин-1-ил, 1-пирролидинил, 1-пиперидинил, 1-пиперазинил, 4-замещенный 1-пиперазинил, 4-морфолинил, 4-тиоморфолинил, 1-оксо-4-тио-морфолинил, 1,1-диоксо-4-тиоморфолинил, пергидроазепин-1-ил, 2,5-диметил-1-пирролил, 2,6-диметил-1-пиперидинил, 3,3-диметил-4-морфолинил, 4-изопропил-2,2,6,6-тетраметил-1-пиперазинил.

Галоген обозначает фтор, хлор, бром или иод, в частности фтор или хлор.

Присутствующий в качестве R⁴ двухвалентный остаток алкилена, который замещен остатком из группы, включающей R¹¹NH, (C₉-C₁₂)-циклоалкил, (С₉-С₁₂)-циклоалкил-(С₁-С ₈)-алкил, (С₆-С₁₂)-бициклоалкил, (С₆-С₁₂)-бициклоалкил-(С₁-С ₈)-алкил, (С₆-С₁₂)-трициклоалкил и (С₆-С₁₂) -трициклоалкил- (С₁ -С₈)-алкил, может представлять собой, например, остатки -СН₂-СН(NHR¹¹)– или -CH₂-CH ₂-CH(NHR¹¹)-, CH(NHR¹¹), группа которых присоединена к остатку Е^a в группе CO-N(R^a )-R⁴-E^a или остаток -CH₂CH(NHR ¹¹)-СН₂-. Далее, двухвалентный остаток алкилена в качестве R⁴ может быть остатком -СН(Су)- или он может быть остатком -CH(Cy)-CH₂-, СН₂ -группа которого присоединена к остатку Е^a, причем Су обозначает (С₉-С₁₂)-циклоалкил, (С ₉-С₁₂)-циклоалкил-(С₁-С₈ )-алкил, (С₆-С₁₂)-бициклоалкил, (С ₆-С₁₂)-бициклоалкил-(С₁-С₈ )-алкил, (С₆-С₁₂)-трициклоалкил или (С ₆-С₁₂)-трициклоалкил-(С₁-С₈ )-алкил. Но во всех этих приведенных в качестве примеров остатках вместо указанных одного или двух атомов водорода могут содержаться алкильные остатки, например метильные остатки.

Двухвалентный остаток аминокислоты, иминокислоты или азааминокислоты в качестве R⁵ или R⁶ получают, как принято в химии пептидов, из соответствующей аминокислоты, иминокислоты или азааминокислоты, путем удаления из их N-концевой аминогруппы или иминогруппы формально одного атома водорода и удалением из С-концевой карбоксильной группы гидрокси-группы. Затем, через возникающую таким образом свободную связь на аминогруппе или иминогруппе, эта группа связывается подобно пептиду посредством амидной связи с карбонильной группой соседней группы, причем содержащаяся в R⁵ N-концевая аминогруппа или иминогруппа соединяется с СО-группой в группе CO-R⁵-R⁶-R⁷. Соответственно, формально возникшая путем удаления гидроксигруппы из карбоксильной группы карбонильная группа соединяется через ее свободную связь подобно пептиду посредством амидной связи с атомом азота соседней группы R⁶ или R⁷. Как указано выше, атомы азота амидных связей, а также групп СО-N(R^b), при помощи которых СО-группа в группе СО-R⁵-R⁶ -R⁷ соединена с группой R⁵ и группы R ⁵ и R⁶ соединены друг с другом, соединены с заместителем R^b, который может, например, обозначать водород или (С₁-С₄)-алкил, например метил.

Природные и неприродные аминокислоты могут присутствовать во всех стереохимических формах, например в D-форме, L-форме или в виде смеси стереоизомеров, например в виде рацемата. Предпочтительными аминокислотами являются -аминокислоты и -аминокислоты, особенно предпочтительны -аминокислоты. В качестве принимаемых во внимание аминокислот, производными которых могут быть R⁵ и R⁶, в качестве примеров называются (срав. Houben-Weyl, Methods der organischen Chemie, Band 15/2, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974); Aad, Abu, Abu, 2ABz, Aca, Ach, Adpd, Ahb, Aib, Aib, Ala, Ala, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, (Суs)₂, Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc, Fel, Gln, Glu, Gly, Guv, hAla, hArg, hCys, hGln, hGlu, hIle, hLeu, hLys, hMet, hPhe, hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, 3Нур, Ile, Ise, Iva, Kyn, Lant, Lcn, Leu, Lsg, Lys, Lys, Lys, Met, Mim, Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, Pic, Pro, Рrо, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, Thi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, Tly, Trp, Trta, Tyr, Val, трет-бутилглицин (Tbg), неопентилглицин (Npg), циклогексилглицин (Chg), циклогексилаланин (Cha), 2-тиенилаланин (Thia), 2,2-дифениламиноуксусная кислота, 2-(п-толил)-2-фениламиноуксусная кислота, 2-(п-хлорфенил)аминоуксусная кислота.

Если R⁵ и/или R⁶ обозначают остаток природной или неприродной -аминокислоты, которая по -атому углерода соединена еще с атомом водорода, то имеет место двухвалентный остаток -N(R^b) -CH(SC) -CO-, в котором SC обозначает боковую цепь -аминокислоты, а также, например, один из заместителей, которые содержатся в -положении вышеназванных, неразветвленных в -положении -аминокислот. Примерами боковых цепей являются алкильные остатки, например метильная группа в аланине или изопропильная группа в валине, бензильный остаток в фенилаланине, фенильный остаток в фенилглицине, 4-аминобутильный остаток в лизине или гидроксикарбонилметильная группа в аспарагиновой кислоте. Такие боковые цепи и, тем самым, аминокислоты, могут быть объединены в объеме данного изобретения, не только на основании их химической структуры, но и, например, на основании их физико-химических свойств в одну группу, например липофильные боковые цепи могут отличаться от гидрофильных боковых цепей, содержащих полярные группы. Примерами липофильных боковых цепей, которые могут содержать в качестве R⁵ и/или R⁶ аминокислоты, являются алкильные остатки, арилалкильные остатки или арильные остатки, например (С₁-С₆ )-алкильные остатки, возможно замещенные в арильном остатке (С₆-С₁₂)-арил-(С₁-С₄ )-алкильные остатки и возможно замещенные (С₆-С ₁₂)-арильные остатки, причем к этим остаткам относятся также приведенные выше пояснения.

Азааминокислоты представляют собой природные или неприродные аминокислоты, в которых СН-фрагмент заменен атомом азота, например в -аминокислотах центральный фрагмент

заменен

В качестве остатков иминокислот принимаются во внимание, в особенности, остатки гетероциклов из следующей группы: пирролидин-2-карбоновая кислота; пиперидин-2-карбоновая кислота; 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота; декагидроизохинолин-3-карбоновая кислота; октагидроиндол-2-карбоновая кислота; декагидрохинолин-2-карбоновая кислота; октагидроциклопента[b]-2-карбоновая кислота; 2-азабицикло-[2.2.2]октан-3-карбоновая кислота; 2-азабицикло[2.2.1]гептан-3-карбоновая кислота; 2-азабицикло[3.1.0]гексан-3-карбоновая кислота; 2-азаспиро[4.4]нонан-3-карбоновая кислота; 2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновая кислота; спиро(бицикло[2.2.1]-гептан)-2,3-пирролидин-5-карбоновая кислота; спиро(бицикло-[2.2.2]октан)-1,3-пирролидин-5-карбоновая кислота; 2-азатрицикло[4.3.0.1^6,9]-декан-3-карбоновая кислота; декагидроциклогепта[b]пиррол-2-карбоновая кислота; декагидроциклоокта[с]-пиррол-2-карбоновая кислота; октагидроциклопента[с]пиррол-2-карбоновая кислота; октагидроизоиндол-1-карбоновая кислота; 2,3,3а,4,6а-гексагидроциклопента[b]пиррол-2-карбоновая кислота; 2,3,3а,4,5,7а-гексагидроиндол-2-карбоновая кислота; тетрагидротиазол-4-карбоновая кислота; изоксазолидин-3-карбоновая кислота; пиразолидин-3-карбоновая кислота; гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота; которые все могут быть, в случае необходимости, замещенными (см. следующие формулы):

Являющиеся основой названных остатков гетероциклы известны, например, из US-A-4344949; US-A-4374847; US-A-4350704; EP-A 29488; EP-A 31741; EP-A 46953; EP-A 49605; EP-A 49658; EP-A 50800; EP-A 51020; EP-A 52870; EP-A 79022; EP-A 84164; EP-A 89637; EP-A 90341; EP-A 90362; EP-A 105102; EP-A 109020; EP-A 111873; EP-A 271865 и EP-A 344682.

Кислотные группы в природных или неприродных аминокислотах, иминокислотах и азааминокислотах могут также существовать в виде эфиров или амидов, например в виде (С₁-С ₄)-алкилового эфира, такого как, например, метиловый эфир, этиловый эфир, изопропиловый эфир, изобутиловый эфир или трет-бутиловый эфир, бензиловый эфир; незамещенных амидов, метиламида, этиламида, семикарбазида или -амино-(С ₂-С₈)-алкиламидов.

Функциональные группы аминокислот, иминокислот и азааминокислот могут быть защищены. Пригодные для этого защитные группы, такие как, например, уретановые защитные группы, карбоксильные защитные группы и защитные группы боковых цепей описаны у Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979, Nr.3, Seiten 14-23 и у Bullesbach, Kontakte (Merck) 1980, Nr.l, Seiten 23-35. В частности, названы: Aloe, Pyoc, Fmoc, Tcboc, Z, Boc, Ddz, Врос, Adoc, Mcs, Моc, Z(NO₂), Z(Hal_n ), Bobz, Iboc, Adpoc, Mboc, Acm, трет-бутил, OBzl, ONbzl, OMbzl, Bzl, Mob, Pic, Trt.

Соединения формулы I могут существовать в стереоизомерных формах. Если соединения формулы I содержат один или несколько асимметричных центров, то они могут независимо иметь S-конфигурацию или R-конфигурацию. К данному изобретению относятся также все возможные стереоизомеры, например энантиомеры и диастереомеры, и смеси двух или нескольких стереоизомерных форм, например смеси энантиомеров и/или диастереомеров, во всех соотношениях. Предметом данного изобретения являются также энантиомеры в энантиомерно чистой форме как левовращающих, так и правовращающих антиподов, в форме рацематов и в форме смесей обоих энантиомеров во всех соотношениях. В случае наличия цис/транс-изомерии, как цис-форма, так и транс-форма и смеси этих форм являются предметом данного изобретения. Получение отдельных стереоизомеров может быть выполнено, если желательно, разделением смеси обычными способами, например хроматографией или кристаллизацией, путем использования стереохимически однородных исходных веществ при синтезе, или посредством стереоизбирательного синтеза. Перед разделением стереоизомеров, в случае необходимости, можно провести взаимодействие с применением хирального реагента, и полученные диастереомерные соединения могут быть разделены согласно обычным способам, например кристаллизацией или хроматографией. Разделение смеси стереоизомеров может происходить на стадии соединений формулы I или на стадии промежуточного продукта в ходе синтеза.

При существовании подвижных атомов водорода данное изобретение включает также все таутомерные формы соединений формулы I, например лактам/лактим-таутомеры.

Если соединения формулы I содержат одну или несколько кислых или основных групп, то соответствующие физиологически или токсикологически приемлемые соли также являются предметом данного изобретения, в частности фармацевтически приемлемые соли. Так, соединения формулы I, которые содержат одну или несколько кислотных групп, например карбоксильные группы или сульфокислотные группы, могут существовать, например, в виде солей щелочных металлов, солей щелочно-земельных металлов или солей аммония и применяться в соответствии с данным изобретением. Примерами таких солей являются соли натрия, соли калия, соли кальция, соли магния или аммиачные соли, или соли органических аминов, таких как этиламин, этаноламин, триэтаноламин или аминокислоты.

Соединения формулы I, которые содержат одну или несколько основных, т.е. протонируемых групп, например аминогруппу, амидиногруппу или гуанидиногруппу, могут находиться в виде их аддитивных солей с неорганическими или органическими кислотами и применяться в соответствии с данным изобретением, например в виде солей с хлористым водородом, бромистым водородом, фосфорной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой, метансульфоновой кислотой, п-толуолсульфокислотой, нафталиндисульфоновой кислотой, щавелевой кислотой, уксусной кислотой, винной кислотой, молочной кислотой, салициловой кислотой, бензойной кислотой, муравьиной кислотой, пропионовой кислотой, пивалиновой кислотой, диэтилуксусной кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, пимелиновой кислотой, фумаровой кислотой, малеиновой кислотой, яблочной кислотой, изоникотиновой кислотой, лимонной кислотой, адипиновой кислотой и т.д. Если соединения формулы I содержат в молекуле одновременно кислотные и основные группы, то к данному изобретению относятся, наряду с описанными формами солей, также внутренние соли или бетаины.

Соли могут быть получены из соединений формулы I обычными, известными специалисту способами, например, объединением с органической или неорганической кислотами или основанием в растворителе или диспергаторе, или также при помощи анионобмена или катионобмена из других солей. Данное изобретение включает также все соли соединений формулы I, которые из-за низкой физиологической переносимости непригодны непосредственно для применения в лекарственных средствах, но могут использоваться в качестве, например, промежуточных продуктов для химических реакций или для приготовления физиологически приемлемых солей.

Данное изобретение включает, далее, все сольваты соединений формулы I, например гидраты или аддукты со спиртами, а также производные соединений формулы I, например сложные эфиры, пролекарства и активные метаболиты.

Отдельные структурные элементы в формуле I имеют предпочтительно следующие значения.

W предпочтительно обозначает R¹-A-C(R¹³ ).

А обозначает предпочтительно метилен, этилен, триметилен, тетраметилен, пентаметилен, циклогексилен, фенилен, фениленметил или фениленэтил.

Y обозначает предпочтительно карбонильную группу.

Z обозначает предпочтительно N(R ⁰).

В обозначает предпочтительно двухвалентный остаток метилена или остаток этилена (=1,2-этилен), в особенности остаток метилена, причем каждый из остатков может быть незамещенным или замещенным. Особенно предпочтительно, оба эти остатка являются замещенными. Если двухвалентный остаток метилена или этилена (=1,2-этилен), обозначающий В, замещен, то он предпочтительно замещен остатком из группы, включающей (С₁-С₈ )-алкил, (С₂-С₆)-алкенил, (С ₂-С₆)-алкинил, (С₃-С₈)-циклоалкил, в частности (С₅-С₆)-циклоалкил, (С ₃-С₈)-циклоалкил-(С₁-С₄ )-алкил, в частности (С₅-С₆)-циклоалкил-(С ₁-С₄)-алкил, возможно замещенный (С ₆-С₁₀)-арил, возможно замещенный в арильном остатке (С₆-С₁₀)-арил-(С₁-С ₄)-алкил, возможно замещенный гетероарил и возможно замещенный гетероарил-(С₁-С₄)-алкил. Особенно предпочтительно, он замещен остатком из группы, включающей (С₁-С ₈)-алкил, в частности (С₁-С₆)-алкил, (С₅-С₆)-циклоалкил, (С₅-С ₆)-циклоалкил-(С₁-С₄)-алкил, фенил, бензил и фенилэтил, особенно предпочтительно, он замещен (С ₁-С₆)-алкильным остатком, также алкильным остатком с линейной или разветвленной цепью с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомами углерода, в осообенности (С₁-С₆ )-алкильным остатком.

Е и Е^a, предпочтительно независимо друг от друга, обозначают R¹⁰СО.

R, R^a и R^b обозначают независимо друг от друга водород, (С₁-С₆)-алкил или бензил, в особенности, водород, метил или этил.

R^c обозначает предпочтительно водород, (C₁-C₆)-алкил, (C₅-C₆)-циклоалкил, (C₅-C ₆)-циклоалкил-(C₁-C₂)-алкил, возможно замещенный фенил или возможно замещенный в фенильном остатке фенил- (C₁-C₂) -алкил.

R⁰ обозначает предпочтительно водород, (C₁-C₈ )-алкил, (C₃-C₁₀)-циклоалкил, (C₃ -C₁₀)-циклоалкил-(C₁-C₆)-алкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C ₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C₆)-алкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил, (C₆-C ₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C₆)-алкил, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C ₁-C₆)-алкил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C ₁-C₆)-алкил, (C₁-C₈)-алкил-СО, (C₃-C₁₀)-циклоалкил-СО, (C₃-C ₁₀)-циклоалкил-(C₁-C₆)-алкил-СО, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-СО, (C₆ -C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C₆)-алкил-СО, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-СО, (C₆ -C₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C₆)-алкил-СО, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил-СО, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C ₁-C₆)-алкил-СО, возможно замещенный гетероарил-СО, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C ₁-C₆)-алкил-СО, (C₁-C₈ )-алкил-S(O)_n, (C₃-C₁₀)-циклоалкил-S(O) _n, (C₃-C₁₀)-циклоалкил-(C ₁-C₆)-алкил-S(О)_n, (C₆ -C₁₂)-бициклоалкил-S(О)_n, (C₆ -C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C₆)-алкил-S(O) _n, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-S(O) _n, (C₆-C₁₂) -трициклоалкил-(C ₁-C₆)-алкил-S(О)_n, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил-S(О)_n , возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C ₁₂)-арил-(C₁-C₆)-алкил-S(O)_n , возможно замещенный гетероарил-S(O)_n или возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁ -C₆)-алкил-S(O)_n, причем n равно 1 или 2. Особенно предпочтительно, R⁰ обозначает (C ₁-C₈)-алкил, (C₃-C₁₀)-циклоалкил, (C₃-C₁₀)-циклоалкил-(C₁-C ₆)-алкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C ₆)-алкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C ₆)-алкил, возможно замещенный (C₆-C ₁₂)-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₂)-арил-(C₁-C₆)-алкил, возможно замещенный гетероарил или возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₆)-алкил, еще более предпочтительно возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₂)-арил-(C₁-C₄)-алкил или возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C ₁-C₄)-алкил, сверх того, предпочтительно, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂ )-арил-(C₁-C₄)-алкил, особенно незамещенный или однократно или многократно замещенный (C₆-C ₁₂)-арил-(C₁-C₂)-алкил.

R ¹ обозначает предпочтительно X-NH-C(=NH), X-NH-(C=NX)-NH или X-NH-СН₂.

X и X¹ обозначают предпочтительно водород, (C₁-C₆)-алкилкарбонил, (C ₁-C₆)-алкоксикарбонил, (C₁-C ₈)-алкилкарбонилокси-(C₁-C₆)-алкоксикарбонил или (C₆-C₁₄)-арил-(C₁-C ₆)-алкоксикарбонил, гидрокси; X¹, кроме того, обозначает R’-NH-C(=N-R’’), причем R’ и R’’, независимо друг от друга, имеют предпочтительные значения X.

R² , R^2a и R^2b обозначают, предпочтительно независимо друг от друга, водород или (C₁-C₈ )-алкил, особенно предпочтительно водород.

R³ предпочтительно обозначает R¹¹NH, (C₁₀ -C₁₂)-циклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-циклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₇-C₁₂ )-бициклоалкил, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₁₀-C₁₂ )-трициклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, CO-N(R^a)-R ⁴-E^a или CO-R⁵-R⁶-Het, особенно предпочтительно R¹¹NH, (C₇-C ₁₂)-бициклоалкил, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, (C₁₀-C₁₂ )-трициклоалкил или (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, CO-N(R^a)-R ⁴-E^a или CO-R⁵-R⁶-Het, особенно предпочтительно R¹¹NH или CO-R⁵ -R⁶-Het.

R⁴ обозначает предпочтительно двухвалентный остаток (C₁-C₄)-алкилена, особенно предпочтительно остаток (C₁-C₂ )-алкилена, который замещен остатком из группы, включающей R ¹¹NH, (C₁₀-C₁₂)-циклоалкил, (C ₁₀-C₁₂)-циклоалкил-(C₁-C₆ )-алкил, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил, (C ₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C₆ )-алкил, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил и (C ₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C₆ )-алкил, и который дополнительно может быть замещен одним или двумя одинаковыми или различными (C₁-C₄ )-алкильными остатками.

R⁵ предпочтительно обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной аминокислоты, причем свободные функциональные группы могут быть защищены обычными в химии пептидов защитными группами или могут существовать в виде сложных эфиров или амидов, и причем атом азота N-концевой аминогруппы содержит остаток R^b. Особенно предпочтительной аминокислотой в качестве R⁵ является -аминокислота.

R⁶ предпочтительно обозначает простую связь.

R¹⁰ предпочтительно обозначает гидрокси, (C ₁-C₆)-алкокси, (C₆-C₁₀ )-арил-(C₁-C₈)-алкокси, который в арильном остатке также может быть замещенным, возможно замещенный (C ₆-C₁₀)-арилокси или (C₁-C₈ )-алкилкарбонилокси-(C₁-C₆)-алкокси.

R¹¹ предпочтительно обозначает R¹²NH-CO, R^14aO-CO, R^14bCO, R^14cS(O) или R^14dS(O)₂.

R¹² предпочтительно обозначает возможно замещенный (C₆-C₁₄)-арил, (C₆-C₁₄)-арил-(C₁-C₆ )-алкил, который может быть также замещенным в арильном остатке, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₈)-алкил или остаток R¹⁵.

R¹³ предпочтительно обозначает водород, (C₁-C₆)-алкил, (C₃-C ₈)-циклоалкил или бензил, особенно предпочтительно (C₁-C₆)-алкил, (C₃-C₈ )-циклоалкил или бензил, причем особенно предпочтительным алкильным остатком в качестве R¹³ является метильный остаток.

R^14a предпочтительно обозначает возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₂ )-алкил или остаток R¹⁵, особенно предпочтительно остаток R¹⁵.

R^14b и R^14d предпочтительно обозначают, независимо друг от друга, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₀)-арил-(C ₁-C₄)-алкил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₄)-алкил или остаток R¹⁵.

R^14c предпочтительно обозначает (C₁-C₁₀)-алкил, (C₆-C₁₀ )-арил-(C₁-C₄)-алкил, который в арильном остатке также может быть замещенным, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₄)-алкил или остаток R¹⁵.

R^14c предпочтительно обозначает (C₁-C₁₀)-алкил, возможно замещенный (C ₆-C₁₄)-арил, который может быть также замещенным в арильном остатке, или остаток R¹⁵.

R^14f предпочтительно обозначает возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил-(C₁-C ₈)-алкил, (C₉-C₁₂)-циклоалкил-(C ₁-C₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, (C₆-C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C ₈)-алкил, (C₆-C₁₂)-трициклоалкил или (C₆-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁ -C₈)-алкил.

R¹⁵ предпочтительно обозначает R¹⁶-(C₁-C₃)-алкил или R ¹⁶, особенно предпочтительно R¹⁶(C₁ ) -алкил или R¹⁶.

R¹⁶ предпочтительно обозначает остаток 5-членного - 10-членного моноцикла или остаток 6-членного - 14-членного бицикла или трицикла, причем эти циклы являются насыщенными или частично ненасыщенными и также могут содержать в кольце одно, два, три или четыре одинаковых или различных гетероатомов из группы, включающей азот, кислород и серу, и также могут быть замещены одним или несколькими одинаковыми или различными (C₁-C₄)-алкильными остатками.

Het предпочтительно обозначает в качестве остатка 5-членный - 10-членный моноциклический или полициклический гетероцикл, соединенный через атом азота в кольце, при этом гетероцикл может быть ароматическим или частично ненасыщенным или насыщенным и может содержать один или два одинаковых или различных дополнительных гетероатома в кольце из группы, включающей кислород, азот и серу, и может быть необязательно замещенным по атомам углерода и по атомам азота в кольце, причем у дополнительных атомов азота в кольце в качестве заместителей могут стоять одинаковые или различные остатки R ^c, R^cCO или R^cO-CO. Особенно предпочтительно, Het обозначает гетероцикл, который является насыщенным и не содержит дополнительного гетероатома в кольце или содержит дополнительный гетероатом в кольце из группы, включающей азот, кислород и серу. Если атом азота в кольце в группе Het содержит один остаток R ⁰O-CO, то в этом остатке R^c предпочтительно имеет иное значение, чем водород.

Если R³ обозначает R¹¹NH, то предпочтительно g равно 1 и Н равно 0. Если R³ обозначает циклоалкильный остаток, бициклоалкильный остаток или трициклоалкильный остаток, то предпочтительно g равно 0 или 1 и h равно 1, особенно предпочтительно, g равно 0 и h равно 1. Если R³ обозначает СО-N(R^a)-R ⁴-E^a или CO-R⁵-R⁶-R ⁷, предпочтительно g равно 0 и h равно 1. Из соединений формулы I предпочтительны такие соединения, в которых один или несколько остатков имеют предпочтительные значения, причем все комбинации предпочтительных значений заместителей являются предметом данного изобретения. Особенно предпочтительными соединениями формулы I являются такие, в которых одновременно

W обозначает R¹-A-C(R¹³), где А обозначает двухвалентный остаток из группы, включающей циклогексилен, фенилен, фениленметил;

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R ⁰);

В обозначает двухвалентный остаток метилена или остаток этилена (=1,2-этилен), причем оба остатка являются незамещенными или замещены остатком из группы, включающей (C ₁-C₈)-алкил, (C₃-C₈)-циклоалкил, (C₃-C₈)-циклоалкил-(C₁-C ₄)-алкил, возможно замещенный (C₆-C₁₀ )-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆ -C₁₀)-арил-(C₁-C₄)-алкил, возможно замещенный гетероарил и возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₄)-алкил;

Е и Е^a, независимо друг от друга, обозначают R ¹⁰CO;

R, R^a и R^b, независимо друг от друга, обозначают водород, (C₁-C₆ )-алкил или бензил;

R^c обозначает водород, (C ₁-C₆)-алкил, (C₅-C₆ )-циклоалкил, (C₅-C₆)-циклоалкил-(C ₁-C₂)-алкил, возможно замещенный фенил или возможно замещенный в фенильном остатке фенил-(C₁-C₂ )-алкил;

R⁰ обозначает (C₁-C ₆)-алкил, (C₅-C₁₀)-циклоалкил, (C ₅-C₁₀)-циклоалкил-(C₁-C ₄)-алкил, (C₇-C₁₂) -бициклоалкил, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C ₄)-алкил, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C ₄)-алкил, возможно замещенный (C₆-C ₁₂)-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₂)-арил-(C₁-C₄)-алкил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₄)-алкил, (C ₁-C₆)-алкил-СО, (C₅-C₁₀ )-циклоалкил-СО, (C₅-C₁₀)-циклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил-СО, (C₇-C₁₂ )-бициклоалкил-СО, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил-СО, (C₁₀-C₁₂ )-трициклоалкил-СО, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил-СО, возможно замещенный (C ₆-C₁₂)-арил-СО, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C₁-C ₄)-алкил-СО, возможно замещенный гетероарил-СО, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁ -C₄)-алкил-СО, (C₁-C₆)-алкил-S(O) _n, (C₅-C₁₀)-циклоалкил-S(О) _n, (C₅-C₁₀)-циклоалкил-(C₁ -C₄)-S(O)_n, (C₇-C₁₂ )-бициклоалкил-S(O)_n, (C₇-C₁₂ )-бициклоалкил-(C₁-C₄)-алкил-S(O)_n , (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-S(O) _n, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил-S(O)_n, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил-S(O)_n, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C ₁-C₄)-алкил-S(О)_n, возможно замещенный гетероарил-S(O)_n или возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₄ )-алкил-S(О)_n, причем n равно 1 или 2,

R ¹ обозначает X-NH-C(=NH), X-NH-C(=NX)-NH или X-NH-CH ₂;

X обозначает водород, (C₁-C₆ )-алкилкарбонил, (C₁-C₆)-алкоксикарбонил, (C₁-C₈)-алкоксикарбонилокси-(C₁ -C₆)-алкоксикарбонил, (C₆-C₁₄ )-арил-(C₁-C₆)-алкоксикарбонил или гидрокси;

R², R^2a и R^2b, независимо друг от друга, обозначают водород или (C₁-C₈ ) -алкил;

R³ обозначает R¹¹NH, (C ₁₀-C₁₂)-циклоалкил, (C₁₀-C ₁₂)-циклоалкил-(C₁-C₄ )-алкил, (C ₇-C₁₂)-бициклоалкил, (C₇-C ₁₂)-бициклоалкил-(C₁-C₄)-алкил, (C ₁₀-C₁₂)-трициклоалкил, (C₁₀-C ₁₂)-трициклоалкил-(C₁-C₄)-алкил, CO-N(R^a)-R⁴-E^a или CO-R ⁵-R⁶-Het;

R¹⁰ обозначает гидрокси, (C₁-C₆)-алкокси, (C₆-C₁₀ )-арил-(C₁-C₈)-алкокси, который в арильном остатке также может быть замещенным, возможно замещенный (C₆-C₁₀)-арилокси или (C₁-C ₈)-алкилкарбонилокси- (C₁-C₆)-алкокси;

R¹¹ обозначает R¹²NH-CO, R^14a O-CO, R^14bCO, R^14cS(O) или R ^14dS(O)₂;

R^14a обозначает возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁ -C₂)-алкил или остаток R¹⁵;

R ^14b и R^14d независимо друг от друга обозначают возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₀ )-арил-(C₁-C₂)-алкил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₂ )-алкил или остаток R¹⁵;

R^14c обозначает (C₁-C₆)-алкил, (C₆-C₁₀ )-арил-(C₁-C₂)-алкил, который также может быть замещен в арильном остатке, или остаток R¹⁵;

R¹⁵ обозначает R¹⁶-(C₁-C ₄)-алкил или R¹⁶;

R¹⁶ обозначает остаток 5-членного - 10-членного моноцикла или остаток 6-членного - 14-членного бицикла или трицикла, причем эти циклы являются насыщенными и также могут содержать один или два одинаковых или различных гетероатома в цикле из группы, включающей азот, кислород и серу, и также могут быть замещены одним, двумя, тремя или четырьмя одинаковыми или различными (C₁-C₄)-алкильными остатками;

Het обозначает остаток связанного через атом азота в кольце 5-членного или 10-членного моноциклического гетероцикла, который может быть ароматическим или частично ненасыщенным или насыщенным и может содержать один или два одинаковых или различных дополнительных гетероатомов в кольце из группы, включающей кислород, азот и серу, и может быть возможно замещенным, причем по атомам азота в кольце могут находиться в качестве заместителей одинаковые или различные остатки R^c, R^cCO или R ^cO-CO и по атомам углерода могут находиться в качестве заместителей один или несколько одинаковых или различных заместителей из группы, включающей (C₁-C₆)-алкил, (C ₁-C₆)-алкокси, трифторметил, фенил и бензил;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях и их физиологически приемлемые соли.

Наиболее предпочтительными соединениями формулы I являются такие соединения, в которых W обозначает R¹-A-C(R¹³) и R ¹³ обозначает (C₁-C₆)-алкил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₄)-арил- (C₁-C₈)-алкил или (C₃-C ₈)-циклоалкил;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях и их физиологически приемлемые соли.

Кроме того, предпочтительными соединениями формулы I являются такие соединения, в которых одновременно

R ³ обозначает R¹¹NH, (C₁₀-C₁₂ )-циклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-циклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, (C₇-C₁₂ )-бициклоалкил, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, (C₁₀-C₁₂ )-трициклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, СО-N(R^a)-R ⁴-Е^a или CO-R⁵-R⁶-Het;

R¹¹ обозначает R¹⁵O-CO или R ¹⁵S(O)₂;

R¹⁵ обозначает R ¹⁶-(C₁-C₃) -алкил или R¹⁶ ;

R¹⁶ обозначает остаток 5-членного - 6-членного моноцикла или остаток 6-членного - 12-членного бицикла или трицикла, причем эти циклы являются насыщенными и также могут содержать один или два одинаковых или различных гетероатома в кольце из группы, включающей азот и кислород, и также могут быть замещены одним, двумя или тремя одинаковыми или различными (C₁ -C₄)-алкильными остатками;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях и их физиологически приемлемые соли.

Особо предпочтительными соединениями формулы I являются такие соединения, в которых одновременно

W обозначает R ¹-A-C(R¹³);

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R⁰);

А обозначает двухвалентный остаток из группы, включающей циклогексилен, фенилен и фениленметил;

В обозначает двухвалентный остаток метилена, который является незамещенным или замещен остатком из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, (C₅ -C₆)-циклоалкил, (C₅-C₆)-циклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, возможно замещенный фенил, возможно замещенный в фенильном остатке фенил- (C₁ -C₄)-алкил, возможно замещенный 5-членный или 6-членный гетероарил или необязательно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил-(C₁-C₄)-алкил;

Е и Е ^a, независимо друг от друга, обозначают R¹⁰CO;

R, R^a и R^b, независимо друг от друга, обозначают водород или (C₁-C₄) -алкил;

R⁰ обозначает (C₁-C₆)-алкил, (C₅-C₆)-циклоалкил, (C₅-C ₆)-циклоалкил-(C₁-C₂)-алкил, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C ₁-C₂)-алкил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный в гетероарильном остатке гетероарил- (C ₁-C₂)-алкил, (C₁-C₆)-алкил-СО, (C₅-C₆)-циклоалкил-СО, (C₅-C ₆)-циклоалкил-(C₁-C₂)-алкил-СО, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил-СО, возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C ₁-C₂)-алкил-СО, (C₁-C₆ )-алкил-S(O)_n, (C₅-C₆)-циклоалкил-S(O) _n, (C₅-C₆)-циклоалкил-(C ₁-C₂)-алкил-S(O)_n, возможно замещенный (C₆-C₁₂)-арил-S(О)_n или возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂)-арил-(C ₁-C₂)-алкил-S(O)_n, причем n равно 1 или 2;

R¹ обозначает Н₂N-С(=NH), H₂N-C(=N-OH), СН₃О-CO-NH-C(=NH), H ₂N-C(=NH)-NH или H₂N-CH₂;

R ², R^2a и R^2b обозначают водород;

R³ обозначает R¹¹NH, (C₁₀ -C₁₂)-циклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-циклоалкил-(C ₁-C₃)-алкил, (C₇-C₁₂ )-бициклоалкил, (C₇-C₁₂)-бициклоалкил-(C ₁-C₃)-алкил, (C₁₀-C₁₂ )-трициклоалкил, (C₁₀-C₁₂)-трициклоалкил-(C ₁-C₃)-алкил, CO-N(R^a)-R ⁴-E^a или CO-R⁵-R⁶-Het;

R¹⁰ обозначает гидрокси, (C₁-C ₄)-алкокси, фенокси, бензилокси или (C₁-C ₄)-алкилкарбонилокси-(C₁-C₄)-алкокси;

R¹¹ обозначает R¹⁵O-CO или R ¹⁵S(O)₂;

R¹³ обозначает (C ₁-C₆)-алкил, (C₃-C₇) -циклоалкил или бензил;

R¹⁵ обозначает R¹⁶- (C ₁-C₃) -алкил или R¹⁶;

R¹⁶ обозначает остаток 5-членного - 6-членного моноцикла или остаток 6-членного - 12-членного бицикла или трицикла, причем эти циклы являются насыщенными и также могут содержать один или два одинаковых или различных гетероатома в кольце из группы, включающей азот и кислород, и также могут быть замещены одним, двумя или тремя одинаковыми или различными (C₁-C ₄)-алкильными остатками;

Het обозначает остаток связанного через атом азота в кольце 5-членного - 6-членного моноциклического гетероцикла, который является насыщенным и может содержать возможно один дополнительный гетероатом в кольце из группы, включающей кислород и серу, и может быть необязательно замещен один раз или два раза одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₁ -C₄)-алкокси, трифторметил, фенил и бензил;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях и их физиологически приемлемые соли.

Еще наиболее почтительными являются такие соединения формулы I, в которых одновременно

W обозначает R¹-A-C(R¹³), где А обозначает двухвалентный остаток фенилена;

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R⁰);

В обозначает двухвалентный остаток метилена, который является незамещенным или замещен остатком из группы, включающей (C₁-C ₆)-алкил, (C₅-C₆)-циклоалкил, (C ₅-C₆)-циклоалкил-(C₁-C₄ )-алкил, фенил, бенэил и фенилэтил;

Е обозначает R ¹⁰CO;

R, R^a и R^b, независимо друг от друга, обозначают водород или (C₁-C₄ )-алкил;

R⁰ обозначает (C₁-C ₆)-алкил, возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₂)-арил-(C₁-C₂)-алкил, (C₁-C₆)-алкил-S(O)_n или возможно замещенный в арильном остатке (C₆-C₁₂) -арил-S(O)_n;

R¹ обозначает H ₂N-C(=NH), Н₂N-С(=N-OH), СН₃О-CO-NH-C(=NH), H₂N-C(=NH)-NH или H₂N-CH₂;

R², R^2a и R^2b обозначают водород;

R³ обозначает R¹¹NH или CO-R⁵-Het;

R⁵ обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной -аминокислоты с липофильной боковой цепью, причем свободные функциональные группы могут быть защищены обычными в пептидной химии защитными группами или могут находиться в виде сложных эфиров или амидов, и причем атом азота в N-концевой аминогруппе содержит остаток R^b;

R¹⁰ обозначает гидрокси, (C ₁-C₄) -алкокси, фенокси, бензилокси или (C ₁-C₄)-алкоксикарбонилокси-(C₁-C ₄)-алкокси;

R¹¹ обозначает R¹⁵ O-СО или R¹⁵S(O)₂;

R¹³ обозначает (C₁-C₆)-алкил;

R ¹⁵ обозначает R¹⁶-(C₁-C₃ )-алкил или R¹⁶;

R¹⁶ обозначает остаток 5-членного - 6-членного моноцикла или остаток 7-членного - 12-членного бицикла или трицикла, причем эти кольца являются насыщенными и также могут содержать один или два одинаковых или различных гетероатома в кольце из группы, включающей кислород и азот, и также могут быть замещены одним или двумя одинаковыми или различными (C₁-C₄)-алкильными остатками;

Het обозначает остаток связанного через атом азота в кольце 5-членного или 6-членного моноциклического гетероцикла, который является насыщенным и может содержать возможно один дополнительный гетероатом в кольце из группы, включающей кислород и серу, и который может быть замещен одним или двумя одинаковыми или различными (C ₁-C₄)-алкильными остатками;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях и их физиологически приемлемые соли.

Особенно предпочтительными являются такие соединения формулы I, в которых одновременно

W обозначает R¹-A-C(R¹³), где А обозначает двухвалентный остаток фенилена;

Y обозначает карбонильную группу;

Z обозначает N(R⁰);

В обозначает двухвалентный остаток метилена, который является незамещенным или замещен одним остатком из группы, включающей (C₁ -C₆)-алкил, (C₅-C₆)-циклоалкил-(C ₁-C₄)-алкил, фенил, бензил и фенилэтил;

В обозначает R¹⁰CO;

R, R^a и R^b, независимо друг от друга, обозначают водород или метил;

R⁰ обозначает (C₁-C ₆)-алкил или возможно замещенный в арильном остатке (C ₆-C₁₂)-арил-(C₁-C₂)-алкил;

R¹ обозначает H₂N-C(=NH), H ₂N-C(=N-OH), СН₃О-CO-NH-C(=NH), H₂ N-C(=NH)-NH или H₂N-CH₂;

R² , R^2a и R^2b обозначают водород;

R ³ обозначает R¹¹NH или CO-R⁵ -Het;

R⁵ обозначает двухвалентный остаток природной или неприродной -аминокислоты с липофильной боковой цепью, причем свободные функциональные группы могут быть защищены обычными в пептидной химии защитными группами или могут находиться в виде сложных эфиров или амидов, и причем атом азота в N-концевой аминогруппе содержит остаток R^b;

R¹⁰ обозначает гидрокси, (C ₁-C₄)-алкокси, фенокси, бензилокси или (C ₁-C₄)-алкоксикарбонилокси-(C₁-C ₄)-алкокси;

R¹¹ обозначает R¹⁵ O-CO;

R¹³ обозначает (C₁-C₆ ) -алкил;

R¹⁵ обозначает R¹⁶ или R ¹⁶CH₂;

R¹⁶ обозначает циклопентил, циклогексил, 1-адамантил, 2-адамантил или норадамантил;

Het обозначает остаток связанного через атом азота в кольце 5-членного или 6-членного моноциклического гетероцикла, который является насыщенным и может необязательно содержать атом кислорода в качестве дополнительного гетероатома в кольце и который может быть замещен одним или двумя одинаковыми или различными (C ₁-C₄)-алкильными остатками;

во всех их стереоизомерных формах и их смесях во всех соотношениях и их физиологически приемлемые соли.

В общем предпочтительны соединения формулы I, которые по хиральным центрам, например по хиральному атому углерода, содержащему остатки R² и R³, и/или по центру W в 5-членном гетероцикле в формуле I, проявляют однородную конфигурацию.

Соединения формулы I могут быть получены, например, конденсацией фрагментов соединения формулы II

с соединением формулы III,

причем в формулах II и III группы W, Y, Z, В, Е, R, R ², R^2a, R^2b и R³, а также g и h, имеют приведенные выше значения или также функциональные группы могут быть в защищенном виде или в форме предшественников, причем G обозначает гидроксикарбонил, (C₁-C₆ )-алкоксикарбонил или активированное производное карбоновой кислоты, такое как хлорангидрид или активный эфир. В соединениях формулы III, если соединения формулы I должны быть получены, в которых R³ в формуле I обозначает CO-N(R^a)-R ⁴-E^a или CO-R⁵-R⁶-R ⁷, может, например, остаток R³ сначала обозначать существующую в защищенной форме гидроксикарбонильную группу и затем, лишь после конденсации формул II и III в одну или несколько последовательных стадий, превращаться в необходимую группу R ³.

Для конденсации соединений формулы II с соединениями формулы III применяют преимущественно хорошо известные специалисту методы связывания пептидной химии (см., например, Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Band 15/1 und 15/2, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974). В качестве конденсирующего средства принимают во внимание, например, карбонилдиимидазол, карбодиимид, такой как дициклогексилкарбодиимид или диизопропилкарбодиимид, О-((циан(этоксикар-бонил)метилен)амино)-N,N,N’,N’-тетраметилуронийтетрафторборат (TOTU) или ангидрид пропилфосфоновой кислоты (РРА). При конденсации, как правило, необходимо, чтобы имеющиеся в наличии нереагирующие аминогруппы были защищены обратимыми защитными группами. То же самое относится к не участвующим в реакции карбоксильным группам, которые во время конденсации предпочтительно существуют в виде (C₁-C₆)-алкилового эфира, например трет-бутилового эфира, или в виде бензилового эфира. Защита аминогрупп является излишней, если аминогруппы находятся еще в виде предшественников, например в виде нитрогрупп или цианогрупп, и лишь после связывания образуются, например в результате гидрирования. После связывания присутствующие защитные группы отщепляют подходящим способом. Например, NO₂-группы (гуанидинозащита), бензилоксикарбонилгруппы и бензиловый эфир удаляют гидрированием. Защитные группы типа трет-бутильных отщепляют в кислой среде, в то время как 9-флуоренилметилоксикарбонильный остаток удаляют при помощи вторичного амина.

Соединения формулы II, в которых W обозначает R¹-A-C(R¹³ ), Y обозначает карбонильную группу и Z обозначает NR ⁰, могут быть получены, например, прежде всего взаимодействием соединений формулы IV

по реакции Бухерера до получения соединения формулы V

в которой, так же, как и в формуле IV, R¹, R¹³ и А имеют указанные выше значения (H.T.Bucherer, V.A.Lieb, J.Prakt. Chem., 141 (1934), 5).

Соединения формулы VI

в которой R¹, R¹³, А, В и G имеют указанные выше значения, могут быть затем получены путем взаимодействия соединений формулы V, например, прежде всего с алкилирующим реагентом, который вводит в молекулу остаток -B-G. Взаимодействие соединений формулы VI со вторым реагентом формулы R⁰-LG, в которой R⁰ имеет приведенные выше значения и LG представляет собой нуклеофильно замещаемую удаляемую группу, например галоген, в частности хлор или бром, (C₁-C₄)-алкокси, возможно замещенный фенокси или гетероциклическую удаляемую группу, такую как, например, имидазолил, приводит к соответствующим соединениям формулы II. Эти взаимодействия можно проводить аналогичными известными для специалиста способами. В отдельных случаях при этом, как и на всех стадиях синтеза соединений формулы I, допустимо временное блокирование функциональных групп, которые могут привести к побочным реакциям или нежелательным реакциям, при помощи стратегии защитных групп, пригодной для проблемы данного синтеза, что известно специалисту. Относительно получения соединений формул V и VI в рацемической форме и в энантиомерно чистом виде, нужно специально сослаться на соответствующие формы выполнения, описанные в WO-A-96/33976, которые являются составной частью раскрытия данного изобретения.

Если W обозначает R¹-A-CH=C, то этот структурный элемент может быть введен, например, аналогичными известными способами конденсации альдегида с 5-членным гетероциклом, который содержит метиленовую группу в положении, соответствующем группе W.

Аминосоединения формулы III могут быть получены стандартным способом или аналогичным способом из исходных соединений, которые коммерчески доступны или могут быть получены согласно описанным в литературе или аналогичным способам.

Соединения формулы I, в которых 5-членный гетероцикл представляет собой диоксо- или тиоксо-оксо-замещенное имидазолидиновое кольцо, в котором W обозначает R¹-A-C(R¹³), могут быть также получены следующим образом:

Реакцией полученных согласно стандартному способу -аминокислот или N-замещенных -аминокислот или предпочтительно их эфиров, например метилового эфира, этилового эфира, трет-бутилового эфира или бензилового эфира, например с соединением формулы VII

где R⁰, R¹, R¹³ и А имеют определенные выше значения, с изоцианатом или изотиоцианатом, например формулы VIII

где В, Е, R, R², R^2a, R^2b , R³, g и h имеют данные выше значения и U обозначает изоцианато- или изотиоцианатогруппу, получают производное мочевины или производное тиомочевины, например формулы IX

к которой относятся также вышеуказанные значения радикалов и в которой V обозначает кислород или серу, и путем нагревания с кислотой при омылении сложноэфирных групп циклизуют в соединения формулы Iа

где V обозначает кислород или серу, W обозначает R ¹-А-С (R¹³) и остальные радикалы имеют вышеуказанные значения. Циклизация соединений формулы IX в соединения формулы Iа может быть также выполнена обработкой основаниями в инертных растворителях, например обработкой гидридом натрия в апротонном растворителе, таком как диметилформамид.

Во время циклизации гуанидиногруппы могут быть блокированы защитными группами, например NO₂. Аминогруппы могут находиться в защищенном виде или, например, находиться еще в виде NO₂-группы или цианогруппы, которые позднее могут быть восстановлены до аминогруппы или в случае цианогруппы могут быть превращены в формамидиногруппу.

Соединения формулы I, в которых 5-членный гетероцикл представляет собой диоксо- или тиоксо-оксо-замещенное имидазолидиновое кольцо, в котором W обозначает R¹-A-C(R¹³), могут быть также получены взаимодействием соединения формулы VII с изоцианатом или изотиоцианатом формулы Х

в которой В и U имеют вышеуказанные для формулы VIII значения и Q обозначает алкоксигруппу, например (C₁-C₄ )-алкоксигруппу, такую как метокси, этокси или трет-бутокси, (C₆-C₁₄)-арилоксигруппу, например фенокси, или (C₆-C₁₄)-арил-(C₁-C ₄)-алкоксигруппу, например бензилокси.

При этом получают соединение формулы XI

в которой V, А, В, Q, R⁰, R¹ и R ¹³ имеют приведенные выше для формул IX и Х значения,

которое затем под действием кислоты или основания, как описано выше для циклизации соединений формулы IX, циклизуют в соединение формулы XII

в которой W обозначает R¹-A-C(R¹³ ) и V, В, Q и R⁰ имеют приведенные выше для формул Iа и Х значения.

Из соединения формулы XII получают затем соединение формулы Iа путем гидролиза группы CO-Q до СООН карбоновой кислоты и последующего связывания с соединением формулы III, как описано выше для связывания соединений формул II и III. Также и здесь во время циклизации функциональные группы могут находиться в защищенной форме или в форме предшественников.

Следующим способом получения соединений формулы Iа является, например, взаимодействие соединений формулы XIII

в которой W обозначает R¹-A-C(R¹³ ) и остальные радикалы имеют вышеуказанные значения,

с фосгеном, тиофосгеном или соответствующими эквивалентами (аналогично S.Goldschmidt und M.Wick, Liebigs Ann.Chem., 575 (1952), 217-231 und C.Tropp, Chem.Ber., 61 (1928), 1431-1439).

Переведение аминогруппы в гуанидиногруппу может быть выполнено следующими реагентами:

1. O-метилизомочевиной (S.Weiss und H.Krommer, Chemiker Zeitung, 98 (19740, 617-618).

2. S-метилизотиомочевиной (R.F.Bopne, M.L.Forrester und I.W.Waters, J.Med.Chem., 20 (1977) 771-776).

3. Нитро-S-метилизотиомочевиной (L.S.Hafner und R.E.Evans, J.Org.Chem., 24 (1959) 57).

4. Формамидиносульфоновой кислотой (K.Kim, Y.-T.Lin und H.S.Mosher, Tetrah.Lett., 29 (1988), 3183-3186).

5. Нитратом 3,5-диметил-1-пиразолил-формамидиния (F.L. Scott, D.G.O’Donovan und J.Reiily, J.Amer.Chem.Soc., 75 (1953), 4053-4054).

6. N,N’-ди-трет-бутилоксикарбонил-S-метилизотиомочевиной (R.J.Bergeron und J.S.McManis, J.Org.Chem., 52 (1987), 1700-1703).

7. N-алкоксикарбонил-, N.N’-диалкоксикарбонил-, N-алкилкарбонил- и N,N’-диалкилкарбонил-S-метилизотиомочевиной (H.Wollweber, H.Kolling, E.Niemers, A.Widdig, P.Andrews, H.-P.Schutz und H.Thomas, Arzneim.Forsch./Drug Res., 34 (1984), 531-542).

Амидины могут быть получены из соответствующих цианосоединений присоединением спиртов (например, метанола или этанола) в кислой безводной среде (например, диоксане, метаноле или этаноле) и последующим аминолизом, например обработкой аммиаком в спиртах, таких как, например, изопропанол, метанол или этанол (G.Wagner, P.Richner und Ch.Garbe, Pharmazie, 29 (1974), 12-55). Следующим способом получения амидинов является присоединение H₂S к цианогруппе с последующим метилированием образовавшегося тиоамида и последующим взаимодействием с аммиаком (патент ГДР №235866). Далее гидроксиламин может быть присоединен к цианогруппе с образованием N-гидроксиамидинов, которые затем при желании могут быть также превращены в амидины, например гидрированием.

Относительно получения соединений формулы I необходимо сослаться на полное описание WO-A-96/33976 и следующие работы, в которых описаны соединения с ингибирующим агрегацию тромбоцитов действием: WO-A-94/21607, WO-A-95/14008, ЕР-А-449079, ЕР-А-530505 (US-A-5389614), WO-A-93/18057, EP-A-566919 (US-A-5397796), EP-A-580008 (US-A-5 424293) и ЕР-А-584694 (US-A-5554594).

Соединения формулы I являются ценными лекарственными активными веществами, которые пригодны, например, для терапии и профилактики воспалительных заболеваний, аллергических заболеваний или астмы. Соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли могут в соответствии с данным изобретением применяться для животных, предпочтительно млекопитающих и, в частности для человека в качестве лекарственного средства для терапии или профилактики. Они могут применяться отдельно, в смесях друг с другом или в форме фармацевтических препаратов, которые делают возможным энтеральное или парентеральное применение и которые в качестве активного компонента содержат эффективное количество по меньшей мере одного соединения формулы I и/или его физиологически приемлемой соли, наряду с обычными фармацевтически приемлемыми носителями и/или добавками.

Поэтому предметом данного изобретения являются также соединения формулы I и/или их физиологически приемлемые соли для применения в качестве лекарственных средств, применение соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей для получения лекарственных средств для терапии и профилактики указанных выше и далее заболеваний, например для терапии и профилактики воспалительных заболеваний, а также применение соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей при терапии и профилактике этих заболеваний. Далее, предметом данного изобретения являются фармацевтические препараты, которые содержат эффективную дозу по меньшей мере одного соединения формулы I и/или его физиологически приемлемых солей, наряду с обычными фармацевтически приемлемыми носителями и/или добавками.

Лекарственные средства могут вводиться перорально, например в виде пилюль, таблеток, покрытых пленками таблеток, драже, гранул, жестких и мягких желатиновых капсул, растворов, сиропов, эмульсий или суспензий. Но применение может быть также ректальным, например в форме суппозиториев, или парентеральным, например в форме инъекционных или инфузионных растворов, микрокапсул или палочек, или чрескожным, например в форме мазей, растворов или настоек, или другим путем, например в форме назальных спреев или аэрозольных смесей.

Приготовление фармацевтических препаратов в соответствии с данным изобретением осуществляют обычным образом, причем наряду с соединением или с соединениями формулы I и/или их физиологически приемлемыми солями применяют инертные неорганические или органические носители. Для приготовления пилюль, таблеток, драже и твердых желатиновых капсул можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или их производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли и т.д. Носителями для мягких желатиновых капсул и суппозиториев являются, например, жиры, воски, полутвердые и жидкие полиолы, природные или отвержденные масла и т.д. В качестве носителей для приготовления растворов, например инъекционных растворов, или эмульсий или сиропов пригодны, например, вода, спирты, глицерин, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза, растительные масла и т.д. В качестве носителей для микрокапсул, трансплантатов или палочек пригодны, например, сополимеризаты из гликолевой кислоты и молочной кислоты. Фармацевтические препараты содержат обычно ~0,5-90 мас.% соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей.

Фармацевтические препараты, наряду с активными веществами и носителями, могут содержать еще дополнительные вещества, например наполнители, разбрызгивающие агенты, связующие агенты, мягчители, смачиватели, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, подслащивающие вещества, красители, улучшающие вкус и запах агенты, загустители, разбавители, буферные вещества, затем растворители или солюбилизаторы или средства для обеспечения пролонгированного действия, а также соли для изменения осмотического давления, покрывающие вещества или антиоксиданты. Они могут также содержать два или несколько соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей. Далее, они могут содержать, наряду с по меньшей мере одним соединением формулы I и/или его физиологически приемлемой солью, еще одно или несколько других терапевтически или профилактически активных веществ, например веществ с ингибирующим воспаление действием. Фармацевтические препараты содержат обычно 0,2-500 мг, предпочтительно 1-100 мг активного вещества формулы I и/или его физиологически приемлемой соли.

Соединения формулы I обладают способностью ингибировать процессы взаимодействия клетка-клетка и клетка-матрица, при которых играют роль взаимодействия между VLA-4 и его лигандами. Эффективность соединений формулы I может быть доказана, например, в тесте, в котором измеряют связывание клеток, которые обнаруживают рецептор VLA-4, например лейкоцитов, с лигандами этого рецептора, например VCAM-1, который может быть получен для этого предпочтительно также путем генной инженерии. Детали такого теста описаны ниже. В частности, соединения формулы I могут ингибировать адгезию и миграцию лейкоцитов в случае прикрепления лейкоцитов к эндотелиальным клеткам, которое, как пояснялось выше, регулируется через VCAM-1/VLA-4 адгезионный механизм. Поэтому, кроме применения в качестве противовоспалительных средств, соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли пригодны вообще для терапии и профилактики заболеваний, которые обусловлены взаимодействием между VLA-4-рецептором и его лигандами или на которые можно воздействовать ингибированием этого взаимодействия, и, в частности, они пригодны для терапии и профилактики заболеваний, которые, по меньшей мере частично, обусловлены нежелательным уровнем адгезии лейкоцитов и/или миграции лейкоцитов или связаны с этим, или для предупреждения, облегчения или излечения которых должна быть уменьшена адгезия и/или миграция лейкоцитов.

Соединения формулы I могут применяться при воспалительных явлениях различных причин в качестве ингибиторов воспаления. Они находят применение, например, для терапии или профилактики ревматоидного артрита, воспалительного кишечного заболевания (язвенного колита), системной красной волчанки или для терапии или профилактики воспалительных заболеваний центральной нервной системы, таких как, например, множественный склероз, для терапии или профилактики астмы или аллергий, например аллергий замедленного типа (аллергии типа IV). Далее, они пригодны для терапии или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, артериосклероза, рестенозов, для терапии или профилактики диабета, для ингибирования повреждения трансплантатов органов, для подавления роста опухолей или метастазирования опухолей при различных злокачественных заболеваниях, для терапии малярии, а также других болезней, при которых ингибирование интегрина VLA-4 и/или воздействие на активность лейкоцитов приводит, по-видимому, к предупреждению, облегчению или излечению.

Доза при применении соединений формулы I может меняться в широких пределах и, как обычно, должна в каждом отдельном случае соответствовать индивидуальным данным. Она зависит от применяемого соединения или от вида и тяжести подлежащего лечению заболевания или от того, проводится ли лечение острого или хронического патологического состояния, или проводится профилактика. В общем, при пероральном введении суточная доза составляет ~0,01-100 мг/кг, предпочтительно 0,1-10 мг/кг, в особенности 0,3-2 мг/кг (на кг веса тела) для взрослых с весом ~75 кг для достижения эффективных результатов. При внутривенном введении составляет суточная доза в общем ~0,01-50 мг/кг, предпочтительно 0,01-10 мг/кг веса тела. Суточная доза может быть разделена, в частности при введении больших количеств, на несколько, например, на 2, 3 или 4 раздельно вводимые дозы. В случае необходимости, в зависимости от индивидуального поведения, может потребоваться скорректировать дозу выше или ниже от приведенной суточной дозы.

Предметом данного изобретения являются также соединения формулы I для ингибирования адгезии и/или миграции лейкоцитов или для ингибирования VLA-4-рецепторов и применение соединений формулы I для приготовления лекарственных средств для этого, а также лекарственных средств для терапии или профилактики болезней, при которых адгезия лейкоцитов и/или миграция лейкоцитов имеет нежелательный размер, или болезней, при которых играют роль VLA-4-зависимые процессы адгезии, а также применение соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей для терапии и профилактики подобных болезней.

Соединения формулы I и их соли могут, кроме того, применяться для диагностических целей, например в in vitro-диагнозах, и в качестве вспомогательного средства в биохимических исследованиях, при которых стремятся получить блокирование VLA-4 или воздействие на взаимодействия клетка-клетка или клетка-матрица. Кроме того, их можно использовать в качестве промежуточных продуктов для получения других соединений, в частности других лекарственных активных веществ, которые могут быть получены из соединений формулы I, например изменением или введением остатков или функциональных групп.

Примеры

Соединения идентифицировали по масс-спектрам (MS) и/или ЯМР-спектрам. Соединения, которые очищали хроматографией с использованием элюента, который содержал, например, уксусную кислоту или трифторуксусную кислоту, и затем сушили лиофилизацией, содержали отчасти, в зависимости от проведения лиофилизации, еще кислоту из элюента, и их получали также частично или полностью в виде соли использованной кислоты, например, в виде соли уксусной кислоты или соли трифторуксусной кислоты.

Сокращения:

ДМФ N,N-диметилформамид

ТГФ тетрагидрофуран

ДЦК N,N’-дициклогексилкарбодиимид

HOBt 1-гидроксибензотриазол

HOOBt 3-гидрокси-4-оксо-3,4-дигидро-1,2,3-бензотриазин

Пример 1

(S)-3-(((R,S)-4-(4-Амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-пропионовая кислота

1a) (R,S)-4-(4-Цианфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин

20 г (138 ммоль) п-ацетилбензонитрила, 115,6 г карбоната аммония (1,21 моль) и 11,6 г цианида калия (178 ммоль) растворяли в 600 мл смеси из 50% этанола и 50% воды. Смесь перемешивали в течение 5 часов при 55°С и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. Раствор доводили до рН 6,3 6н соляной кислотой и затем перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Осадок отсасывали, промывали водой и сушили над пентоксидом фосфора в высоком вакууме. Выход: 22,33 г (75%).

1b) Метиловый эфир ((R,S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты

1,068 г натрия (46,47 ммоль) растворяли в атмосфере азота в 110 мл абсолютного метанола. Прозрачный раствор смешивали с 10 г (R,S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидина (46,47 ммоль) и смесь кипятили в течение 2 часов с обратным холодильником. Добавляли 7,75 г (46,68 ммоль) иодида калия и по каплям в течение 1 часа добавляли раствор 4,53 мл метилового эфира хлоруксусной кислоты (51,3 ммоль) в 5 мл метанола. Смесь нагревали в течение 6 часов до кипения, выдерживали в течение ночи при комнатной температуре и концентрировали. Маслянистый остаток хроматографировали через силикагель смесью метиленхлорид/этилацетат (9:1). Выход: 8,81 г (66%).

1с) Метиловый эфир ((R,S)-4-(4-цианфенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты

К раствору 4,5 г (15,7 ммоль) метилового эфира ((R,S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты в 25 мл абсолютного ДМФ в атмосфере аргона при 0°С добавляли 754 мг (17,27 ммоль) гидрида натрия, оставляли перемешиваться в течение 15 минут при комнатной температуре, добавляли 2,05 мл (17,27 ммоль) бензилбромида и оставляли перемешиваться в течение 4 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме и остаток хроматографировали на силикагеле смесью гептан/ацетальдегид. После концентрирования фракций продукта получали 9,81 г (76%) целевого соединения.

1d) Гидрохлорид метилового эфира ((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты

Суспензию 4,42 г (11,7 ммоль) метилового эфира ((R,S)-4-(4-цианфенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты в 80 мл абсолютного этанола охлаждали до 0°С. Сухой газообразный хлористый водород вводили в суспензию при постоянном поддержании температуры ниже 10°С, пока ИК-спектр больше не показывал полосы нитрила. Этанольный раствор концентрировали вдвое и смешивали с 1 л диэтилового эфира. Суспензию концентрировали в вакууме и остаток сушили в высоком вакууме. Полученный таким образом промежуточный продукт растворяли в 60 мл абсолютного изопропанола и при 50°С смешивали с 13,7 мл 1,9 н. раствора аммиака в изопропаноле. После 5 часов перемешивания при 50°С реакционную смесь охлаждали и выливали в 1 л диэтилового эфира. Осадок отсасывали, фильтрат концентрировали, оба остатка объединяли и очищали хроматографией на силикагеле смесью дихлорметан/метанол/уксусная кислота/вода (9:1:0,1:0,1). Получали 2,94 г (64%) целевого соединения.

1е) Гидрохлорид ((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты

2,82 г (7,2 ммоль) гидрохлорида метилового эфира ((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты нагревали в 60 мл концентрированной соляной кислоты в течение 5 часов с обратным холодильником. Раствор концентрировали в вакууме, остаток разбавляли водой и лиофилизировали. Получали 1,885 г (63%) целевого соединения.

1f) Трет-бутиловый эфир (S)-3-амино-2-бензилоксикарбонил-аминопропионовой кислоты

10 г (42 ммоль) (S)-3-амино-2-бензилоксикарбониламинопропионовой кислоты в смеси из 100 мл диоксана, 100 мл изобутилена и 8 мл концентрированной Н₂SO₄ встряхивали в течение 3 дней при 20 атм N₂-давления в автоклаве. Избыточный изобутилен выпускали под давлением и к оставшемуся раствору добавляли 150 мл диэтилового эфира и 150 мл насыщенного раствора NаНСО ₃. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали 2×100 мл диэтилового эфира. Объединенные органические фазы промывали 2×100 мл воды и сушили над Na₂SO₄. После удаления растворителей в вакууме получали 9,58 г (78%) целевого соединения в виде бледно-желтого масла.

1g) Трет-бутиловый эфир (S)-2-бензилоксикарбониламино-3-трет-бутоксикарбониламинопропионовой кислоты

К раствору 10 г (34 ммоль) трет-бутилового эфира (S)-3-амино-2-бензилоксикарбониламинопропионовой кислоты в 600 мл смеси ТГФ/вода (2:1) при 0°С добавляли 8,9 г (40,8 ммоль) ди-трет-бутилдикарбоната и затем порциями 1 н. NaOH так, чтобы рН раствора был между 9 и 10 (расход 1 н. NaOH 32 мл). После 3 часов перемешивания при комнатной температуре добавляли 1 л воды и экстрагировали 3 раза диэтиловым эфиром. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрования и удаления растворителя в вакууме остаток хроматографировали смесью дихлорметан/метанол (20:1) на силикагеле. Получали 13,19 г (98%) целевого соединения.

1h) Гидрохлорид трет-бутилового эфира (S)-2-амино-3-трет-бутоксикарбониламинопропионовой кислоты

13,1 г трет-бутилового эфира (S)-2-бензилоксикарбониламино-3-трет-бутоксикарбониламинопропионовой кислоты гидрировали в смеси метанол/НСl над 10% Pd/C. После 1,5 часов фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Получали 9,77 г (99%) целевого соединения в виде бесцветного твердого вещества.

1i) Трет-бутиловый эфир (S)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-3-трет-бутоксикарбониламинопропионовой кислоты

Раствор 10,9 г (65,4 ммоль) 1-(гидроксиметил)-адамантана и 10,6 г (65,4 ммоль) карбонилдиимидазола в 60 мл ТГФ перемешивали в течение 1,5 часа при 50°С. Добавляли 9,7 г (32,7 ммоль) гидрохлорида трет-бутилового эфира (S)-2-амино-3-трет-бутоксикарбониламинопропионовой кислоты в 25 мл ТГФ и 5,6 мл (32,7 ммоль) диизопропилэтиламина, перемешивали в течение 4 часов при 60°С и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме и остаток хроматографировали на силикагеле смесью гептан/этилацетат (7:3). Получали 8,7 г (59%) целевого соединения в виде бесцветного масла.

1j) Трет-бутиловый эфир (S)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-3-аминопропионовой кислоты

Раствор 8,7 г (19,22 ммоль) трет-бутилового эфира (S)-2-(1-адамантилметилоксикарбонил-амино)-3-трет-бутоксикарбо-ниламинопропионовой кислоты в 180 мл смеси трифторуксусная кислота/дихлорметан (1:1) после 1 минуты выливали в 1,5 л охлажденного льдом раствора NаНСО ₃, смесь трижды экстрагировали дихлорметаном и затем объединенные дихлорметановые фазы сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и удаления растворителя в вакууме получали 6,35 г (94%) целевого соединения в виде бесцветного твердого вещества.

1k) (S)-3-(((R,S)-4-(4-Амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-пропионовая кислота

417 мг (1 ммоль) гидрохлорида ((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты и 163 мг (1 ммоль) HOOBt суспендировали в 5 мл ДМФ и при 0°С соединяли с 220 мг (1,1 ммоль) ДЦК.

Перемешивали в течение 1 часа при 0°С и в течение 1 часа при комнатной температуре и затем добавляли 353 мг (1 ммоль) трет-бутилового эфира (S)-2-(1-адамантилметилоксикарбонил-амино)-3-аминопропионовой кислоты и 11,7 мкл (0,9 ммоль) N-этилморфолина, перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. После фильтрования фильтрат концентрировали в вакууме и остаток хроматографировали на силикагеле смесью дихлорметан/метанол/уксусная кислота/вода (9:1:0,1:0,1). После концентрирования фракций продукта остаток растворяли в 4 мл 90%-ной трифторуксусной кислоты и перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Трифторуксусную кислоту удаляли в вакууме, остаток распределяли между диэтиловым эфиром и водой, водную фазу концентрировали и остаток очищали хроматографией на силикагеле смесью дихлорметан/метанол/уксусная кислота/вода (9:1:0,1:0,1) с последующей препа-ративной ВЖХ на RP-18. После концентрирования фракций продукта и лиофилизации получали 26,3 мг (4%) целевого соединения FAB-MS: 659,4 (М+Н)⁺.

Пример 2

(S)-3-((S)-4-(4-Аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-пропионовая кислота

2а) 2-нафтилметиловый эфир ((S)-4-(4-цианфенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2, 5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты

К раствору 13,66 г (50 ммоль) ((S)-4-(4-цианфенил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты в 100 мл абсолютного ДМФ при охлаждении льдом добавляли 5,28 г (110 ммоль) гидрида натрия. После 1 часа перемешивания при комнатной температуре добавляли на протяжении 1 часа 24,3 г (110 ммоль) 2-бромметилнафталина. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре и затем выливали в смесь уксусная кислота/вода. После разделения фаз водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы дважды промывали водой и сушили над сульфатом магния. После фильтрования и удаления растворителя в вакууме остаток хроматографировали на силикагеле смесью гептан/этилацетат (2:1). Получали 8,51 г (56%) целевого соединения.

2b) 2-нафтилметиловый эфир ((S)-4-(4-аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты

К раствору 6,64 г (12 ммоль) 2-нафтилметилового эфира ((S)-4-(4-цианфенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты в 120 мл абсолютного этанола добавляли 1,67 г (24 ммоль) гидроксиламмонийхлорида и 5,04 мл (36 ммоль) триэтиламина и нагревали эту смесь с обратным холодильником в течение 2,5 часа. Растворитель удаляли в вакууме и остаток распределяли между этилацетатом и водой. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали водой и сушили над сульфатом магния. После фильтрования растворитель удаляли в вакууме и получали 6,08 г (86%) целевого соединения.

2с) ((S)-4-(4-Аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусная кислота

2 г (3,4 ммоль) 2-нафтилметилового эфира ((S)-4-(4-аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты в 200 мл абсолютного метанола гидрировали в течение 4 часов над смесью гидроксид палладия/сульфат бария. Катализатор отфильтровывали, фильтрат концентрировали в вакууме и остаток разбавляли этилацетатом. Продукт отсасывали и сушили в высоком вакууме. Получали 0,56 г (37%) целевого соединения.

2d) Трет-бутиловый эфир (S)-3-((S)-4-(4-аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил) -ацетиламино)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-пропионовой кислоты

К раствору 223 мг (0,5 ммоль) ((S)-4-(4-аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты и 176 мг (0,5 ммоль) трет-бутилового эфира (S)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-3-аминопропионовой кислоты (см. Пример 1) в 10 мл абсолютного ДМФ добавляли 164 мг (0,5 ммоль) TOTU (O-(циан-(этоксикарбонил)метиленамино)-1,1,3,3-тетраметилуроний-тетрафторбората) и 165 мг (1,26 ммоль) диизопропилэтиламина. После 2 часов перемешивания при комнатной температуре и выдерживания в течение ночи реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток распределяли между этилацетатом и водой. Фазы разделяли, водную фазу экстрагировали этилацетатом и объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водой. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрования и концентрирования фильтрата в вакууме остаток помещали в этилацетат и раствор последовательно промывали раствором KHSO₄/K₂SO₄ , насыщенным раствором NаНСO₃ и водой и сушили над сульфатом магния. Получали 240 мг (62%) целевого соединения.

2е) (S)-3-((S)-4-(4-Аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-пропионовая кислота

220 мг (0,28 ммоль) трет-бутилового эфира (S)-3-((S)-4-(4-аминогидроксиминометил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-(1-адамантилметилоксикарбониламино)-пропионовой кислоты растворяли в 20 мл 90%-ной трифторуксусной кислоты. После 1 часа при комнатной температуре трифторуксусную кислоту удаляли в вакууме и остаток перемешивали с диэтиловым эфиром. Продукт отсасывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили в высоком вакууме. Получали 110 мг (54%) целевого соединения (в виде соли трифторуксусной кислоты). ES(+)-MS: 725,4 (M+H)⁺.

Пример 3

(S)-3-(((R,S)-4-(4-Амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-бензиламинокарбониламинопропионовая кислота

3а) Дигидрохлорид (S)-3-(((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-аминопропионовой кислоты

Раствор 4,4 г (6,7 ммоль) (S)-3-(((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-бензилоксикарбониламинопропионовой кислоты (полученной реакцией сочетания гидрохлорида ((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты и трет-бутилового эфира (S)-3-амино-2-бензилоксикарбониламинопропионовой кислоты аналогично Примеру 1 и последующим расщеплением трет-бутилового эфира (аналогично Примеру 1) в 100 мл метанола гидрировали над смесью гидроксид палладия/сульфат бария в течение 1 часа при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали, растворитель удаляли в вакууме и остаток в 40 мл 6н соляной кислоты перемешивали в течение 30 минут при 40°С. Раствор концентрировали в вакууме, разбавляли водой и лиофилизировали. Получали 2,39 г (77%) целевого соединения.

3b) (S)-3-(((R,S)-4-(4-Аминоиминометил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-бензиламинокарбониламинопропионовая кислота

К раствору 570 мг (1,2 ммоль) дигидрохлорида (S)-3-(((R,S)-4-(4-амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил) -ацетиламино) -2-аминопропионовой кислоты в 20 мл абсолютного ДМФ добавляли 0,4 мл диизопропилэтиламина (2,4 ммоль) и 0,15 мл (1,2 ммоль) бензилизоцианата. После 4 часов перемешивания при комнатной температуре растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с дихлорметаном, смесью дихлорметан/метанол (8:2) и затем метанолом. После концентрирования фракций продукта остаток растворяли в воде и лиофилизировали. Получали 70 мг (10%) целевого соединения. FAB-MS: 600,3 (М+Н) ⁺.

Пример 4

(S)-(((R,S)-4-(4-(Амино-имино-метил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-ацетиламино)-2-бен-зиламинотиокарбониламинопропионовая кислота

Это соединение получали аналогично Примеру 3 с использованием вместо бензилизоцианата бензилизотиоцианата. ES(+)-MS: 616,3 (М+Н)⁺.

Пример 5

((R,S)-4-(4-(Амино-имино-метил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диимидазолидин-1-ил)-ацетил-L-(N-метиласпартил)-L-валинморфолид

5а) L-Валинморфолид

К раствору 3,01 г (12 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-валина и 1,04 г (12 ммоль) морфолина в 30 мл абсолютного ДМФ добавляли 3,93 г (12 ммоль) TOTU (см. Пример 2) и 2,04 мл диизопропилэтиламина. После 2 часов перемешивания при комнатной температуре растворитель удаляли в вакууме, остаток помещали в этилацетат и раствор последовательно промывали 3х водным раствором KHSO₄/K₂SO₄ , 3 x насыщенным раствором NаНСО₃ и 3 х водой. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрования и удаления растворителя в вакууме получали 3,88 г N-бензилоксикарбонил-L-валинморфолида в виде неочищенного продукта, который для отщепления бензилоксикарбонильной группы гидрировали в метаноле в течение 3 часов над 10% Pd/C. Получали 2,11 г (95%) целевого соединения.

5b) L-(N-метиласпартил(OtBu))-L-валинморфолид

Это соединение получали сочетанием L-Z-N-(СН₃ )-Asp-(OtBu)-ОН с L-валинморфолидом и последующим гидрогенолитическим отщеплением Z-группы (бензилоксикарбонильной группы), как описано в а). Из 1,39 г (7,5 ммоль) L-валинморфолида получали таким образом 2,4 г (86%) целевого соединения.

5с) ((R,S)-4-(4-(Амино-имино-метил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диимидазолидин-1-ил)-ацетил-L-(N-метиласпартил)-L-валинморфолид

Это соединение получали сочетанием гидрохлорида ((R,S)-4-(4-(амино-имино-метил)-фенил)-3-(2-нафтилметил)-4-метил-2,5-диимидазолидин-1-ил)-уксусной кислоты (полученной аналогично Примеру 1 с использованием 2-бромметилнафталина вместо бензилбромида) и L-(N-метиласпартил(OtBu))-L-валинморфолида и последующим расщеплением трет-бутилового эфира 90%-ной трифторуксусной кислотой аналогично Примеру 2. ES(+)-MS: 728,4 (М+Н)⁺ .

Аналогично соединению Примера 1 могут быть получены другие карбаматы, например, (S)-3-(((S)-4-(4-аминоиминометил)-фенил)-3-бензил-4-метил-2,5-диоксоимидазолидин-1-ил)-((R,S)-2-(2-метилпропил)-ацетиламино)-2-(циклогексилметилоксикарбониламино)-пропионовая кислота формулы

причем вместо использованного в Примере 1 в стадии b) эфира хлоруксусной кислоты может быть использован эфир 2-бром-4-метилпентановой кислоты.

Исследование биологической активности

В качестве тест-способа для определения эффективности соединений формулы I на взаимодействие между VCAM-1 и VLA-4 применяют тест, который является специфическим для этого взаимодействия. Клеточные партнеры связывания, т.е. VLA-4-интегрины, применяются в их природной форме в виде поверхностных молекул на клетках человека U937 (АТСС CRL 1593), которые принадлежат к группе лейкоцитов. В качестве специфических партнеров связывания применяют полученные генной инженерией рекомбинантные растворимые слитые белки, состоящие из внецитоплазматических доменов человеческого VCAM-1 и константной области человеческого иммуноглобулина подкласса IgG1.

Тест-способы

Тест для измерения адгезии U937-клеток (АТСС CRL 1593) на hVCAM-1

1. Получение человеческого VCAM-1(1-3)-IgG и человеческого CD4-IgG

Использовали генетическую конструкцию для экспрессии внеклеточных доменов человеческого VCAM-1, связанную с генетической последовательностью тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина IgGI (шарнирную область, области СН2 и СН3), полученную от доктора Brian Seed, Massachusetts General Hospital, Boston, USA (срав. Damie find Aruffo, Proc.Natl. Acad.Sci.USA, 1991, 88, 6403-6407). Растворимый слитый белок hVCAM-1(1-3)-IgG содержит три аминоконцевых внеклеточных иммуноглобулин-подобных домена человеческого VCAM-1 (Damie und Aruffo, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1991, 88, 6403). CD4-IgG (Zettlmeissl et al., DNA and Cell Biology, 1990, 9, 347) служил в качестве слитого белка для отрицательных контролей. Рекомбинантные белки экспрессировались в виде растворимых белков после ДНК-трансфекции согласно ДЭАЭ-декстрановому способу в COS-клетках (АТСС CRL 1651) в соответствии со стандартными процедурами (Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc., 1994).

2. Тест для измерения адгезии U937-клеток на hVCAM-1(1-3)-IgG

2.1 96-луночные микротитрационные планшеты (Nunc Maxisorb) инкубировали с 100 мкл/лунку раствора козьих антител против человеческого IgG (10 мкг/мл в 50 мМ Трисе, рН 9,5) в течение 1 часа при комнатной температуре. После удаления раствора антител остаток промывали один раз PBS (ЗФР).

2.2 150 мкл/лунку блокирующего буфера (1% БСА в ЗФР) инкубировали 0,5 часа при комнатной температуре на планшетах. После удаления блокирующего буфера один раз промывали ЗФР.

2.3 100 мкл/лунку супернатанта клеточной культуры трансфицированных COS-клеток инкубировали в течение 1,5 часа при комнатной температуре на планшетах. СОS-клетки были трансфицированы плазмидой, которая кодирует три N-концевых иммуноглобулин-подобных домена VCAM-1, связанных с Fc-частью человеческого IgG₁ (hVCAM-1(1-3)-IgG). Содержание hVCAM-1(1-3)-IgG составляло ~0,5-1 мкг/мл. После удаления культурального супернатанта промывали один раз ЗФР.

2.4 Планшеты инкубировали с 100 мкл/лунку Fc-рецептора-блокирующего буфера (1 мг/мл -глобулина, 100 мМ NaCl, 100 мкМ MgCl₂, 100 мкМ CaCl₂ , 1 мг/мл БСА в 50 мМ HEPES, рН 7,5) в течение 20 минут при комнатной температуре. После удаления Fc-рецептора-блокирующего буфера промывали один раз ЗФР.

2.5 20 мкл буфера для связывания (100 мМ NaCl, 100 мкМ MgCl₂, 100 мкМ MnCl₂ , 100 мкМ CaCl₂, 1 мг/мл БСА в 50 мМ HEPES, рН 7,5) предоставляли, тестируемые вещества добавляли в 10 мкл буфера для связывания и инкубировали в течение 20 минут. В качестве контролей служили антитела против VCAM-1 (BBT, Nr. BBA6) и против VLA-4 (Immunotech, Nr. 0764).

2.6 U937-клетки инкубировали 20 минут в смеси Fc-рецептор-блокирующий буфер и затем добавляли пилотированием в концентрации 1×10⁶ на мл в количестве 100 мкл на лунку (конечный объем 125 мкл на лунку).

2.7 Планшеты медленно погружали под углом 45° в стоп-буфер (100 мм NaCl, 100 мкМ MgCl₂, 100 мкМ MnCl₂, 100 мкМ CaCl₂ в 25 мМ Трисе, рН 7,5) и отклоняли. Процесс повторяли.

2.8 Затем 50 мкл на лунку раствора красителя (16,7 мкг/мл красителя Хехста 33258, 4% формальдегид, 0,5% Тритон Х-100 в ЗФР) инкубировали 15 минут на планшетах.

2.9 Планшеты наклоняли, медленно погружали под углом 45° в стоп-буфер (100 мм NaCl, 100 мкМ MgCl₂, 100 мкМ MnCl₂ , 100 мкМ CaCl₂ в 25 мМ Трисе, рН 7,5). Процесс повторяли. Затем измеряли с жидкостью в цитофлуориметре (Millipore) (чувствительность: 5, фильтр: длина возбуждающей волны: 360 нм, длина испускаемой волны: 460 нм).

Интенсивность испускаемого окрашенными U937-клетками света является мерой количества оставшихся на планшетах прикрепляющих hVCAM-1(1-3)-IgG U937-клеток и, следовательно, мерой способности добавленного тестируемого вещества ингибировать эту адгезию. Из ингибирования адгезии при различных концентрациях тест-вещества рассчитывали концентрацию IC₅₀, которая приводит к ингибированию адгезии на 50%.

Получили следующие результаты тестов: