способ консервирования малых доз антигена в жидком азоте

Формула изобретения

Способ консервирования малых доз антигена в жидком азоте, включающий определение активности и специфичности антигена, консервирования, причем температура жидкого азота (-170) - (-180)С, отличающийся тем, что консервирование проводят в жидком азоте путем замораживания капель в виде "шариков" размером 35-40 мм в течение 1 мин в количестве 1 мл антигена с последующим переносом "шариков" в пластиковые флаконы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам консервирования диагностических препаратов, и может быть использовано в области ветеринарии и медицины.

Известен способ консервирования диагностических препаратов (антигена) формалином 0,2% с последующим хранением в рефрижераторе (см. Орлов Ф.М. Лабораторные методы исследования в ветеринарии. М.: Сельскохозяйственная литература, 1954, с.114-161).

Недостатком данного способа является невысокая активность антигена.

Известен способ консервирования рекомбинантного штамма Pseudomonas species - продуцента а-2 интерферона, предусматривающий отделение свежевыращенных клеток путем их центрифугирования, ресуспензирования осадка в свежей среде с глицерином и антибиотиками, консервирование в стеклянных или пластмассовых ампулах (-70)-(-196)С, при этом консервирование осуществляют через 15-30 минут после того, как скорость роста достигает своего максимального значения (см. а.с. СССР № 1698285, кл. С 12 N 1/04 // (С 12 N 1/04, С 12 R 1:38).

Недостатком данного способа является высокая стоимость способа консервирования.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятым авторами за прототип является способ консервирования малых доз антигена мертиолатом, включающий предварительное определение активности и специфичности антигена, контакт антигена с мертиолатом, замораживание антигена и хранение в пластмассовых флаконах (см. Антонов В.Я., Блинова П.Н. Лабораторные исследования в ветеринарии. М.: Колос, 1971, с.68-81).

Недостатком данного способа является непродолжительное время сохранения активности и специфичности антигена.

Задачей предлагаемого способа консервирования малых доз антигена в жидком азоте является сохранение активности и специфичности антигена на продолжительное время: 20-24 мес., удешевление и упрощение способа.

Поставленная задача достигается тем, что в способе консервирования малых доз антигена в жидком азоте, включающем определение активности и специфичности антигена и консервирование, консервирование проводят в жидком азоте путем замораживания капель в виде “шариков” размером 35-40 мм³ в течение 1 минуты при температуре (-170)-(-180)С с последующим переносом “шариков” в пластмассовые или стеклянные флаконы.

Сущность способа заключается в следующем.

Пластиковую пробирку на половину заполняют жидким азотом и помещают, например, в полистероловый сосуд с жидким азотом. Предварительно определяют активность и специфичность антигена, затем капли антигена размером 35-40 мм³ капают пастеровской пипеткой или шприцом (2-5 мл) с иглой на поверхность азота в пробирке. По мере замораживания капли антигена образуют форму “шариков” и опускаются на дно пробирки, при этом температура замораживания равна (-170) - (-180)С, а время образования “шариков” 1 минута. Затем “шарики” переносят в пластиковые флаконы вместе с азотом на хранение. Антиген сохраняет исходный титр (1:80; 1:160) до 24 месяцев. Быстрое замораживание и оттаивание таких антигенов не влияет на их активность.

Примеры конкретного выполнения способа консервирования малых доз антигена.

ПРИМЕР 1. Антиген консервируют мертиолатом 1:10000, затем разливают в ампулы, запаивают и хранят в ампулах при температуре +2, +4С в холодильнике. При таких условиях консервированный антиген не изменял свою активность в течение 1 года, давал четкие реакции в разведении 1:160 с позитивными сыворотками в разведении 1:20 и в разведении антигена 1:40 с с позитивными сыворотками в разведении 1:80 (табл.1).

Титрацию антигена проводят (через 12 месяцев после консервирования мертиолатом 1:10000) с сыворотками больных и переболевших саркоцистозом овец. Результаты проверки активности антигена в РСК с сыворотками больных и переболевших саркоцистозом, представленные в таблице, показали, что антиген давал четкие реакции в разведении 1:80 с позитивными сыворотками в разведении 1:40 и в разведении антигена 1:40 с позитивными сыворотками в разведении 1:80 (табл.2).

Результаты исследования активности антигена, консервированного мертиолатом 1:10000, через 13 месяцев после консервирования показали, что активность антигена снизилась до разведения 1:40, а через 14 мес. - 1:20 с позитивными сыворотками.

ПРИМЕР 2. Консервирование антигена 5% раствором фенола (1 капля на 1 мл антигена) или консервирование антигена сухой борной кислотой (2% к объему антигена). Результаты исследования активности антигена, консервированного указанными методами, показали, что антиген сохраняется без существенного колебания активности до 2-4 месяцев.

ПРИМЕР 3. Пластиковую пробирку на половину наполняют жидким азотом и помещают в полистероловый сосуд с жидким азотом. Затем капли антигена с определенной активностью и специфичностью размером 35-40 мм³ капают пастеровской пипеткой или шприцом (2-5 мл) с иглой на поверхность азота в пробирке. По мере замораживания капли антигена в форме “шариков” опускаются на дно пробирки. После наполнения пробирки “шарики” (антиген) переносят в 25-50 мл пластиковый флакон вместе с азотом и помещают в сосуд Дьюара на длительное хранение.

На замораживание 10 мл антигена потребуется 10 мин. Антиген сохраняет исходный титр (1:80; 1:160) до 24 мес. (срок наблюдения).

Быстрое замораживание и оттаивание таких антигенов не влияет на их активность.

Перед постановкой реакции (иммунологических исследований) антиген “шарики” вынимают пинцетом из пробирки с жидким азотом, быстро оттаивают и используют в реакции.

Титрацию антигена проводили сыворотками больных саркоцистозом овец. Титр антигена составил 1:80 и 1:160 (табл.3).

Табл.4 поясняет предлагаемый способ.

Саркоцистозный антиген специфичен и обладает активностью. В рабочем разведении 1:160 дает четкие реакции с сыворотками больных саркоцистозом животных в разведении 1:80.

Способ консервирования антигена (саркоцистозного) замораживанием позволяет сохранить активность и специфичность антигена, который дает четкие реакции в разведении 1:80, 1:160 с саркоцистозными сыворотками и положительные реакции только с сыворотками от больных саркоцистозом животных.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- сохранение активности и специфичности антигена на продолжительное время: 20-24 мес.;

- удешевление и упрощение способа консервирования малых доз антигена.