биологический адгезивный клей

Классы МПК:A61K38/37 факторы VIII
A61P7/04 кровоостанавливающие средства; прокоагулянты; гемостатические агенты; антифибринолитические агенты
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Люляева Ольга Дамировна,
Грицкова Ирина Владимировна,
Родоман Григорий Владимирович
Приоритеты:
подача заявки:
2002-12-15
публикация патента:

Изобретение относится к области медицины и касается клеевой композиции для остановки кровотечения на основе VIII фактора. Сущность изобретения состоит в том, что предлагаемая композиция содержит криопреципитат, полученный путем рефрижераторного центрифугирования при скорости 2500-3000 об/мин в течение 1-1,5 ч, доза которого содержит VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед. , тромбин с активностью от 160 до 700 ед. в 7-15 мл изотонического раствора хлорида натрия и 3-10 мл 10% хлорида кальция или глюконата кальция. Техническим результатом является создание клеевой композиции, применение которой позволяет останавливать кровотечения не только из капилляров, но из сосудов малого и среднего калибра, а также обширных тканевых поверхностей.

Изобретение относится к области медицины и касается клеевой композиции на основе фракционного белка плазмы (VIII фактор) для остановки кровотечения и восстановления биологической целостности тканей (реконструктивная и экстренная хирургия, травматология, реаниматология, акушерство, гинекология, офтальмология, отоларингология).

Клеевые композиции на основе биологических субстанций, таких как фибриноген, лишены многих недостатков, присущих синтетическим клеям:

- применение только на сухом хирургическом поле;

- замедление регенерации тканей;

- токсическое действие на окружающие ткани.

Фибриновый клей не только останавливает кровотечение, но и способствует регенерации тканей за счет уникальных стимулирующих свойств фибриногена - мультифункционального белка, который служит матрицей для регуляции фибринолиза, прикрепления клеток в процессе репарации, активирует продукцию лейкоцитарных ростковых ангиогенных факторов.

Известны фибрин-содержащие клеи, выпускаемые фирмами как препараты Beriplast (Германия), Tissucol (Австрия) [1], Biocol (Франция) [2].

Они близки по составу. Например, клей Beriplast состоит из: 1) лиофилизированного фибриногена крови человека 115-232 мг; 2) тромбина (бычьего) 400-500 ед.; 3) плацентарной белковой фракции, содержащей 40-80 ед. фактора XIII; 4) раствора апротинина - до 1000 КЕ; 5) раствора кальция хлорида, 40 ммоль/л-25 мл.

Разработка подобного отечественного препарата сложна из-за отсутствия технологии получения фактора XIII, отсутствия препарата апртинина и дороговизны конечного продукта.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является фибриновый клей, разработанный в ОПК ГКБ 7 города Москвы [3]. Его получают по следующей методике:

1). Стандартную криоплазму, заготовленную в дозе 100 мл в 200 мл флаконе, оттаивают обычным способом, к ней добавляют раствор ПЭГ - 6000 и 1 мл биологический адгезивный клей, патент № 2224540- аминокапроновой кислоты (растворы стерильно завальцованы в стерильную аптечную посуду, извлекают через прокол пробки методом вакуум-аспирации).

2). Флакон встряхивают, отстаивают 30 минут и центрифугируют 15 минут при 4oС.

3). Надосадочную жидкость отсасывают, а осадок растворяют в цитрате натрия и забирают в стерильный завальцованный пенициллиновый флакон (около 4 мл фибриногена, с содержанием последнего 40-60 г/л) и дополнительно парафинизируют. Для полимеризации на кровоточащей поверхности к нему добавляют 500 ед. тромбина в 4 мл 10% раствора СаСl2.

Недостатками клея, полученного указанным способом, являются:

- возможность контаминации плазмы крови вирусами различного происхождения, в том числе СПИД и гепатит С;

- сложность состава первой компоненты клея, состоящей из криоплазмы, ПЭГ - 6000 и биологический адгезивный клей, патент № 2224540- аминокапроновой кислоты;

- использование дорогостоящего цитрата натрия для регулирования рН;

- узкая область его применения: для остановки кровотечений только из капилляров;

- получение клея происходит непосредственно на раневой поверхности, вводя поочередно компоненты клеевого состава, что может привести к неравномерному их смешиванию и избыточному поступлению некоторых из них в организм.

Задачей настоящего изобретения является создание фибрин-содержащего безопасного клея на основе карантинизированого криопреципитата, который исключает вирусную контаминацию. Клей получают из отечественного сырья и он предназначен для остановки кровотечений из паренхиматозных, полых органов, обширных кровоточащих тканевых поверхностей и сосудов малого и среднего калибра, для фиксации собственных биологических тканей (аутотрансплантатов) и для улучшения репаративных процессов в месте применения клеевой массы.

Решением поставленной задачи является создание биологического адгезивного клея (БАК), включающего криопреципитат, в количестве 1 дозы, содержащей VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед., тромбин с активностью от 160 до 700 ед. в изотоническом растворе хлорида натрия (7-15 мл) и хлорид кальция или глюконат кальция (3-10 мл).

Предпочтительно БАК содержит: тромбин с активностью от 240 до 560 ед.

Предпочтительно БАК содержит VIII фактор с активностью от 160 до 200 ед.

Преимущества предлагаемого изобретения:

1. Использование карантинизированного криопреципитата, который исключает вирусную контаминацию.

2. Простота получения (полный цикл получения клея занимает 5 минут).

3. Отсутствие в технологии осадителей - комплексообразователей.

4. Экономическая выгода.

5. Применение для остановки кровотечений не только из капилляров, но и из сосудов мелкого и среднего калибра, а также обширных тканевых кровоточащих поверхностей.

6. Достоверное ускорение и стимуляция регенерации тканей.

7. Возможность применения для изготовления биологических протезов, так как клеевая композиция "in vitro" способна длительно удерживать заданную форму и полностью биологически совмещаться с тканями организма.

8. Способность сохранять "in vivo" в организме человека клеевые свойства в течение 5-7 суток, образуя на поврежденной поверхности фибриновую пленку с последующей грануляцией и эпителизацией.

Изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.

ПРИМЕР 1.

Для получения криопреципитата карантинизированную (в течение 6 месяцев) свежезамороженную плазму (донорская или АУТО) размораживают при комнатной температуре до вида "мокрого сахарного песка", в количестве 300 мл, затем плазменную субстанцию центрифугируют в рефрижераторной центрифуге в течение 1-1,5 часа при скорости 2500-3000 об/мин. Надосадочную часть плазмы (супернатант) и среднюю фракцию плазмы (концентрат нативной плазмы) через замкнутую систему перегоняют в пластикатные контейнеры. Осадочная часть плазмы с белесоватым осадком (криопреципитат) оставляют в основном мешке и вновь замораживают. Полученный криопреципитат содержит VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед. Хранят криопреципитат при температуре от 28 до 73oС.

ПРИМЕР 2.

Для получения биологического адгезивного клея:

1. Одну дозу криопреципитата, содержащую 160 ед. антигемофильного глобулина (VIII фактор), оттаивают при комнатной температуре в условиях встряхивания до образования однородной массы (чтобы не было образования комков).

2. Тромбин, взятый с активностью в количестве 240 ед., растворяют в равных количествах в двух пробирках, содержащих 10 мл изотонического раствора NaCl и 5 мл 10% СаСl2 соответственно, затем смешивают.

3. Криопреципитат и раствор тромбина смешивают непосредственно перед использованием.

ПРИМЕР 3. Для получения биологического адгезивного клея:

1. Одну дозу криопреципитата, содержащую 160 ед. антигемофильного глобулина (VIII фактор), оттаивают при комнатной температуре в условиях встряхивания до образования однородной массы (чтобы не было образования комков).

2. Тромбин, взятый с активностью в количестве 700 ед., растворяют в равных количествах в двух пробирках, содержащих 10 мл изотонического раствора NaCl и 5 мл 10% глюконата кальция соответственно, затем смешивают.

3. Криопреципитат и раствор тромбина смешивают непосредственно перед использованием.

ПРИМЕР 4.

Отличается от примера 2 тем, что криопреципитат взят с активностью антигемофильного глобулина (VIII фактор) 180 ед.

ПРИМЕР 5.

Больная Р. , 75 лет поступила в МСЧ 1 АМО ЗИЛ с клиническими признаками желудочно-кишечного кровотечения и низкими гемодинамическими показателями через трое суток от начала заболевания. При экстренной гастродуоденоскопии выявлена обширная (до 3,5-4 см) язва тела желудка с тромбом, из под которого активно поступала свежая кровь. Ситуация расценена как продолжающееся желудочно-кишечное кровотечение (Forrest 16). В связи с тем, что язва располагалась на малой кривизне желудка, не представлялось технически возможным проведение коагуляционных и инъекционных методов остановки кровотечения, а риск экстренной операции был крайне высок у больной преклонного возраста с выраженной сопутствующей соматической патологией. Было принято решение обработать поверхность язвы БАКом. Два компонента клея были смешаны ex tempora и апплицированы через катетер на язвенную поверхность. Нанесенный состав, заполнив язвенный дефект, образовал матовую желеобразную фибриновую пленку, интимно прилегающую к слизистой оболочке. Уже во время проведения манипуляции поступление крови из язвенной ниши прекратилось. В дальнейшем больная наблюдалась в отделении реанимации, где ей проводилась инфузионно-трансфузионная коррекция кровопотери циркуляторных расстройств в сочетании с медикаментозным противоязвенным лечением. При контрольной гастродуоденоскопии через 24 часа признаков кровотечения не выявлено, язвенный дефект по-прежнему был заполнен фибриновой пленкой. После стабилизации состояния больная переведена для дальнейшего лечения в хирургическое отделение, где ей продолжена комплексная терапия. Через три недели при ЭГДС язвенный дефект представлен красным рубцом. В удовлетворительном состоянии больная выписана домой.

ПРИМЕР 6.

Больной К., 65 лет, поступил в сосудистое отделение МСЧ 1 АМО ЗИЛ с диагнозом: атеросклероз сосудов нижних конечностей, синдром Лериша, хроническая артериальная недостаточность 2б стадии. В процессе ангиографического обследования установлено 50% стенозирование аорты и окклюзия артерий подвздошно-бедренного сегмента с обеих сторон.

С целью восстановления кровотока в нижних конечностях больному была показана реконструктивная операция аорто-бифеморального шунтирования. В процессе операции был использован высокопорозный лавсановый протез "Север". С целью минимизации кровопотери через анастомозы и поры протеза, во время включения кровотока в протез был использован БАК. Протез был погружен в БАК до его имплантации на 5 минут. По нашим данным кровопотеря без применения БАК при включении кровотока составляла от 600 до 900 мл, что вызывало впоследствии различные осложнения. При использовании БАК кровопотеря по линии анастомоза и через поры протеза не отмечалась. Больной был выписан на 10-ые сутки после операции в удовлетворительном состоянии.

Источники информации

1. Gastpar H. Local application of human fibrin seal (Tissucol/Tissel) in tonsillectomies and adenectorrues in patients with bleeding disorders. Ten years clinical experience // Fibrin sealant in operative medicine / Shlag G. Readi H (Eds). - Springer Verlag: Berlin - Heidelberg, 1986. - P. 128-131.

2. Kraum H.B., Nathan R.C, MacKable J.R. Clinical use of noneautologous fibrin glue // Amer. Surg. - 1988. - Vol. 54, 9. - P.570-573.

3. Т. В. Хоробрых, А.Н. Антонов, Г.К. Орлова, Т.М. Соловьев. Получение фибринового клея в клинических условиях //М. - 1994. Научные достижения в практическую работу, вып. 7, стр. 133-136.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Клеевая композиция для остановки кровотечения и восстановления биологической целостности тканей, отличающаяся тем, что она содержит криопреципитат, полученный путем рефрижераторного центрифугирования при скорости 2500-3000 об/мин в течение 1-1,5 ч, доза которого содержит VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед., тромбин с активностью от 160 до 700 ед. в 7-15 мл изотонического раствора хлорида натрия и 3-10 мл 10% хлорида кальция или глюконата кальция.

Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K38/37 факторы VIII

Патенты РФ в классе A61K38/37:
новые защитные композиции для рекомбинантного фактора viii -  патент 2510279 (27.03.2014)
стабилизация жидких растворов рекомбинантного белка для хранения в замороженном состоянии -  патент 2469739 (20.12.2012)
способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека -  патент 2445974 (27.03.2012)
сайт-направленная модификация fviii -  патент 2423380 (10.07.2011)
способ получения концентрата фактора фон виллебранда или комплекса "фактор viii/фактор фон виллебранда" и его применение -  патент 2417096 (27.04.2011)
выделенный полипептид ib альфа гликопротеина тромбоцитов человека, слитый белок, молекула днк (варианты), экспрессирующий вектор (варианты), клетка (варианты), способ экспрессии полипептида, способ экспрессии слитого белка, фармацевтическая композиция (варианты), способ ингибирования прикрепления клетки крови к биологической ткани в биологической системе, способ ингибирования прикрепления белка к биологической ткани в биологической системе и способ лечения нарушения -  патент 2403262 (10.11.2010)
композиции и способы терапии и диагностики рака молочной железы -  патент 2344831 (27.01.2009)
способ получения концентрата viii фактора свертывания крови человека и продукт его содержащий -  патент 2326689 (20.06.2008)
способ получения препарата фактора свертывания viii крови человека -  патент 2324495 (20.05.2008)
стабильная фармацевтическая композиция, содержащая фактор viii -  патент 2314825 (20.01.2008)

Класс A61P7/04 кровоостанавливающие средства; прокоагулянты; гемостатические агенты; антифибринолитические агенты



Наверх