биологический адгезивный клей

Формула изобретения

Клеевая композиция для остановки кровотечения и восстановления биологической целостности тканей, отличающаяся тем, что она содержит криопреципитат, полученный путем рефрижераторного центрифугирования при скорости 2500-3000 об/мин в течение 1-1,5 ч, доза которого содержит VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед., тромбин с активностью от 160 до 700 ед. в 7-15 мл изотонического раствора хлорида натрия и 3-10 мл 10% хлорида кальция или глюконата кальция.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и касается клеевой композиции на основе фракционного белка плазмы (VIII фактор) для остановки кровотечения и восстановления биологической целостности тканей (реконструктивная и экстренная хирургия, травматология, реаниматология, акушерство, гинекология, офтальмология, отоларингология).

Клеевые композиции на основе биологических субстанций, таких как фибриноген, лишены многих недостатков, присущих синтетическим клеям:

- применение только на сухом хирургическом поле;

- замедление регенерации тканей;

- токсическое действие на окружающие ткани.

Фибриновый клей не только останавливает кровотечение, но и способствует регенерации тканей за счет уникальных стимулирующих свойств фибриногена - мультифункционального белка, который служит матрицей для регуляции фибринолиза, прикрепления клеток в процессе репарации, активирует продукцию лейкоцитарных ростковых ангиогенных факторов.

Известны фибрин-содержащие клеи, выпускаемые фирмами как препараты Beriplast (Германия), Tissucol (Австрия) [1], Biocol (Франция) [2].

Они близки по составу. Например, клей Beriplast состоит из: 1) лиофилизированного фибриногена крови человека 115-232 мг; 2) тромбина (бычьего) 400-500 ед.; 3) плацентарной белковой фракции, содержащей 40-80 ед. фактора XIII; 4) раствора апротинина - до 1000 КЕ; 5) раствора кальция хлорида, 40 ммоль/л-25 мл.

Разработка подобного отечественного препарата сложна из-за отсутствия технологии получения фактора XIII, отсутствия препарата апртинина и дороговизны конечного продукта.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является фибриновый клей, разработанный в ОПК ГКБ 7 города Москвы [3]. Его получают по следующей методике:

1). Стандартную криоплазму, заготовленную в дозе 100 мл в 200 мл флаконе, оттаивают обычным способом, к ней добавляют раствор ПЭГ - 6000 и 1 мл - аминокапроновой кислоты (растворы стерильно завальцованы в стерильную аптечную посуду, извлекают через прокол пробки методом вакуум-аспирации).

2). Флакон встряхивают, отстаивают 30 минут и центрифугируют 15 минут при 4^oС.

3). Надосадочную жидкость отсасывают, а осадок растворяют в цитрате натрия и забирают в стерильный завальцованный пенициллиновый флакон (около 4 мл фибриногена, с содержанием последнего 40-60 г/л) и дополнительно парафинизируют. Для полимеризации на кровоточащей поверхности к нему добавляют 500 ед. тромбина в 4 мл 10% раствора СаСl₂.

Недостатками клея, полученного указанным способом, являются:

- возможность контаминации плазмы крови вирусами различного происхождения, в том числе СПИД и гепатит С;

- сложность состава первой компоненты клея, состоящей из криоплазмы, ПЭГ - 6000 и - аминокапроновой кислоты;

- использование дорогостоящего цитрата натрия для регулирования рН;

- узкая область его применения: для остановки кровотечений только из капилляров;

- получение клея происходит непосредственно на раневой поверхности, вводя поочередно компоненты клеевого состава, что может привести к неравномерному их смешиванию и избыточному поступлению некоторых из них в организм.

Задачей настоящего изобретения является создание фибрин-содержащего безопасного клея на основе карантинизированого криопреципитата, который исключает вирусную контаминацию. Клей получают из отечественного сырья и он предназначен для остановки кровотечений из паренхиматозных, полых органов, обширных кровоточащих тканевых поверхностей и сосудов малого и среднего калибра, для фиксации собственных биологических тканей (аутотрансплантатов) и для улучшения репаративных процессов в месте применения клеевой массы.

Решением поставленной задачи является создание биологического адгезивного клея (БАК), включающего криопреципитат, в количестве 1 дозы, содержащей VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед., тромбин с активностью от 160 до 700 ед. в изотоническом растворе хлорида натрия (7-15 мл) и хлорид кальция или глюконат кальция (3-10 мл).

Предпочтительно БАК содержит: тромбин с активностью от 240 до 560 ед.

Предпочтительно БАК содержит VIII фактор с активностью от 160 до 200 ед.

Преимущества предлагаемого изобретения:

1. Использование карантинизированного криопреципитата, который исключает вирусную контаминацию.

2. Простота получения (полный цикл получения клея занимает 5 минут).

3. Отсутствие в технологии осадителей - комплексообразователей.

4. Экономическая выгода.

5. Применение для остановки кровотечений не только из капилляров, но и из сосудов мелкого и среднего калибра, а также обширных тканевых кровоточащих поверхностей.

6. Достоверное ускорение и стимуляция регенерации тканей.

7. Возможность применения для изготовления биологических протезов, так как клеевая композиция "in vitro" способна длительно удерживать заданную форму и полностью биологически совмещаться с тканями организма.

8. Способность сохранять "in vivo" в организме человека клеевые свойства в течение 5-7 суток, образуя на поврежденной поверхности фибриновую пленку с последующей грануляцией и эпителизацией.

Изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.

ПРИМЕР 1.

Для получения криопреципитата карантинизированную (в течение 6 месяцев) свежезамороженную плазму (донорская или АУТО) размораживают при комнатной температуре до вида "мокрого сахарного песка", в количестве 300 мл, затем плазменную субстанцию центрифугируют в рефрижераторной центрифуге в течение 1-1,5 часа при скорости 2500-3000 об/мин. Надосадочную часть плазмы (супернатант) и среднюю фракцию плазмы (концентрат нативной плазмы) через замкнутую систему перегоняют в пластикатные контейнеры. Осадочная часть плазмы с белесоватым осадком (криопреципитат) оставляют в основном мешке и вновь замораживают. Полученный криопреципитат содержит VIII фактор с активностью от 150 до 220 ед. Хранят криопреципитат при температуре от 28 до 73^oС.

ПРИМЕР 2.

Для получения биологического адгезивного клея:

1. Одну дозу криопреципитата, содержащую 160 ед. антигемофильного глобулина (VIII фактор), оттаивают при комнатной температуре в условиях встряхивания до образования однородной массы (чтобы не было образования комков).

2. Тромбин, взятый с активностью в количестве 240 ед., растворяют в равных количествах в двух пробирках, содержащих 10 мл изотонического раствора NaCl и 5 мл 10% СаСl₂ соответственно, затем смешивают.

3. Криопреципитат и раствор тромбина смешивают непосредственно перед использованием.

ПРИМЕР 3. Для получения биологического адгезивного клея:

1. Одну дозу криопреципитата, содержащую 160 ед. антигемофильного глобулина (VIII фактор), оттаивают при комнатной температуре в условиях встряхивания до образования однородной массы (чтобы не было образования комков).

2. Тромбин, взятый с активностью в количестве 700 ед., растворяют в равных количествах в двух пробирках, содержащих 10 мл изотонического раствора NaCl и 5 мл 10% глюконата кальция соответственно, затем смешивают.

3. Криопреципитат и раствор тромбина смешивают непосредственно перед использованием.

ПРИМЕР 4.

Отличается от примера 2 тем, что криопреципитат взят с активностью антигемофильного глобулина (VIII фактор) 180 ед.

ПРИМЕР 5.

Больная Р. , 75 лет поступила в МСЧ 1 АМО ЗИЛ с клиническими признаками желудочно-кишечного кровотечения и низкими гемодинамическими показателями через трое суток от начала заболевания. При экстренной гастродуоденоскопии выявлена обширная (до 3,5-4 см) язва тела желудка с тромбом, из под которого активно поступала свежая кровь. Ситуация расценена как продолжающееся желудочно-кишечное кровотечение (Forrest 16). В связи с тем, что язва располагалась на малой кривизне желудка, не представлялось технически возможным проведение коагуляционных и инъекционных методов остановки кровотечения, а риск экстренной операции был крайне высок у больной преклонного возраста с выраженной сопутствующей соматической патологией. Было принято решение обработать поверхность язвы БАКом. Два компонента клея были смешаны ex tempora и апплицированы через катетер на язвенную поверхность. Нанесенный состав, заполнив язвенный дефект, образовал матовую желеобразную фибриновую пленку, интимно прилегающую к слизистой оболочке. Уже во время проведения манипуляции поступление крови из язвенной ниши прекратилось. В дальнейшем больная наблюдалась в отделении реанимации, где ей проводилась инфузионно-трансфузионная коррекция кровопотери циркуляторных расстройств в сочетании с медикаментозным противоязвенным лечением. При контрольной гастродуоденоскопии через 24 часа признаков кровотечения не выявлено, язвенный дефект по-прежнему был заполнен фибриновой пленкой. После стабилизации состояния больная переведена для дальнейшего лечения в хирургическое отделение, где ей продолжена комплексная терапия. Через три недели при ЭГДС язвенный дефект представлен красным рубцом. В удовлетворительном состоянии больная выписана домой.

ПРИМЕР 6.

Больной К., 65 лет, поступил в сосудистое отделение МСЧ 1 АМО ЗИЛ с диагнозом: атеросклероз сосудов нижних конечностей, синдром Лериша, хроническая артериальная недостаточность 2б стадии. В процессе ангиографического обследования установлено 50% стенозирование аорты и окклюзия артерий подвздошно-бедренного сегмента с обеих сторон.

С целью восстановления кровотока в нижних конечностях больному была показана реконструктивная операция аорто-бифеморального шунтирования. В процессе операции был использован высокопорозный лавсановый протез "Север". С целью минимизации кровопотери через анастомозы и поры протеза, во время включения кровотока в протез был использован БАК. Протез был погружен в БАК до его имплантации на 5 минут. По нашим данным кровопотеря без применения БАК при включении кровотока составляла от 600 до 900 мл, что вызывало впоследствии различные осложнения. При использовании БАК кровопотеря по линии анастомоза и через поры протеза не отмечалась. Больной был выписан на 10-ые сутки после операции в удовлетворительном состоянии.

Источники информации

1. Gastpar H. Local application of human fibrin seal (Tissucol/Tissel) in tonsillectomies and adenectorrues in patients with bleeding disorders. Ten years clinical experience // Fibrin sealant in operative medicine / Shlag G. Readi H (Eds). - Springer Verlag: Berlin - Heidelberg, 1986. - P. 128-131.

2. Kraum H.B., Nathan R.C, MacKable J.R. Clinical use of noneautologous fibrin glue // Amer. Surg. - 1988. - Vol. 54, 9. - P.570-573.

3. Т. В. Хоробрых, А.Н. Антонов, Г.К. Орлова, Т.М. Соловьев. Получение фибринового клея в клинических условиях //М. - 1994. Научные достижения в практическую работу, вып. 7, стр. 133-136.