применение -метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки

Классы МПК:	A61K31/197 амино- и карбоксильная группы присоединены к одной и той же ациклической углеродной цепи, например гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), бета-аланин, эпсилон-аминокапроновая кислота, пантотеновая кислота A61K31/5575 содержащие циклопентановое кольцо, например простагландин E2, простагландин F2-альфа A61K45/06 смеси активных ингредиентов, для которых не указаны химическая структура или состав, например смесь противовоспалительного средства со средством, возбуждающим сердечную деятельность A61P27/00 Лекарственные средства для лечения расстройств восприятия
Автор(ы):	ДРАГО Филиппо (IT)
Патентообладатель(и):	ФАРМАЦИА ЭНД АПДЖОН АБ (SE)
Приоритеты:	подача заявки: 1998-04-21 публикация патента: 10.12.2003

Изобретение относится к медицине. Применение ингибиторов тирозиназы в качестве средства, которое предотвращает продуцирование меланина меланоцитами радужной оболочки, вызванное производными PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и PGE₂. Фармацевтические препараты, содержащие производное PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} в качестве агента против глаукомы и ингибитор тирозиназы. Способ предотвращения продуцирования меланина меланоцитом радужной оболочки, включающий введение эффективного количества ингибитора тирозиназы. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение. 4 с. и 7 з.п.ф-лы, 2 табл.

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4

Формула изобретения

1. Применение ингибиторов тирозиназы в качестве средства, предотвращающего продуцирование меланина меланоцитами радужной оболочки, вызванное производными простагландинов PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и PGE₂.

2. Применение по п.1, где продуцирование меланина вызывают производными PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и PGE₂.

3. Применение по п.2, где производными PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и PGE₂ являются латанопрост или унопростон.

4. Применение по любому из предшествующих пунктов, где ингибитором тирозиназы является применение <img src=

5. Фармацевтическая композиция для лечения глаукомы, содержащая эффективные количества производного РGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и ингибитора тирозиназы.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, содержащая латанопрост, в качестве агента против глаукомы, и применение <img src=

7. Набор для лечения глаукомы, содержащий дозированные формы производного РGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и ингибитора тирозиназы.

8. Набор по п.7, содержащий латанопрост в качестве агента против глаукомы и применение <img src=

9. Набор по п.7, где производное PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} представлено в дозированной форме для местного применения, а ингибитор тирозиназы представлен в дозированной форме для местного, перорального или парентерального применения.

10. Способ предотвращения продуцирования меланина меланоцитами радужной оболочки, вызванного производными простагландинов РGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и РGЕ₂, включающий введение эффективного количества ингибитора тирозиназы.

11. Способ по п.10, где ингибитором тирозиназы является применение <img src=

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к применению агентов для блокирования синтеза тирозиназы для предотвращения постоянной пигментации радужной оболочки, вызванной отложением меланина, индуцированным фармакологическими лечениями или метаболическим дисбалансом.

Предпосылки к созданию изобретения

Обнаружено, что латанопрост (13,14-дигидро-17-фенил-18,19,20-тринор--PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} изопропиловый эфир), синтетический аналог простагландина, (ЕР-А-0364317), а также встречающиеся в природе простагландины, такие как PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и РGF2, вызывают усиленную пигментацию радужной оболочки обезьян во время хронического лечения (Selen G., Stjernschantz J., Resul В. Prostaglandin-induced iridial pigmentation in primates. Surv. Ophthalrool 1997; 41, Suppi. 2: S125-S128). Точный механизм реакции, происходящей после лечения простагландином, не известен, но усиленный синтез меланина (меланогенез) должен происходить, т. к. цвет глаз становится темнее. Кроме того, у пациентов, проходивших лечение латанопростом (Wistrand P.J., Stjernschantz J., Olsson К. The incidence and time-course of latanoprost-induced iridial pigmentation as a function of eye color. Surv. Ophthalmol 1997; 41, Suppl. 2: S129-S138) или изопропил-унопростоном ((13,14-дигидро-15-кето-20-этил--PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} изопропиловый эфир) (Yamamoto Т., Kitazawa Y. Iris-color change developed after topical isopropyl unoprostone treatment. J. Glaucoma 1997; 6: 430-432), иногда отмечается потемнение радужной оболочки во время хронической терапии. В особенности пациенты с гетерохромной радужной оболочкой, т.е. голубой-коричневой, серой-коричневой, зеленой-коричневой или с ореховым цветом глаз предрасположены к этому побочному эффекту. Так как побочный эффект может привести к косметическим нарушениям, в особенности у пациентов с односторонней глаукомой, когда лечат только один глаз, и так как побочный эффект является необратимым и относительно часто встречается, полезно было бы избежать его, хотя он и не выглядит представляющим опасность для здоровья пациентов, у которых он проявляется.

Меланин, широко распространенный в природе полимер, образуется из аминокислоты тирозина. На начальной стадии образования меланина тирозин гидроксилируется до L-Dopa, который далее окисляется до допахинона. Фермент, катализирующий обе реакции, называется тирозиназой. Допахинон является лабильным соединением, которое превращается в допахром, черное соединение, которое необходимо для образования олигомеров DHICA (дигидроксииндолкарбоновой кислоты), которые необходимы для окончательной полимеризации с образованием эумеланина (черного или коричневого меланина). Допахинон альтернативно может взаимодействовать с цистеином, образуя в результате серусодержащие олигомеры и в итоге феомеланин (желтоватый или красноватый меланин). Важным для реализации является то, что стадией, ограничивающей скорость продуцирования меланина, является реакция, катализируемая тирозиназой. Недостаточность функциональной тирозиназы, например, по причине мутации гена тирозиназы, часто ведет к альбинизму, т.к. в организме не может образовываться пигмент. Интересно, что тот же фермент тирозиназа также требуется для продуцирования норадреналина, нейротрансмиттера, и адреналина, гормона, в симпатических нейронах и мозговом веществе надпочечников, поскольку эти соединения синтезируются из тирозина. Поэтому соединения, которые блокируют фермент тирозиназу, будут оказывать воздействие как на меланогенез, так и на функцию симпатической нервной системы.

Краткое описание изобретения

В настоящее время обнаружено, что ингибиторы фермента тирозиназы, в особенности применение <img src=

-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-метил-п-тирозин, ингибируют продуцирование меланина, вызываемое введением производных PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} и РGF2, таких как латанопрост и унопростон.

Таким образом, лечение указанными ингибиторами тирозиназы до, во время или после введения производных простагландина пациентам с глаукомой ингибирует продуцирование меланина меланоцитами радужной оболочки, исключая изменения окраски глаз у этих пациентов.

Подробное описание изобретения

Классическим агентом для блокирования синтеза тирозингид-роксилазы является применение <img src=

-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-метил-пара-тирозин, лекарство, известное под названием метирозин (J. Am. Chem. Soc. 11, 100, 1958), который является ложным субстратом для фермента. Поэтому L-Dopa не образуется и, следовательно, ни меланин, ни адреналин/норадреналин не могут образовываться. Лекарство используют в паллиативном лечении феохромацитомы, опухоли мозгового вещества надпочечника, приводящей к высоким концентрациям катехоламинов в крови и вследствие этого к повышенному кровяному давлению. Применяемый в достаточно высоких концентрациях применение <img src=

-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-метил-пара-тирозин может существенно блокировать биосинтез адреналина/норадреналина, а также меланина. При использовании катехоламина в клинических концентрациях для лечения феохромацитомы его концентрацию в организме значительно снижают (Weiner N. , Drugs that inhibit adrenergic nerves and block adrenergic receptors. In Goodman Gilman A., Goodman L.S., Rall T.W., Murad F. , eds; Goodman and Gilman"s the Pharmacological Basis of Therapeutics, Macmillan, New York, 1985, pp. 181-214) и в экспериментах in vitro данного изобретения продуцирование меланина было значительно снижено. По существу любой агент, который мешает ферменту тирозиназе, будет иметь тот же полезный эффект, результатом которого является блокада продуцирования меланина.

Такими агентами являются, например, гидроксихинон и вещества, которые взаимодействуют с ионами меди, потому что медь является необходимым кофактором для фермента тирозиназы, и различные виды ложных субстратов для фермента. Следовательно, если эти агенты давать либо отдельно, либо в смеси вместе с латанопростом, изопропил-унопростоном или каким-либо другим простагландином, который индуцирует меланогенез, образование пигмента в радужной оболочке может быть предотвращено или по меньшей мере значительно затруднено.

Эта активность применение <img src=

Материалы и методы Культура клеток

Ювеальные меланоциты выделяют из глаза взрослого донора и культивируют. Радужную оболочку вырезают и помещают в чашку задней поверхностью вверх. Пигментированный эпителий радужной оболочки отделяют от стромы после погружения в 0,25% раствор тирозина (Gibco, USA) при 37^oС на 2 часа. Оставшуюся строму радужной оболочки помещают в 0,25% раствор тирозина при 4^oС на 18 часов с последующим инкубированием при 37^oС в течение 1 часа. Выделенные клетки собирают. Раствор тирозина замещают раствором коллагеназы (400 ЕД/мл в среде F-12, Sigma, США) и инкубируют при 37^oС. Раствор коллагеназы заменяют и клетки собирают, центрифугируют, ресуспендируют и высевают на чашки каждый час в течение 3 часов.

Выделенные ювеальные меланоциты культивируют в сосудах для культивирования Falcon (Becton Dickinson, USA) со средой FIC, которая состоит из среды F-12 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 2 мМ глутамина (все - Gibco), 10 нг/мл холерного токсина, 0,1 мМ изобутилметилксантина, 50 мкг/мл гентамицина (все - Sigma) и 20 нг/мл основного ростового фактора фибробластов (Promega, США). Сосуды для культивирования инкубируют в увлажненной 5% CO₂ атмосфере. Среду заменяют три раза в неделю. Генетицин (Sigma, США), цитотоксический агент добавляют (100 мкг/мл) при необходимости в течение от 3 до 7 дней.

8 штаммов клеток ювеальных меланоцитов, используемых в данном исследовании, выделяют у доноров с различным цветом радужной оболочки (коричневой и коричневой-голубой).

Измерение меланина

Культивированные ювеальные меланоциты отделяют раствором тирозин-EDTA и определяют их количество в гемоцитометре, суспензии клеток центрифугируют и осадок растворяют в 1н. NaOH. Концентрацию меланина определяют путем измерения оптической плотности при 475 нм и сравнивают со стандартной кривой, полученной с использованием синтетического меланина (Sigma). Содержание меланина выражают как нг/клетка.

Расчет продуцирования меланина

Продуцирование меланина рассчитывают путем определения содержания меланина и количества клеток в начале и в конце каждой генерации по следующей формуле:

Ср=С_tР-C₀/l,3D(P-l),

где С₀ и C_t - содержание меланина на клетку во время 0 и время t соответственно;

Р - увеличение популяции за время t,

D - время удвоения численности ювеальных меланоцитов, и

Ср - продуцирование меланина на клетку в сутки в течение времени t.

Активность тирозиназы

Активность тирозиназы оценивают в девяти штаммах клеток с использованием адаптированного метода Pomerantz, который основан на измерении ³H₂O, выделяемой путем ферментативного гидроксилирования тирозина.

Результаты

Содержание меланина в культивированных меланоцитах радужной оболочки из 5 клеточных штаммов из коричневых радужных оболочек и 3 клеточных штаммов из коричневых-голубых радужных оболочек оказывается повышенным, когда латанопрост добавляют в самых высоких молярных концентрациях. То же самое обнаруживают для продуцирования меланина и активности тирозиназы (таблицы 1 и 2).

Затем добавляют применение <img src=

-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-метил-п-тирозин

(10^-5 М), заметное снижение содержания и продуцирования меланина и активности тирозиназы обнаруживают с латанопростом в количестве от 10^-7 до 10^-5М в культивированных меланоцитах как из коричневых радужных оболочек, так и из коричневых-голубых радужных оболочек (таблицы 1 и 2).

Эти результаты показывают, что продуцирование меланина меланоцитами радужной оболочки ингибируется применение <img src=

Данное изобретение также относится к фармацевтическим препаратам, содержащим производное PGF_{2-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="TOP">} или РGF2 с активностью против глаукомы и ингибитор тирозиназы как объединенные препараты для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении глаукомы. В частности, изобретение относится к фармацевтическим продуктам, содержащим латанопрост в качестве агента против глаукомы и применение <img src=

-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-метил-п-тирозин как объединенные препараты для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении глаукомы.

Для рассматриваемых терапевтических целей применение <img src=

Хотя данное описание касается, в частности, ингибирования продуцирования меланина, вызванного латанопростом, применение <img src=

-метил-п-тирозина для ингибирования продуцирования меланина в меланоцитах радужной оболочки, патент № 2218159" SRC="/images/patents/250/2218056/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-метил-п-тирозин может быть успешно использован для ингибирования такого же побочного эффекта пигментации, вызванного другими фармакологическими лечениями или метаболическим дисбалансом другого происхождения.

Класс A61K31/197 амино- и карбоксильная группы присоединены к одной и той же ациклической углеродной цепи, например гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), бета-аланин, эпсилон-аминокапроновая кислота, пантотеновая кислота

биодеградируемое гемостатическое лекарственное средство для остановки капиллярных и паренхиматозных кровотечений - патент 2522879 (20.07.2014)
применение 5-аминолевулиновой кислоты и ее производных в твердой форме для фотодинамического лечения и диагностики - патент 2521228 (27.06.2014)

комбинированный гемостатический препарат для наружного применения - патент 2519026 (10.06.2014)
антисептическое средство с гемостатическим действием и способ его получения - патент 2508104 (27.02.2014)
глазные капли - патент 2504372 (20.01.2014)
сульфонамидные соединения и их применение - патент 2502730 (27.12.2013)
4-триметиламмониобутираты в качестве ингибиторов срт2 - патент 2502727 (27.12.2013)
кровоостанавливающая спичка - патент 2501556 (20.12.2013)
способ проведения интраоперационной комбинированной спектроскопической диагностики опухолей головного и спинного мозга - патент 2497558 (10.11.2013)
композиции на основе тапентадола для лечения боли - патент 2497512 (10.11.2013)

Класс A61K31/5575 содержащие циклопентановое кольцо, например простагландин E2, простагландин F2-альфа

способ комплексного лечения хронического эндометрита у коров - патент 2524623 (27.07.2014)
терапевтические композиции, содержащие мацитентан - патент 2519161 (10.06.2014)
способ эндолимфатической терапии при эндометритах у собак - патент 2517614 (27.05.2014)
фармацевтическая композиция, содержащая 11-дезокси-простагландиновое соединение, и способ стабилизации этого соединения - патент 2506072 (10.02.2014)
способ лечения больных с осложненными формами синдрома диабетической стопы - патент 2504385 (20.01.2014)
агент, способствующий росту волос, содержащий в качестве активного ингредиента производное 15,15-дифторпростагландина f2 - патент 2504380 (20.01.2014)
фармацевтические композиции, обладающие желаемой биодоступностью - патент 2503453 (10.01.2014)
терапевтические замещенные циклопентаны - патент 2501789 (20.12.2013)
терапевтические соединения - патент 2500674 (10.12.2013)
фармацевтическая комбинация опиоида и простагландинового соединения - патент 2488398 (27.07.2013)

Класс A61K45/06 смеси активных ингредиентов, для которых не указаны химическая структура или состав, например смесь противовоспалительного средства со средством, возбуждающим сердечную деятельность

лекарственное средство для лечения рака печени - патент 2523897 (27.07.2014)
способ получения гидрогеля лечебного назначения - патент 2508091 (27.02.2014)
композиции и способы усиления когнитивной функции - патент 2507742 (27.02.2014)
применение каннабиноидов в комбинации с антипсихотическим лекарственным средством - патент 2503448 (10.01.2014)
противоопухолевые комбинации из 4-анилино-3-цианохинолинов и капецитабина - патент 2498804 (20.11.2013)
приятная на вкус твердая композиция, включающая нейтрализатор кислотности и стимулятор слюноотделения - патент 2497503 (10.11.2013)
модуляторы рецептора s1p для лечения рассеянного склероза - патент 2495664 (20.10.2013)
композиции для восстановления кожи, содержащие активаторы циркадных генов и синергическую комбинацию активаторов гена sirt1 - патент 2494756 (10.10.2013)
новая комбинация активных ингредиентов, содержащая нестероидное противовоспалительное лекарственное средство и производное колхикозида - патент 2493853 (27.09.2013)
способы и композиции для лечения расстройств пищевода - патент 2491075 (27.08.2013)

Класс A61P27/00 Лекарственные средства для лечения расстройств восприятия

офтальмологический ирригационный раствор - патент 2529787 (27.09.2014)
глазные капли на основе композиции фармацевтически приемлемой аддитивной соли кислоты и метилэтилпиридинола, содержащие композицию витаминов группы в - патент 2528912 (20.09.2014)
6-замещенные изохинолины и изохинолиноны полезные в качестве ингибиторов rho-киназы - патент 2528229 (10.09.2014)
способ комбинированного лечения ретиноваскулярного макулярного отека - патент 2527360 (27.08.2014)
фармацевтическая антиангиогенная композиция для лечения заболеваний глаз - патент 2526825 (27.08.2014)
способ медикаментозного расширения ригидного зрачка перед проведением факоэмульсификации - патент 2525512 (20.08.2014)
способ лечения монокулярного оптического неврита при рассеянном склерозе - патент 2523146 (20.07.2014)
профилактика и лечение патологических состояний глаз, вызванных комплементом - патент 2522976 (20.07.2014)
производные пиридина в качестве ингибиторов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов 2 подтипа (vegfr-2) и протеинтирозинкиназы - патент 2522444 (10.07.2014)
способ лечения кератоконуса у пациентов с тонкой роговицей - патент 2522386 (10.07.2014)