иммуноадъювантная активность поли-1-винилимидазола и способ получения антител к коринебактериям дифтерии на его основе

Формула изобретения

1. Применение поли-1-винилимидазола в качестве вещества, обладающего иммуноадъювантной активностью.

2. Способ получения антител к коринебактериям дифтерии путем введения в организм животных препарата клеточных мембран C. Diphtehriae "Кодивак", отличающийся тем, что в качестве адъюванта используют поли-1-винилимидазол в концентрации 0,01-0,6 мг/мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для получения защитных антител к бактериям C.Diphtehriae и в производстве гипериммунных сывороток.

Успешная борьба с заболеваемостью дифтерией требует развития методов диагностики и лечения носителей токсигенных коринебактерий дифтерии. Для этих целей необходимы эффективные способы получения антител к C.Diphtehriae. Известен способ получения этих антител путем введения в организм животных препарата клеточных мембран C.Diphtehriae "Кодивак" [SU а.с. 758775, 1980]. Для усиления и пролонгирования выработки антител было предложено [SU Патент 2129014, 1999] использовать раствор 0,4-0,6 мг/мл сополимера 5-изопропенилтетразола и 1-винилпирролидона в качестве адъюванта. Недостатком данного способа является применение бинарного сополимера на основе 5-изопропенилтетразола, который не является промышленным мономером и при синтезе которого используются высокотоксичные метакрилонитрил и азид натрия [Arnold С., Thatcher D.N. // J. Org. Chem. - 1969. - V. 34. - P. 1141]. В то же время, известна способность поли-1-винилимидазола, синтезируемого на основе выпускаемого промышленностью 1-винилимидазола, образовывать комплексы с бычьим сывороточным альбумином [Анненков В.В., Мазяр Н.Л., Круглова В.А. и др.// Высокомол. соед. Сер. А. -2000. - Т. 42, 11. - С. 1804-1810], что позволило предположить наличие адъювантных свойств у данного полимера.

Целью изобретения является расширение ассортимента иммуноадъювантных препаратов путем выявления адъювантной активности поли-1-винилимидазола, а также упрощение и удешевление способа получения антител к C.Diphtehriae при использовании в качестве адъюванта водного раствора поли-1-винилимидазола.

Сущность предлагаемого изобретения раскрывается следующими примерами.

Пример 1. Иммуноадъювантная активность поли-1-винилимидазола.

Исследования проводили на кроликах породы "шиншилла". Животных вакцинировали еженедельно в течение 4-х недель смесью раствора вакцины "Кодивак" (1 мл при концентрации 0,4 мг/мл) с равным объемом водного раствора поли-1-винилимидазола (0,2 мг/мл). Поли-1-винилимидазол получен радикальной полимеризацией 1-винилимидазола по методу [N. Pekel, О. Guven // Colloid Polym Sci. - 1999. - V. 277. - Р. 570]. Его молекулярная масса составляла 65000, что соответствует степени полимеризации 700. В водной среде он обладает свойствами слабого полимерного основания, pK₀ сопряженной кислоты составляет 5,6 [Мазяр Н.Л., [Анненков В.В. и др. // Изв. АН. Сер. хим. - 2000, 12, с. 2047]. Поли-1-винилимидазол является нетоксичным веществом (LD₅₀=1318 мг/кг, определена по методу Кербера на белых беспородных мышах).

В контрольных опытах к раствору "Кодивак" добавляли равный объем воды. Через неделю после окончания цикла иммунизации определяли титры антител методом РПГА с эритроцитарным диагностикумом. Полученные величины рассчитаны как средние для групп из не менее 5 животных. Результаты (табл. 1) свидетельствуют об ярко выраженной адъювантной активности поли-1-винилимидазола.

Пример 2. Разработка способа получения антител к коринебактериям дифтерии.

Начальный цикл иммунизации осуществляли в соответствии с Примером 1. Через месяц проводили трехкратную ревакцинацию с интервалом в неделю и после каждой ревакцинации определяли титры антител методом РПГА с эритроцитарным диагностикумом. Титр специфических иммуноглобулинов определяли при помощи обработки сыворотки кроликов 2-меркаптоэтанолом [Svehag S.E., Mandel В. // J. Exp. Med. - 1964. - V. 119. - Р. 1]. В контрольных опытах к раствору "Кодивак" добавляли равный объем полного адъюванта Фрейнда или раствора сополимера 5-изопропенилтетразола и 1-винилпирролидона (0,6 мг/мл в соответствии с [SU а.с. 1578143, 1990]).

Из результатов, представленных в табл. 2, следует, что оптимальной концентрацией поли-1-винилимидазола для использования в качестве иммуноадъюванта является 0,02-0,05 мг/мл, что значительно ниже оптимального интервала для сополимера 5-изопропенилтетразола и 1-винилпирролидона. Титры антител в получаемых сыворотках превышают результаты для адъюванта Фрейнда и сополимера 5-изопропенилтетразола и 1-винилпирролидона.

Таким образом, поли-1-винилимидазол способен проявлять иммуноадъювантную активность и может быть использован для выработки защитных антител против коринебактерий дифтерии у животных и для получения гипериммунных сывороток.