питательная среда для дифференциальной диагностики cl. perfringens

Формула изобретения

Питательная среда для дифференциальной диагностики Cl. perfringens, содержащая триптический гидролизат казеина, экстракт дрожжей, глюкозу, сульфит натрия, хлорид натрия, агар микробиологический, отличающаяся тем, что она содержит экстракт кормовых дрожжей и дополнительно хлорид железа, соду кальцинированную и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Триптический гидролизат казеина - 16,0-20,0

Экстракт кормовых дрожжей - 4,0-5,0

Д-глюкоза - 5,5-5,9

Сульфит натрия - 2,3-2,7

Хлорид железа - 0,7-0,9

Хлорид натрия - 6,0-7,0

Сода кальцинированная - 1,0-1,2

Агар микробиологический - 5,0-7,0

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при диагностике газовой гангрены для ускоренной дифференциации Cl. perfringens от других возбудителей газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций по сульфатредуцирующему признаку.

Газовая гангрена - полимикробное заболевание, вызываемое группой анаэробных микроорганизмов, обычно в сочетании с кокками. Из ран, осложненных анаэробной инфекцией, чаще всего высевают Cl.perfringens (4).

При диагностике заболеваний, вызванных Cl.perfringens, фактор времени имеет большое значение, поэтому ускоренная дифференциация основного возбудителя газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций очень важна.

Известно использование для этих целей среды Вильсона-Блер (1, 2, 4). Предложены различные варианты среды (3, 5, 6).

Недостатком этих сред является недостаточная чувствительность и дифференцирующие свойства, использование пищевого сырья (мясо) и вещества, обладающего высокой гигроскопичностью, а также внесение extempore растворов хлористого железа и сульфита натрия в среду. Кроме того, отсутствие коммерческого выпуска среды ограничивает применение в практических лабораториях и является одной из причин неудовлетворительной бактериологической диагностики газовой гангрены и пищевых токсикоинфекций, вызванных анаэробами.

Наиболее близким решением технической задачи данного назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является среда Вильсона-Блер, содержащая в качестве источника азотистого питания пептон (мясо-пептонный бульон), сульфит натрия, хлористое железо, агар микробиологический.

Задача предлагаемого изобретения - повышение ростовых и дифференцирующих свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда содержит в качестве источника азотистого питания сухой триптический гидролизат казеина, в качестве стимулятора роста - экстракт кормовых дрожжей или экстракт хлебных дрожжей, в качестве источника энергии и углерода - глюкозу, сульфит натрия безводный, восстанавливающийся в сульфат натрия, который, соединяясь с солью Мора, образует соединение черного цвета - сернистое железо. Для создания изотоничных условий в среде использован натрий хлористый, для корректировки рН - сода кальцинированная, в качестве желирующего компонента использован агар микробиологический, при следующем соотношении компонентов, г/л:

Триптический гидролизат казеина - 16,0-20,0

Экстракт кормовых дрожжей или экстракт хлебных дрожжей - 4,0-5,0

Д-глюкоза - 5,5-5,9

Сульфит натрия безводный - 2,3-2,7

Соль Мора - 0,7-0,9

Натрия хлорид - 6,0-7,0

Сода кальцинированная - 1,0-1,2

Агар микробиологический - 5,0-7,0

Вода дистиллированная - До 1 л

Богатая аминокислотами, имеющими значение в азотистом питании возбудителей газовой гангрены, питательная основа из казеина в сочетании со стимулятором роста - экстрактом кормовых дрожжей или экстрактом хлебных дрожжей и глюкозой - источником энергии и углерода, веществами, обеспечивающими сульфатредуцирующие свойства среды, создают оптимальные условия для роста анаэробных микроорганизмов, что обеспечивает возможность ранней дифференциации Cl. perfringens от других возбудителей газовой гангрены за 2-3 часа.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды растворяют 16,0 г триптического гидролизата казеина, 4,0 г экстракта кормовых дрожжей или хлебных дрожжей, 5,5 г глюкозы, 2,3 г сульфита натрия безводного, 0,7 г соли Мора, 6,0 г натрия хлорида, 1,0 г соды кальцинированной, 5,0 г агара микробиологического. Кипятят в течение 2-3 мин до полного расплавления агара. Среду не стерилизуют. Разливают в стерильные пробирки по 10 мл и охлаждают под струей холодной воды до температуры 45-50^oС и выдерживают на водяной бане при этой температуре до посева.

Контроль качества среды осуществляют при посеве тест-штаммов:

Cl. perfringens BP6K тип А 28, Cl. septicum 307, Cl. histolyticum 304, Cl. novyi 108, Cl. sporogenes 272.

Учет результатов проводят визуально по почернению среды или наличию "облачка" дымчатого цвета или единичных колоний темного цвета через 2-3 часа инкубации посевов при температуре 37^oС в аэробных условиях.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л дистиллированной воды растворяют 18,0 г триптического гидролизата казеина, 4,5 г экстракта кормовых дрожжей или экстракта хлебных дрожжей, 5,7 г Д-глюкозы, 2,5 г сульфита натрия безводного, 0,8 г соли Мора, 6,5 г натрия хлорида, 1,1 г соды кальцинированной, 6,0 агара микробиологического. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1, 2 тем, что в 1 л дистиллированной воды растворяют 20,0 г триптического гидролизата казеина, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей или экстракта хлебных дрожжей, 5,9 г Д-глюкозы, 2,7 г сульфита натрия безводного, 0,9 г соли Мора, 7,0 г натрия хлорида, 1,2 г соды кальцинированной, 7,0 г агара микробиологического. Далее согласно примеру 1, 2.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.

Источники информации

1. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, М., Медицина, 1973, стр.262.

2. Вильсон и Блер. "Железо - сульфитный агар". Руководство по микробиологии и эпидемиологии инфекционных болезней. М., 1962, стр. 329.

3. Клейн Б.М. Усовершенствование в диагностике анаэробов газовой гангрены, ЖМЭИ, 1943, 9, стр. 59.

4. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований, М., 1978, стр. 252.

5. Рунова В. Ф. Выращивание Cl. perfringens на синтетических средах. ЖМЭИ, 1962, 3, стр. 56-62.

6. Рунова В.Ф. Плоскирев Н.Ф. Сухая среда для обнаружения Cl. perfringens. Лабораторное дело, 1960, 1, стр. 37-40.