применение низкомолекулярных гепаринов для профилактики и лечения отеков головного мозга

Формула изобретения

1. Применение низкомолекулярного гепарина в качестве активного вещества при получении лекарственного средства для профилактики и лечения отеков головного мозга.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что низкомолекулярный гепарин имеет молекулярную массу от 1000 до 10000 Да.

3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что низкомолекулярный гепарин имеет молекулярную массу от 1500 до 6000 Да.

4. Применение по п. 1, отличающееся тем, что низкомолекулярный гепарин имеет молекулярную массу от 4000 до 5000 Да.

5. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярный гепарин состоит из олигосахаридов, имеющих на одном из своих концов 2-О-сульфо-4-енопиранозоуроновую кислоту.

6. Применение по одному из пп. 1-5, отличающееся тем, что низкомолекулярный гепарин получают деполимеризацией сложного эфира гепарина с помощью основания.

7. Применение по одному из пп. 1-6, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является еноксапарин.

8. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является надропарин.

9. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является парнапарин.

10. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является ревипарин.

11. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является дальтепарин.

12. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является тинзапарин.

13. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является данапароид.

14. Применение по одному из пп. 1-7, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является ардепарин.

15. Применение по одному из пп. 1-7, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является цертопарин.

16. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является CY222.

17. Применение по одному из пп. 1-4, отличающееся тем, что низкомолекулярным гепарином является SR90107/ORG31540.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к применению низкомолекулярных гепаринов для профилактики и лечения отеков головного мозга.

Изобретение также относится к применению низкомолекулярных гепаринов для получения лекарственного средства для профилактики и лечения отеков головного мозга.

Стандартный гепарин представляет собой сульфатированный полисахарид со средней молекулярной массой 12000-15000 Да, выделяемый из слизистых тканей кишечника крупного рогатого скота, овец и свиней. Гепарин применяется в клинике для профилактики и лечения тромбоэмболических нарушений, но иногда вызывает кровотечения.

В течение последних десяти лет гепарин постепенно вытесняется низкомолекулярными гепаринами, которые не приводят или приводят в меньшей степени к кровотечениям и требуют только одной инъекции в день вместо 2-3 инъекций в день стандартного гепарина. Такие низкомолекулярные гепарины получают, в частности, путем фракционирования, контролируемой деполимеризации гепарина или химического синтеза. Они характеризуются отношением активности анти-Ха к активности анти-IIa, превышающим 2.

Было обнаружено, что низкомолекулярные гепарины уменьшают отеки головного мозга.

Отеки головного мозга являются главным осложнением тромбоэмболии сосудов головного мозга, церебральных кровоизлияний и травматизма центральной нервной системы (церебральный травматизм и медуллярная травма), а также остановки сердца или дыхания или какой-либо другой эквивалентной функциональной ситуации вне зависимости от вызвавшей ее причины (фибрилляция желудочка, приступ злокачественной астмы). Отеки головного мозга могут также встречаться при любом коматическом состоянии, возникающем в результате патологии или несчастного случая, и сопровождаться паренхиматозной гипоперфузией головного мозга. Отеки головного мозга могут также возникать при опухолях головного мозга, облучениях и бактериальных, вирусных и паразитарных инфекциях паренхимы головного мозга.

Согласно изобретению преимущественно используют низкомолекулярный гепарин со средней молекулярной массой от 1000 до 10000 Да, чаще от 1500 до 6000 и, более предпочтительно, от 4000 до 5000 Да.

Такие низкомолекулярные гепарины получают различными способами из гепарина:

- фракционирование с использованием растворителей (FR 2440376, US 4692435),

- фракционирование с использованием анионной смолы (FR 2453875),

- гель-фильтрация (BARROWCLIFFE, Thromb. Res. 12,27-36 (1977)),

- афинная хроматография (US 4401758),

- контролируемая деполимеризация с использованием химического реагента:

азотной кислоты (ЕР 14184, ЕР 37319, ЕР 76279, FR 2503714, US 4804652, WO 813276), бета-элиминирования сложных эфиров гепарина (ЕР 40144, US 5369618), периодата (ЕР 287477), боргидрида натрия (ЕР 347588, ЕР 380943), аскорбиновой кислоты (US 4533549), перекиси водорода (US 4629699, US 4791195), гидроксида четвертичного аммония из четвертичной аммониевой соли гепарина (US 4981955), гидроксида щелочного металла (ЕР 380943, ЕР 347588) или ферментативным путем (ЕР 64452, US 4396762, ЕР 244235, ЕР 244236, US 4826827, US 3766167) и с помощью облучения (ЕР 269981).

Некоторые низкомолекулярные гепарины могут быть также получены путем химического синтеза (US 4801583, US 4818816, ЕР 165134, ЕР 84999, FR 2535306).

Из низкомолекулярных гепаринов можно, в частности, назвать еноксапарин (DCI), поставляемый фирмой RHONE-POULENC PORER, надропарин (DCI), поставляемый фирмой SANOFI, парнапарин (DCI), поставляемый фирмой OPOCRIN-ALFA, ревипарин (DCI), поставляемый фирмой KNOLL, дальтепарин (DCI), поставляемый фирмой KABI PHARMACIA, тинзапарин (DCI), поставляемый фирмой NOVO NORDISK, данапароид (DCI), поставляемый фирмой ORGANON, ардепарин (DCI), разработанный фирмой WYETH AYERST, цертопарин (DCI), поставляемый фирмой SANDOZ, и продукты в стадии исследования, такие как CY222 фирмы SANOFI-CHOAY (Thromb. Haemostasis, 58 (1), 553 (1987)) и SR90107/ORG31540 фирмы SANOFI-ORGANON (Thrombosis and Haemostasis, 74, 1468-1473 (1995)).

Низкомолекулярные гепарины преимущественно состоят из олигосахаридов, имеющих на одном из своих концов 2-O-сульфо-4-енопиранозоуроновую кислоту.

Один из низкомолекулярных гепаринов, обладающий особыми преимуществами, получают деполимеризацией сложного эфира гепарина с помощью основания, такого как гидроксид натрия.

А - Профилактическое действие низкомолекулярных гепаринов на отек определяли на крысах после фототромботического поражения головного мозга по следующей методике: крысы-самцы Sprague Dawley (150-200 г) (26 в испытуемой группе и 22 в контрольной группе) проходят анестезию хлорал-гидратом (400 мг/кг живого веса) и подвергаются стереотаксическому напряжению. После этого рассекают кожу для оголения черепа и воздействуют холодным светом (Bioblock 150W) с правой стороны черепа перед лямбдой. Низкомолекулярные гепарины растворяют в солевом растворе (0,9% NaCl) и далее действуют следующим образом:

за 3 часа до воздействия вводят подкожно 2 мг/кг/5 мл низкомолекулярного гепарина,

непосредственно перед воздействием вводят внутривенно 0,5 мг/кг/5 мл низкомолекулярного гепарина и сразу же после этого вводят подкожно 10 мг/кг/5 мл красителя Бенгальского розового в солевом растворе (0,9% NaCl), производят рассечение кожи, облучая череп в течение 5 мин, после чего кожу сшивают и возвращают животных в клетки,

через 3 и 21 час после воздействия вводят подкожно 2 мг/кг/5 мл низкомолекулярного гепарина,

через 24 часа после воздействия животных декапитируют и извлекают головной мозг.

Собирают образцы с места воздействия и контралатерально к нему, используя сверло с изоляционной пробкой с диаметром 6 мм. Объем воды в образцах определяют по отношению веса влажной ткани к весу сухой ткани и отек определяется как избыточное содержание воды на образце, взятом с места воздействия, в сравнении с образцом контралатерального полушария у каждой крысы. Животные из контрольной группы получают в тех же условиях физиологический раствор.

В проведенном тесте низкомолекулярные гепарины уменьшают отек приблизительно на 30%.

Еноксапарин уменьшает отек на 33%.

Эти результаты показывают, что низкомолекулярные гепарины оказывают на отек профилактическое действие.

В - Лечебное действие низкомолекулярных гепаринов на отек определяли на крысах после фототромботического повреждения головного мозга по следующей методике: крысы-самцы Sprague Dawley (200-240 г) (20 в контрольной группе и 12 и 8 в испытуемых группах) проходят анестезию хлоралгидратом (400 мг/кг живого веса) и подвергаются стереотаксическому напряжению. После этого рассекают кожу для оголения черепа и воздействуют холодным светом (Bioblock 150W) с правой стороны черепа перед лямбдой. Вводят внутривенно 10 мг/кг/5 мл красителя розового Бенгальского в физиологическом растворе. Освещают череп в течение 5 мин и зашивают кожу. Низкомолекулярные гепарины растворяют в солевом растворе (0,9% NaCl) и затем, либо через 2 часа после воздействия, вводят внутривенно 0,5 мг/кг/5 мл низкомолекулярного гепарина, и через 15 мин, вводят подкожно 2 мг/кг/5 мл низкомолекулярного гепарина, либо через 6 час после воздействия вводят подкожно 2 мг/кг/5 мл низкомолекулярного гепарина. Животных после этого помещают в их клетки и через 24 часа после воздействия декапитируют и извлекают головной мозг. Собирают образцы с места воздействия и контралатерально к нему, используя сверло с изоляционной пробкой с диаметром 6 мм. Объем воды в образцах определяют по отношению веса влажной ткани к весу сухой ткани и отек определяется как избыточное содержание воды на образце, взятом с места воздействия, в сравнении с образцом контралатерального полушария у каждой крысы. Животные из контрольной группы получают в тех же условиях физиологический раствор.

В проведенном тесте низкомолекулярные гепарины уменьшают отек приблизительно на 30%, когда низкомолекулярный гепарин вводят через 2 или 6 часов после воздействия.

Еноксапарин уменьшает отек на 33% в обоих случаях.

В аналогичном тесте, где низкомолекулярные гепарины вводят через 18 часов после воздействия (0,5 мг/кг/5 мл внутривенно и спустя 15 мин 2 мг/кг/5 мл подкожно), уменьшение отека все еще значительно и составляет приблизительно от 10 до 30% (еноксапарин 23% и надропарин 14%).

Эти результаты показывают, что низкомолекулярные гепарины проявляют в отношении отека лечебный эффект.

С - Действие низкомолекулярных гепаринов на отек головного мозга также показано на крысах на отеке, вызванном травмой, нанесенной следующим способом: крысы-самцы Sprague Dawley (Charles River France), весом 280-300 г (12 в контрольной группе и 12 в испытуемой группе) проходят анестезию галотаном (1,5%) в смеси N₂О/О₂ (70/30) и подвергаются стереотаксическому напряжению. После этого кожный покров черепа рассекают и проделывают отверстие с помощью зубчатого сверла в правой теменной области коры (координаты: 3,5 мм перед и 6 мм над межушной линией). Полиэтиленовую трубку с внутренним диаметром 3 мм помещают на твердую оболочку, фиксируют в полости черепа с помощью зубного цемента и соединяют с электромагнитным вентилем (Danfoss Evsi, 24 В, 15 Вт). При этом твердая оболочка остается интактной. Вентиль соединен с насосом для высокопроизводительного жидкостного хроматографа (Walters 590). Систему заполняют стерильной водой и, когда давление насоса достигает 3,8-4 бар, производят жидкостной удар умеренной силы (1,6-1,8 бар) путем кратковременного (20 мс) открытия вентиля. После этого трубку удаляют, разрез зашивают и животных возвращают в клетку, находящуюся в комнате с температурой 26-28^oС.

Низкомолекулярные гепарины, растворенные в солевом растворе (0,9% NaCl) вводят следующим образом: через 2 часа после воздействия - 0,5 мг/кг/5 мл IV bolus, через 2 часа 15 мин после воздействия - 2 мг/кг/5 мл SC, через 6 час после воздействия - 2 мг/кг/5 мл SC, через 24 часа после воздействия 2 мг/кг/5 мл SC и через 30 час после воздействия - 2 мг/кг/5 мл SC.

Животным контрольной группы в тех же условиях вводили 5 мл/кг солевого раствора (0,9% NaCl).

Животных забивают через 48 час после воздействия. Отек головного мозга оценивают с использованием метода влажный вес/сухой вес (24 часа при 100^oС). Отек, оцениваемый как содержание воды в головном мозге, измеряют в гиппокампе и коре рядом с местом воздействия.

В этом тесте низкомолекулярные гепарины уменьшают по крайней мере на 40% отек в гиппокампе и коре рядом с местом воздействия.

Еноксапарин (LOVENOX) уменьшает отек на 69% в гиппокампе и на 50% в коре рядом с местом воздействия.

Лекарственные средства состоят из соли (предпочтительно натриевой или кальциевой) низкомолекулярного гепарина в виде композиции, в которой он объединен с любым другим фармацевтически приемлемым веществом, которое может быть как инертным, так и физиологически активным. Лекарственные средства по изобретению могут применяться внутривенно, подкожно, перорально, ректально, местно или пульмонарно (ингаляцией).

Стерильные композиции для внутривенного или подкожного введения обычно представляют собой водные растворы. Эти композиции могут также содержать добавки, обычно увлажняющие, изотонизирующие, эмульгирующие, диспергирующие и стабилизирующие добавки. Стерилизация может производиться различными способами, например, асептической фильтрацией, введением в композицию стерилизующих агентов, облучением. Композиции могут быть также приготовлены в виде стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены непосредственно перед применением в стерильной воде или любой другой пригодной для инъекций стерильной среде.

Твердые композиции для перорального введения могут применяться в виде таблеток, пилюль, порошков (в желатиновых или крахмальных капсулах) или гранул. Активное начало в этих композициях смешивают с одним или несколькими инертными разбавителями, такими как крахмал, целлюлоза, сахароза, лактоза или кремнезем, в токе аргона. Кроме разбавителей эти композиции могут также содержать другие вещества, например, одно или несколько смазывающих средств, таких как стеарат магния или тальк, агент, способствующий пероральному всасыванию, краситель, оболочку (в случае драже) или лак.

Жидкие композиции для перорального введения могут применяться в виде растворов, суспензий, эмульсий, сиропов и фармацевтически приемлемых эликсиров, содержащих инертные разбавители, такие как вода, этанол, глицерин, растительные масла или парафиновое масло. Кроме разбавителей эти композиции могут содержать и другие вещества, например, увлажняющие вещества, подсластители, загустители, ароматизаторы и стабилизаторы.

Композиции для ректального введения представляют собой суппозитории или ректальные капсулы, содержащие кроме активного начала носители, такие как масло какао, полусинтетические глицериды или полиэтиленгликоли.

Композиции для местного применения могут представлять собой, например, кремы, лосьоны, глазные капли, полоскания, капли для носа или аэрозоли.

Дозы зависят от желаемого эффекта, длительности обработки и от пути введения. Обычно они составляют от 0,2 до 4 мг на 1 кг в сутки для подкожного пути, т.е. от 14 до 280 мг в сутки для взрослого.

В общем случае врач определяет соответствующую дозировку в зависимости от возраста, веса и других относящихся к делу факторов.

Настоящее изобретение касается также способа профилактики или лечения отеков головного мозга у человека, состоящего в введении эффективного количества низкомолекулярного гепарина.