способ изготовления вакцины для профилактики и лечения дерматофитозов домашних и лабораторных животных

Формула изобретения

Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения дерматофитозов домашних и лабораторных животных, включающий посев и раздельное выращивание культур грибов Microsporum canis, Microsporum qypseum, Trichophyton mentagrophytes, приготовление гомогенатов в соответствующем соотношении, добавление иммуномодулятора и инактиватора-формалина, учет результатов по количеству микроконидий, отличающийся тем, что гомогенаты Microsporum canis, Microsporum qypseum, Trichophyton mentagrophytes смешивают в соотношении 1: 1: 2, в качестве иммуномодулятора берут Риботан, а учет результатов проводят по количеству элементов грибов: мицелия, макроконидий, артроспор, хламидоспор, микроконидий и вакцину считают иммуногенной при общем содержании 25-50 млн элементов грибов в 1 мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к профилактике и лечению дерматофитозов животных.

До настоящего времени дерматофитозы различных животных имеют место в различных странах, поэтому изыскание способов получения высокоиммуногенных вакцин против этих инфекций актуально.

В настоящее время известны способы лечения дерматофитозов животных противогрибковыми препаратами, например фунгином.

Это линимент включает клотримазол (3%), серу (10) и другие активные ингредиенты. Фунгин обладает широким спектром противогрибкового действия. Активен против возбудителей трихофитии и микроспории животных, в частности собак и кошек [1].

Известен способ изготовления вакцины против микроспории восприимчивых животных, включающий посев и выращивание культуры гриба штамма Microsporum canis ВИЭВ 473 и приготовление гомогената с концентрацией 20-50 млн микроконидий в 1 мл, 4-6%-ного солевого раствора натрий хлор с последующим добавлением гидроокиси алюминия из расчета 0,5 мл на каждые 100 мл вакцины [2, 4] .

Известен также способ изготовления вакцины для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных, включающий использование в качестве штаммов вирулентных культур грибов вида T. mentagrophytes, M.canis, M. qypseum, раздельное выращивание культур, получение гомогенатов и смешивание их в равных объемах, дополнительное инактивирование полученной смеси 0,5-0,6-ным раствором формалина в течение 3-4 дней при температуре 37-38^oС и добавление 0,8-0,9%-ного раствора иммуномодулятора нуклеоната натрия в количестве 1:1, расфасовку, замораживание в течение 10-15 часов, высушивание в сублимационной установке в течение 32-36 часов.

Для профилактической цели используют вакцину против дерматофитов, ресуспензированную в 1,9-2,1 мл физиологического раствора, которую вводят лабораторным животным - собакам и кошкам, независимо от возраста в области бедренной группы мышц двукратно с интервалом 10-14 дней в дозах - 0,9-1,2 мл (200-250 млн микроконидий) [3] прототип.

В задачу наших исследований входило получить иммуногенную вакцину с низкой реактогенностью и уменьшение концентрации грибных клеток в 1 мл вакцины.

Это нам удалось достичь благодаря тому, что в качестве антигена используют различные клетки и элементы грибов М.canis, M.qypseum, T.mentagrophytes в количественном соотношении 1:1:2, в качестве иммуномодулятора используют риботан 0,2-0,4%, в качестве разбавителя - официнальный физиологический раствор. Концентрация элементов гриба равна 25,0-50,0 млн в 1 мл.

Предложенный способ изготовления вакцины для профилактики и лечения дерматофитозов домашних и лабораторных животных заключается в следующем:

Пример 1. Культуры штаммов M.canis, M.qypseum, T.mentagrophytes раздельно выращивают в течение 15-25 суток на сусло-агаре при температуре 26-28^oС. Затем скребком снимают грибную массу с поверхности питательной среды, размалывают в отдельных гомогенизаторах и добавляют 300-500 мл стерильного физиологического раствора с содержанием в нем 0,2-0,4% риботана из расчета размола 4-7 матрасов в 1 гомогенизаторе с рабочим объемом стакана не менее 1,5-2,0 литра.

Затем в каждом гомогенате определяют количество элементов гриба (фрагменты мицелия, макроконидий, микроконидий и других клеток дерматофитов). Далее подтитровывают концентрацию элементов гриба в каждом гомогенате до концентраций клеток гриба 50 млн в 1 мл, затем смешивают в соотношении:

- 1 часть M.canis

- 1 часть M.qypseum

- 2 части T.mentagrophytes

После смешивания к полученной суспензии добавляют 0,2-0,3% официнального раствора (40%) формалина.

Полученную таким образом вакцину проверяют на наличие бактериальной и грибной обсемененности, высевая пробы на МПА, МПБ, агар Сабуро, среду Китт-Тароци. Затем на кроликах, собаках определяют безвредность и реактогенность путем внутримышечного введения животным 0,5-1,0 мл вакцины, что не вызывает отрицательной реакции со стороны организма и вырабатывает иммунитет не менее 12 месяцев.

Пример 2. Для изготовления 1 л вакцины берут 250 мл гомогената культуры M.canis с содержанием 50 млн в 1 мл элементов гриба, добавляют 0,2% риботана и 0,2% формалина. Далее берут 250 мл гомогената культуры M.qypseum с содержанием 50 млн в 1 мл элементов гриба, добавляют 0,2% риботана и 0,2% формалина.

Затем берут 500 мл гомогената культуры T.mentagrophytes с содержанием 50 млн в 1 мл элементов гриба и добавляют 0,2% риботана и 0,2% формалина.

Полученную таким образом вакцину проверяют на наличие бактериальной и грибной обсемененности, высевая пробы на МПА, МПБ, агар Сабуро, среду Китт-Тароци. Далее на кроликах и собаках определяют безвредность и реактогенность путем внутримышечного введения животным 0,5-1,0 мл вакцины, что не вызывает отрицательной реакции со стороны организма и вырабатывает иммунитет не менее 12 месяцев.

Пример 3. На 1 л вакцины берут 250 мл гомогената культуры M.canis с добавлением 0,4% риботана и 0,3% формалина с концентрацией клеток 50 млн в 1 мл, добавляют 250 мл гомогената культуры M.qypseum с 0,4% риботана и 0,3% формалина с концентрацией элементов гриба 50 млн/1 мл и далее берут 500 мл гомогената культуры T. mentagrophytes с добавлением 0,4% риботана и 0,3% формалина. После смешивания гомогенатов полученную вакцину аналогично вышеописанному Примеру 1 проверяли на обсемененность, безвредность и реактогенность и создание иммунитета и его продолжительность.

Пример 4. На 1 л вакцины брали по 250 мл. гомогенатов культур M.canis и M.qypseum с концентрацией в каждом из них по 25 млн. в 1 мл. элементов гриба с добавлением в них 0,2% риботана и 0,2% формалина и добавляли к ним 500 мл. гомогената T. mentagrophytes с концентрацией 25 млн/мл элементов гриба, с предварительным добавлением в него 0,2% риботана и 0,2% формалина.

Пример 5. На 1 л вакцины гомогенаты культур брали в соотношении 1:1:2 с концентрацией в них по 25 млн в 1 мл элементов гриба и добавляли к ним 0,4% риботана и 0,3% формалина.

Пример 6. На 1 л вакцины гомогенаты культур брали в соотношении 1:1:2 с концентрацией в них по 35 млн элементов гриба в 1 мл и с добавлением 0,3% риботана и 0,25% формалина.

Во всех примерах полученную вакцину проверяли на бактериальную грибную обсемененность, безвредность и реактогенность и создание длительного и напряженного иммунитета, как описано в Примере 1.

Увеличение концентрации элементов гриба в 1 мл свыше 50 млн ведет к повышению реактогенности вакцины, а уменьшение концентрации менее 25 млн элементов гриба в 1 мл значительно снижает ее иммуногенность, поэтому оптимальными иммуногенными дозами вакцины является концентрация элементов гриба 25-50 млн в 1 мл.

Для профилактики дерматофитозов вакцину вводят внутримышечно двукратно с интервалом 10-14 суток в дозах 0,5-0,6 (12,5-25 млн элементов грибов) собакам весом до 5 кг, щенкам пушных зверей и кроликам от 1 до 2-месячного возраста и 1,0-1,2 мл (25,0 млн - 50,0 млн элементов грибов) собакам весом более 5 кг, пушным зверям и кроликам старше 2-месячного возраста.

Для лечения дерматофитозов вакцины применяют внутримышечно трехкратно с интервалом 10-14 суток между введениями в тех же дозах, что и для профилактики - 0,5-0,6 - 1,0-1,2 мл.

Пример 7. 5 собак весом до 5 кг, 7 щенков пушных зверей (три щенка лисы и 4 щенка песца) и 3 кролика 30-дневного возраста вакцинировали двукратно внутримышечно с интервалом 10 суток в дозе 0,5 мл с содержанием элементов гриба 12,5 млн.

При исследовании сыворотки крови в РМА через 23 дня после 2-й вакцинации титры антител (AT) и AT JgG, выраженные в логарифмах, составляли 6,24 и 5,55 соответственно, тогда как у тех же животных до иммунизации эти показатели составляли AT - 2,77 и AT JgG - 1,39.

Через 30 дней после второй иммунизации вакцинированных животных заразили вирулентными культурами M. canis, M.qypseum и T.mentagrophytes. При наблюдении за опытными животными клинических признаков заболевания не обнаружено, что подтверждено микологическими исследованиями проб материала с места заражения.

3 собаки и 5 щенков пушных зверей (2 лисицы и 3 песца) и 2 кролика, не вакцинированных против дерматофитозов, и параллельно с опытными животными, зараженными вирулентными культурами M.canis, M.qypseum, T.mentagrophytes в тех же заражающих дозах, заболели дерматофитозом с проявлением характерных клинических признаков болезни.

Пример 8. 7 собак весом более 5 кг, 6 голов пушных зверей и 5 кроликов старше 3-месячного возраста двукратно привили вакциной с профилактической целью в дозе 1,0 мл с содержанием элементов гриба 50 млн в 1 мл. Исследование сыворотки крови в РМА через 23 дня после второй вакцинации показало титр AT - 7,63 и AT JgG - 6,93. После накожного заражения вирулентными культурами M. canis, M.gypseum, T.mentagrophytes иммунизированные животные не заболели.

Животные контрольной группы (не вакцинированные против дерматофитозов) и зараженные вирулентными культурами M. canis, M.qypseum и T.mentagrophytes заболели дерматофитозами.

Пример 9. Для лечения микроспории и трихофитии (возбудитель M.canis и T. mentagrophytes) 3 щенка лисицы, 5 щенков песца, 4 кролика и 3 собаки весом до 5 кг, больных данным дерматофитозом, трехкратно внутримышечно вакцинировали вакциной в дозе 0,6 мл с содержанием 12,5 млн элементов гриба.

Через 10 дней после последней вакцинации животные выздоровели, на месте кожных поражений, где были отмечены массивные корки, наблюдали гладкую ровную поверхность и активный рост молодого волоса. Результаты микологических исследований были отрицательны, в то время как 2 щенка лисицы, 3 щенка песца, 2 кролика и 2 собаки, также больные дерматофитозами и не подвергавшиеся вакцинотерапии, продолжали болеть.

Пример 10. При лечении трихофитии и микроспории у 2-х лисиц, 3-х песцов, 2-х кроликов старше 2-месячного возраста и 5 собак весом более 5 кг вакцину вводили трехкратно внутримышечно с интервалом 10-14 суток в дозе 1,0 мл с содержанием 50 млн элементов гриба. Через 7-10 дней после третьей вакцинации все животные выздоровели. Клинические признаки заболевания отсутствовали, наблюдали рост нового волоса.

2 лисы, 3 песца, 2 кролика, 2 собаки, больные дерматофитозами и не подвергавшиеся вакцинотерапии, продолжали болеть.

Жидкая вакцина для профилактики и лечения дерматофитозов животных, полученная предложенным способом, при введении в организм формирует напряженный, продолжительный иммунитет против дерматофитозов.

Вакцина апробирована с положительным результатом в ряде хозяйств с 1994 по 2000 гг.

Вакцина, полученная предложенным способом, найдет применение в пушном звероводстве, собаководстве и частном секторе.

Источники информации

1. Справочник - "Ветеринарные препараты в России", под. редакцией И.Ф. Кленова, М. "Сельхозиздат", стр. 254-255.

2. Патент 2084241 по кл. 6 А 61 К 39/00, 1997 г.

3. Авт. св. СССР 1734762 А1, кл. А 61 К 39/00, 1992 г. (прототип).

4. Диссертация к. в.н. Ханиса А.Ю. - "Иммунизация животных антигенами, приготовленными из дерматофитов", М., 1989 г., стр. 42.