способ диагностики возможности рецидивов церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций

Формула изобретения

Способ диагностики возможности рецидивов церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций, включающий микроскопическое исследование серийных гистологических срезов церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций, отличающийся тем, что серийные срезы обрабатывают стандартным антигеном к эндотелиальному фактору (фактор von Willеbrand) и выявляют наличие между сосудами эндотелиальных клеток, окрашенных в коричневый цвет, при отсутствии таких клеток диагностируют отсутствие возможности рецидивов, а при наличии таких клеток проводят инкубацию срезов со стандартным антителом к антигену ядер пролиферирующих клеток, выявляют ядра эндотелиальных клеток, окрашенные в коричневый цвет, и диагностируют возможность рецидива церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при постановке диагноза на операционном и патологоанатомическом материале.

До последнего времени церебральные рацемозные артериовенозные мальформации относили к наиболее часто встречающемуся пороку развития сосудов головного мозга. Он состоит из сосудов с неправильно сформированными стенками, определить тип которых порой невозможно. Лечение АВМ осуществляется по трем основным направлениям: внутрисосудистые вмешательства, радиолечение ("радиохирургия"), открытые операции. После каждого из видов лечения отмечены рецидивы.

Авторам изобретения удалось доказать, что межсосудистые скопления эндотелиальных клеток, выявленные при микроскопическом изучении церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций, обладают пролиферативной активностью и являются источником образования новых сосудов, что может привести к рецидивам.

Наиболее близкой работой к предлагаемому изобретению можно считать автореферат кандидатской диссертации И.А. Соколовой "Внутричерепные рацемозные артериовенозные пороки развития", опубликованный в Санкт-Петербурге, РНХИ им проф. Поленова А.Л., 1999 г. В указанной работе (с. 16) описаны данные иммуногистохимического исследования церебральных рацемозных артeриовенозных мальформаций, на основании которых подтверждается эндотелиальная природа клеток, расположенных в нейропиле, и обнаружена возможность их участия в опухолевом ростe.

Однако в указанной работе и других известных источниках на эту тему отcyтствует четкая формулировка необходимости диагностики пролиферативной активности межсосудистых скоплений эндотелиоцитов, что важно для прогнозирования возможных рецидивов. Кроме этого, отсутствует четкий методологический подход к последовательности и порядку проведения иммуногистохимического исследования. Не отмечены xарактерные особенности грануляционной ткани, в которой идет процесс сосудообразования и которая может присутствовать в церебральных рацемозных артериовенозных мальформациях.

Задача предлагаемого изобретения - выявление признаков пролиферативной активности эндотелиальных клеток межсосудистых пространств церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций, обеспечивающих достоверность диагностирования рецидивов, а также систематизация признаков, позволяющая дифференцировать данный конкретный процесс со сходными реактивными разрастаниями эндотелиальных клеток (грануляционной тканью).

Поставленная задача решается следующим образом. В способе диагностики возможности рецидивов церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций, включающем микроскопическое исследование серийных гистологических срезов церебральных рацемозных артериовенозныx мальформаций, отличающемся тем, что серийные срезы обрабатывают стандартным антителом к эндотелиальному фактору (фактор von Willеbrand) и выявляют наличие между сосудами эндотелиальных клеток, окрашенных в коричневый цвет, при отсутствии таких клеток - диагностируют отсутствие возможности рецидивов, а при наличии таких клеток - проводят инкубацию срезов со стандартным антителом к антигену ядер пролиферирующих клеток, выявляют ядра эндотелиальных клеток, окрашенные в коричневый цвет и диагностируют возможность рецидива церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций.

Предложенный алгоритм исследования позволяет выявить признаки наличия грануляционной ткани, которая может встречаться в церебральных рацемозных артериовенозных мальформациях. В грануляционной ткани имеются пролиферативно активные эндотелиальные клетки и процесс образования сосудов, но затем он подвергается регрессу и не сопровождается рецидивами. Признаки грануляционной ткани (помимо сосудообразования):

1) отложение зерен гемосидерина,

2) разрастание волокнистой соединительной ткани,

3) лимфо-макрофагальная инфильтрация.

Выявление фактора наличия в межсосудистых пространствах скоплений пролиферативно активных эндотелиальных клеток и их дифференциальная диагностика с грануляционной тканью, позволяют прогнозировать в дальнейшем рецидивы церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций.

Сопоставление выявленных морфологически признаков пролиферативной активности эндотелиальных клеток, расположенных вне сосудов (полученных при исследовании операционного материала и умерших людей), с клиническими проявлениями, зафиксированными в историях болезней, помогут в выборе оптимальных методов и принципов лечения.

Способ осуществляется следующим образом. Приготавливают гистологические серийные срезы внутричерепных рацемозных артериовенозных мальформаций толщиной 5-7 микрон. Срезы исследуют под микроскопом.

На срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, под микроскопом выявляют межсосудистые скопления эндотелиальных клеток, образующих пласты, сосудистые почки (фиг. 1). При выявлении этих скоплений проводят их дифференциальную диагностику с грануляционной тканью. Находят характерные для нее признаки:

- наличие зерен гемосидерина (желтого или коричневого пигмента - продукта распада гемоглобина, лежащего вне клеток),

- разрастание волокнистой соединительной ткани;

- лимфо-макрофагальную инфильтрацию.

Если эти признаки присутствуют, значит это грануляционная ткань и исследования прекращают. Если грануляционной ткани нет, то для подтверждения эндотелиальной природы этих внесосудистых скоплений клеток берут следующий серийный срез, покрывают полизином (стандартный реактив, фабричного производства) и инкубируют (держат в термостате) 10 часов при температуре 4^oC с антителом к эндотелиальному фактору (фактор von Willebrand, стандартный реактив для иммуногистохимического метода, фирма "DAKO", поликлональные, предварительное разведение). Для выявления иммунного окрашивания срезы обрабатывают стрептавидин-биотиновым пероксидазным методом (стандартные реактивы, фирма "DAKO" LSAB-kit). При просмотре гистологических препаратов под микроскопом эндотелиальные клетки межсосудистых скоплений имеют коричневый цвет (фиг. 2), что подтверждает их эндотелиальную природу. При отсутствии клеток, окрашенных в коричневый цвет, диагностируют отсутствие возможности рецидива, а при наличии таких коричневых клеток в межсосудистых пространствах берут следующий покрытый полизином серийный срез и инкубируют с антителом к антигену ядер пролиферирующих клеток (АЯПК, стандартный реактив для иммуногистохимического исследования, фирма "DAKO", клон PC-10, предварительное разведение). Сроки инкубации и выявление иммуногистохимической реакции аналогичны вышеизложенным. Срезы подвергаются микроскопическому исследованию, при котором выявляются окрашенные в коричневый цвет ядра эндотелиальных клеток, расположенных между сосудами, что свидетельствует об их пролиферативной активности (фиг.3).

Предлагаемый способ диагностики разработан на основе многочисленных наблюдений и исследований, которые позволили выявить важный и однозначный признак пролиферативной активности межсосудистых скоплений эндотелиальных клеток с целью прогнозирования результатов лечения церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций и, что самое главное, правильного выбора методов лечения. Критерии дифференциальной диагностики способствуют повышению ее достоверности.

Предлагаемое изобретение устанавливает только морфологический факт наличия пролиферативной активности эндотелиальных клеточных скоплений в межсосудистых пространствах. Необходимы дополнительные исследования для сопоставления полученных результатов с клиническими данными. Это позволит разработать дооперационную и прижизненную диагностику пролиферативной активности эндотелиальных клеток в межсосудистых пространствах церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций, а следовательно, возможности их рецидивов.

Однако даже на этом этапе выявленная пролиферативная активность межсосудистых скоплений эндотелиальных клеток церебральных рацемозных артериовенозных мальформаций дают лечащим врачам новые знания, которые необходимо учитывать при выборе методов лечения. Это, в свою очередь, делает лечение больных с церебральными рацемозными артериовенозными мальформациями более эффективным.