способ получения лекарственного средства, обладающего противовирусной, гепатопротекторной и иммуностимулирующей активностью

Формула изобретения

Способ получения лекарственного средства путем фракционирования раствора цветочного меда кристаллизацией во льду, инкубирования в течение 3 - 30 дней при температуре 4 - 30^o соответственно с последующим осветлением с помощью фильтрования или центрифугирования, отличающийся тем, что полученную после осветления субстанцию замораживают до образования льда, после чего подвергают ее радиационной обработке дозой ионизирующего излучения, составляющей 0,1 - 100 КГр.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения препаратов, обладающих противовирусной, гепатопротекторной и иммуностимулирующей терапевтической активностью.

"Витамедин-М" представляет собой комплекс биологически активных веществ, получаемый из натурального пчелиного меда. Препарат оказывает корригирующее действие на систему неспецифической резистентности организма, повышает его устойчивость к вирусным инфекциям, таким как грипп и другие ОРЗ, герпес, к бактериальным инфекциям, а также показан при заболеваниях, вызывающих нарушение функции печени и для снижения гепатотоксического действия лекарственных средств.

Лекарственная форма "Витамедина-М" зарегистрирована Фармакологическим государственным комитетом Российской Федерации под N 97/202/4 и разрешена для применения и промышленного выпуска. Она представляет собой раствор светло-желтого цвета с характерным запахом меда и предназначена для интраназального введения /капли в нос/. При указанном способе введения препарата целебные свойства меда полностью сохраняются, в то время как при обычном, пероральном, приеме его лечебные свойства во многом теряются под действием кислоты и ферментов желудочного сока. "Витамедин-М" содержит только натуральные компоненты меда без консервантов и синтетических добавок. Это, в первую очередь, легкоусваиваемые моносахариды - глюкоза и фруктоза в биологически активной форме, а также биологически активные кислоты-муравьиная, яблочная, лимонная, уксусная, глюконовая, глюкуроновая и другие, витамины, микро- и макроэлементы, входящие в состав натурального меда. Препарат не содержит примесей, вызывающих аллергические реакции, белков, цветочной пыльцы и полисахаридов, поэтому испытания показали практическое отсутствие у него аллергенных свойств.

Обнаружено, что "Витамедин-М" одновременно обладает и противовирусным, и гепатозащитным, и иммунокорригирующим, и гиполипидемическим, и антиоксидантным действием, что позволяет отнести его к адаптогенам природного происхождения, таким как алоэ, женьшень, элеутеракокк, пантокрин. Он сочетает в себе свойства таких известных лекарств как ремантадин, эссенциале, ацикловир, тимоген.

Известен способ получения биостимулирующего средства путем растворения меда в воде до гипертонической концентрации /Лечебные свойства меда и пчелиного яда. М.: "Медгиз", 1956, с. 135-136, Кузьмина К.А. Лечение пчелиным медом и ядом. Изд-во Саратовского ун-та, 1983/. Для повышения биологической активности раствор меда получают с помощью фракционирования и кристаллизации во льду/заявка N 5002353 от 23.08.91/, далее возможна обработка продукта гамма-облучением /заявка N 5064879 от 16.07.92/.

Однако целевой продукт, полученный данными способами, обладает низкой гиполипидемической, антиоксидантной и гепатозащитной активностью.

Наиболее близким к заявляемому по технической сущности и достигаемому результату является способ получения вещества, обладающего гиполипидемической, антиоксидантной и гепатозащитной активностью, из пчелиного меда /патент РФ N 2084232, Б.И. N 20, 1997/, заключающийся в кристаллизации меда во льду с последующим инкубированием в течение 3-30 дней при температуре от 4 до 30^oC и осветлении с помощью фильтрования или центрифугирования. Далее возможна радиационная обработка продукта гамма-облучением.

Однако целевой продукт, полученный известным способом, обладает низкой противовирусной активностью.

Целью предлагаемого способа получения лекарственного средства "Витамедин-М" является повышение противовирусной активности целевого продукта при сохранении всего комплекса его лечебных свойств.

Поставленная цель достигается тем, что субстанцию "Витамедина-М", полученную путем фракционирования раствора цветочного меда кристаллизацией во льду, инкубирования в течение 3 - 30 дней при температуре 4 - 30^oC соответственно, с последующим осветлением с помощью фильтрования или центрифугирования, замораживают до образования льда, после чего подвергают ее радиационной обработке дозой ионизирующего излучения, составляющей 0,1 - 100 кГр.

Противовирусная активность "Витамедина-М", полученного заявляемым способом, в экспериментах по репродукции герпес вируса in vitro оказалась сопоставимой с таковой у наиболее эффективного зарубежного лекарства-ацикловира.

Радиационная обработка применялась и в известных способах при получении биологически активных растворов меда, но впервые нами обнаружено, что именно предварительное замораживание препарата перед облучением способствует усилению имеющихся у него антивирусных свойств, не ослабляя других лечебных свойств.

Таким образом, предлагаемое техническое решение обладает новизной, изобретательским уровнем и промышленно применимо.

Примеры осуществления заявляемого способа.

Пример 1. Растворитель - дистиллированную воду замораживают до образования льда при температуре -20^oC. На поверхность льда наносят слой хранившегося ранее при комнатной температуре некристаллизованного цветочного пчелиного меда, полученного с экологически чистой пасеки и прошедшего жесткий контроль по всем параметрам ГОСТа и на отсутствие в нем солей тяжелых металлов и радионуклидов, в весовом соотношении 4:1 соответственно и выдерживает в течение 20 суток при -20^oC. За этот срок происходит растворение меда во льду, вызванное тепломассопередачей, с последующей его кристаллизацией.

Кристаллизованный раствор меда делят на порции, которые инкубируют при температурах и в течение сроков, указанных в табл. 1. По окончании инкубирования производят осветление целевого продукта фильтрованием через ватно-марлевый фильтр, затем полученную субстанцию "Витамедина-М" замораживают при температуре -14^oC до образования льда и подвергают гамма-облучение дозой 25 кГр.

Биологическую активность препарата испытывают на белых мышах по 9 - 12 особей в группе, вводя его перорально по 1 капле на особь в течение 10 дней, затем мышам внутрибрюшинно вводят по 80 мг/кг гексенала - снотворного средства, нейтрализация которого происходит только в печени. О биологической активности целевого продукта судят по длительности гексеналового сна мышей по сравнению с длительностью гексеналового сна мышей следующих контрольных групп:

Контроль 1. Мышей защищают биологически активным раствором меда данной партии, не подвергающимся облучению после замораживания препарата до образования льда /прототип/.

Контроль 2. Гексенал вводят мышам, не защищенным каким-либо лекарственным средством.

Результаты испытания приведены в табл. 1.

Пример 2. Раствор меда получают как в примере 1, при следующих значениях режимных параметров стадии инкубирования: длительность - 15 дней, температура 22^oC. Выход целевого продукта составляет 95%. Доза облучения составляла 25 кГр, температура замораживания субстанции "Витамедина-М" перед гамма-облучением -20^oC.

Биологическую /антиоксидантную/ активность препаратов испытывают на крысах-самцах массой 240 - 260 г /8 - 10 особей в группе/. Крысы получают гиперхолестериновую диету /ГХД/: 2,5% холестерина, 0,12% 6-метилтиоурацила и 30% смеси жиров /прогретое подсолнечное масло и свиной жир в соотношении 1: 1/. Испытуемый препарат вводят интраназально в разведении 1:10 по 1 капле в течение 24 дней. Об антиоксидантной активности целевого продукта судят по содержанию гидроперекисей липидов в плазме крови.

Контроль 1 - прототип. Контроль 2 - незащищенные крысы.

Результаты испытания приведены в табл. 2.

Пример 3. Раствор меда получают как в примере 2, а по окончании инкубирования раствор меда осветляют центрифугированием на лабораторной центрифуге в течение 30 мин при 2000 об/мин. Порции полученного препарата замораживают до образования льда при температуре -10^oC, поглощенные дозы гамма-облучения составляют: 0,1 кГр; 25 кГр; 100 кГр.

Испытание гепатозащитного действия препарата проводят на белых мышах /по 9 - 12 особей в группе/. Его вводят в разведении 1:100 интраназально по 50 мкл в течение 10 дней, затем проводят однократную затравку мышей четыреххлористым углеродом /CCl₄/ внутрибрюшинно по 0,2 мл 25%-ного масляного раствора CCl₄. Действие препарата оценивают по выживаемости мышей в течение 4 суток.

Контроль 1. Мышей защищают облученным препаратом той же серии, но без предварительного замораживания /прототип/.

Контроль 2. CCl₄ вводят незащищенным мышам.

Результаты приведены в табл. 3.

Пример 4. Раствор меда получают как в примере 3. Порции полученного препарата замораживают до образования льда при температуре -10^oC, поглощенные дозы гамма-облучения составляют: 0,1 кГр, 25 кГр.

Испытание на противовирусное действие проводят на модели переживающих фрагментов хорионаллантоисной оболочки /ФХАО/ куриных эмбрионов. Для этого вирус гриппа A/Гонконг/1/68/H₃N₂/ с инфекционной активностью 100 ЭИД₅₀/0.2 мл вносят в лунки планшетки с ФХАО в культуральной среде 199 и инкубируют 1 ч при 37^oC в течение 3 суток, после чего определяют остаточную инфекционную активность /ИА/ вируса титрованием на куриных эмбрионах. Результаты приведены в табл. 4.

Контроль 1. Зараженные клетки, обработанные биологически активным раствором меда данной партии, не подвергавшимся замораживанию перед облучением /прототип/.

Контроль 2. Зараженные клетки, не обработанные защитным средством.

Пример 4. Приготовление и испытание препаратов осуществляли как в примере 4, но облучали предварительно замороженную при температуре -10^oC субстанцию "Витамедина-М" потоком ускоренных электронов, получаемым на ускорителе "Элит-2" /длительность импульса 3 мксек, энергия электронов 1,5 МэВ/т и доза облучения составила 100 кГр. Результаты приведены в табл. 4.

Радиационная обработка субстанции "Витамедина-М" дозами облучения более 100 кГр экономически нецелесообразна, а дозами облучения менее 0,1 кГр не приводит к ощутимому положительному эффекту от облучения.

Как видно из табл. 1, 2, 3 биологическая активность полученного заявляемым способом лекарственного средства "Витамедин-М" по ряду показателей сохранена на уровне показателей препарата, полученного способом-прототипом.

Как видно из табл. 4 противовирусная активность препарата "Витамедин-М", полученного заявляемым способом на 30% выше, чем у полученного по способу-прототипу.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить лекарственное средство "Витамедин-М" с более высокой противовирусной активностью при сохранении всего комплекса лечебных свойств препарата.