способ получения иммуноглобулина человека антистафилококкового для внутривенного введения

Формула изобретения

Способ получения иммуноглобулина человека антистафилококкового для внутривенного введения, включающий спиртовое фракционирование плазмы доноров с содержанием антиальфастафилолизина в котловой загрузке не менее 4 МЕ/мл и отличающийся тем, что сухой осадок иммуноглобулина растворяют в 2%-ном растворе глюкозы, проводят кислотно-ферментативный гидролиз раствора иммуноглобулина в течение 18 ч с последующим удалением фермента гелем гидроокиси алюминия, доводят pH раствора до 6,5 - 7,5, выстаивают в течение 1 - 3 месяцев для образования осадка нестабильных компонентов, центрифугируют при 6000 об/мин, проводят стерилизующую фильтрацию и получают целевой продукт с содержанием антиальфастафилолизина не менее 20 МЕ/мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к производству специфических иммуноглобулинов для внутривенного введения.

Иммунную плазму, содержащую антитела к стафилококковому экзотоксину, заготавливают методом плазмафереза от доноров, имеющих естественные антитела к экзотоксину или специально вакцинированных стафилококковым анатоксином. Плазма должна быть проверена на отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита B (HB Ag) и антител к вирусу иммунодефицита человека, а также на гепатит C. Содержание антиальфастафилолизина в плазме доноров должно быть не ниже 4,5+0,5 МЕ/мл.

Прототипом изобретения является способ получения иммуноглобулина антистафилококкового человека жидкого для внутримышечного введения (ФС 42-3158-95, срок введения установлен с 3.10.85 г., срок действия до 31.12.2000 г.).

Известно, что иммуноглобулин антистафилококковый человека жидкий для внутримышечного введения обладает рядом существенных недостатков, а именно: в мышце разрушается до 30% введенного препарата, невозможно быстро достичь лечебной дозы, он обладает высокой антикомплементарной активностью, которая не позволяет вводить его внутривенно.

Целью настоящего изобретения является получение иммуноглобулина антистафилоккокового человека для внутривенного введения с низкой антикомплементарной активностью.

Иммунную плазму доноров фракционируют этанолом при температуре ниже 0^oC (метод Кона), сырой осадок иммуноглобулина лиофилизируют, сухой порошок растворяют в 2% растворе глюкозы, обрабатывают пепсином в слабокислой среде в течение 18 часов, нейтрализуют пепсин гидроокисью алюминия, доводят pH раствора до 6,5-7,5, проводят стерилизующую фильтрацию и выстаивание препарата при температуре +4 - +6^oC для формирования осадка нестабильных белков, причем для ускорения выпадения осадка препарат прогревают при температуре +37^oC в течение 24 часов, удаляют осадок центрифугированием при 6000 об/мин и после осветляющей и стерилизующей фильтрации получают целевой продукт.

Пример. Иммунную плазму, содержащую антитела к стафилококковому экзотоксину, в количестве 84 л получили методом плазмафереза от доноров, имеющих естественные антитела и специально вакцинированных стафилококковым анатоксином. В котловой загрузке содержание антиальфастафилолизина составило 4,5 МЕ/мл.

Выделение специфической иммуноглобулиновой фракции проводят спиртовым методом Кона при низких температурах. Фракционирование ведут до стадии сухого порошка.

426 г (21 флакон) растворяют в 2% р-ре глюкозы, pH раствора доводят до 3,9-4,1 и добавляют пепсин с активностью не менее 2000 ед. в кол-ве 25-50 мл на 100 г белка и в течение 1 часа перемешивают. Через 18 часов протеолиза при температуре +37^oC нейтрализуют избыток пепсина гидроокисью алюминия, pH р-ра доводят до 6,5-7,5, проводят остветляющую и стерилизующую фильтрацию и выстаивание препарата в течение 1-3 месяцев при температуре +4 - +6^oC для формирования осадка нестабильных белков. Для ускорения выпадения осадка препарат прогревают при температуре +37^oC в течение 24 часов. Выпавший осадок удаляют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 40 мин. Стерилизуют раствор фильтрацией, получают 3,5 л готового препарата с титром антиальфастафилолизина 2 МЕ/мл, который разливают во флаконы емкостью 50 мл по 25 мл целевого продукта.

Таким образом было получено 25 серий иммуноглобулина в лаборатории препарата крови Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Иммуноглобулин антистафилококковый человека для внутривенного введения представляет собой жидкость бесцветную, прозрачную и слегка опалесцирующую.

Фракция иммуноглобулина составляет не менее 100% общего белка.

Содержание белка в среднем 5%.

Фракционный состав: на иммуноэлектрофореграмме должна выявляться интенсивная дуга преципитации IgG и не более одной дополнительной дуги.

Молекулярные параметры: мономеры в среднем 80%, димеры не более 4%, фрагменты не более 16%.

Специфическая активность: содержание антиальфастафилолизина составляет в 1 мл не менее 20 МЕ, в дозе не менее 500 МЕ.

По сравнению с прототипом препарат обладает низкой антикомплементарной активностью; в присутствии не менее 10 мг белка иммуноглобулина 2 единицы CH₅₀ (комплемента) должны сохранять гемолитическую активность.

Иммуноглобулин антистафилококковый человека для внутривенного введения стерилен, апирогенен, нетоксичен.

Назначение препарата - лечение заболеваний стафилококковой этиологии, сопровождающихся бактериемией и септическим состоянием.

Проведены Государственные клинические испытания, утверждена Временная фармакопейная статья, написан лабораторный регламент, утверждена Инструкция по клиническому применению иммуноглобулина антистафилококкового человека для внутривенного введения.

Таким образом, получен новый препарат для лечения заболеваний стафилококковой этиологии, имеющий существенные отличия от прототипа и нашедший применение в учреждениях здравоохранения.