способ терапии поллиноза

Формула изобретения

Способ терапии поллиноза путем эндоназального электрофореза лекарственного вещества, на курс 10 процедур, отличающийся тем, что в качестве лекарственного вещества вводят супернатант культуры аутологичных мононуклеарных клеток, стимулированных фитогемагглютинином, в количестве 1 - 2 мл с концентрацией белка 150 - 200 мкг/мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии - аллергологии. Оно может быть использовано в клинике для лечения больных поллинозом.

Известно, что одним из общеизвестных способов лечения поллинозов является специфическая иммунотерапия (СИТ). По данным литературы существует много методов СИТ, в том числе специфическая электрофоретическая иммунотерапия (Э. И. Салимов А.М. Львович. Наследственность и сравнительная эффективность различных методов специфической гипосенсибилизации при поллинозах у детей - Педиатрия, 1989, N 6).

Известен способ терапии поллиноза путем эндоназального электрофореза интала, на курс 10 процедур (Беспалько Н.Н. и др. "Эндоназальный электрофорез интала для профилактики и лечения поллиноза у детей в условиях санатория", опубликованный в сб. "Актуальные вопросы санаторно-курортного лечения детей с нетуберкулезными заболеваниями". Тезисы докладов 2-ой Всероссийской конференции, Евпатория, 1988 г., с.82.

Недостаток способа состоит в том, что клинический эффект при назначении мембраностабилизаторов, в том числе и интала, возможен только при продолжительном их применении, что в условиях электрофоретического способа введения может быть показано не всем больным.

Сущность предложенного способа состоит в том, что больному в период ремиссии заболевания вводят методом электрофореза эндоназально супернатант культуры аутологичных мононуклеарных клеток (МНК), стимулированных фитогемагглютинином (ФГА), в количестве 1-2 мл на каждую процедуру, с концентрацией белка 150-200 мкг/мл в течение 10 дней.

Введение в шоковый орган супернатанта аутологичных МНК обеспечивает поступление комплекса природных цитокинов (КПЦ), таких как интерлейкин-1, интерлейкин-2, интерлейкин-6, - интерферон и фактор некроза опухоли, запускающих локальный цитокиновый каскад. В то же время, - интерферон, интерлейкин-2 контролируют аллергический ответ путем регуляции продукции В-лимфоцитами иммуноглобулинов Е.

Возможность электрофоретического введения КПЦ с положительного полюса обусловлена тем, что они являются кислыми полипептидами с низким молекулярным весом (<80 КД).

Эндоназальное введение КПЦ обусловлено тем, что полость носа это один из шоковых органов при поллинозах, при воздействии на которую постоянным током возникает не только местная, но и общая ответная реакция всего организма. Как известно положительное действие постоянного тока заключается не только в разнообразных физико-химических метаболических и клеточных реакциях, направленных на мобилизацию систем защиты, но и в создании благоприятного фона для специфического действия веществ, вводимых с его помощью.

При выборе дозировки вводимого комплекса нами учитывался тот факт, что при электрофоретическом методе введения в организм поступает небольшой процент лекарственного вещества, в отличие от аппликационного применения КПЦ на раневую поверхность. Дозировка по белку, учитывая выше сказанное, увеличена до 150-200 мкг/мл в сравнении с применением КПЦ при других видах патологии.

Объем КПЦ на каждую процедуру может колебаться от 1,0 до 2,0 мл в зависимости от физиологических особенностей шокового органа и выбран нами потому, что именно это количество жидкости необходимо и достаточно для проведения одной процедуры эндоназального электрофореза.

Способ осуществляется следующим образом. У больного в период ремиссии заболевания проводят забор 20 мл венозной крови из кубитальной вены в стерильную силиконизированную пробирку, содержащую 0,5 мл гепарина (5000 ед/мл). Из этой крови выделяют мононуклеарные клетки путем центрифугирования на градиенте плотности фиколл-верографина. Выделенные клетки трижды отмывают раствором Версена и готовят взвесь их в концентрации 510⁶ мл в среде 199. К полученной взвеси добавляют 80 мкг/мл гентамицина и ФГА из расчета 20 мкг/мл, затем инкубируют 3 часа в термостате при температуре 37^oC. Удаляют стимулятор, трижды отмывая раствором Версена, продолжают культивировать 20 часов в бессывороточной среде при температуре 37^oC. Отделяют аутологичный супернатант путем центрифугирования взвеси мононуклеарных клеток в течение 10 минут при 1500 об/мин. Супернатант расфасовывают в стерильные флаконы по 2 мл и хранят при температуре - 20^oC. К оставшемуся клеточному осадку добавляют среду 199 и гентамицин до первоначального объема, инкубируют в термостате при температуре 37^oC в течение 24 часов. Аутологичный супернатант отделяют аналогичным образом. Эти процедуры проводят в стерильных условиях с соблюдением правил асептики и антисептики. Полученные супернатанты фильтруют через стерильные фильтры synpore или millipore 0,22. Биологическую активность супернатанта оценивают в тесте фагоцитарной активности нейтрофилов. Количество общего белка в супернатанте определяют по Лоури спектрофотометрическим методом.

Больному вводят ежедневно 1-2 мл супернатанта с концентрацией белка 150-200 мкг/мл в полость носа методом эндоназального электрофореза с положительного полюса аппарата Поток-1 в течение 10 дней. Плотность тока при электрофоретическом введении супернатанта от 0,2-2 мА/см², длительность процедуры от 10 до 25 минут в зависимости от индивидуальной чувствительности организма к постоянному току.

Пример. Больной Л..., 36 лет, диагноз при поступлении: поллиноз; сенсибилизация к пыльце злаковых трав и культурных злаков; риноконъюнктивальный синдром; трахеобронхит средней степени тяжести, период межсезонной ремиссии.

Анализ крови при поступлении: Э-4,5510¹²/л; Hb- 149 г/л; Ц.П.-0,99; Л-4,4110⁹/л; Э-3%; n-3%; С-69%; Лф-18%; М-6%; СОЭ-3 мм/час. Иммунограмма: Е-РОК-80%; Тфр-РОК-60%; Тфч-РОК-8%; ИРИ-7,5; ФИ-60%; ФЧ-7,0; IgA-1,5 г/л; IgM-0,55 г/л; IgG-8,5 г/л; IgE-273 МЕ/мл; ЦИК-0,9 г/л. Кожное тестирование с пыльцевыми аллергенами: ежа сборная ++++; овсяница ++++; мятлик +++; райграс +++; тимофеевка ++; рожь -; лисохвост -. Провокационный назальный тест положительный при концентрации аллергена ежа сборная 10^-5.

Больному накануне палинации растений вводили в полость носа по общему носовому ходу КПЦ методом эндоназального электрофореза с положительного полюса аппарата Поток-1. Объем супернатанта на каждую процедуру составил 2 мл, количество белка в супернатанте 150 мкг/мл, продолжительность процедуры 20 минут, курс лечения 10 процедур. Побочных реакций во время лечения не наблюдалось. Однако на 2-ой и 7-ой процедурах появились кратковременные, самостоятельно купирующиеся субъективные ощущения в виде заложенности носа, ринореи, чихания и зуда глаз.

После 10 процедуры (по окончании лечения) анализ крови: Э-4,3110¹²/л; Hb-142 г/л; Ц.П-0,99; Л-6,4410⁹/л; Э-2%; n-5%; C-57%; Лф-24%; М-12%; СОЭ-2 мм/час. Иммунограмма: Е-РОК-60%; Тфр-РОК-64%; Тфч-РОК-16%; ИРИ-4,0; ФИ- 62%; ФЧ-6,0; IgA-1,4 г/л; IgM-1,0 г/л; IgG-7,05 г/л; IgE-226 МЕ/мл; ЦИК-0,6 г/л. Чувствительность шокового органа ежи сборной при провокационном назальном тесте снизилась на 1 балл (10^-4) по сравнению с (10^-5). Степень сенсибилизации к пыльцевым аллергенам ежи сборной, тимофеевки, овсяницы, мятлика, райграса при контрольном кожном тестировании осталась прежней.

В катамнезе в период палинации растений наблюдали за степенью выраженности клинических симптомов, объемом медикаментозной терапии и продолжительности обострения заболевания.

В катамнезе после палинации растений проводили оценку эффективности лечения по балльной системе (по А.Д.Адо), она составила 3 балла (хорошо).

Под наблюдением находилось 16 больных в период ремиссии заболевания. Все больные были разделены на две группы: основную и контрольную. При балльной оценке показателей клинических симптомов в обеих группах до лечения достоверных различий не было.

Основная группа составила 7 человек в возрасте от 15 до 36 лет, средний возраст 29,8 лет, из них 5 мужчин, женщин - 2; контрольная состояла из 9 человек в возрасте от 19 до 35 лет, средний возраст 27,7 лет, из них мужчин - 4, женщин - 5.

Больным основной группы вводили КПЦ методом эндоназального электрофореза N 10, больным контрольной группы проводили сит ускоренным методом путем подкожного введения аллергенов.

В катамнезе в период палинации растений наблюдали за степенью выраженности клинических симптомов, объемом медикаментозной терапии и продолжительностью обострения заболевания. Эффективность лечения в каждой группе оценивали в катамнезе по балльной системе А.Д.Адо. В результате эндоназального электрофоретического введения КПЦ отмечалась четкая тенденция к снижению степени выраженности клинических симптомов заболевания в период палинации растений.

Использование предложенного метода лечения больных поллинозом имеет следующие преимущества:

1. Процедура введения КПЦ атравматична;

2. Сокращение сроков лечения;

3. Отсутствие риска развития реакций на аллергены.