"антибак" - ингибитор роста болезнетворных бактерий

Формула изобретения

Применение высушенных корок плода граната в качестве ингибитора роста болезнетворных желудочно-кишечных бактерий, таких как салмонеллы и холерные вибрионы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в качестве лекарственного средства против Vibrio cholerae El-Tor, Salmonella typhimurium и Shigella Flexneri 2a.

Известно, что при инфекции данными микробами основными клиническими проявлениями являются поражения желудочно-кишечного тракта, общая интоксикация и нарушение водно-солевого обмена (Медицинская микробиология. - М.: Медгиз, 1958, с. 215, 220, 225). Холерный вибрион относится к наиболее опасным возбудителям. Известно также, что основными средствами лечения и профилактики холеры успешно применяют бактериофаг, тетрациклин, стрептомицин и другие антибиотики, а для устранения обезвоживания организма назначают внутрь солевые растворы. Причем в зависимости от сложности течения заболевания терапия должна быть дифференцированной с применением в комплексе различных терапевтических препаратов (Руднев Г. П. Клиника особо опасных инфекций. - М., 1966, с. 188-191). В основном, общие меры борьбы с холерным вибрионом те же, что и при других кишечных инфекциях, например, бактериальной дизентерии. Известно, что бактериальная дизентерия вызывается группой дизентерийных бактерий, которые поражают нервный аппарат тонкого и толстого кишечника (Медицинская микробиология. - М.: Медгиз, 1958, с. 218-220). К представителям патогенных микробов, поражающих желудочно-кишечный тракт, относится и группа возбудителей, называемых салмонеллами, которые кроме пищевых токсикоинфекций могут послужить причиной заболеваний, протекающих подобно дизентерии, особенно у маленьких детей. Использование широкого спектра лекарств и множественности процедур в процессе лечения желудочно-кишечных инфекций следует отнести скорее к недостаткам, чем к достоинствам. Лечение усложняется еще и тем, что при применении сульфаниламидов и антибиотиков происходят количественные и качественные изменения микрофлоры кишечника в сторону их уменьшения (дисбактериоз). Это приводит к снижению сопротивляемости организма, к инфекциям, что вынуждает применять биологические препараты, получаемые из микробов (колибактерин, лактобактерин и др.). Поэтому, для лечения желудочно-кишечных заболеваний необходимо изыскание иных, более эффективных препаратов в сравнении с имеющимися.

Цель изобретения - повышение эффективности ингибирования роста микробных бактерий, вызывающих острые желудочно-кишечные заболевания. Данная цель достигается тем, что в качестве средства ингибирования бактерий применяется экстракт из растительной природы, который получают из высушенных корок плода граната. Гранат (Punica granatum L.) - субтропический плодовый кустарник или небольшое дерево из семейства гранатовых (Гутиев Г.Т. Субтропические плодовые растения. - М., 1958, с. 189-194). В медицинской практике корки плода граната применяются в виде отваров или экстрактов. Кроме того, настой из кожуры плодов дается при лихорадках и поносе (Деревья и кустарники в СССР. - М.-Л., Из-во АН СССР, 1958. Т. 4, с. 911-917), а также при заболевании дизентерией (Скляревский Л.Я. Целебные свойства пищевых растений. - М.: Россельхозиздат, 1975, с. 189).

Отвары или экстракты корок граната ранее нигде не применялись в качестве лекарственных средств при инфекциях, вызванных холерными вибрионами, и токсикоинфекциях, вызванных представителями салмонелл. Поэтому, исследования по оценке антибактериальной активности экстракта из корок граната, названного "Антибак", были проведены на модели Vibrio cholerae El-Tor, а также в отношении музейных штаммов Salmonella typhimurium и Shigella Flexneri 2a.

Использование штамма Salmonella typhimurium диктовалось тем, что он устойчив к большинству антибиотиков (гентамицин, левомицетин, ампициллин, тетрациклин и др.). Умеренно устойчив к полимексину. Штамм Shigella Flexneri 2a устойчив к ампициллину, тетрациклину; умеренно устойчив к левомицитину, амикацину; чувствителен к канамицину, полимексину, цефалотину, гентамицину. Проверка на различных представителях кишечных инфекций давала возможность не только оценить антибактериальную активность препарата "Антибак", но и показать его универсальность.

При подготовке к исследованию определяли активность культуры штамма Vibrio cholerae El-Tor путем ее разведения в физиологическом растворе с 10⁹ до 10¹ кл./мл с дальнейшим высевом каждого разведения на чашки Петри по 0,1 мл и выдерживанием в течение суток при 37^oC. Далее подсчет колоний. Для приготовления экстракта брали 9 г препарата "Антибак" и заливали кипятком дистиллированной воды объемом 150 мл. Смесь выдерживали 30 мин при 37^oC. Перед использованием смесь перемешивали и после отстаивания (1 мин.) отделяли надосадочную жидкость (экстракт) от осадка. При проведении испытаний 4,5 мл экстракта смешивали с 1,0 мл суспензии культуры в разведениях 10⁶ - 10⁹ кл. мл^-1. Выдерживали 3 часа при 37^oC, затем добавляли еще 4,5 мл экстракта, после чего пробирки помещали в термостат на 24 часа при температуре 37^oC. По истечении времени из каждого разведения высеивали по 0,1 мл на чашки Петри, выдерживали сутки при 37^oC, после чего осуществляли подсчет колоний. Контроль опыта ставился по аналогичной методике, но вместо экстракта применялся физиологический раствор в указанном объеме.

Результаты испытаний представлены в табл. 1. Испытания проведены на базе 736 Центра санитарно-эпидемиологического надзора МО РФ.

Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что препарат "Антибак" обладает высокой антибактериальной активностью в отношении Vibrio cholerae El-Tor.

Высокая эффективность препарата, очевидно, связана с тем, что экстракт имеет кислую среду (pH равен 4,0), поэтому подавляет рост бактерий. Возможен и другой механизм действия.

При выявлении ингибирующего действия препарата "Антибак" в отношении штаммов Salmonella typhimurium и Shigella Flexneri 2a технология приготовления экстракта была несколько изменена. Так, до смешивания корок граната с экстрагентом их диспергируют до состояния порошка с целью большего извлечения из корок активно действующих компонентов. Кроме того, порошок заливали кипящим экстрагентом в различных соотношениях для установления оптимального объема экстрагента. Время экстрагирования на водяной бане составляло 30 мин. После чего смесь центрифугировали 10 мин при 1,5 тыс. обмин^-1, затем отделяли экстракт от осадка. Центрифугирование осуществляли с целью получения однородной жидкости. В опыте использованы микробные культуры в разведениях 10⁸-10⁶ микробных тел в 1,0 мл. В ходе исследований по каждому штамму смешивались равные объемы разведений экстракта препарата и музейного штамма: по 1 мл каждого. Конъюгаты инкубировали при 37^oC в течение 18 часов с последующим высевом на плотные питательные среды и дальнейшей инкубацией в течение 20 часов при температуре 37^oC. Затем проводили подсчет колоний. Контролем служили разведения культур с последующим высевом на плотную среду. Результаты испытаний представлены в табл. 2.

Кроме того, за 15 лет "Антибак" был испытан автором на многих десятках заболевших добровольцев. Он применялся измельченным и неизмельченным в виде водных настоев и отваров без добавления и с добавлением различного количества спирта, спиртовых настоев различных концентраций, для жевания. Получены хорошие результаты. Например, для излечения от дизентерии достаточно выпить 200 мл водного настоя 10-12 г "Антибака" и выздоровление наступает через 4-6 часов. Учитывая, что "Антибак" одинаково хорошо бьет in vitro дизентерию, салмонеллез и холеру, имеются основания полагать, что выздоровление больных холерой и салмонеллезом наступит примерно через такое же время.

Данные таблицы 2 свидетельствуют о том, что препарат "Антибак" обладает высокой бактериальной активностью в отношении штаммов Salmonella typhimurium и Shigella Flexneri 2a.