способ прогнозирования эффективности фетальной терапии у больных с онкологическими заболеваниями

Формула изобретения

Способ прогнозирования эффективности фетальной терапии у больных с онкологическими заболеваниями, включающий обследование больного, отличающийся тем, что до начала лечения выделяют лимфоциты из крови пациента, проводят из инкубацию с фетальным протеином, определяют относительное количество T-супрессорных/цитотоксических (СД8⁺) лимфоцитов и Т-хелперных/индукторных (СД4⁺) лимфоцитов и при превышении количества СД8⁺-лимфоцитов количества СД4⁺-лимфоцитов на 15% и более прогнозируют положительный эффект фетальной терапии у больного с онкологическим заболеванием.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения фетальными протеинами больных с онкологическими заболеваниями.

Известен способ лечения онкологических больных препаратами, в состав которых входит фетальный протеин (RU 2026687 C1), при котором можно прогнозировать эффективность лечения по количеству вводимого фетального протеина в смеси с остальными лекарственными средствами. Однако прогнозировать эффективность лечения согласно способу можно лишь в процессе лечения, пролонгируя действие препарата.

Более близок к предлагаемому способу является способ, при котором использовали альфа-фетопротемн в составе экстракта из абортивного материала человека (RU 2026688 C1). Однако эффективность терапии оценивают только в процессе лечения и только in vivo.

Предлагаемое изобретение позволяет прогнозировать эффективность фетальной терапии у больных с онкологическими заболеваниями до начала лечения и только in vitro.

Техническим результатом является увеличение количества Т-супрессорных/цитотоксических (СД8⁺) лимфоцитов по сравнению с Т-хелперными/индукторными (СД4⁺) лимфоцитами у больных с онкологической патологией после инкубирования клеток с фетальными протеинами до начала лечения фетальными препаратами.

Сущность изобретения в том, что до начала лечения выделяют мононуклеары - лимфоциты из крови пациента, проводят их инкубацию с фетальным протеином, определяют относительное количество Т-супрессорных/цитотоксических (СД8⁺) лимфоцитов и Т-хелперных/индукторных (СД4⁺) лимфоцитов и при превышении количества СД8⁺) лимфоцитов и при превышении количества СД8⁺ лимфоцитов количества СД4⁺ лимфоцитов на 15 и более процентов прогнозируют положительный эффект фетальной терапии у больного с онкологическим заболеваниям.

Способ осуществляется следующим образом. В стерильных условиях производят забор крови в центрифужную пробирку с гепарином (3 мл.крови и 1 капля гепарина). Кровь смешивают с равным объемом среды Игла, подслаивают градиент фикола-верографина (пл. -1,077 г/мл). Пробирку центрифугируют при 1,5 тыс. об/мин 15-45 мин. После центрифугирования слой моноцитов собирают, переносят в пробирку с 10 мл раствора Хенкса, центрифугируют 5-7 мин при 1,5 тыс. об/мин. Процедуру отмывки клеток центрифугирование повторяют сливанием надосадочной жидкости и внесением свежей порции раствора Хенкса. Выделенные молекулярные клетки смешивают с равным объемом фетального протеина-водносолевого экстракта эмбриона человека (абортивный материал на 10-12 неделе беременности), с концентрацией белка 0,9 мг/мл или альфа-фетопротеина, выделенного из абортивного материала человека или из пуповиной крови в концентрации 1 мг/мл и инкубируют при 37^o 1 час. Повторяют отмывку клеток, добавление 1 мл раствора Хенкса и среды 199 до 10 мл с последующим центрифугированием при 1,5 тыс. об/мин 5 мин. Надосадочную жидкость сливают в осадок и ресуспендируют в 50 мкл среды 199. В 2 пластиковые пробирки вносят по 25 мкл выделенных клеток, в одну добавляют 10 мкл мышиных моноклональных антител - ИКО-86 - маркер СД4⁺ лимфоцитов, в другую 10 мкл мышиных моноклональных антител -ИКО-31-маркер СД8⁺ лимфоцитов и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем вносят по 500 мкл раствора Хенкса, центрифугируют при 1,5 тыс.об/мин. Среду сливают, добавляют по 10 мкл антител, меченных изотиоцианатом флюресцеина против иммуноглобулинов мыши, перемешивают и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Вносят по 1 мл раствора Хенкса, центрифугируют при 1,5 тыс. об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливают, добавляют по 1 мл раствора Хенкса, в котором ресуспендируют осадок и вновь центрифугируют в аналогичном режиме. Надосадочную жидкость сливают и 10 мкл осадка из каждой пробирки помещают на предметное стекло и прикрывают покровным стеклом. Подсчет клеток производят под люминесцентным микроскопом с масляной иммерсией, объектив 90^x, скуляр 7^x. Подсчитывают относительное количество СД8⁺ и СД4⁺ - лимфоциты определяют процент превышения СД8⁺ лимфоцитов над СД4⁺ - лимфоцитами.

В таблице приведены данные, отражающие результаты, полученные с помощью предлагаемого способа.

Из таблицы видно, что в группе больных с онкологическими заболеваниями с положительным эффектом от фетальной терапии до начала лечения отмечается в среднем превышение относительного количества СД8⁺-лимфоцитов над СД4⁺ - лимфоцитами на 26,173,65% (мин.-15,05 и макс.-42,86%). В результате фетальной терапии у больных этой группы получен распад опухоли, исчезновение метастазов.

У больных с отсутствием положительного эффекта от фетальной терапии до начала лечения фетальными протеинами не отмечено превышение количества СД8⁺ - лимфоцитов над СД4⁺ - лимфоцитами.