ферментационная среда для биосинтеза стрептомицина штаммом streptomyces griseus
Классы МПК: | C12P1/06 актиномицетов C12N1/20 бактерии; питательные среды для них C12P19/54 с циклогексильным радикалом, непосредственно связанным с атомами азота двух или более радикалов, например стрептомицина |
Автор(ы): | |
Патентообладатель(и): | Горин Сергей Евгеньевич, Колесникова Наталия Александровна |
Приоритеты: |
подача заявки:
1995-12-27 публикация патента:
20.05.1998 |
Изобретение относится к биотехнологии, к биосинтезу антибиотика стрептомицина штаммом streptomyces griseus. Для этого используется ферментационная среда, содержащая смесь глюкозы с другим углеводом (фруктоза, галактоза, мальтоза, лактоза, декстрин, крахмал), или смесь глюкозы с глицерином в соотношении 9:1 - 1:9, соответственно. Среда содержит также соевую муку, сульфат аммония, аммоний, (или калий) фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, карбонат кальция и воду. Среда позволяет повысить уровень образования стрептомицина при биосинтезе. 3 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5
Формула изобретения
Ферментационная среда для биосинтеза стрептомицина штаммом Streptomyces griseus, содержащая источники углерода, соевую муку, сульфат аммония, аммоний или калий фосфорно-кислый двузамещенный, натрий хлористый, карбонат кальция и воду, отличающаяся тем, что в качестве источника углерода она содержит смесь глюкозы с другим углеводом, выбранным из группы фруктоза, галактоза, мальтоза, лактоза, декстрин, крахмал, или смесь глюкозы с глицерином в соотношении 9 : 1 - 1 : 9 соответственно при следующем соотношении компонентов, %:Смесь глюкозы с другим углеводом или глицерином - 7 - 15
Соевая мука - 2 - 6
Сульфат аммония - 1,5 - 2,5
Аммоний (или калий) фосфорнокислый двузамещенный - 0,06 - 0,12
Натрий хлористый - 0,1 - 0,5
Карбонат кальция - 1,0 - 2,5
Вода - Остальноеа
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к производству антибиотиков, а именно к производству стрептомицина. Для биосинтеза стрептомицина используются комплексные среды, включающие соевую муку, аммоний сернокислый, калий или аммоний фосфорнокислый, мел, натрий хлористый и источник углерода. В качестве источника для биосинтеза стрептомицина испытано много веществ - глицерин, маннит, фруктоза, манноза, глюкоза, мальтоза, декстрин, крахмал, жир [1] . Наивысшая активность получена при использовании глюкозы - 9000 мкг/мл на среде с 7% глюкозы [2]. Указанная среда выбрана в качестве прототипа. Недостатком прототипа является низкий уровень образования стрептомицина. Цель предлагаемого изобретения - повышение уровня образования стрептомицина при биосинтезе. Указанная цель достигается использованием новой ферментационной среды, в которой источником углерода служит смесь глюкозы с другим углеводом или глицерином. Это позволяет значительно (до 30-40%) повысить выход антибиотика в процессе ферментации. Положительный эффект подтвержден на примере трех штаммов продуцентов стрептомицина, относящихся к виду Streptomyces griseus - C-5, C-6 и C-7. Максимальный уровень образования стрептомицина - 28000 мкг/мл - получен со штаммом C-7 на среде с 5,5% глюкозы и 5,5% крахмала (общее содержание углеводов 11%, см. пример 3). Полученный эффект можно объяснить более точной настройкой метаболизма штаммов продуцентов на биосинтез стрептомицина при использовании в ферментационной среде смеси определенных источников углерода в определенном соотношении и количестве. В общедоступной литературе мы не нашли сведений об использовании при биосинтезе стрептомицина сред с двумя углеводами или смесью углевода и глицерина. Таким образом, предлагаемое изобретение обладает новизной. Ввиду широкого использования в здравоохранении и большой коммерческой значимости антибиотиков, вопросам их биосинтеза посвящено огромное количество работ (см. , например, [3]). До сих пор, однако, не создано надежной теоретической базы, указывающей закономерный путь оптимизации состава питательных сред для биосинтеза. Как и создание штаммов продуцентов, создание ферментационных сред до сих пор в значительной мере эмпирический процесс. Один и тот же подход может дать совершенно разные результаты не только в применении к продуцентам разных антибиотиков, но и в случае разных штаммов продуцентов одного и того же антибиотика. Следовательно, использованный для создания изобретения подход (замена части глюкозы в среде на другой углевод или глицерин) не следует явным образом из уровня техники. Пример 1. Продуцент стрептомицина Streptomyces griseus штамм C-5 (использованный в процессе по прототипу штамм-продуцент недоступен, поэтому в примере использован доступный штамм C-5 с близким уровнем активности) выращивают в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащих 80-100 мл среды следующего состава (по прототипу, в %): глюкоза - 4, декстрин - 0,2, соевая мука - 3, [NH4]2SO4 - 0,55, KH2PO4 - 0,005, NaCl - 0,2, CaCO3 - 0,65, вода - остальное. Процесс роста продолжается 48 ч при 26oC на качалке. Затем инокулюм в количестве 20-25% переносят в колбы Эрленмейера, содержащие 50 мл ферментационной среды следующего состава (по прототипу, в %): глюкоза - 7, соевая мука - 3, [NH4] 2SO4 - 1,05, NaCl - 0,25, KH2PO4 - 0,0025, CaCO3 - 0,9, вода - остальное. Ферментация протекает при 26oC. Уровень образования стрептомицина - 10000 мкг/мл. Пример 2. Посевной материал штамма C-5 выращивают по примеру 1. Ферментацию проводят как в примере 1, но на средах иного состава. Изменяется суммарное содержание источников углерода в среде и их сочетание, а также концентрация всех прочих веществ. Составы сред и соответствующие им уровни образования стрептомицина приведены в табл. 1 и примечаниях к ней. Превышение активности на средах с двумя источниками углерода колеблется от 7% (глюкоза + глицерин) до 23% (глюкоза + лактоза). Пример 3. Для биосинтеза используется штамм C-6. Выращивание посевного материала и ферментацию осуществляют как в примере 2. Уровни образования стрептомицина приведены в табл. 2. Превышение активности на средах с двумя источниками углерода колеблется от 11% (среды с глицерином, фруктозой, галактозой, лактозой) до 25% (среда с мальтозой). Пример 4. Для биосинтеза стрептомицина используется штамм C-7. Выращивание посевного материала и ферментацию проводят как в примере 2. Уровни образования стрептомицина приведены в табл. 3. Превышение активности колеблется от 9,5% (среда с глицерином) до 33% (среда с крахмалом). Литература1. Demain A. L. and E.Inamine (1970). Biochemistry and regulation of streptomycin and mannosidostreptomycinase formation. - Bacteriol. Rev., Vol. 34, No. 1, pp.1-19. 2. Singh A. , E.Bruzelius and H.Heding (1976). Streptomycin. A fermentation study. - Eur. J.Appl. Microbiol., Vol. 3, N 2, pp.97-101 (прототип)
3. Murray Moo-Young, ed. (1985). Comprehensive Biotechnology, Vol.3. - Pergamon Press. Oxford, New York, Toronto, Sydney, Frankfurt.
Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
Класс C12P19/54 с циклогексильным радикалом, непосредственно связанным с атомами азота двух или более радикалов, например стрептомицина