средство зволинского, обладающее иммунотропной, ранозаживляющей и антимикробной активностью и способ его получения

Формула изобретения

1. Средство, обладающее иммунотропной, ранозаживляющей и антимикробной активностью, характеризующееся тем, что оно представляет собой прозрачную жидкость, полученную из мочи беременных женщин, имеющую сопротивляемость порядка 800-1000 Ом и включающую комплекс гормонов и стероидов:

ТТГ - 0,08 - 1,3 мк МЕ/мл

ТТ₃ - 0,98 - 2,0 нмоль/л

ТТ₄ - 4,2 - 127,0 нмоль/л

СТ₃ - 4,2 - 6,5 нмоль/л

СТ₄ - 7,2 - 21,0 нмоль/л

Кортизол - 399 - 1019 нмоль/л

ФСГ - 8,25 - 27,7 мМЕ/мл

ЛГ - 1,8 - 14,8 мМЕ/мл

Пролактин - 6,6 - 788 мМЕ/л

ХГЧ - 11205 - 29500 мМЕ/мл

Эстрадиол - 18,984 - 315000 пм/л

Прогестерон - 5,4 - 2919 пм/л

Эстриол - 1,8 - 1,39 мг/сут

2. Способ получения средства, обладающего иммунотропной, ранозаживляющей и антимикробной активностью, заключающийся в том, что мочу беременных женщин отстаивают при пониженной температуре, образовавшийся осадок отделяют, а надосадочную жидкость нагревают и инкубируют при той же температуре, затем охлаждают, выделившийся осадок отделяют, а раствор подвергают катализу в электрическом поле до достижения сопротивляемости 800 - 1000 Ом, далее осуществляют стерилизующую фильтрацию при пониженной температуре.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что используют мочу беременных женщин 1 триместра.

4. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что мочу отстаивают при температуре 4 - 10^oС в течение 10 - 30 суток.

5. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что надосадочную жидкость нагревают до 37 - 40^oС и инкубируют при этой температуре до 3-х суток.

6. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что надосадочную жидкость после инкубации охлаждают до 18 - 20^oС.

7. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что стерилизующую фильтрацию проводят через миллипоровые фильтры (0,2 мкм), при давлении 0,2 атм и температуре 18 - 19^oС.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности. Группа изобретений касается биологически активного средства, регулирующего метаболические процессы и способа его получения.

Актуальность поиска средств, нормализующих обмен веществ при различных патологических нарушениях в организме человека, обусловлена широким спектром препаратов, используемых для этой цели (Машковский М.Д. - Медицина, М.: 1993, т.1, с. 634-714, т. с. 3-192).

Теоретический анализ эффективности препаратов показывает, что подобные средства представляют собой либо вещества, полученные путем химического синтеза, либо вещества биологического происхождения с однонаправленным конкретным действием.

Среди последних особую группу составляют соединения гормональной природы, которые управляют метаболическими процессами в организме как на стадии развития, так и в зрелом возрасте. В качестве таковых выступают гормоны, выделяемые передней долей гипофиза и влияющие на функции половых желез: фолликулостимулирующий гормон, лютеинизирующий гормон и пролактин.

В медицинской практике в качестве препарата, обладающего активностью фолликулостимулирующего гормона, применяют гонадотропин сывороточный и гонадотропин менопаузный, а препаратом, обладающим активностью лютеинизирующего гормона, является гонадотропин хорионический, получаемый из мочи беременных женщин (патент США N 3852422, патент ГДР N 274355, авт. свид. СССР N 537681, заявка Японии N 60-45852).

Поскольку использование известных высокоочищенных отдельных гормонов и стероидов не всегда давало положительный лечебный эффект, появились средства, которые содержат комплекс двух гормонов, как, например, в препарате пергонал, предназначенном для лечения эндокринного бесплодия. Кроме того, известно, что для лечения болезней иммунных комплексов и аллергических заболеваний оказались полезными выделенные из мочи человека протеазы мочевой кислоты (патент США N 4540569), а ингибиторы протеаз лечат воспалительные заболевания (патент США N 4479937). Показано также, что низкомолекулярные пептиды из мочи обладают противоопухолевой активностью (Европейский патент N 0069232).

Становится очевидным, что создавая средства, содержащие различные комбинации из гормонов и метаболитов, можно влиять на обмен веществ при различных патологических нарушениях.

Однако полученные к настоящему времени препараты не могут полностью удовлетворить потребности медицины, поскольку не обладают комплексом необходимых свойств, обеспечивающих возможность их эффективного применения. Кроме того, при использовании большинства из них требуется введение больших доз, что вызывает опасность побочных эффектов.

Задача изобретения - выбор условий получения из мочи беременных женщин препарата, обладающего широким спектром действия.

Согласно изобретению предлагается новое, не имеющее аналогов, средство, имеющее полигормональную природу, которое обладает одновременно иммунотропным, ранозаживляющим и антимикробным действием. Предлагаемый препарат не только является средством широкого действия, но в отличие от известных веществ, регулирующих обмен, обладает высокой активностью и не дает побочного действия.

Согласно изобретению создан принципиально новый, эффективный технологический процесс, который позволяет при минимальном количестве и простоте стадий получить продукт с высокой активностью.

В основе способа получения предлагаемого средства лежит использование в качестве материала мочи беременных женщин, при этом может быть полезной моча, взятая на любом сроке беременности от 1 до 9 мес.

При реализации способа принципиально важным является этап отстаивания собранной мочи в течение 10-30 сут, предпочтительно от 15 до 20 сут при температуре от 4 до 10^oС, предпочтительно от 4 до 6^oС. Осадок, образовавшийся после отстоя, отделяют декантированием, а жидкую часть обрабатывают нагреванием при 37-40^oС, инкубируют, охлаждают, фильтруют и проводят катализ раствора в электрическом поле до достижения сопротивляемости порядка 800-1000 Ом. Полученный раствор подвергают стерилизующей фильтрации при давлении 0,2 атм через миллипоровские фильтры 0,2 мкм при пониженной температуре, ампулируют и хранят в холодильной камере.

Готовый препарат представляет собой прозрачную жидкость. Проведенный химический анализ показал, что он включает комплекс различных гормонов и стероидов при следующем их содержании: ТТГ 0,08-1,3 мкМЕ/мл; ТТ₃ 0,98-2,0 нмоль/л; ТТ₄ 1,2 - 127,0 нмоль/л; СТ₃ 4,2 - 6,5 нмоль/л; СТ₄ 7,2 - 21,0 нмоль/л; кортизол 399 -1019 нмоль/л; ФСГ 8,25 - 27,7 мМЕ/мл; ЛГ 1,8 - 14,8 мМЕ/мл; пролактин 6,6 - 788 мМЕ/л; ХГЧ 11205 - 29500 мМЕ/мл; эстрадиол 18,984 - 315000 пм/л; прогестерон 5,4 - 2919 пм/л; эстриол 1,8 - 1,39 мг/сут. Препарат нетоксичен, не вызывает аллергической реакции.

Лекарственное средство имеетт действующее активное начало в количестве, эффективном для проявления иммуномодулирующего действия. Предпочтительное количество для обеспечения оптимального фармакологического эффекта при внутримышечном, внутривенном или подкожном введении составляет 0,5 - 10³ мл, при ежедневном введении либо через день в количестве от 1 до 10 инъекций до достижения положительного результата лечения.

Пример 1. Мочу беременной женщины первого триместра собирают, отстаивают при 4-6^oС в течение 30 сут, декантируют верхний слой, примерно 2/3, нагревают до 40^oС и инкубируют примерно трое суток. После инкубации охлаждают до 18^oС, фильтруют раствор через бумажный фильтр или центрифугируют, а жидкую часть подвергают катализу в электрическом поле до достижения сопротивляемости раствора порядка 800-1000 Ом. Затем проводят стерилизующую фильтрацию через миллипоровские фильтры 0,2 мкм при давлении 0,2 атм, 18-19^oС. Полученный препарат ампулируют в жидком виде и хранят в холодильной камере.

Препарат получен с характеристикой, описанной выше.

Пример 2. Собирают мочу беременных женщин последнего триместра, отстаивают ее не менее 10 дней при 5-10^oС. Осадок отделяют, надосадочную жидкость нагревают и инкубируют при 37-40^oС трое суток, охлаждают до 20^oС, выделившийся осадок отделяют, раствор подвергают катализу в электрическом поле до достижения сопротивления 800-1000 Ом. Стерилизующую фильтрацию и ампулирование готового препарата проводят также, как в примере 1. Полученный препарат имеет характеристику, указанную выше.

Оценка антимикробной активности.

Изучение активности препарата было проведено инвитро методом серийных разведений в соответствующей каждому микроорганизму питательной среде с последующим засевом тест-микробов на твердую питательную среду.

Всего для изучения микробиологической активности брали 7 культур. На питательную среду проводили посев микроорганизмов в концентрации 10², 10₃ и т.д. в 1 мл пептонной воды, тщательно растирали шпателем. Определялась задержка роста микроорганизмов по сравнению с контролем. Результаты исследований приведены в табл. 1. Как следует из табл. 1, предлагаемое средство проявляет антимикробную активность широкого спектра действия.

Изучение ранозаживляющей активности.

Средство, полученное согласно изобретению, было применено в хирургической клинике в отделении плановой экстренной и гнойной хирургии.

Исследована группа больных с длительно незаживающими ранами различной этиологии (посттравматические, постнагноительные, варикозные, нейротрофические).

Ранозаживляющая активность оценивалась по скорости эпителизации поверхности пораженного участка кожи. В результате лечения у всех больных наблюдалось купирование воспаления, на вторые-третьи сутки раны очищались от гноя и нежизнеспособных тканей, на десятые-двенадцатые происходила полная эпителизация раневого дефекта у 80% больных.

Оценка иммунотропного действия средства.

Средством, полученным согласно изобретению, было также проведено лечение амбулаторно 56 больных добровольцев с диагнозом хронический бронхит, сахарный диабет, нейродермит, церебральный арахноидит, деформирующий остеоортроз, вирусный гепатит, ишемический инсульт, тромбофлебит, пародонтит. Для оценки эффективности лечения изучалась динамика клинической картины, проведены клинико-биохимические и иммунохимические исследования крови, изменение объема этиотропной и патогенетической терапии. В 36 случаях отмечен высокоэффективный результат, в 12 - удовлетворительный, и в 8 случаях - без эффекта. При применении предлагаемого средства терапевтический эффект наблюдался как при шокотерапии, так и в сочетании с другими методами лечения, независимо от длительности заболевания. Ухудшение самочувствия не наблюдалось, аллергических и токсический реакций не было, непереносимости препарата не установлено. Улучшение самочувствия у 36 больных сопровождалось исчезновением или уменьшением клинических признаков и симптомов заболеваний и было подтверждено нормализацией клинико-биохимических показателей крови, а также результатами исследования иммунологического статуса..

Иммуномодулирующее действие предлагаемого препарата оценивали в динамике до и во время лечения. При этом исследовались следующие показатели. Количество сывороточных иммуноглобулинов JgА, JgM, JgB, содержание В-лимфоцитов, Т-лимфоцитов, абсолютное содержание Т-хелперов и Т-супрессоров и их соотношение.

В табл. 2 представлены данные, иллюстрирующие иммунокорректирующее действие препарата, полученного согласно изобретению, при лечении некоторых из вышеуказанных патологий. Значения рассчитаны по среднестатистическим показателям величин, приведенных в табл. 2 (p 0,05).

Полученные результаты свидетельствуют о восстановлении в периферической крови содержания субпопуляции Т-лимфоцитов, до уровня нормальных показателей. Основным показателем иммуномодулирующей активности является содержание Т-хелперов и Т-супрессоров, значение которого после проведения курса лечения приходит к норме.

Практическая применимость изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной К., 25 лет, диагноз - церебральный арахноидит, гипертензивный синдром. Жалобы на головную боль в теменновисочной области, головокружение, плохой сон, раздражительность.

Проведен курс заявленным средством внутримышечной инъекцией по 2,0 мл в течение 40 дней через день. В результате лечения самочувствие и настроение ровное, аппетит и сон нормализовались, головокружение и головные боли не беспокоят.

Пример 2. Больная Р., 3 года, диагноз - хронический бронхит. Беспокоил почти постоянный сухой кашель, одышка, слабость. После внутримышечной инъекции средства в дозе 0,5-1,0 мл в течение 7 дней наблюдалось значительное улучшение самочувствия: нормализовался сон, появился аппетит. Ребенок стал подвижнее, общительнее. Нет кашля, одышка не беспокоит.

Пример 3. Больная Т., 64 года, диагноз - сахарный диабет, инсулинозависимая форма, перенесла острое нарушение мозгового кровообращения. Назначен курс 22 инъекции внутримышечно по 2,0 мл через день в сочетании с традиционной терапией. В результате лечения больная сначала с помощью, а затем самостоятельно встает и передвигается. Наблюдавший больную невропатолог отметил ранний восстановительный период.

Пример 4. Больной Р., 1936 года рождения. Диагноз: хронический простатит. Назначен курс внутримышечных инъекций через день в течение 40 дней в количестве по 2,0 мл. Объективно улучшение гемодинамических показателей. Больной отмечает нормализацию аппетита и сна, восстановление половой активности, общее улучшение самочувствия.

Пример 5. Больная М. , 1942 года рождения. Диагноз: язвенная болезнь 12-перстной кишки, обострение. Назначен курс из 10 в/м инъекций через день по 2,0 мл. После проведенного лечения объективно живот мягкий, безболезненный, язва зарубцевалась, жалоб не предъявляет, боли не беспокоят, сон и аппетит нормализовались.

Пример 6. Больная К. , 21 года, диагноз: нейродермит. Больна с 4 лет. Объективно кожные высыпания на огибательных участках конечностей, на лице, на боковых поверхностях шеи, кожный зуд. После проведения курса 20 в/м инъекций по 2,0 мл через день кожные поражения исчезли, зуд прекратился.

Пример 7. Больная С., 45 лет. Посттравматический остеохондроз пояснично-крестцового отделов позвоночника. Жалобы на постоянные ноющие и ломящие боли в упоминавшихся отделах позвоночника. После применения заявленного средства по 3,0 мл в количестве 15 инъекций через два дня, боли не беспокоят, сон нормализовался. Восстановилась работоспособность.