консорциум бифидобактерий bifidobacterium bifidum 791, b. longum b 379 m, b. breve 79-119, b. infantis 73-15, b. adolescentis г 7513 для приготовления кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов

Формула изобретения

Консорциум штаммов бифидобактерий пяти видов Bifidobacterium bifidum, коллекционный номер В-3300 ЦМПМ ВНИИгенетика, Bifidobacterium longum, коллекционный номер В-2000 ЦМПМ ВНИИгенетика, Bifidobacterium breve, коллекционный номер 153 Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского, Bifidobacterium infantis, коллекционный номер 155 в ГКНМ МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского, Bifidobacterium adolescentis, коллекционный номер 158 ГКНМ МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского, используемый для получения кисломолочных продуктов лечебно-диетического питания, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой консорциум штаммов бифидобактерий пяти видов, который может быть использован для приготовления кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов.

Препараты и продукты, содержащие в своем составе бифидобактерии, предназначены для нормализации микробиоценоза кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате неблагоприятных экологических условий, стрессовых влияний, перенесенных кишечных заболеваний, длительной антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии.

Известны зарубежные моно- и комплексные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B.bifidum, B. longum, B.adolescentis, B.breve (Франция, патенты 2336886, 2411008; Швейцария патент 637297; ФРГ патенты 2134179, 2421066; Япония патенты 05227946, 0430642США патент 4645667).

У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания, применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов B. bifidum N 1,791, B.longum B379M, B.adolescentis МС-42 (SU авт. св. 343588, патенты 1347221, 849779, 863639).

В кишечнике человека встречаются 5 видов бифидобактерий -B.bifidum, B. lohgum, B.adolescentis, B.breve и B.infantis. C наибольшей частотой обнаруживаются виды B.bifidum, B.longum и B.alolescentis (39-75%), причем два последних преобладают у взрослых людей. У детей грудного возраста в 30% случаев встречаются и бифидобактерии видов B.breve и B.infantis.

Целью настоящего изобретения является получение консорциума штаммов бифидобактерий, обладающих комплексом свойств, присущих отдельным штаммам, способный более быстро приживляться в кишечнике, обладающий повышенной специфической активностью и способствующий нормализации микрофлоры кишечника в более ранние сроки.

Консорциум получен путем сочетания штаммов пяти видов бифидобактерий: B. bifidum 791, B.longum B379, B.breve 79-119, B.infantis 73-15, B.adolescentis Г7513, имеющих близкие культуральные и физиологобиохимические свойства, а также обладающих сквашивающей активностью.

Штамм B.bifidum 791 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован в ВНИИгенетика в ЦМПМ под N В-3300.

Штамм B.longum B379M выделен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в ВНИИгенетика в ЦМПМ под N В-2000.

Штамм B.breve 79-119 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под N 153 в ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Штамм B.infantis 73-15 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под N 155 в ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Штамм B. adolescentis Г7513 выделен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован под N 158 в ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Культурально-морфологические признаки консорциума.

Клетки штаммов бифидобактерий представляют собой грам+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1-2-х концах, склонные к образованию скоплений. В жидких питательных средах растут по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 ч.

Физиолого-биохимические признаки консорциума.

Неподвижные, бесспоровые анаэробы. Оптимальная температура выращивания 37,5 - 38^oC, pH питательных сред 7.2 - 7,4. Каталазу не образуют, желатину не разжижают. Сбраживают глюкозу с образованием уксусной и L+ молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до pH 4,1 - 3,9. Видовая принадлежность каждого из штаммов определена в соответствии с их ферментативной активностью. Штаммы сквашивают молоко к 24 ч культивирования.

Штаммы активно наращивают микробную массу на средах разного состава и сквашивают молоко к 24 ч культивирования, накапливая определенное количество кислот (табл.1).

Консорциум штаммов активно размножается на средах разного состава, к 24 ч культивирования, достигая в 1 мл lg 8,9 - 9,3; сквашивают молоко с высокой концентрацией бифидобактерий, что является основным показателем возможности использования штаммов в технологическом процессе.

Продуцируя кислоты, консорциум штаммов пяти видов бифидобактерий ингибирует рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (табл. 2).

Способность консорциума штаммов пяти видов бифидобактерий наращивать микробную массу в питательных средах, сквашивать молоко в короткие сроки, проявлять специфическую активность делает возможным его использование в приготовлении кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов.

Пример 1. Использование консорциума штаммов бифидобактерий в составе закваски для приготовления кисломолочных продуктов.

1-й пассаж. Лиофилизированные штаммы B.bifidum 791, B.longum B379M, B. infantis 73-15, B.breve 79-119, B.adolescentis Г7513 в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) вносят каждый отдельно в среду выращивания (печеночную, тиогликолевую, кукурузно-лактозную) и титруют методом десятикратных разведений до 10^-7-8.

Выращивают 48 - 72 ч при 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж. Выросшую культуру каждого из штаммов в объеме 5-10% вносят в среду накопления и культивируют 16-24 ч при 37,5 - 38^oC.

3-й пассаж. Полученную биомассу (консорциум) в объеме 5% вносят в стерильное молоко и культивируют 12-16 ч при 37,5-38^oC.

4-й пассаж производственная закваска. Лабораторную закваску в объеме 5% вносят в больший объем стерильного молока и культивируют 12- 16 ч при 37,5 - 38^oC.

Получение продукта. Полученную производственную закваску в объеме 5% вносят в пастеризованное молоко и культивируют 4 - 5 ч, после чего продукт охлаждают и сливают. В результате получают готовый продукт с нежным кисломолочным вкусом густой однородной консистенции с содержанием в 1 мл 10⁹ живых бифидобактерий.

Пример 2. Использование консорциума штаммов бифидобактерий в составе закваски для приготовления неферментированных пищевых продуктов.

1-ый пассаж. Лиофилизированные штаммы B.bifidum 791, B.longum B379M, B. infantis 73-15, B.breve 79-119, B.adolescentis Г7513 в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) вносят каждый отдельно в среду выращивания (печеночную, тиогликолевую, кукурузно-лактозную) и титруют методом десятикратных разведений до 10^-7-8.

Выращивают 48 - 72 ч при 37,5 - 38^oC.

2-ой пассаж. Выросшую культуру каждого из штаммов в объеме 5-10% вносят в среду выращивания и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC.

3-ий пассаж. Полученную биомассу (консорциум) в количестве 5% вносят в среду накопления большего объема и культивируют 16-24 ч при 37,5 - 38^oC.

Получение продукта. Выросшую закваску вносят в пищевое сырье (молоко, соки, пиво, и пр.), перемешивают и разливают в емкости. В результате получают продукт с общей концентрацией синантропной бифидофлоры не менее 1 млн/мл.

Пример 3. Использование консорциума штаммов бифидобактерий для получения бактерийного препарата.

Штаммы B.bifidum 791, B.longum B379M, B.infantis 73-15, B.breve 79-119, B. adolescentis Г7513 1-2-3 его пассажей культивируют при 37,5-38^oC и при pH 7,2-7,4 в течение 16-24 ч. К выращенной биомассе консорциума добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% в объеме 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл в ампулы или по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при -40 - -45^oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит 10^7-8 живых клеток бифидобактерий. Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-1.32 ВС 94) допускается содержание в 1 дозе препарата не менее 10⁷ живых клеток бифидобактерий.

Таким образом, предлагаемый консорциум штаммов пяти видов бифидобактерий активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования; сквашивает молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами; обладает специфической активностью.

Консорциум штаммов можно рекомендовать в составе заквасок для приготовления кисломолочных лечебно-диетических продуктов, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов.