способ оценки профилактики нарушений иммунного статуса при воздействии ионизирующей радиации

Формула изобретения

Способ оценки профилактики нарушений иммунного статуса при воздействии ионизирующей радиацией путем проведения ультразвукового воздействия на область иммунокомпетентных органов, например тимуса, у животных, например мышей, с последующим на 1-2-й день после окончания воздействия острым внешним гамма-облучением и исследованием на 5-й или 12-й день после облучения уровня лейкоцитов в капиллярной крови, клеточности тимуса и массы селезенки, отличающийся тем, что оценку профилактического действия физического фактора производят путем вычисления произведения уровней лейкоцитов и клеточности тимуса, деленного на массу селезенки, и при его значениях на 5-й день, больших 3,3, определяют наличие раннего профилактического эффекта, а на 12-й день - больших 10,9, - наличие профилактического эффекта в фазе разгара лучевых проявлений.

Описание изобретения к патенту

Известен способ оценки профилактики нарушений иммунного статуса путем воздействия лечебного фактора, например грязи, на подопытных животных с последующей инициацией адъювантного артрита, оценкой фагоцитарной активности крови - ФАЛ, отличающийся тем, что дополнительно в крови определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), а оценку ФАЛ и уровня ЦИК осуществляют ко времени хронизации воспалительного процесса (на 30 - 35-й день после введения адъюванта) путем определения отношения величин ФАЛ/ЦИК, и при его значениях 0,3 и более определяют наличие профилактического эффекта [1].

Данный способ рассчитан на определение профилактического эффекта грязей в отношении хронического воспалительного процесса в суставах и не может быть применен при оценке профилактики нарушений иммунного статуса при действии ионизирующей радиации при остром внешнем облучении в силу принципиальной разницы патогенеза двух указанных моделей. Иммунологическая картина острого лучевого синдрома при относительно небольших дозах облучения у животных исчерпывается сроком в 1 месяц, а изучение соотношения ФАЛ/ЦИК в подобных случаях не результативно. Так, при определении этого соотношения у 30 необлученных мышей линии СВА и 30 облученных гамма-излучением внешне при дозе 2,5 Гр (ФАЛ - [2] , ЦИК - [3]) выяснилось, что среднее соотношение ФАЛ/ЦИК в указанных группах на 5-й день после облучения равнялось 6,86 в обеих группах, на 12-й день - соответственно 6,83 и 7,17, т.е. практически было идентичным, а сам способ оказался неинформативным.

Предлагаемый способ лишен указанных недостатков. Для его осуществления вначале проводят курс ультразвукового воздействия на область тимуса подопытных животных, например мышей, при интенсивности 0,05 Вт/см², разовой экспозиции 15 - 20 с, числе процедур 6. Результаты сравнивают у животных основной и контрольной (без пресанации ультразвуком) групп, у которых моделируется острый лучевой синдром путем однократного внешнего гамма-облучения в дозе 2,5 Зв непосредственно после завершения курса ультразвуковых воздействий. Животные каждой группы делятся на 2 подгруппы, которые забиваются соответственно на 5-й и 12-й дни после облучения. Объект изучения - основные иммунокомпетентные органы - тимус, кровь, селезенка. Определяют содержание лейкоцитов (ЛК) в капиллярной крови, клеточность тимуса (КТ) - количество клеток в пересчете на 100 мг массы тимуса и массу селезенки (МС) в мг. Вычисляют величину коэффициента профилактики (КП) по формуле:

,

и при значениях его на 5-й день после облучения, больших 3,3, констатируют наличие раннего профилактического эффекта, на 12-й день - больших 10,9, - наличие профилактического эффекта в фазе разгара лучевых проявлений.

Способ осуществляют следующим образом. Группе животных, например мышей, воздействуют на область тимуса ультразвуком (УЗ) по лабильной методике интенсивностью 0,05 Вт/см² при экспозиции 15 - 20 с, числе процедур 6. Через 1 - 2 дня после окончания курса ультразвукового воздействия проводят внешнее острое гамма-облучение животных в дозе 2,5 Зв. Часть животных исследуют на 5-й день после облучения, часть - на 12-й день. Изучают содержание лейкоцитов капиллярной крови (в 10⁹ кл/мл), количество клеток (клеточность) в тимусе - в камере Горяева (в 10⁶ кл на 100 мг его массы), массу селезенки (в мг). Вычисляют коэффициент профилактики (КП) по формуле:

,

и при значениях его на 5-й день после облучения, больших 3,3, констатируют наличие раннего профилактического эффекта, на 12-й день - больших 10,9, - наличие профилактического эффекта в фазе разгара лучевых проявлений.

Пример 1. Мышь-самец линии СВА N 2, масса тела - 22,7 г. Ультразвук не назначался. Проведено острое внешнее гамма-облучение в дозе 2,5 Зв. На 5-й день после облучения осуществлено исследование животного. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови - 2,510⁹ кл/мл, масса тимуса - 15 мг, селезенки - 39 мг, клеточность тимуса - 46,710⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 2,9. Профилактика отсутствует.

Пример 2. Мышь-самец линии СВА N 7, масса тела - 22,5 г. Предварительные процедуры ультразвукового воздействия (УЗВ) на область тимуса и по лабильной методике интенсивностью 0,05 Вт/см² при экспозиции 15 с, числе процедур 6. Через 2 дня после УЗВ проведено острое внешнее гамма-облучение в дозе 2,5 Зв. На 5-й день после облучения осуществлено исследование животного. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови - 2,9 10⁹ кл/мл, масса тимуса - 10 мг, селезенки - 34 мг, клеточность тимуса - 56,4 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 4,8. Наблюдается ранний профилактический эффект.

Пример 3. Мышь-самец линии СВА N 9, масса тела - 23,4 г. Предварительные процедуры ультразвукового воздействия на область тимуса и по лабильнй методике интенсивностью 0,05 Вт/см² при экспозиции 20 ч, числе процедур 6. Через 2 дня после УЗВ проведено острое внешнее гамма-облучение в дозе 2,5 Зв. На 5-й день после облучения осуществлено исследование животного. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови - 4,6 10⁹ кл/мл, масса тимуса - 10,5 мг, селезенки - 40 мг, клеточность тимуса - 64,57 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 7,4. Наблюдается ранний профилактический эффект.

Пример 4. Мышь-самец линии СВА N 21, масса тела - 25,6 г. Ультразвук не назначался. Проведено острое внешнее гамма-облучение в дозе 2,5 Зв. На 12-й день после облучения осуществлено исследование животного. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови - 2,36 10⁹ кл/мл, масса тимуса - 14,5 мг, селезенки - 64 мг, клеточность тимуса - 167 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 6,1. Профилактика отсутствует.

Пример 5. Мышь-самец линии СВА N 27, масса тела - 24,8 г. Предварительные процедуры ультразвукового воздействия на область тимуса и по лабильной методике интенсивностью 0,05 Вт/см² при экспозиции 15 с, числе процедур 6. Через 2 дня после УЗВ проведено острое внешнее гамма-облучение в дозе 2,5 Зв. На 12-й день после облучения осуществлено исследование животного. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови - 3,3 10⁹ кл/мл, масса тимуса - 17 мг, селезенки - 62 мг, клеточность тимуса - 333,6 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 17,7. Наблюдается профилактический эффект в фазе разгара лучевых проявлений.

Пример 6. Мышь-самец линии СВА N 9, масса тела - 24,9 г. Предварительные процедуры ультразвукового воздействия на область тимуса и по лабильной методике интенсивностью 0,05 Вт/см² при экспозиции 20 с, числе процедур 6. Через 1 день после УЗВ проведено острое внешнее гамма-облучение в дозе 2,5 Зв. На 12-й день после облучения осуществлено исследование животного. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови - 3,0 10⁹ кл/мл, масса тимуса - 17 мг, селезенки - 40 мг, клеточность тимуса - 379,4 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 28,5. Наблюдается профилактический эффект в фазе разгара лучевых проявлений.

Вычисление КП в виде отношения произведения уровней лейкоцитов в крови и клеточности тимуса к массе селезенки логично обоснованно ввиду того, что при остром лучевом синдроме в указанные сроки наблюдаются лейкопения, снижение клеточности тимуса и увеличение массы селезенки. Поэтому уменьшение выраженности указанных изменений может быть расценено как профилактический эффект.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов ГНИИ курортологии в г. Пятигорске. Объектом исследования послужили 27 мышей-самцов линии СВА, разделенные на 4 группы. 5 животных 1-й группы (контроль 1) получили острое внешнее гамма-облучение на аппарате "Агат-2" в дозе 2,5 Зв. На 5-й день после облучения осуществлено исследование животных. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови составило 2,68 0,26 10⁹ кл/мл, масса селезенки - 43,6 5,64 мг, клеточность тимуса - 44,2 2,89 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 2,77 0,23.

5 животных 2-й группы (опыт 1) вначале приняли курс ультразвуковых процедур на область тимуса по описанной выше методике, через 1 -2 дня после этого мышам этой группы осуществлено острое внешнее гамма-облучение на аппарате "Агат-2" в дозе 2,5 Зв. На 5-й день после облучения осуществлено исследование животных. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови составило 3,42 0,36 10⁹ кл/мл, масса селезенки - 38,4 1,12 мг, клеточность тимуса - 54,1 4,45 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 4,82 0,68.

У 10 животных 3-ей группы (контроль 2) получили острое внешнее гамма-облучение на аппарате "Агат-2" в дозе 2,5 Зв. На 12-й день после облучения осуществлено исследование животных. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови составило 2,50 0,20 10⁹ кл/мл, масса селезенки - 52,8 + 2,34 мг, клеточность тимуса - 155,9 12,5 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 7,66 1,01.

7 животных 2-й группы (опыт 2) вначале приняли курс ультразвуковых процедур на область тимуса по описанной выше методике, через 1 - 2 дня после этого мышам этой группы осуществлено острое внешнее гамма-облучение на аппарате "Агат-2" в дозе 2,5 Зв. На 12-й день после облучения осуществлено исследование животных. Содержание лейкоцитов в капиллярной крови составило 3,30 0,25 10⁹ кл/мл, масса селезенки - 54,7 3,65 мг, клеточность тимуса - 275,6 55,5 10⁶ кл/100 мг массы тимуса, коэффициент профилактики - 18,9 5,11.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что рассчитанная верхняя граница диапазона КП ( Л.С.Каминский, 1959) при облучении без профилактики ультразвуком составляет на 5-й день после облучения 3,3, на 12-й - 10,9. Поэтому значения, превышающие указанные, свидетельствуют о наличии профилактического эффекта. При этом разница отдельных показателей (масса селезенки на 5-й и 12-й дни после облучения, клеточность тимуса и уровень лейкоцитов в крови на 5-й день) могут быть недостаточно существенны, тогда как разница уровне интегрального показателя на 5-й и 12-й дни соответственно достоверна (соответственно 2,77 0,23 и 4,82 0,68; P < 0,05; 7,66 1,01 и 18,9 5,11; P < 0,05).

Следовательно, предлагаемый способ является более информативным, чем традиционные.