способ количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из растительного сырья

Формула изобретения

Способ количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из растительного сырья, включающий спектрофотометрическое измерение оптической плотности, отличающийся тем, что параллельно навески препарата и кверцетина растворяют в спиртохлороформном растворе (2 1), измеряют оптические плотности при длине волны 258 нм против масляного раствора каротина и рассчитывают содержание флавоноидов по формуле



где D₁ оптическая плотность опытного образца;

D₀ оптическая плотность раствора кверцетина;

m₁ навеска опытного образца, г;

m₀ навеска образца кверцетина, г;

Р₁ степень разведения опытного образца;

Р₀ степень разведения раствора кверцетина.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения флавоноидов в лекарственных препаратах растительного происхождения.

Известны способы количественного определения флавоноидов в лекарственных препаратах растительного происхождения титриметрическими методами, а также фотоэлектроколориметрическими и спектрофотометрическими по измерению оптической плотности растворов при 360-450 нм непосредственно или после реакций с цветореагентами (Государственная Фармакопея СССР. 10-ое изд. М. Медицина. 1968, с. 599-600; Коренман И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений. М. Химия, 1970, с. 47, 50, 80, 248, 285, 288; Георгиевский В. П. и др. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, 1990, с. 49-52; Авт.св. СССР N 1571821.

Недостатками указанных способов являются: неточность количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из лекарственного растительного сырья (масло облепиховое, масло шиповника, каротолин и др.), так как масляные растворы плохо титруются, а каротиноиды, содержащиеся в этих препаратах (до 180 мг%), имеют совпадающие максимумы поглощения в видимой области при 360-490 нм, мешая определению оптическими методами, громоздкость и длительность определений, связанная с затратой времени на приготовление титрованных растворов, реагентов, нестабильность окрашенных продуктов реакций, недостаточная чувствительность и селективность.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения флавоноидов в экстрактах из растительного сырья, заключающийся в добавлении к исследуемому экстракту 2% -ного раствора хлорида алюминия и 5%-ного раствора ацетата натрия (или ацетата калия), фильтровании и измерении оптической плотности при длине волны 440 нм через 2,5 ч после начала реакции.

Недостатками данного способа являются сложность способа, невозможность количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из растительного сырья (в масле облепиховом, масле шиповника и т.д.), так как водно-спиртовые растворы хлорида алюминия не смешиваются с препаратами, неточность анализов при 410 нм в присутствии каротиноидов.

Задача изобретения упрощение способа, повышение чувствительности, позволяющее проводить определение флавоноидов в экстракционных маслах из лекарственного растительного сырья.

Это достигается тем, что навески исследуемых препаратов растворяют в спирто-хлороформной смеси (2:1) с последующим спектрофотометрическим определением оптической плотности при длине волны 258 нм максимуме поглощения света в УФ-области. В качестве раствора сравнения используется спирто-хлороформный раствор каротина микробиологического в масле (ТУ 149-80), выпускаемого промышленностью с 1974 г. и включающего 98% -каротина, 2% смеси а- и g-изомеров, после предварительного разведения подсолнечным маслом (соответствующим требованиям ГФ Х) до концентрации, равной содержанию каротиноидов в анализируемом экстракте, определяемому фотоэлектроколориметрически по общепринятой методике, входящей в НТД на препараты.

Так как биологически активные флавоноиды экстракционных масел являются производными кверцетина и его растворы подчиняются закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах от 0,5 до 20 мкг/мл, это вещество использовали в качестве стандарта для количественного определения (фиг.1). Спектрофотометр марки Beckman UV-5270 (США), кюветы с толщиной слоя 10 мм.

Фиг.1 показывает зависимость оптической плотности раствора кверцетина от длины волны; фиг. 2 спектры поглощения растворов препаратов в концентрациях 10 мкг/мл в 96%-ном спирте-хлороформе (2:1); фиг.3 поглощение 96%-ного спирто-хлороформного (2: 1) раствора b каротина стандарта в концентрации 10 мкг/мл, подтверждая интенсивное светопоглощение в области 360-490 нм.

В научно-фармацевтической, медицинской и патентной литературе способов, позволяющих определить флавоноиды в экстракционных маслах в присутствии каротиноидов, авторами не выявлено. Впервые разработана методика анализа с использованием в качестве раствора сравнения масляного раствора каротина микробиологического, стандартного раствора кверцетина в спирто-хлороформных смесях (2:1).

Пример.Количественное определение флавоноидов в экстракционных маслах из лекарственного растительного сырья.

Около 1,0 г препарата (точная навеска) растворяют в спирто-хлороформной смеси (2: 1) в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора до метки, 5 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем тем же растворителем до метки. Оптическую плотность полученного раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 258 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Одновременно в тех же условиях проводят измерение оптической плотности рабочего стандартного образца кверцетина (МРТУ 42-3974-71). В качестве раствора сравнения используют 1,0 г масляного раствора каротина микробиологического (ТУ 149-80), разведенного до эквивалентной концентрации каротиноидов подсолнечным маслом, соответствующим требованиям ГФ Х в спирто-хлороформной смеси (2:1)

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин рассчитывают по формуле:



^Do^mI

где D₁ оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ оптическая плотность PCO кверцетина;

m₁ навеска препарата в граммах;

m₀ навеска PCO кверцетина в граммах.

Приготовление PCO кверцетина. Около 0,01 г (точная навеска) кверцетина (МРТУ 42-3974-71), предварительно высушенного при температуре от 50 до 60^oC в течение 1 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл смеси 96%-ного спирта-хлороформа (2:1), нагревают на водяной бане и перемешивают до растворения, охлаждают и доводят объем раствора тем же растворителем до метки (раствор А). Срок годности раствора А трое суток. 5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью 96% -ного спирта-хлороформа (2:1) до метки и перемешивают (раствор Б). Срок годности раствора Б двое суток.

Приготовление PCO каротина. Исходный масляный раствор каротина микробиологического (ТУ 149-80) разводят подсолнечным маслом (соответствующим требованиям ГФ Х) до равной концентрации каротиноидов в анализируемом объекте, определенной фотоэлектроколориметрически в соответствии с НТД на препараты. Срок годности 6 месяцев при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Полученные данные по предлагаемому методу и методу прототипу представлены в таблице.

Предлагаемый метод позволяет определить количественно важнейший компонент экстракционных масел из лекарственных растений биологически активные флавоноиды, проявляющие противовоспалительное действие на моделях формалинового, трипсинового и гиалуронидазного стеков. Проведенные исследования подтверждают ярко выраженную зависимость биологического действия экстракционных масел от количественного содержания в них флавоноидов.

Разработанный метод количественного определения суммы флавоноидов в экстракционных маслах прост в выполнении, не требует трудоемких процессов, чувствителен, не требует специальных реактивов и реагентов, имеет невысокую относительную ошибку. Это позволяет рекомендовать разработанный способ количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из лекарственного растительного сырья в нормативно-техническую документацию на препараты, выпускаемые промышленностью.