способ получения тритерпеновых гликопептидов

Классы МПК:C07K9/00 Пептиды, содержащие до 20 аминокислот с сахаридными радикалами и полностью определенной последовательностью; их производные
C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Институт органической химии Уфимского научного центра РАН
Приоритеты:
подача заявки:
1994-07-18
публикация патента:

Изобретение относится к органической химии, конкретно к способу получения тритерпеновых гликопептидов - производных глицирризиновой кислоты (ГК) с использованием незащищенного гликозида (карбокси-компонент) и свободных аминокислот или дипептидов (аминокомпонет АК). В предлагаемом способе глицирризиновую кислоту обрабатывают комплексом F в среде диметилформамида при 0oC 1 ч, при комнатной температуре 4 ч, выдерживают в течение ночи при 4-80oC и получают активированный трис-пентафторфениловый эфир ГК, который в растворе вводят в реакцию с аминокислотами или дипептидами в присутствии 1N раствора NaOH при соотношении реагентов ГК/комплекс F/АК, равном 1:3-3,5/3-4 ммоль. Выход целевых соединений 62,5-90,9%.

Изобретение относится к способу получения свободных тритерпеновых гликопептидов производных глицирризиновой кислоты (ГК) (I) общей формулы (II), представляющих интерес для медицины в качестве иммуномодуляторов и анти-ВИЧ средств

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

Известен способ получения карбокси-защищенных гликопептидов ГК, состоящий в конденсации гликозида (карбокси-компонент) с эфирами аминокислот (метиловыми и трет-бутиловыми),

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

взятыми в виде их гидрохлоридов (аминокомпонент) (АК) с помощью N-гидроксисукцинимида (HOSu)-N, N"-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в среде тетрагидрофурана или диоксана в присутствии триэтиламина (ТЭА) (прототип), с последовательным выдерживанием реакционной массы при температуре 0-5oC 3 ч, комнатной 6 ч, 4-8oC 12 ч с последующим взаимодействием образовавшегося трисоксисукцинимидного эфира с АК при 0-5oC и выдерживанием реакционной массы при комнатной температуре 24 ч при молярном соотношении реагентов ГК/HOSu/ДЦГК/АК/OCH= 2/10-10,4/6-6,4/6-7/9,8-10,8 ммоль, выход карбоксизащищенных гликопептидов ГК (IY) 46-86% (схема 1).

Недостатком данного способа является протекание побочной реакции образования сукцинимидоксикарбонил способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 аланина, что снижает выход целевых продуктов (в данном случае гликопептидов ГК):

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

Кроме того, основным недостатком предложенного нами ранее способа является использование в качестве реагента (аминокомпонента) эфиров аминокислот или дипептидов в виде солей (HCI), в результате чего конечным продуктом реакции являются карбоксизамещенные гликопептиды формулы (IY), содержащие фрагменты метиловых и трет-бутиловых эфиров аминокислот или дипептидов. Для получения полностью деблокированных гликопептидов формулы (II), где R-фрагменты свободных аминокислот, необходимо проведение дополнительной стадии синтеза, связанной с уделением карбоксизащитных сложноэфирных групп:

а) обработка трифторуксусной кислотой в случае трет-бутиловых эфиров;

б) щелочной гидролиз (КОН или NaOH в метаноле) в случае метиловых эфиров.

Как показали наши исследования, деблокирование защищенных гликопептидов ГК, содержащих фрагменты метиловых эфиров аминокислот, путем щелочного гидролиза приводит к сложной смеси продуктов в результате расщепления гликозидных связей. При обработке трифторуксусной кислотой гликопептидов ГК, содержащих фрагменты трет-бутиловых эфиров аминокислот, выходы свободных гликопептидов составили 43-47% (примеры 8, 9). В качестве примера мы приводим две методики получения целевых гликопептидов (IVд,з) по способу-прототипу. Поэтому получение свободных тритерпеновых гликопептидов ГК формулы (II), представляющих интерес для медицины в качестве потенциальных иммуномодулирующих и антивирусных средств, пригодных для получения инъекционных форм, является актуальной задачей. В предложенном техническом решении упрощена технология получения свободных гликопептидов ГК формулы II, благодаря принципу "минимальной защиты", исключающей процесс деблокирования.

Гликопептиды ГК формулы (II) образуются в результате конденсации активированного интермедиата КГ (VI) с аминокислотами или дипептидами в среде ДМФА в присутствии 1N раствора NaOH. Для получения активированного эфира ГК (VI) (схема 2) ГК обрабатывают комплексом F (комплекс пентафторфенола с N, N"-дициклогексилкарбодиимидом состава 3: 1) (У) при 0-5oC в ДМФА. Молярное соотношение реагентов ГК /комплекс F/ аминокомпонент равно 1/3/3-4 ммоль

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

Способ состоит в том, что глицирризиновую кислоту (I) (1 ммоль) обрабатывают при 0 -5oC при перемешивании комплексом F (3 ммоль) в среде ДМФА в течение 1 ч, при комнатной температуре 4ч, получая активированный интермедиат (VI), который после отделения осадка N, N" -дициклогексилмочевины подвергают взаимодействию с аминокомпонентом (АК) (аминокислотами или дипептидами) формулы RNH 2, где

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

в среде ДМФА в присутствии 1N раствора NaOH при молярном соотношении реагентов ГК/комплекс F/AK, равном 1/3/3-4 ммоль при 0oС с последующим выдерживанием реакционной смеси при комнатной температуре в течение 24 ч. Целевые гликопептиды П (а-ж) выделяют путем разбавления реакционной смеси колодной водой и подкисления лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 20835873. Полученный осадок отфильтровывают и переосаждают из смеси хлороформ метанол (5:1) эфиром. Выход гликопептидов (П а-ж) составил 62,5-90,9% После очистки колоночной хроматографией выход продуктов составляет 44,4-57,9%

Отличия предлагаемого способа следующие.

1. Для активации карбоксильных групп глицирризиновой кислоты используется комплекс F (схема 2) вместе N гидроксисукцинимида (HOSu) N, N" -дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в известном способе [4] (схема 1). В качестве активированного интермедиата образуется при этом трис-пентафторфениловый эфир ГК (VI).

2. В качестве растворителя используется N, N -диметилформамид (ДМФА).

3. В качестве аминокомпонента (АК) используются свободные аминокислоты или дипептиды.

4. В качестве основания используется 1N раствор NaOH вместо третичного амина (триэтиламин) в известном способе.

Пример 1. Трис-пентафторфениловый эфир глицирризиновой кислоты (VI).

К раствору 0,82 г (1 ммоль) глицирризиновой кислоты в 30 мл диметилформамида (ДМФА) при 0oC прибавили при перемешивании 2,28 г (3 ммоль) комплекса F и перемешивали смесь при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре (20-22oC) 4 ч. Выдерживали реакционную смесь в холодильнике (4 -8oC) в течение ночи и отфильтровывали осадок дициклогексилмочевины. Полученный раствор пентафторфенилового эфира ГК (VI) использовали в реакции конденсации с аминокомопнентами.

Пример 2. 3-0-2-0-[N-(способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587) D-глюкопиранозил уронол)- L -аланин -N-(b- D-глюкопиранозилуроноил) L -аланин} (3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587), -11-оксо-30-(N-карбонил-L-аланин) -30- норолеан- 12-ен (llа).

К раствору 0,36 г (4 ммоль) L аланина в 10 мл I N раствора NaOH прибавили 10 мл ДМФА, охладили до 0oC и при перемешивании прибавили по каплям раствор пентафторфенилового эфира ГК (VI) (1 ммоль) в 30 мл ДМФА (пример 1), перемешивали смесь 30 мин при охлаждении и выдерживали при комнатной температуре 24 ч с периодическим перемешиванием. Разбавили реакционную смесь 200 мл холодной водой, подкислили лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 20835873. Выпавший осадок отфильтровали, промывали водой и высушили. Получили 1,03 г (99,4%) сырого гликопептида llа, который переосадили из смеси хлороформа метанола (5:1, Y/Y) эфиром. Выход 0,8 г (77,2%). Rf 0,47 (Хлороформ метанол-вода, 45:10:1); [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+55способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с0,02; MeOH). Аналитически чистый образец 0,6 г 57,9% получили колоночной хроматографией на силикагеле L при элюировании системой хлороформ-метанол-вода, 100:10:1.

ИК-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, см-1: 3600-3200 (OH,NH); 1720 (COOH); 1670 (C11 0); 1540 (CONH). УФ-спекр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH, нм, (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587) 248,5 нм (4,00). Найдено, C 58,93; H 7,10; N 3,74. C51H77N3O19. М.в. 1036,3. Вычислено, C 59,11; H 7,50; N 4,05.

Пример 3. 3-0-{ 2-0-[N-(b-D-глюкопиранозиоуроноил)-L-валин] -N- (b-D-глюкопиранозилуроноил)-L валин} 3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587-11-оксо-30-(N-карбонил -L-валин)-30-норолеан -12- ен (llб).

К раствору 0,35 г (3 ммоль) L-валина в 10 мл IN раствора NaOH прибавили 10 мл ДМФА, охладили до 0oC и при перемешивании прибавили по каплям раствор 1 ммоль пентафторфенилового эфира ГК (VI)(пример 1) в 30 мл ДМФА, перемешивали смесь при 0oC 30 мин и выдержали при комнатной температуре 24 ч. Разбавили реакционную смесь 200 мл холодной водой, подкислили лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 2. Осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Получили 1,12 г (91,1% ) сырого гликопептида (llб), который переосадили из ацетона гексаном. Выход 0,9 г (80,4%). Rf 0,5 (хлороформ-метанол-вода, 45:10:1); [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+42,5способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,02; MeOH). Аналитически чистый образец 0,56 г (50%) получили колоночный хроматографией аналогично llа. ИК-спекр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 см -1 : 3600-3200 (OH, NH); 1710 (COOH); 1670 (C11 0); 1530 (CONH), УФ-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH нм (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587): 248 нм (3,93). Найдено, C 61,46; H 7,96; N 3,23; C57H89N3O19. М.в. 1120,49. Вычислено, C 61,09; H 8,02; N 3,75.

Пример 4. 3-0-{2-0-[N-( b -D-глюкопиранозилураноил)-L -метионин]-N-( b -D-глюкопиранозилуроноил)-L-метионин} (3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587) -II- оксо-30-(N-карбонил-L-метионин)-30-норолеан-12-ен (llв).

К раствору 0,58 г (4 ммоль) L-метионина в 10 мл ДМФА прибавили 10 мл 1N раствора NaOH, охладили до 0oC и при перемешивании прибавили по каплям раствор 1 ммоль пентафторфенилового эфира ГК (VI) в 30 мл ДМФА (пример 1). Перемешивали реакционную смесь при этой температуре 24 ч. Разбавили смесь 200 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 20835873. Осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Получили 1,07 г (87,7%) сырого гликопептида (llв), который переосадили из смеси хлороформа метанола (5:1) эфиром. Выход 0,86 г (70,0% ), Rf 0,56 (хлороформ-метанол-вода, 45:10:1); [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+34способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (c 0,02; MeOH). Аналитически чистый образец получен колоночной хроматографией аналогично llа.

ИК-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, см-1 3600-3200 (OH, NH); 1715 (COOH); 1660 (C11=0); 1530 (CONH). УФ-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH нм (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587): 249 нм (3,92). Найдено, C 56,18; H 7,32; N 2,82. C57H89N3O19S3. М.в. 1216,48. Вычислено, C 56,27; H 7,37; N 3,45.

Пример 5. 3-0-{ 2-0-[N- способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 D-глюкопиранозилуроноил)-L-изолейцин]-N- b -D- глюкопиранозилуроноил)-L-изолейцин ( 3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 )-II- оксо-30-(N-карбонил-L-изолейцин) -30- норолеан-12-ен (llг).

К раствору 0,52 г (4 ммоль) L изолейцина в 10 мл ДМФА, охлажденному до 0o, прибавили 10 мл 1N раствора NaOH и при перемешивании прибавили по каплям раствор 1 ммоль пентафторфенилового эфира ГК (VI) в 30 мл ДМФА (пример 1). Смесь перемешивали 30 мин при 0oC и выдерживали с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч. Разбавили смесь 200 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 20835873. Осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Получили 1,14 г (98,3%) гликопептида (llг), который переосадили из ацетона-гексаном. Выход 1,0 г (86,2%). Аналитический чистый образец получен с выходом 0,6 г (51,8%) колоночной хроматографией аналогично llа. Rf 0,5 (хлороформ-метанол-вода, 45:10:1). [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+45способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,02; MeOH);

ИК-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 см-1: 3600-3200 (OH, NH); 1720 (COOH); 1660 (C11=0); 1530 (CONH). УФ-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH нм (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587): 248 нм (4,10). Найдено, C 61,76; H 8,14; N 3,57. C60 H95 N3O19. М.в. 1162,5. Вычислено, C 61,59; H 8,25; N 3,61.

Пример 6. 3-0-{ 2-0-[N-(b-D-глюкопиранозилуроноил)-L-глутаминовая кислота]-N-(b-D-глюкопиранозилуроноил)-L-глутаминоваякислота}-(3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587)-11-оксо-30-(N-карбонил -способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587- глутаминовая кислота) -30- норолеан-12 ен (llд).

К раствору 0,59 г (4 ммоль) L глутаминовой кислоты в 10 мл ДМФА, охлажденному до 0oC, прибавили 20 мл 1N раствора NaOH и при перемешивании по каплям раствор 1 ммоль пентафторфенилового эфира ГК (VI) в 30 мл ДМФА (пример 1). Смесь выдержали с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч и разбавили 300 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 20835873. Осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Получили 1,20 г (99,1% ) сырого гликопептида (llд), который переосадили из смеси хлороформ-метанола (5: 1) эфиром. Выход 1,1 г (90,9%). Rf 0,49 (хлорофом-метанол-вода, 45:10:1). [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+49способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,02; MeOH).

ИК-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, см-1: 3600-3200 (OH, NH); 1710 (COOh); 1660 (C11=0); 1530 (CONH). УФ-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH, нм (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587); 248 нм (4,07). Найдено, C 57,06; H 7,23; N 3,52. C57H83N3O25. М.в. 1210,4. Вычислено, C 56,56; H 6,93; N 3,47.

Пример 7. 3 -0-{2-O-(N- (способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 -D-глюкопиранозилуроноил)-глицин-L- фенилаланин] -N-(b-D-глюкопиранозилуроноил)-глицин-L-фенилаланин} (3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587)-11-оксо-30-(N-карбонил -глицин-L-фенилаланин) -30- норолеан-12-ен llж).

К раствору 0,89 г (4 ммоль) глицил-L фенилаланина в 10 мл 1N NaOH, охлажденному до 0oC, прибавили 10 мл ДМФА и по каплям раствор 1 моль пентафторфенилового эфира ГК (У) в 30 мл ДМФА (пример 1). Смесь перемешивали 30 мин при 0oC и выдерживали с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч. Смесь разбавили 300 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до pHспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 20835872-3. Выпавший осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Получили 1,21 г (84,0%) сырого гликопептида (llж), который переосадили из смеси хлороформа-метанола (5:1) эфиром. Выход 0,9 г (62,5%). Аналитический чистый образец получен колоночной хроматографией аналогично llа с выходом 0,64 г (44,4% ). Rf 0,45 (хлороформ-метанол-вода, 45:10:1). [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+35способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,02; MeOH).

ИК-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, см-1: 3600-3200 (OH, NH); 1720 (COOH); 1660 (C11=0), 1540 (CoNH). УФ спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH, нм (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587); 245 нм (3,95). Найдено, C 61,74; H 7,51; N 5,55. C75H10N6O22. М.в. 1438,76. Вычислено, C 62,61; H 7,09; N 5,84.

Пример 8. 3-0-{2-0-[N-(способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587)-D-глюкопиранозилуроноил) -L-изолейцина трет-бутиловый эфир] -N-(b-D- глюкопиранозилуроноил)-L -изолейцинатрет-бутиловый эфир} (3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587) 11,30 диокси-30-L-изолейцина трет -бутиловый эфир -30-норолеан-12-ен (IVd).

1. К раствору 1,64 г (2 ммоль) глицирризиновый кислоты в 50 мл диоксана при 0-5oC прибавили 1,2 г (10,4 ммоль )HOSu, 1,3 г (6 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 3 ч, при комнатной 6 ч. Выдержали смесь в течение ночи в холодильнике, отфильтровывали осадок дициклогексилмочевины и к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 1,5 г (6 ммоль) гидрохлорида третбутилового эфира L-изолейцина и 1,3 мл (9,5 ммоль) триэтиламина. Смесь перемешивали при охлаждении 1 ч и выдержали при комнатной температуре 24 ч. Растворитель упарили в вакууме при способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 208358745oC, остаток растворили в хлористом метилене (200 мл) и промыли 5% раствором лимонной кислоты, водой, 5%-ным раствором NH4OH и снова водой. Сушили над MgSO4 упарили растворитель в вакууме при способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 208358730oC. Получили 2,0 г (75,2%) сырого защищенного продукта (IVd), который переосадили из ацетона-гексана. Выход 1,28 г (48,1% ). Rf 0,66 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1); 0,36 (хлороформ-спирт, 10:1). [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+29способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,086; способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587tOH),

ИК-спектр; способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, см-1; 3600-3200 (OH, NH); 1740 (COOR); 1660 (C11=0); 1530 (CONH). УФ-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587etOmaxH, (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587): 246 нм (3,93). Найдено, C 64,86; H 8,96; N 3,52. C 72 H119N3O19. Вычислено, C 64,98; H 9,01; N 3,16.

Деблокирование защищенного гликопептида (IYд).

1,0 г (0,86 ммоль) защищенного гликопептида (IYд) в 20 мл CF3COOH выдержали 30 мин при 20-22oC и упарили смесь в вакууме досуха. Остаток (0,9 г) хроматографировали на колонке с силикагелем L (40/100 мкм/, элюируя смесью хлороформ метанол-вода, 200:10:1, 100:10:1, 50:10:1, 25:10:1. Смесью 50:10:1 вымывали 0,5 г (43%) гомогенного продукта (llг) в виде аморфного вещества. Rf 0,48 (хлороформ-метанол вода, 45:10:1); [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+55способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,015; способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587tOH).

Пример 9. 3-0-{2-0-[N-(способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587-Д- глюкопиранозилуроноил)-L-валина трет-бутиловый эфир] -N-(b-Д- глюкопиранозилуроноил)-L-валина трет-бутиловый эфир} (3способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, 20способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587) 11,30 диоксо-30-L-валина трет-бутиловый эфир-30-норолеан-12-ен (VIз).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) глицирризиновой кислоты в 50 мл сухого диоксана при 0-5oC прибавили 1,2 г (10,4 ммоль) HOSu 1,4 г (6,4 ммоль) ДЦГК и перемешивали смесь при этой температуре 3 ч, при комнатной (20-22oC) 6 ч. Выдержали смесь в течение ночи при 4-6oC в холодильнике, осадок дициклогексилмочевины отфильтровали, фильтрат охладили до 0-5oC и прибавили к нему 1,47 г (7 ммоль) гидрохлорида трет-бутилового эфира L-валина, 1,3 мл (9,5 ммоль) триэтиламина и перемешивали при охлаждении 1 ч, 24 ч при комнатной температуре. Растворитель упарили в вакууме, остаток растворили в хлористом метилене (200 мл) и промыли 5%-ным раствором соляной кислоты, водой, 5%-ным раствором NaHCO3, сушили MgSO4 и упарили в вакууме. Получили 1,9 г (80%) сырого гликопептида (IVз), который переосадили из ацетона гексаном. Выход защищенного гликопептида 1,2 г (48% ). Rf 0,48 (хлороформ-спирт, 7:1); [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+30способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,02; MeOH).

ИК-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587, см-1: 3600-3200 (OH, NH); 1740 (COOP); 1670 (C 11=0); 1540 (CONH). УФ-спектр, способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587MeOmaxH, (lgспособ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587): 249 нм (3,99). Найдено, C 63,96; H 8,85; N 3,47. C69H116N3O19. Вычислено, C 63,16; X 9,04; N 3,25.

Деблокирование гликопептида (IVз).

1,0 г (0,8 ммоль) защищенного гликопептида в 20 мл CF3COOH перемешивали при комнатной температуре 1 ч и упарили в вакууме. Остаток растерли сухим эфиром и сушили в вакууме при 40-45oC 3 ч. Сухой остаток (0,84 г) хроматографировали на колонке с силикагелем L (40/100 мкм), элюируя смесью хлороформ-метанол-вода 100:10:1, 50:10:1, 25:10:1, 10:10:1. Смесью 50:10:1 вымывали 0,42 г (46,7%) гомогенного по ГСХ гликопептида (Пз) в виде аморфного вещества желтоватого цвета. Rf 0,5 (хлороформ метанол-вода 45:10:1), [способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587]2D0+45способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587 (с 0,02; способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587tOH).

Преимущества предлагаемого способа следующие.

1. В качестве аминокомпонентов (АК) в предлагаемом способе используются свободные аминокислоты и дипептиды, а не эфиры, как в способах [1] и [4] что упрощает и удешевляет процесс получения гликопептидов ГК (например, стоимость 1 г эфира аминокислоты дороже стоимости аминокислоты).

2. В качестве конечных продуктов образуются свободные гликопептиды общей формулы (II) (со свободными COOH-группами), т.е. отпадает необходимость проведения стадии деблокирования [5] что также упрощает процесс получения гликопептидов ГК.

3. В качестве основания в предлагаемом способе используется 1N раствор NaOH вместо третичного основания (триэтиламина) в известном способе [1, 4] что также значительно удешевляет процесс получения гликопептидов ГК.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения тритерпеновых гликопептидов производных глицирризиновой кислоты общей формулы

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

где R L Ala, L Val, L Met, L Ile, L Glu, Gly L Phe

путем активации карбоксильных групп незащищенной глицирризиновой кислоты (ГК) активирующим комплексом через стадию конденсации с образованием активированного интермедиата в среде растворителя в присутствии основания с образованием гликопептидной связи в течение 24 ч, отличающийся тем, что гликозид подвергают взаимодействию с комплексом пентафторфенола N,N"-дициклогексилкарбодиимида в соотношении 3 1 (комплекс F) при 0 - 5oС в течение 1 ч, при комнатной температуре в течение 4 ч с последующим выдерживанием при 4 8oС в течение ночи и конденсацией активизированного интермедиата с аминокислотами (АК) формулы RNH2,

где R CH3CH (L Ala) (a);

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

способ получения тритерпеновых гликопептидов, патент № 2083587

в присутствии 1 н. раствора NaOH при ммолярном соотношении реагентов ГК комплекс F АК соответственно 1 3,0 3,5 3 4.

Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07K9/00 Пептиды, содержащие до 20 аминокислот с сахаридными радикалами и полностью определенной последовательностью; их производные

Патенты РФ в классе C07K9/00:
фармацевтическое средство, содержащее эпитопные пептиды hig2 и urlc10, для лечения рака, способы и средства для индукции антигенпрезентирующей клетки и цитотоксического т-лимфоцита (цтл), антигенпрезентирующая клетка и цтл, полученные таким способом, способ и средство индукции иммунного противоопухолевого ответа -  патент 2529373 (27.09.2014)
модифицированный пептид и его использование для тестирования онкологических заболеваний цнс и эффективности терапии -  патент 2491291 (27.08.2013)
гликозилированные гликопептидные антибиотические производные -  патент 2481354 (10.05.2013)
способ получения пептида -  патент 2478105 (27.03.2013)
пептиды rumc, обладающие антимикробной активностью -  патент 2464274 (20.10.2012)
состав полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура -  патент 2453557 (20.06.2012)
пептид с антипролиферативной активностью и фармацевтическая композиция для лечения пролиферативных заболеваний -  патент 2446174 (27.03.2012)
мономерные производные гликопептидного антибиотика -  патент 2424248 (20.07.2011)
способ очистки ванкомицина -  патент 2400489 (27.09.2010)
композиции далбаванцина для лечения бактериальных инфекций -  патент 2352353 (20.04.2009)

Класс C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца

Патенты РФ в классе C07J53/00:
способ получения а-секотритерпеновых с-3(28) моно-и диамидов и их секоинтермедиатов -  патент 2525546 (20.08.2014)
способ получения бетулина -  патент 2524778 (10.08.2014)
способ получения бетулина (варианты) -  патент 2523545 (20.07.2014)
способ синтеза производного эфира и глицирретиновой кислоты и соединение сложного эфира дезоксиглицирретиновой кислоты -  патент 2522455 (10.07.2014)
способ получения производных 3,28-дисульфата бетулина -  патент 2520971 (27.06.2014)
способ получения бетулина из бересты -  патент 2501805 (20.12.2013)
способ получения ацетата 16 ,17 -циклогексанопрегн-5-ен-3 -ол-20-она -  патент 2495047 (10.10.2013)
средство, обладающее антиоксидантной, противовоспалительной, нейропротекторной, гиполипидемической, гипохолестеринемической, гипогликемической, гепатопротекторной, иммуносупрессорной активностями -  патент 2487884 (20.07.2013)
способ получения натриевой соли 3-сульфата аллобетулина -  патент 2482126 (20.05.2013)
способ получения натриевой соли 3-сульфата аллобетулина -  патент 2482125 (20.05.2013)


Наверх