средства, обладающие антиаллергической и противовоспалительной активностью при поражении кожи немикробного генеза

Формула изобретения

1. Применение соединений общей формулы I



где Х O, S или -CH₂-;

Y Cl или Br;

Z SO₂H, NO₂ или C₁ C₄-алкил;

o, r 0 3;

m, n, p 0 или 1,

в качестве средств, обладающих антиаллергической и противовоспалительной активностью при поражении кожи немикробного генеза путем локального и/или ингаляционного введения.

2. Применение по п.1 соединений общей формулы I, где X O,S или -CH₂-, Y Cl или Br, Z SO₂H, NO₂ или C₁ - C₄-алкил, p, m 0, n 0 или 1, o,r 1 или 2.

3. Применение по п.1 соединений общей формулы I, где X O, Y Cl, m, n, p 0, о 1, r 2.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к композициям с подавляющими липоксигенезо- и простагландин-Н-синтезу биологически активными веществами предпочтительно для топического применения в ветеринарии и медицине. Они обладают антиаллергической и противовоспалительной активностью при поражении кожи немикробного генеза, как например, псориаз, кожные эритемы, фибропролиферативные заболевания, аллергические заболевания.

Для создания композиций с фармакологическими ценными в особенности, противовоспалительными, антипсориатическими, регулирующими профилерацию клеток, антиаллергическими, спазмолитическими, гастрозащитными и антиастматическими свойствами в особенности, при локальном и/или ингаляционном применении, действие которых основаны в особенности на подавлении реакций оксигенирования, связанного с арахидоновой кислотой обмена веществ и при локальном применении не показывают никаких побочных действий.

Известные 2-окси-дифениловые эфиры, 2-окси-дифенилметаны и 2-окси-дифенилтиоэфиры общей формулы I

ZX где X кислород, сера или -CH₂-; Y хлор или бром и Z SO₂H, NO₂ или C₁-C₄ алкил, и r=0-3; o=0-3; p=0 или 1; m=1 или 2 и n= 0 или 1, обладают ярко выраженными противовоспалительными, антиаллергическими и антиастматическими действиями, подтверждаются ин витро целлюлярными и ин витро и ин виво экспериментальными на животных исследованиями.

Нужно подчеркнуть соединения формулы I

ZX где Х кислород, сера и -CH₂-; Y хлор или бром и Z SO₂H, NO₂ или С₁-С₄-алкил, и r=0-3; o=0-3; p=0 или 1; m=0 или 1 и n= 0 или 1, соединения формулы (I) где Х обозначает кислород, серу или -CH₂- и Y обозначает хлор или бром и m=0, n=0 или 1, о=1 или 2, r=1 или 2, и p=0.

Преимущественно интересными оказались соединения формулы (I), где Х кислород и Y хлор и m=0, n=0, o=1, r=2 и p=0.

Соединения общей формулы I в зависимости от дозы понижают индуцированное арахидоновой кислотой сокращение изолированной полосы пaренхемы легкого и изолированной спирали трахеи морской свинки (пример 1). В обоих случаях испытывались ин витро модель для антиастматических действий, которые основаны на влиянии связанного с арахидоновой кислотой обмена веществ в легочной ткани.

Благодаря указанным соединениям формулы I снижается специфическое аллергическое сжатие бронхов у сенсибилизированных овальбуминов, находящихся под наркозом и при искусственном дыхании морских свинок (пример 2).

В ин виво-астма-модели интратрахеальной истилляции арахидоновой кислоты в случае морских свинок снижается сжатие бронхов благодаря указанным соединениям (пример 3).

Соединения формулы I в низких концентрациях подавляют очищенную эритроидную 15-липоксигеназу кроликов (пример 4), а также простагландин-Н-синтазу из семенных пузырьков овец (пример 5).

Эйкозаноиды, которые образуются за счет липоксигенеза или простагландин-Н- синтез из арахидоновой кислоты в клетках млекопитающих, играют ключевую роль в патогенезе бронхиальной астмы, индуцированного УФ-светом дерматита и множества аллергических возбудителей заболеваний.

Соединения формулы I согласно изобретению непосредственно в виде составной части галеновых композиций вместе с одним или несколькими фармацевтическими применимыми носителями эффективны для аллергических заболеваний, фибропролиферативных заболеваний псориаза, кожных эритем и других воспалительных заболеваний немикробного генеза.

В качестве галеновых форм, которые содержат соединения формулы I, в особенности нужно понимать формы введения для локального (топического) и ингаляционного лечения, как эмульсия, мази, желе, порошки, препараты для ингаляции и т.д. Соединения формулы I могут также содержаться в липосомах или использоваться вместе с обычными носителями и/или ускорителями пенетрации, как например, мочевинa, пропиленгликоль, олеиновая кислота и другие в количествах 0,001-15, предпочтительно 0,1-4 мас. от всей смеси.

Предлагаемые в изобретении фармацевтические композиции кроме соединений формулы I могут содержать также другие фармацевтические биологические активные вещества, например, противовоспалительные, антипсориатические, регулирующие пролиферацию клеток, антиаллергические, спазмолитические, гастрозащитные и антиастматические биологически активные вещества.

П р и м е р 1. Действие 2,4,4-трихлор-2-окси-дифенилового эфира (Triclosan) и 2,2-диокси-5,5"-дихлор-дифенилсульфи-да (Fenticlor) на индуцированное арахидоновой кислотой сокращение изолированных препаратов трахеи и паренхемы легкого.

Испытание Triclosan и Fenticlor на антиастматические действия ин витро проводилось на изолированных спиралях трахеи и полосах паренхемы легкого взрослых морских свинок (250-500 г) обоих полов. Особое значение придается полному удалению окружающей связывающей ткани и сохранению неповрежденности эпителия.

Для исследований применяется модифицированный раствор Krebs-Henseleit (рН= 7,4) следующего состава (м.мольл^-1), NaCl=134,8, KCl=5,9, Трис=10,02, CaCl₂= 1,82, MgCl₂=1,145, глюкоза=1,11. Газацию осуществляют с помощью воздуха. Температура ванны для полос паренхемы легкого составляет 37^оС, а для спиралей трахеи 35^оС. Кондиционирование препаратов осуществляют многократно с помощью 5 10^-4 М ацетилхинолина для получения нормировочного (стандартного) значения с последующим выполаскиванием этого вещества.

Во всех исследованиях сокращения индуцируются за счет добавки арахидоновой кислоты в ванну для органа в возрастающих концентрациях и кумулятивно измеряются. Все измерения осуществляют в присутствии 5 мМ Индометацина.

Арахидоновая кислота в обоих препарациях вызывает зависящее от концентрации сокращение со значением ЭЛ₅₀ в среднем 10^-4 М для легочных полос и 5 10^-5 М для спиралей трахеи.

Triclosan в концентрации 10^-6 М ведет к полному подавлению индуцированного арахидоновой кислотой сокращения (10^-7-10^-3 М) в изолированных полосах паренхемы легкого.

По сравнению с этим Ketotifen в концентрации 10^-М на той же препарации вызывает только 25% подавление, а 5 10^-5 М нордигидрогваяретовой кислоты и 5 10^-5 М Bw 755С вызывают только, каждое 50% подавление.

Triclosan в концентрациях более 10^-М и индуцирует при равных условиях опыта, ярко выраженную, зависящую от дозы, релаксацию в изолированных полосах паренхемы легкого. В присутствии 5 10^-6 или 5 10^-5 М Triclosan концентрация арахидоновой кислоты, которая вызывает полумаксимальную релаксацию составляет LD₅₀=3 10^-6 М. Соответствующее значение в случае спиралей трахеи составляет LC₅₀=10^-6 М.

Fenticlor изолированные полосы паренхемы легкого: LD₅₀=5 10^-6 М изолированные спирали трахеи LD₅₀=1 10^-5 М.

П р и м е р 2. Действие Fenticlor не индуцированное овальбумином сжатие бронхов у сенсибилизированных овальбумином морских свинок.

Морские свинки сенсибилизируются по методу Андерсона с помощью 10 мкг овальбумина и 100 мг гидроксида алюминия в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия, интраперитонеально. Спустя 14 дней осуществляют ингаляционную обработку бодрствующих животных путем отуманивания 0,1% раствором овальбумина. Только животные с положительной реакцией используются для сравнения с 4 дня после обработки. Морских свинок весом по 450-550 г наркотизируют интраперитонеально с помощью 1,3 г/кг этилуретана. Затем вставляют канюлю в трахею. Животные расслабляются с помощью 0,2 мг/кг панкуронийбромида внутривенно и дышат в танк-респираторе (f=20 мин, p=3рРа, 1:E=1:1). Животные дышат окружающим воздухом через выведенные наружу канюли трахеи. Объем вздоха V_тизмеряется пневмотахографически. Для появления спазм инстиллируют интратрахеально 1 мг/кг овальбумина в 300 мкл воды.

Благодаря предварительной обработке с помощью Fenticlor значительно снижается аллергическая реакция по сравнению с контролем. Максимальная спазма бронхов подавляется на 0% и спустя 25 мин происходит возврат вплоть до исходного объема.

П р и м е р 3. Действие Fenticlor не индуцированное арахидоновой кислотой сжатие бронхов у морских свинок.

При таком порядке проведения опыта, как в примере 2 у несенсибилизированных морских свинок путем интратрахеальной инстилляции 2 мг/кг раствора арахидоната натрия в фосфатном буфере с рН=7,4 вызывают спазм бронхов.

Благодаря предварительной обработке с помощью Fenticlor, начиная с 5 минуты, в значительной степени подавляется индуцированная арахидоновой кислоты реакции сжатия бронхов. Максимальный спазм бронхов подавляется на 16,5% и спустя 25 мин достигается возврат вплоть до исходного объема.

П р и м е р 4. Подавление активности 15-лидоксигеназы из ретикулоцитов кроликов.

Липоксигеназу из ретикулоцитов кроликов получают описанным в литературе способом в электрофоретически и иммунологически чистой форме. Определение активности липоксигеназы осуществляют при 25^оС через амперометрическое измерение потребления кислорода с помощью электрода Кларка в следующей системе: 0,1 М фосфат калия, рН=7,4 с 0,2% холята натрия и 0,53 мМ линолевой кислоты. Концентрация фермента составляет в измеряемой смеси 25 нМ. Испытуемые вещества добавляются растворенными в метилгликоле (свежеперегнанном). Разбавления соединений выбираются так, что конечные концентрации метилгликоля в предварительно инкубированной смеси не превышали 2% при этих условиях не наступают никакие достойные упоминания подавления в контрольных смесях ферментная реакция инициируется за счет добавки холята натрия и линолевой кислоты. Путем изменения концентрации биологически активного вещества строится кривая титрования подавления и из нее определяется необходимая концентрация для 50% подавления.

Результаты представлены в табл. 1.

П р и м е р 5. Подавление активности простагландин-Н-синтазы из семенных пузырьков овец.

Простагландин-Н-синтазу из семенных пузырьков овец получают по описанному в литературе способу.

Определение ферментативной активности осуществляют при 25^оС путем полярографического измерения потребления кислорода с помощью электрода Кларка.

Измеряемая смесь состоит из 400 мкг х х мл^-1простагландин-Н-синтазы в 0,1 М Трис-HCl-буфере рН=8,0, 5 мМ триптофана, 1 мМ Haemin и 0,124 мМ арахидоновой кислоты. Испытуемые вещества растворяют в метилгликоле и в течение 10 минут при 25^оС инкубируют вместе с ферментом в отсутствии арахидоновой кислоты. Ферментативная реакция инициируется арахидоновой кислотой.

Путем изменения концентрации биологически активного вещества строится кривая титрования для подавления и из нее определяется необходимая концентрация для 50% подавления.

Результаты представлены в табл. 2.

Пример приготовления 1: мазь, содержащая 0,05% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира может приготавливаться следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 0,05 Вазелин 45,0 Парафиновое масло 19,6 Цетиловый спирт 5,0 Прополис 5,0 Сорбитан-сесквиолеат 5,0 Сложный эфир п-оксибензойной кислоты 0,2 Деминерализованная вода, вплоть до общего количества 100,0

Жиры и эмульгаторы расплавляют вместе и в этом расплаве растворяют биологически активное вещество. Консервант растворяют в воде и раствор эмульгируют в расплаве жира при повышенной температуре и охлаждают при перемешивании.

Пример приготовления 2: крем, содержащий 0,5% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира, можно готовить следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 0,5 Изопропилпальмитат 8,0 Цетилпальмитат 1,5 Силиконовое масло 100 0,5 Сорбитанмоностеарат 3,0 Полисорбат 60 3,5 1,2-пропиленгликоль РН 20,0 Полиакриловая кислота 0,5 Триэтаноламин 0,7 Деминерализованная вода, до общего количества 100,0

Полиакриловую кислоту суспендируют в смеси из деминерализованной воды с 1,2-пропиленгликолем. При перемешивании затем добавляют триэтаноламин, благодаря чему получается слизь. Смесь из изопропилпальмитата, цетилпальмитата, силиконового масла, сорбитанмоностеарата и полисорбата нагревают до примерно 75^оС и в ней растворяют биологически активное вещество. Эту жировую фазу при перемешивании вводят в также нагретую примерно до 75^оС слизь и при перемешивании охлаждают.

Пример приготовления 3: крем, содержащий 0,05% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира, можно готовить следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 0,05 Центилпальмитат РН 2,00 Цетиловый спирт РН 2,00 Триглицеридная смесь насыщенных со средней длины цепью, жирных кислот 5,00 Стеариновая кислота 3,00 Глицеринстеарат РН 4,00 Кетомакроголь 1000 1,00 Микрокристаллическая целлюлоза 0,50 1,2-пропиленгликоль, перегнанный 20,00 Деминерализованная вода, вплоть до общего количества 100,00

Цетиловый спирт, цетилпальмитат, триглицеридная смесь, стеариновая кислота и глицеринстеарат расплавляются вместе и в этом расплаве растворяется биологически активное вещество. Микрокристаллическая целлюлоза диспергируется в части воды. В остальной части воды растворяется кетомакроголь и сюда же примешиваются пропиленгликоль, а также слизь. Жировую фазу затем при перемешивании вводят в водную фазу и все при перемешивании охлаждают.

Пример приготовления 4: прозрачный гидрогель, содержащий 0,5% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира готовят следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 0,5 Пропиленгликоль 10,0-20,0 Изопропанол 20,0 Оксипропил- метилцеллюлоза 2,0 Вода До 100,00

Оксипропил-метилцеллюлозу доводят до набухания в воде. Биологически активное вещество растворяют в смеси из пропиленгликоля. Затем раствор биологически активного вещества смешивают с набухшим производным целлюлозы и если желательно, смешивают с душистыми веществами (0,1%).

Пример приготовления 5: прозрачный гидрогель, содержащий 0,005% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира готовят следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 0,005 Пропиленгликоль 20,0 Изопропанол 20,0 Полиакриловая кислота 2,0 Триэтаноламин 3,0 Вода До 100,00

Полиакриловую кислоту и воду диспергируют и нейтрализуют триэтаноламином. Биологически активное вещество растворяют в смеси из изопропанола и пропиленгликоля. Затем раствор биологически активного вещества смешивают с гелем, причем, если желательно, можно добавлять душистое вещество (0,1%).

Пример приготовления 6: Пеноаэрозоль, содержащий 0,01% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира можно приготавливать следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 0,01 Цетиловый спирт РН 1,70 Парафиновое масло густое 1,00 Изопропилмиристат 2,00 Кетомакроголь 1000 2,40 Сорбитанмоностеарат 1,50 1,2-пропиленгликоль РН 5,00 Метилпарабен 0,18 Пропилпарабен 0,02 Хемодерм 314 0,10 Деминерализованная вода До 100,00

Цетиловый спирт, парафиновое масло, изопропилмиристат, кетомакроголь и сорбитанстеарат расплавляют вместе и в этом расплаве растворяют биологически активное вещество. Метил-и-пропилпарабен растворяют в пропиленгликоле и добавляют к горячей воде. Расплав и раствор затем смешивают. После охлаждения добавляют Хемодерм и доливают водой до конечного веса.

Заполнение:

20 мл смеси заполняют в алюминиевую емкость. Коробку снабжают вентилем и под давлением вводят туда рабочий газ.

Пример приготовления 7: Главная мазь, содержащая 1% 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира, может быть приготовлена следующим образом:

Состав, Биологически активное вещество 1 Густое парафиновое масло 10 Безводный ланолин 10 Белый вазелин 79

__________

100

Составные части расплавляют и стерильно фильтруют.

Пример приготовления 8: Пригодные для вдувания (инсуфляций), содержащие 0,025 г 2,4,4"-трихлор-2"-окси-дифенилового эфира, капсулы можно приготовить следующим образом:

состав: (для 1000 капсул) Биологически активное вещество 25,00 Размолотая лактоза 25,00

Биологически активное вещество и очень тонко размолотую лактозу хорошо смешивают друг с другом. Полученный порошок просеивают и порциями по 0,05 г каждая вносят в желатиновые капсулы.