вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов

Формула изобретения

Вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая суспензию инактивированных антигенов S.typhimurium, Е.соli и вирусной геморрагической болезни кроликов, адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей сальмонеллеза S.typhimurium, эшерихиоза Е.coli и вируса геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, а также формалин и гидроокись алюминия, при этом приготовление суспензии антигенов S.typhimurium и Е.coli проводят путем приготовления суспензии пораженных органов от павших кроликов, посева на дифференциально-диагностические среды, выращивания раздельно в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см³ и выделения чистых культур возбудителей сальмонеллеза S.typhimurium, эшерихиоза Е.coli, а суспензию клеток чистой культуры возбудителя вируса геморрагической болезни кроликов, выделенной из пораженного органа павшего кролика из местного эпизоотического очага, получают после заражения указанным вирусом кроликов в виде 10-15%-ной суспензии клеток печени от зараженных кроликов, с активностью не менее 10^3,0 ЛД₅₀/см³, смешивают полученные суспензии клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза S.typhimurium, клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.coli и суспензии клеток печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S.typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза
Е.coli, выделенного из местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0ЛД50 /см3	24,0-29,0
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокись алюминия	остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к ассоциированным вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки Escherichia coli штаммы: 0138 К88,09К99, 200; рода Salmonella, штаммы: ГИСК № 195, ГИСК № 196, ГИСК № 197; р0Да Proteus, штаммы: ГИСК № 198, ГИСК № 199; Klebsiella pneumoniae, штаммы: ГИСК № 201, ГИСК № 202 (патент на изобретение РФ № 2035916 от 17.06.93, МКИ A61 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами.

Известна инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза телят (патент РФ на изобретение № 2154495 от 15.10.97, МКИ A61K 39/112, C12N 1/20, A61K 39/39). Данная вакцина содержит в качестве антигенов смесь инактивированных формалином вирулентных штаммов рода Salmonella (S. dublin № 1449, S. typhimurium № 159) в качестве иммуномодулятора взвесь клеток Rodococcus equi № 2 в маслоланолиновой смеси. Данная вакцина применяется для профилактики сальмонеллеза телят. Использование маслоланолиновой смеси в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.)

Техническим результатом изобретения является получение безвредной, высокоиммуногенной, стабильной при хранении вакцины против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

Технический результат достигается тем, что в вакцине ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащей суспензию инактивированных антигенов S. typhimurium, Е. coli и вирусной геморрагической болезни кроликов, адъювант, согласно изобретению в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, а также формалин и гидроокись алюминия, при этом приготовление суспензии антигенов S. typhimurium и Е. Coli проводят путем приготовления суспензии пораженных органов от павших кроликов, посева на дифференциально-диагностические среды, выращивания раздельно в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см³ и выделения чистых культур возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза. Coli, а суспензию клеток чистой культуры возбудителя вируса геморрагической болезни кроликов, выделенной из пораженного органа павшего кролика из местного эпизоотического очага, получают после заражения указанным вирусом кроликов в виде 10-15%-ной суспензии клеток печени от зараженных кроликов, с активностью вируса не менее 10^3,0 ЛД₅₀/см³ , смешивают полученные суспензии клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза S. typhimurium, клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е. coli и суспензии клеток печени кроликов с вирусом геморрагической болезни кроликов при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S. typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.
coli, выделенного из местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток
в 1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0 ЛД 50/см3	24,0-29,0
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокись алюминия	остальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных ассоциированных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

При раздельном культивировании чистых культур возбудителей получают концентрацию S. typhimurium и Е. coli не менее 4-5 млрд. в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования и вируса вирусной геморрагической болезни кроликов с активностью не менее 10^3,0 ЛД₅₀/см³. Инактивирование баксырья формалином в 0,1-0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°C в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов S. typhimurium, Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых кроликов поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после двукратного введения с интервалом 7-10 дней в дозе кроликам по 1,5 см³ против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 12 месяцев. Использование чистых культур возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших животных, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после вакцинации обеспечивает защиту животных сразу против трех опасных инфекционных болезней сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г., представлены все необходимые сведения о микроорганизмах. Однако для кроликов эти вакцины не применяются.

Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Москва, ВО «Агропромиздат», 1990 г., а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А. Москва: Колос, 1995, стр.201-204. В «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И. М.: «Колос», 2001, на стр.222-233.

Методы выделения чистой культуры возбудителя эшерихиоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г. № 13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва: Колос, 1995, стр.196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.219-222.

Методы выделения и характеристика вирусной геморрагической болезни кроликов описаны в «Методических указаниях по лабораторной диагностике вирусной геморрагической болезни кроликов», утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 28.12.88. г.; в книге «Вирусная геморрагическая болезнь кроликов» авторы: Шевченко А.А., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А., Власова Т.А. М.: «Две Короны», 1995, 48 с.; в книге «Болезни кроликов», авторы: Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов A.M. М.: «Аквариум», 2002, стр.42-57.

Вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, содержащая суспензии клеток инактивированных формалином возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°C 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Она вызывает образование специфического иммунитета против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у кроликов, привитых вакциной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, формируется через 12-15 суток после двукратного введения с интервалом 7-10 дней в дозе по 1,0 см³ против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 12 месяцев. Вакцину применяют в неблагополучных и угрожаемых по сальмонеллезу, эшерихиозу и вирусной геморрагической болезни кроликов хозяйствах в дозах, указанных выше. Продукты убоя вакцинированных животных используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять , содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 66,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S. typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	22,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.
coli, выделенного из местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток
в 1 см3	22,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0 ЛД 50/см3	22,0
глюкоза	0,5
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов обладает иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 72,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S. typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	24,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.
coli, выделенного из местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток
в 1 см3	24,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0 ЛД 50/см3	24,0
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов обладает умеренной иммуногенной активностью.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 84,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S. typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	28,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.
coli, выделенного из местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток
в 1 см3	28,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0 ЛД 50/см3	28,0
глюкоза	1,7
формалин	1,3
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов обладает иммуногенной активностью.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 87,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S. typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	29,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.
coli, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток
в 1 см3	29,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0 ЛД 50/см3	29,0
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов обладает значительной иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица 1).

Пример 5.

Берут пораженные органы от павших кроликов в эпизоотическом очаге, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза S. typhimurium, эшерихиоза Е. coli и вируса геморрагической болезни кроликов, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 90,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза
S. typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в
1 см3	30,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е.
coli, выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток
в 1 см3	30,0
суспензия клеток печени кроликов с вирусом геморрагической
болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического
очага в физиологическом растворе с активностью не менее
103,0 ЛД 50/см3	30,0
глюкоза	2,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов обладает иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.

Таблица
Сравнительная оценка эффективности вакцины
Вакцина	Доза вакцины, см3	Метод введения	Иммунобиологические свойства
			Кол-во кроликов в опыте (гол)	Наличие поствакцина льных осложнений	Длительность иммунитета (мес)	Защита, (%)
По прототипу	1,0	Внутримышечно	1000	нет	9	80-90
По предлагаемому способу	1,0	Внутримышечно	1000	нет	12	90-100

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Предложенная вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.