новые кристаллические формы адефовира дипивоксила и способы его получения

Формула изобретения

1. Форма А кристаллического адефовира дипивоксила, на дифрактограмме порошка которой отображены характерные пики при 2 =12,9, 25,9 и 28,1°.

2. Форма А кристаллического адефовира дипивоксила по п.1, на дифрактограмме порошка которой отображены характерные пики при 2 =4,4, 8,7, 12,9, 17,2, 19,8, 21,6, 25,9, 28,1 и 30,38±0,3°.

3. Способ получения формы А кристаллического адефовира дипивоксила по п.1, отличающийся тем, что

(a) адефовира дипивоксил растворяют в ацетоне, используемом в качестве растворяющего растворителя в количестве от 2 до 7 вес.ч. относительно веса адефовира дипивоксила, к данному раствору добавляют воду в качестве кристаллизующего растворителя в количестве от 20 до 40 вес.ч. относительно веса адефовира дипивоксила, а кристаллы, полученные таким образом, собирают и сушат при температуре 25-30°С, или

(b) адефовира дипивоксил растворяют в 1-метилпирролидоне, используемом в качестве растворяющего растворителя в количестве от 2 до 5 вес.ч., или в этаноле, используемом в качестве растворяющего растворителя в количестве от 5 до 15 вес.ч. относительно веса адефовира дипивоксила, к данному раствору добавляют воду в качестве кристаллизующего растворителя в количестве от 10 до 30 вес.ч. относительно веса адефовира дипивоксила, а кристаллы, полученные таким образом, собирают и сушат при температуре 25-30°С.

4. Способ по п.3, в котором температуру на стадии добавления кристаллизующего растворителя поддерживают в интервале от 0 до 30°С в варианте (а) и в интервале от 0 до 10°С в варианте (b).

5. Форма В кристаллического адефовира дипивоксила, на дифрактограмме порошка которой отображены характерные пики при 2 =7,3, 16,3, 17,2 и 22,2°.

6. Форма В кристаллического адефовира дипивоксила по п.5, на дифрактограмме порошка которой отображены характерные пики при 2 =6,4, 7,3, 8,6, 9,7, 12,6, 13,5, 16,3, 17,2, 19,5, 20,8, 22,2 и 26,0±0,3°.

7. Способ получения формы В кристаллического адефовира дипивоксила по п.5, отличающийся тем, что форму А кристаллического адефовира дипивоксила, собранную согласно способу, описанному в п.3, сушат при температуре от 35 до 45°С.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к новым кристаллическим формам 9-[2-[бис[(пивалойлокси)метокси]фосфинил]метокси]этил]аденина («Адефовира дипивоксил»), являющегося аналогом нуклеотидов, и способам его получения.

Уровень техники

Адефовира дипивоксил является противовирусным аналогом нуклеотидов, показывающим отличный результат при его использовании в качестве терапевтического средства против ВИЧ-инфекции (HIV) и инфекции вирусного гепатита B (HBV). Противовирусная активность указанного соединения показана в литературных источниках (например, см. патенты США № № 4724233 и 4808716; Европейский патент № 0481214; Benzaria et al., Nucleosides and Nucleotide 14(3-5):563-565, 1995; а также Starrett et. al., J. Med. Chem. 37:1857-1864, 1994).

Химическая структура адефовира дипивоксила видна из следующей формулы 1:

Адефовира дипивоксил впервые был раскрыт в Европейском патенте № 0481214 и может существовать в аморфной и кристаллической формах. Аморфная форма адефовира дипивоксила может быть получена путем элюирования через колонку с силикагелем с применением смеси метанола (приблизительно 4%) и метиленхлорида (приблизительно 96%) и осаждения с помощью ротационного выпаривания растворителя при пониженном давлении и температуре приблизительно 35°С (см. J. Med. Chem., 19:1857-1864, 1994). Однако очистка и получение аморфной формы имеют недостатки, связанные с тем, что методики не являются подходящими для применения в серийном производстве и с тем, что аморфную форму необходимо защищать от нагревания, света, кислорода и влаги. Таким образом, в качестве альтернативного способа, были получены и применены кристаллические формы адефовира дипивоксила. В качестве примера одного из таких способов, в документе WO04/043972 раскрывается способ распылительной сушки, в котором непосредственно изготовленный, или коммерчески доступный адефовира дипивоксил растворяют в органическом растворителе и распыляют в виде микрокапель раствора лекарственного препарата в потоке высокотемпературного пара, и таким образом, полученные капли моментально высыхают с образованием кристаллов. Однако данный способ имеет недостаток, связанный с применением устройства для распылительной сушки, которое является неподходящим для серийного производства. С другой стороны, в патенте США № 6451340 раскрывается способ получения формы 2 (2 дигидрат) путем разбавления раствора адефовира дипивоксила, содержащего 0,2% или менее воды и 50% или более 1-метилпирролидона с ацетоном, добавлением н-бутилового эфира для получения кристаллов, охлаждения с получением формы 1, взаимодействия указанной формы 1 с воздухом, имеющим относительную влажность 75% или выше, или ее кристаллизация из растворителя, содержащего 2-5% воды. Однако в данном способе в качестве кристаллизующего растворителя применяется опасный и взрывоопасный органический растворитель, такой как н-бутиловый эфир.

Как правило, считают, что полиморфизм подразумевает под собой отдельные твердые вещества, имеющие одинаковую молекулярную формулу, но различные физические свойства: температуру плавления, растворимость, плотность и т.д. Различие в физических свойствах полиморфных форм происходит от ориентаций соседних молекул (комплексов) и взаимодействий между молекулами в порошке. Таким образом, полиморфные формы, имеющие одинаковую молекулярную формулу, являются твердыми веществами, уникальными в том отношении, что не очевидно, имеет ли одна полиморфная форма более подходящие физические свойства, чем другая. Одно из наиболее важных физических свойств полиморфных форм фармакологических веществ - это растворимость в воде, особенно растворимость в желудочном соке пациента. Например, если абсорбция в кишечнике медленная, желательно, чтобы лекарственное вещество, которое является нестабильным в среде желудка или кишечника пациента, медленно растворялось и не накапливалось в этой губительной среде. Такие кристаллические соединения могут иметь различную текучесть, способность к эластичной деформации, скорость высвобождения из готовой лекарственной формы, стабильность, эффективность и т.д. Таким образом, в данной области требуется кристаллическая форма, которая является более стабильной, более легкой в обращении и имеет высокую скорость растворения. Т.е., открытие новой кристаллической формы лекарственного вещества должно позволить специалисту в области технологии приготовления лекарственных препаратов создать рецептуру лекарственного препарата из данного лекарственного вещества, который имеет желаемую кривую высвобождения или другие характеристики.

Исходя из вышеизложенного, авторы изобретения попытались обеспечить ряд новых кристаллических форм адефовира дипивоксила, чтобы расширить диапазон выбора при приготовлении лекарственного препарата, а также решить проблемы известного уровня техники, связанные с получением новых кристаллических форм.

Таким образом, первой целью данного изобретения является обеспечение новых кристаллических форм адефовира дипивоксила.

Другой целью данного изобретения является обеспечение способов получения новых кристаллических форм адефовира дипивоксила.

Раскрытие изобретения

В результате обширных исследований для достижения вышеупомянутых целей авторы изобретения успешно разработали новые формы A, B, C, D, E, А и G кристаллического адефовира дипивоксила.

Новые кристаллические формы, обеспеченные данным изобретением, более конкретно можно охарактеризовать следующим образом.

Дифрактограмма формы A отображает характерные пики при 2 =12,9, 25,9 и 28,1. При этом форма A дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =4,4, 8,7, 12,9, 17,2, 19,8, 21,6, 25,9, 28,1 и 30,38±0,3°.

Дифрактограмма формы B отображает характерные пики при 2 =7,3, 16,3, 17,2 и 22,2. При этом форма B дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =6,4, 7,3, 8,6, 9,7, 12,6, 13,5, 16,3, 17,2, 19,5, 20,8, 22,2 и 26,0±0,3°.

Дифрактограмма формы C отображает характерные пики при 2 =8,1, 8,8, 9,5, 24,5, 25,3, и 32,9. При этом форма C дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =8,1, 8,8, 9,5, 15,4, 17,2, 17,6, 19,7, 21,8, 24,5, 25,3, 26,8, 28,9 и 32,9±0,3°.

Дифрактограмма формы D отображает характерные пики при 2 =3,8 и 13,0. При этом форма D дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =3,8, 7,2, 10,4, 12,4, 13,0, 15,9, 17,5, 21,0 и 23,3±0,3°.

Дифрактограмма формы E отображает характерный пик при 2 =3,4. При этом форма E дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =3,4, 6,9, 11,8, 12,7, 15,7, 17,2, 20,7, 21,5, 22,5 и 23,3±0,3°.

Дифрактограмма формы F отображает характерный пик при 2 =5,6. При этом форма F дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =5,6, 6,9, 11,8, 12,7, 15,7, 17,2, 20,7, 21,5, 22,5 и 23,3±0,2°.

Дифрактограмма формы G имеет особенность, связанную с отсутствием пика при 2 =11,8, который является характерным пиком формы 1, описанной в патенте США № 6451340. При этом форма G дает дифрактограмму порошка, состоящую из дифракционных пиков при 2 =6,9, 12,7, 15,7, 17,2, 20,7, 21,5, 22,5 и 23,3±0,2°.

Кристаллические формы, как правило, определяются термодинамическими параметрами, такими как растворимость, и динамическими параметрами, такими как ряд условий проведения процесса кристаллизации. Механизм кристаллизации определяется условиями проведения процесса кристаллизации, при этом механизм влияет на образование центра кристаллизации, рост кристалла и деформацию кристаллической формы с получением ожидаемого кристалла. Таким образом, анализ механизма кристаллизации с целью контроля формы кристалла является необходимым и обязательно должен проводиться при исследовании кристаллических форм. Для разработки эффективного способа были изучены различные способы создания пересыщения.

Путем последовательных исследований было установлено, что изменение пересыщения в зависимости от концентрации и температуры в различных растворителях является наиболее важным фактором для получения кристаллических форм адефовира дипивоксила. Параметрами, оказывающими наибольшее воздействие на кристаллическую форму частиц, когда кристалл осаждается из насыщенного раствора за счет образования центра кристаллизации, являются температура и растворитель. Для изучения кристаллических форм, полученных в результате процесса образования кристаллов, применяют различные автономные методы анализа, такие как рентгеноструктурный анализ (XRD), дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC), исследование под микроскопом и т.д.

Исходный адефовира дипивоксил, используемый для получения новых кристаллических форм, относящихся к данному изобретению, может быть получен способами, известными в данной области, т.е. способам, описанным в патенте США № 5663159 или в J. Med. Chem., (1994) 19:1857-1864. Однако настоящее изобретение не устанавливает никаких особых ограничений на способ приготовления исходного адефовира дипивоксила.

Как пояснялось выше, настоящее изобретение обеспечивает различные новые кристаллические формы адефовира дипивоксила и способы его получения. В соответствии с данным изобретением, в данной области продемонстрированы следующие преимущества.

Во-первых, различные кристаллические формы, обеспечиваемые данным изобретением, приводят к увеличению разнообразия выбора исходного сырья для приготовления фармацевтических препаратов.

Во-вторых, в данном изобретении в качестве кристаллизующего растворителя для получения кристаллических форм адефовира дипивоксила используется вода, в результате чего органические растворители, имеющие некоторые ограничения в фармацевтике, остаются в меньшем количестве, чем при известном уровне техники. Более того, в соответствии с данным изобретением, стоимость продукции снижается, и ее получение, включая серийное производство, становится простым.

В-третьих, кристаллические формы, относящиеся к данному изобретению, извлекаются с высоким выходом, имеют отличную скорость растворения и устойчивость при хранении.

Краткое описание чертежей

На фигуре 1 отображены результаты XRD известных форм кристаллического адефовира дипивоксила [(а) форма 1, (b) форма 2, (c) форма 3, (d) форма 4 (формы 1-4 раскрыты в патенте США № 6451340), (e) форма, описанная в WO 04/043972]

На фигуре 2 представлен рентгенодифракционный спектр формы A кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 1.

На фигуре 3 представлен рентгенодифракционный спектр формы C кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 4.

На фигуре 4 представлен рентгенодифракционный спектр формы D кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 5.

На фигуре 5 представлен рентгенодифракционный спектр формы E кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 7.

На фигуре 6 представлен рентгенодифракционный спектр формы F кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 9.

На фигуре 7 представлен рентгенодифракционный спектр формы G кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 10.

На фигуре 8 представлен рентгенодифракционный спектр формы B кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 11.

На фигуре 9 представлена эндотермическая кривая DSC формы A кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 3.

На фигуре 10 представлена эндотермическая кривая DSC формы B кристаллического адефовира дипивоксила, полученного в примере 11.

Способ осуществления изобретения

В способах получения новых кристаллических форм, соответствующих данному изобретению, типы новых кристаллов определяются соотношением растворенное вещество (адефовира дипивоксил):растворяющий растворитель:кристаллизующий растворитель, условием растворимости, температурой кристаллизации и т.д., которые подробно описываются ниже.

1) Использование воды в качестве кристаллизующего растворителя.

В одном варианте осуществления данного изобретения в качестве растворяющего растворителя применяют ацетон в количестве от 2 до 7 весовых частей, предпочтительно от 4 до 6 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила, которое является минимальным количеством для растворения адефовира дипивоксила. После того, как адефовира дипивоксил растворяют при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С, к вышеуказанному раствору добавляют воду в качестве растворителя для кристаллизации адефовира дипивоксила. Количество воды составляет от 20 до 40 весовых частей, предпочтительно от 25 до 30 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. Кристаллизующий растворитель добавляют для образования кристаллов, при этом полученную таким путем смесь перемешивают от 4 до 30 ч, предпочтительно от 5 до 20 ч поддерживая температуру в интервале от 0 до 30°С, предпочтительно от 5 до 25°С, чтобы способствовать образованию и росту ядра кристаллизации. Смесь фильтруют, и собранные кристаллы сушат при пониженном давлении и температуре 35°С или ниже с получением формы A кристаллического адефовира дипивоксила. После сушки, для формы А с помощью титрования методом Карла Фишера определяется содержание влаги, которое составляет от 6,5% до 7,1%. Если температура при перемешивании высокая, то выход может уменьшиться. Таким образом, температура и время перемешивания могут играть важную роль при получении ожидаемых высокого выхода и чистоты формы А кристаллического адефовира дипивоксила.

В другом варианте осуществления данного изобретения ацетон используют в качестве растворяющего растворителя в количестве от 2 до 7 весовых частей, предпочтительно от 2 до 4 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила, чтобы растворить адефовира дипивоксил при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С. Затем к вышеуказанному раствору добавляют воду в качестве кристаллизующего растворителя в количестве от 7 до 13 весовых частей, предпочтительно от 9 до 11 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. Полученную таким образом смесь не перемешивают, но дают ей постоять поддерживая температуру в интервале от 0 до 10°С, предпочтительно от 5 до 10°С при постоянном охлаждении в течение от 5 до 30 ч, предпочтительно от 5 до 20 ч, чтобы вызвать рост кристалла. Смесь фильтруют, и собранные кристаллы сушат при пониженном давлении и температуре 35°С или ниже. После сушки, для формы С с помощью титрования методом Карла Фишера определяется содержание влаги, которое составляет от 6,5% до 7,1%.

В другом варианте осуществления данного изобретения форму А получают путем использования 1-метилпирролидона, или этанола в качестве растворяющего растворителя и воды в качестве кристаллизующего растворителя. В случае, когда 1-метилпирролидон используют в качестве растворяющего растворителя для растворения адефовира дипивоксила, его используют в количестве от 2 до 5 весовых частей, предпочтительно от 3 до 4 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. В случае, когда этанол используют в качестве растворяющего растворителя для растворения адефовира дипивоксила, его используют в количестве от 5 до 15 весовых частей, предпочтительно от 8 до 12 весовых частей, относительно веса адефовира дипивоксила. Полученному таким образом раствору дают постоять поддерживая температуру от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С, чтобы растворить адефовира дипивоксил. Затем к вышеуказанному раствору добавляют воду в качестве кристаллизующего растворителя в количестве от 10 до 30 весовых частей, предпочтительно от 15 до 20 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. Для того, чтобы вызвать рост кристалла, смесь перемешивают от 3 до 10 ч, предпочтительно от 4 до 5 ч поддерживая температуру от 0 до 10°С, предпочтительно от 5 до 10°С при постоянном охлаждении. Смесь фильтруют и собранные кристаллы сушат при пониженном давлении и температуре 30°С или ниже с получением формы A кристаллического адефовира дипивоксила. В случае, если кристаллизацию осуществляют с применением воды в качестве кристаллизующего растворителя, содержание влаги после сушки составляет от 6,5% до 7,1% по данным титрования методом Карла Фишера.

2) Использование органических растворителей в качестве растворяющих растворителей и кристаллизующих растворителей.

Кристаллические формы адефовира дипивоксила можно получить путем смешивания кристаллизующих растворителей, таких как н-гептан, или циклогексан с раствором адефовира дипивоксила в растворяющих растворителях, таких как хлороформ, этилацетат, ацетонитрил или изопропиловый спирт.

В одном варианте осуществления данного изобретения адефовира дипивоксил растворяют хлороформе, используемом в качестве растворяющего растворителя в количестве от 1 до 5 весовых частей, предпочтительно от 2 до 4 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила при температуре от 30 до 50°С, предпочтительно от 35 до 45°С. Данный раствор охлаждают до температуры от 10 до 30°С, предпочтительно от 20 до 25°С и добавляют н-гептан, чтобы образовывались кристаллы. Количество н-гептана составляет от 1 до 5 весовых частей, предпочтительно от 2 до 3 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. После образования кристаллов смесь перемешивают от 4 до 20 ч, предпочтительно от 5 до 10 ч поддерживая температуру от -10 до 30°С, предпочтительно от -5 до 25°С, чтобы способствовать образованию и росту ядер кристаллизации. Смесь фильтруют, и собранные кристаллы сушат с получением формы D кристаллического адефовира дипивоксила.

В другом варианте осуществления данного изобретения этилацетат используют в качестве растворяющего растворителя в количестве от 0,5 до 2 весовых частей, предпочтительно от 0,5 до 1 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С для приготовления раствора с высоким содержанием адефовира дипивоксила. Затем данный раствор добавляют к н-гептану при температуре от -20 до 20°С, предпочтительно от -5 до 5°С для образования кристаллов. Количество н-гептана составляет от 10 до 100 весовых частей, предпочтительно от 20 до 50 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. После образования кристаллов смесь перемешивают в течение от 4 до 20 ч, предпочтительно от 5 до 10 ч поддерживая температуру от -20 до 20°С , предпочтительно от -5 до 5°С, чтобы способствовать образованию и росту ядер кристаллизации. Смесь фильтруют, и полученные кристаллы сушат с получением формы D кристаллического адефовира дипивоксила.

В другом варианте осуществления данного изобретения изопропиловый спирт используют в качестве растворяющего растворителя в количестве от 5 до 20 весовых частей, предпочтительно от 10 до 15 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С для приготовления раствора адефовира дипивоксила. Затем к данному раствору для образования кристаллов добавляют циклогексан при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С. Количество циклогексана составляет от 10 до 40 весовых частей, предпочтительно от 20 до 30 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. После образования кристаллов смесь перемешивают от 10 до 40 ч, предпочтительно от 15 до 25 ч поддерживая температуру от -20 до 20°С, предпочтительно от 0 до 10°С чтобы способствовать росту центров кристаллизации. Смесь фильтруют, и полученные кристаллы сушат с получением формы F кристаллического адефовира дипивоксила.

В другом варианте осуществления данного изобретения хлороформ применяют в качестве растворяющего растворителя в количестве от 1 до 5 весовых частей, предпочтительно от 2 до 3 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С для получения раствора адефовира дипивоксила. Затем к данному раствору для образования кристаллов добавляют н-гексан при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С. Количество н-гексана составляет от 5 до 30 весовых частей, предпочтительно от 5 до 10 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила. После образования кристаллов смесь перемешивают от 1 до 10 ч, предпочтительно от 2 до 5 ч поддерживая температуру от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С чтобы способствовать росту центров кристаллизации. Смесь фильтруют, и полученные кристаллы сушат с получением формы G кристаллического адефовира дипивоксила.

3) Получение формы B кристаллического адефовира дипивоксила.

В другом варианте осуществления данного изобретения получают и отфильтровывают форму A кристаллического адефовира дипивоксила. Полученные кристаллы сушат при пониженном давлении и температуре от 35 до 45°С с получением формы B кристаллического адефовира дипивоксила. Содержание влаги после сушки составляет от 0,01% до 0,5% по данным титрования методом Карла Фишера.

4) Получение формы E кристаллического адефовира дипивоксила.

В другом варианте осуществления данного изобретения метилацетат или ацетонитрил используют в качестве растворяющего растворителя в количестве от 3 до 40 весовых частей, предпочтительно от 3 до 15 весовых частей относительно веса адефовира дипивоксила при температуре от 10 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С, чтобы растворить адефовира дипивоксил. Использованный растворяющий растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении и той же температуре с получением формы E кристаллического адефовира дипивоксила.

Настоящее изобретение будет описано более конкретно с помощью следующих примеров. Однако следует понимать, что примеры предоставлены только с целью пояснения и объем изобретения ими не ограничивается.

Пример 1: Получение формы A

Адефовира дипивоксил (0,3 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и 1-метилпирролидон (1,00 г) смешивали в весовом соотношении 1:3,33, при этом адефовира дипивоксил полностью растворялся при 30°С. К данному раствору добавляли воду, заранее проконтролировав, чтобы ее температура составляла 25°С, до тех пор, пока не образовались кристаллы. Количество добавленной воды составляло 5,00 г. Раствор охлаждали с помощью холодильника, контролируя, чтобы температура составляла 5°С. Охлажденный таким образом раствор перемешивали приблизительно 4,5 ч и суспензию отфильтровывали, для отделения кристаллов. Кристаллы, полученные после фильтрации, промывали водой и снова отфильтровывали. Кристаллы сушили при пониженном давлении и температуре от 25 до 30°С с получением 0,3 г (выход извлекаемого продукта: 93%) формы A (содержание влаги по данным титрования методом Карла Фишера: 6,7%).

Пример 2: Получение формы A

Проводили методику, аналогичную описанной в примере 1, с получением 0,31 г (выход извлекаемого продукта: 96%) формы A (содержание влаги по данным титрования методом Карла Фишера: 7,1%), за исключением того, что смешивали адефовира дипивоксил (0,3 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и этанол (3,31 г) в весовом соотношении 1:11,03.

Пример 3: Получение формы A

Адефовира дипивоксил (3,94 кг), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и ацетон (14,15 кг) смешивали в весовом соотношении 1:3,59, и адефовира дипивоксил полностью растворялся при 30°С. К данному раствору добавляли воду (141,5 кг), заранее проконтролировав, чтобы ее температура составляла 25°С, и перемешивали смесь приблизительно 10 ч при температуре от 20 до 25°С. Кристаллы отделяли фильтрованием и промывали водой. Кристаллы сушили при пониженном давлении при температуре от 25 до 30°С с получением 3,83 кг (выход извлекаемого продукта: 91%) формы A (содержание влаги по данным титрования методом Карла Фишера: 6,9%).

Пример 4: Получение формы C

Адефовира дипивоксил (0,301 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и ацетон (1,30 г) смешивали в весовом соотношении 1:4,32, при этом адефовира дипивоксил полностью растворялся при 30°С. К данному раствору добавляли воду в количестве, превышающем в два раза количество ацетона, используемого в качестве растворителя, т.е. 2,60 г. Смеси дали постоять при 6,4°С в течении приблизительно 17 ч, чтобы вызвать рост кристалла. Кристаллы отделяли фильтрованием и сушили при пониженном давлении и температуре от 25 до 30°С в течение 24 ч с получением 0,29 г (выход извлекаемого продукта: 90%) формы C (содержание влаги по данным титрования методом Карла Фишера: 6,5%).

Пример 5: Получение формы D

Адефовира дипивоксил (1,00 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и хлороформ (3 г) смешивали в весовом соотношении 1:3,00, при этом адефовира дипивоксил полностью растворился при 45°С. Полученный раствор охлаждали до 25°С и добавляли к нему н-гептан (2,7 г), заранее проконтролировав, чтобы его температура составляла 25°С. Смесь охлаждали с помощью холодильника, контролируя, чтобы температура составляла 0°С, и перемешивали приблизительно 5 ч. Кристаллы отделяли фильтрованием и промывали н-гептаном. Кристаллы сушили при пониженном давлении и температуре от 25 до 30°С в течение 24 ч с получением 0,89 г (выход извлекаемого продукта: 89%) формы D.

Пример 6: Получение формы D

Адефовира дипивоксил (3,8 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и этилацетат (2,7 г) смешивали в весовом соотношении 1:0,71, при этом адефовира дипивоксил был полностью растворен при 30°С, чтобы приготовить высококонцентрированный раствор. Полученный раствор добавляли к н-гептану (82 г), поддерживая температуру равную 0°С, и смеси давали возможность кристаллизоваться приблизительно 6 ч. Образованные таким образом кристаллы отделяли фильтрованием, промывали н-гептаном и снова отфильтровывали. Кристаллы сушили при пониженном давлении и температуре от 25 до 30°С в течение 24 ч с получением 3,7 г (выход извлекаемого продукта: 97%) формы D.

Пример 7: Получение формы E

Адефовира дипивоксил (0,2 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и метилацетат (2,8 г) смешивали в весовом соотношении 1:14, при этом адефовира дипивоксил полностью растворялся при 25°С. Из полученного раствора выпаривали растворитель при пониженном давлении и аналогичной температуре с получением 0,18 г (выход извлекаемого продукта: 90%) формы E, которая по сравнению с формой A, описанной в патенте США № 6451340, дополнительно имеет пик при 2 =3,4°.

Пример 8: Получение формы E

Проводили методику, аналогичную описанной в примере 7, за исключением того, что смешивали адефовира дипивоксил (0,2 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и ацетонитрил (0,8 г) в весовом соотношении 1:4. В результате получали 0,18 г (выход извлекаемого продукта: 90%) формы E, которая по сравнению с формой A, описанной в патенте США № 6451340, дополнительно имела пик при 2 =3,4°.

Пример 9: Получение формы F

Адефовира дипивоксил (0,5016 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и изопропиловый спирт (6,11 г) смешивали в весовом соотношении 1:12,2, при этом адефовира дипивоксил полностью растворялся при 30°С. К данному раствору добавляли циклогексан в количестве, приблизительно в 2 раза превышающем количество изопропилового спирта, используемого в качестве растворителя, т.е. 12,83 г. Затем смесь перемешивали при 6,4°С в течение приблизительно 20 ч, чтобы вызвать рост кристаллов. Кристаллы отделяли фильтрованием, промывали циклогексаном, снова отфильтровали и сушили при пониженном давлении и температуре от 25 до 30°С в течение 24 ч с получением 0,45 г (выход извлекаемого продукта: 90%) формы F, которая по сравнению с формой A, описанной в патенте США № 6451340, дополнительно имеет пик при 2 =5,6°.

Пример 10: Получение формы G

Адефовира дипивоксил (0,50 г), полученный согласно примеру 9 патента США № 5663159, и хлороформ (1,50 г) смешивали в весовом соотношении 1:3, при этом адефовира дипивоксил полностью растворялся при 30°С. К данному раствору добавляли н-гексан (3,03 г), заранее проконтролировав, чтобы его температура была такой же, как температура раствора. Затем смесь перемешивали приблизительно 4 ч, кристаллы отделяли фильтрацией с помощью отсасывающего устройства и сушили при температуре от 25 до 30°С в течение 24 ч с получением 0,42 г (выход извлекаемого продукта: 84%) формы G, у которой по сравнению с формой A, описанной в патенте США № 6451340, отсутствовал пик при 2 =11,8°.

Пример 11: Получение формы В

Форму А адефовира дипивоксила (3,83 кг), которую получали согласно методике, аналогичной описанной в примере 3, и собирали фильтрованием, сушили при пониженном давлении при температуре от 35 до 45°С с получением 3,54 кг (выход извлекаемого продукта: 99%) формы В кристаллического адефовира дипивоксила (содержание влаги по данным титрования методом Карла Фишера: 0,2%).

Эксперимент 1: Рентгенодифракционный спектр

Адефовира дипивоксил, полученный в примерах, был проанализирован с помощью приборов для рентгеноструктурного анализа [измерительные приборы: M18XHF-SRA (Mac Science, Япония) и порошковый рентгеноструктурный анализ (Bruker AXS, Германия) с источником излучения Си К-альфа с длиной волны 1.54 Å], при этом результаты отображены на фигурах 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8.

Эксперимент 2: Дифференциальный сканирующий калориметр; DSC

Кристаллические формы адефовира дипивоксила, полученные в примерах 3 и 11, были проанализированы с помощью дифференциального сканирующего калориметра [измерительный прибор: DSC822e, Mettler Toledo], при этом результаты отображены на фигурах 9 и 10.

Эксперимент 3: Температурные режимы сушки для получения форм А и В

Форму А, полученную согласно примеру 3, подвергали воздействию различных температур сушки и различному времени сушки в условиях вакуума, составляющего 0,1~1,0 мм ртутного столба, при этом конечное изменение кристаллической формы отображено в таблице 1.

Таблица 1
Использованный продукт	Время сушки	Температура сушки	Кристаллическая форма
Форма A, полученная в примере 3 данного изобретения	10 ч	25°С	Форма A (двуводная)
48 ч	25°С	Форма A (двуводная)
10 ч	35°С	Форма B
10 ч	40°С	Форма B
10 ч	42°С	Форма B
10 ч	45°С	Форма B
10 ч	50°С	Смесь формы B + кристаллическая форма, описанная в патенте Китая № 2003100167
Форма I, полученная согласно примеру 1, описанному в WO99/04774	10 ч	40°С	Форма I
20 ч	40°С	Форма I

Как показано в таблице 1, когда форма A кристаллического адефовира дипивоксила, полученная согласно примеру 3, была высушена под вакуумом при 25°С, она не превращалась в другие кристаллические формы, при этом сохранялось содержание воды, соответствующее дигидрату в виде формы A. Однако, когда сушку проводили при температуре от 35 до 45°С, было обнаружено, что она превращается из формы A в форму B. C другой стороны, форма I не превращалась в форму B в процессе сушки при вышеупомянутой температуре.

Эксперимент 4: Испытание на стабильность

Новые формы A и B, описанные в примерах 3 и 11 данного изобретения и 50 мг оригинального адефовира дипивоксила (чистота: 99,5%) точно взвесили в мерной колбе объемом 50 мл и растворили в растворителе. После доведения до метки, их использовали в качестве растворов образцов и стандартного раствора, соответственно. Анализ проводили в соответствии с указанными ниже условиями, с тем, чтобы рассчитать содержания новых форм A и B и количества образовавшихся продуктов разложения адефовира дипивоксила по площадям пиков. Изменения в содержаниях новых кристаллических форм и количества продуктов разложения измеряли при 5°С, а также в условиях ускоренных испытаний, в течение 6 месяцев. Результаты показаны в таблицах 2 и 3.

Условия проведения анализа

Прибор: Waters HPLC модель 2695

Колонка: Alltech смешанного режима анионообменная С8, 7 мкм размер пор 100 Å, 250 мм ×4,6 мм.

Условия проведения анализа

Был задействован следующий режим смешанного использования подвижной фазы: В течение 19 мин доля подвижной фазы A менялась от 100% до 0%, а доля подвижной фазы B менялась от 0% до 100%. После элюирования 100% подвижной фазой B в течение 36 минут, доля подвижной фазы A в элюенте менялась от 0% до 100% в течение 46 мин.

Подвижная фаза A: буфер/ацетонитрил (70:30, об./об.)

Подвижная фаза B: буфер/ацетонитрил (50:50, об./об.)

Буфер: 9,2 г K₂HPO₄ и 47,2 г KH₂PO₄ растворили в 2 л очищенной воды

Растворитель: 3,4 г KH₂PO ₄ растворили в 1 л очищенной воды и отрегулировали pH до 3,0

Длина волны детектора: 260 нм

Скорость потока: 1,2 мл/мин

Таблица 2
5°С
Период времени	0 месяцев (%)	1 месяцев (%)	3 месяцев (%)	6 месяцев (%)
Форма A	Содержание	100,26	99,45	100,43	100,2
Общее количество продуктов разложения	0,27	0,25	0,25	0,32
Форма B	Содержание	100,48	100,34	99,18	99,74
Общее количество продуктов разложения	0,38	0,31	0,36	0,43

Таблица 3
Ускоренные испытания (25°С, 60% RH)
Период времени	0 месяцев (%)	1 месяцев (%)	3 месяцев (%)	6 месяцев (%)
Форма A	Содержание	100,26	99,68	99,50	100,06
Общее количество продуктов разложения	0,27	0,38	0,45	0,60
Форма B	Содержание	100,48	98,85	100,25	99,32
Общее количество продуктов разложения	0,38	0,42	0,50	0,66

Как показано в таблицах 2 и 3, как при 5°С, так и в условиях ускоренных испытаний, содержание новых форм A и B сохранялось на уровне 98,85%~100,48%, а общее количество продуктов разложения составляло 0,25%~0,66%, тем самым демонстрировалась весьма отличная стабильность.

Эксперимент 5: Испытание на растворение

Используя в качестве исходных продуктов новую форму B, полученную в примере 11 данного изобретения и форму 1, полученную на основе примера 1, описанного в WO 99/04774, каждую лекарственную форму изготовили методом, раскрытым в примере 1, описанном в WO 00/35460. Сравнили скорости растворения в 0,01н. растворе HCl, в буферном растворе с pH 1,2 (20 г NaCl+68~70 мл 37% HCl+9 л дистиллированной воды), в буферном растворе с pH 4,0 (7,38 г ацетата натрия +25 мл уксусной кислоты+9 л дистиллированной воды), в буферном растворе с pH 6,0 (68 г KH₂PO₄+NaOH+10 л дистиллированной воды) и в дистиллированной воде с pH 7. Для каждого случая эксперименты повторили 3 раза, при этом средние значения отображены в таблице 4.

Таблица 4
Время (мин)	5	10	15	20
Скорость растворения (%)	0,01 Н HCl	Форма I	88,11	93,32	95,48	98,17
Форма B	85,25	97,19	99,65	101,12
pH 1,2	Форма I	95,24	100,90	101,38	101,61
Форма B	93,77	101,06	102,03	101,71
pH 4,0	Форма I	83,38	88,07	89,76	93,00
Форма B	87,18	96,99	98,21	98,98
pH 6,0	Форма I	74,89	89,88	94,58	97,38
Форма B	88,62	95,33	98,01	100,32
Дистиллированная вода	Форма I	70,92	83,19	88,58	94,85
Форма B	83,57	96,96	98,73	98,96

Конечные данные в таблице 4 показывают, что лекарственная форма, полученная с использованием новой формы B, относящейся к данному изобретению, демонстрирует большую скорость растворения, чем скорость растворения лекарственной формы, изготовленной с применением существующей формы I.