способ моделирования хлоридкальциевой аритмии при l-name-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте

Формула изобретения

Способ моделирования хлоридкальциевой аритмии при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, отличающийся тем, что самцам крыс линии Wistar внутрибрюшинно вводят L-NAME в дозе 25 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней, затем на 8 день от начала эксперимента под наркозом осуществляют струйное введение 10%-ного раствора хлорида кальция в бедренную вену в дозе 200 мг/кг и одновременно регистрируют ЭКГ с помощью электрокардиографа «Малыш ЭК1Т-04» во втором стандартном отведении, оценкой проаритмогенного действия L-NAME по количеству выживших животных, по времени возникновения аритмии, по ЧСС и по характеру аритмии в опытной и контрольной группах.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для оценки антиаритмического действия ряда фармакологических препаратов при моделировании хлоридкальциевой аритмии в условиях L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота.

Наиболее близким к заявленному решению является способ моделирования аритмии с помощью внутривенного введения 10% раствора хлорида кальция в дозе 250 мг/кг (Хабриев Р.У. «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», Москва, 2005, с.424).

Основными недостатками способа является то, что он не учитывает NO- и АДМА-зависимых механизмов развития аритмий.

Задачей изобретения является разработка хлоридкальциевой аритмии при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, учитывающей NO-зависимые механизмы развития аритмий, основанной на предварительном внутрибрюшинном введении L-NAME в течение семи дней.

Поставленная задача достигается внутрибрюшинным введением самцам крыс линии Wistar блокатора эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) L-NAME в дозе 25 мг/кг один раз в сутки в течение 7 дней с последующим струйным введением на восьмой день эксперимента 10% раствора хлорида кальция в дозе 200 мг/кг в бедренную вену.

Внутрибрюшинное введение L-NAME в дозе 25 мг/кг приводит к конкурентному обратимому ингибированию эндотелиальной NO-синтазы, что приводит к дефициту эндогенного оксида азота и, как следствие, к повышению адренореактивности миокарда и увеличению его проаритмогенного потенциала.

Способ осуществляется следующим образом.

Эксперимент выполнен на половозрелых самцах крыс линии Wistar массой 180-200 г. Раствор для внутрибрюшинного введения L-нитроаргинина метилового эфира готовили ex tempore с помощью дистиллированной воды из расчета 25 мг L-NAME на 1 мл дистиллированной воды. В эксперименте использовались две группы животных: 1) контрольная (n=7); 2) опытная (n=7). Контрольной группе ежедневно внутрибрюшинно вводили физиологический раствор из расчета 0,1 мл на 100 г массы животного в течение 7 дней. Опытной группе ежедневно внутрибрюшинно вводили раствор L-NAME в дозе 25 мг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы животного в течение 7 дней.

По окончании введения L-NAME на восьмые сутки от начала эксперимента животных наркотизировали (хлоралгидрат, 300 мг/кг) и осуществили струйное введение 10% раствора хлорида кальция в бедренную вену в дозе 200 мг/кг с одновременной регистрацией ЭКГ с помощью электрокардиографа «Малыш ЭК1T-04».

Степень проаритмогенного действия L-NAME оценивали по проценту выживших животных, по времени возникновения аритмии от начала введения хлорида кальция, по характеру развития аритмий и ЧСС.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

Пример конкретного выполнения.

Результаты проведенных экспериментов позволили установить, что ежедневное в течение 7 суток внутрибрюшинное введение блокатора эндотелиальной NO-синтазы L-NAME в дозе 25 мг/кг вызывает гибель 100% животных после внутривенного струйного введения хлорида кальция в результате фибрилляции. В отличие от опытной в контрольной группе гибель животных после внутривенного струйного введения хлорида кальция составила 43%. Время возникновения аритмии от момента струйного внутривенного введения хлорида кальция в опытной группе животных составило в среднем 4,2 секунды, в контрольной - 9,8 секунды.

До начала введения хлорида кальция у крыс обеих групп на ЭКГ регистрировался правильный синусовый ритм, ЧСС в опытной группе составляла 425 уд/мин, а в контрольной - 395 уд/мин. После струйного введения 10% раствора хлорида кальция в бедренную вену у животных опытной и контрольной групп через определенный промежуток времени развивалась аритмия. Дальнейшая динамика изменений, возникающих на ЭКГ, в данных группах животных значительно отличалась. В опытной группе аритмия быстро переходила в непродолжительный период фибрилляции, амплитуда которой сначала резко увеличивалась, а затем прогрессивно снижалась и через 11-12 секунд переходила в изолинию, что свидетельствовало о гибели животного. В контрольной группе животных у 57% возникшие нарушения ритма постепенно исчезали и через 1-2 мин наблюдалось восстановление правильного синусового ритма.

Таким образом, моделирование хлоридкальциевой аритмии при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота с помощью внутрибрюшинного введения L-NAME в дозе 25 мг/кг один раз в сутки в течение 7 дней следует признать адекватной экспериментальной моделью развития аритмии, которая может быть использована для изучения противоаритмических эффектов различных групп фармакологических препаратов при данной модели патологии.