фотохимическая интернализация для опосредованной вирусом доставки молекулы в цитозоль

Формула изобретения

1. Способ введения молекулы нуклеиновой кислоты в клетку, где указанный способ включает контактирование указанной клетки с фотосенсибилизирующим средством, контактирование указанной клетки с молекулой нуклеиновой кислоты, подлежащей введению (переносимой молекулой), которая представляет собой часть генома вирусного носителя или переносится в составе вирусного носителя, и облучение указанной клетки светом с длиной волны, эффективной для активации фотосенсибилизирующего средства.

2. Способ по п.1, где указанная клетка является клеткой млекопитающего.

3. Способ по п.1 или 2, где указанная переносимая молекула включает ген полной длины, или кДНК, или другую ДНК, кодирующие одно и то же, или их функциональный фрагмент.

4. Способ по п.3, где указанная молекула нуклеиновой кислоты кодирует пролекарство, активирующее фермент, белковый токсин, белок, индуцирующий апоптоз, иммуностимулирующий фактор, опухолеспецифичный антиген, ингибитор иммунитета/воспаления, ингибитор ангиогенеза, белок, индуцирующий образование сосудов, белок инициации коагуляции, внутриклеточное антитело или рекомбинантный иммунотоксин.

5. Способ по п.1 или 2, где указанная переносимая молекула кодирует антисмысловую молекулу РНК, рибозим, аптамер, олигонуклеотид или триплексобразующий олигонуклеотид.

6. Способ по любому из пп.3-5, где указанная переносимая молекула включает от 20 до 10000 оснований в длину.

7. Способ по любому из пп.1-6, где указанная переносимая молекула включена в вирусную конструкцию, которая содержит полученные из вируса элементы, необходимые для того, чтобы указанная конструкция могла упаковаться внутри вирусного носителя.

8. Способ по любому из пп.1-7, где указанный вирусный носитель представляет собой аденовирус, аденоассоциированный вирус, ретровирус, лентивирус, вирус герпеса, бактериофаг, вирус гриппа, вирус Сендаи, вирус осповакцины или бакуловирус.

9. Способ по любому из пп.1-8, где указанный вирусный носитель представляет собой аденовирус.

10. Способ по любому из пп.1-9, где указанное фотосенсибилизирующее средство локализовано во внутриклеточных компартментах, в особенности в эндосомах или лизосомах.

11. Способ по любому из пп.1-10, где указанное фотосенсибилизирующее средство отделено от вирусного носителя и предпочтительно фотосенсибилизирующее средство и вирусный носитель контактируют с указанной клеткой последовательно.

12. Способ по любому из пп.1-11, где указанное фотосенсибилизирующее средство выбирают из группы, состоящей из TPPS _2a, A1PcS_2a, и других амфифильных фотосенсибилизаторов.

13. Способ по любому из пп.1-11, где указанные фотосенсибилизирующие средства относятся к соединениям, представляющим собой 5-аминолевулиновую кислоту или сложные эфиры 5-аминолевулиновой кислоты или их фармацевтически приемлемым солям.

14. Способ по любому из пп.1-13, где указанный вирусный носитель контактирует с указанной клеткой в течение 15 мин - 6 ч.

15. Способ по любому из пп.1-14, где указанное фотосенсибилизирующее средство контактирует с указанными клетками за 4-24 ч до облучения.

16. Способ по любому из пп.1-15, где указанная стадия облучения составляет от 1 до 10 мин.

17. Способ по любому из пп.1-16, где указанный вирусный носитель добавляют до или после облучения.

18. Способ по любому из пп.1-17, где одно или оба указанных: фотосенсибилизирующее средство и переносимая молекула присоединяются, ассоциируются или конъюгируют с одной или более молекулами носителя, целевыми молекулами или векторами.

19. Способ по любому из п.18, где указанный вирусный носитель присоединяется, ассоциируется или конъюгирует с молекулой носителя.

20. Способ по п.18 или 19, где указанная молекула носителя включает поликатион или катионный липид.

21. Способ по п.20, где указанный поликатион представляет собой поли-L-лизин или поли-D-лизин или Superfect®.

22. Способ по п.20, где указанный катионный липид представляет собой ДОТАП.

23. Способ по п.19 или 20, где указанная молекула носителя представляет собой липосому или конструкцию на основе липида, предпочтительно содержащую по меньшей мере один катионный липид.

24. Способ по любому из пп.1-23, где по меньшей мере 50% из указанных клеток, внутрь которых вводят указанную молекулу, сохраняют жизнеспособность.

25. Способ по любому из пп.1-24, где по указанный способ осуществляют на клетках in vitro или in vivo.

26. Способ лечения или профилактики заболевания, расстройства или инфекции у пациента методом генной терапии, включающей введение переносимой молекулы нуклеиновой кислоты, которая представляет собой часть генома вирусного носителя или переносится в составе вирусного носителя, внутрь одной или большего числа клеток in vitro, in vivo или ex vivo в соответствии с настоящим способом по любому из пп.1-25, когда есть необходимость введения указанных клеток пациенту.

27. Способ по п.26, где указанная генная терапия достигается за счет целевого уничтожения специфических клеток, целевого ингибирования генной экспрессии, аугментационной терапии или коррекции мутации за счет введения гена или его части, способных к экспрессии функционального продукта, компенсирующего имеющийся у пациента недостаток.

28. Способ по п.26 или 27, где указанные заболевание, расстройство или инфекция представляют собой рак, ревматоидный артрит, атеросклероз, вирусную или другую инфекцию, псориаз, солнечный кератоз, рану, перелом, боровки или наследственное генетическое нарушение.

29. Способ по любому из пп.26-28, где вводят in vivo от 10 ³ до 10¹⁵ вирусных частиц.

30. Клетка, содержащая переносимую молекулу нуклеиновой кислоты, которая представляет собой часть генома вирусного носителя или переносится в составе вирусного носителя, полученная согласно способу по любому из пп.1-25.

31. Фармацевтическая композиция для генной терапии, включающая переносимую молекулу нуклеиновой кислоты, которая представляет собой часть генома вирусного носителя или переносится в составе вирусного носителя, и фотосенсибилизирующее средство или клетку по п.30.

32. Применение переносимой молекулы нуклеиновой кислоты, которая представляет собой часть генома вирусного носителя или переносится в составе вирусного носителя, и фотосенсибилизирующего средства, как определено в любом из пп.1-25, или клетки по п.30 для получения лекарственного средства для применения в генной терапии.

Приоритет по пунктам:

29.11.2000 - пп.1, 2, 4-7, 9-12, 15-20, 24-28, 30-32;

01.12.2000 - п.13;

15.06.2001 - п.14;

29.11.2001 - пп.3, 8, 21-23, 29.

Описание изобретения к патенту

Текст описания приведен в факсимильном виде.