ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки крови

Классы МПК:G01N33/49 крови
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского" (RU),
Закрытое акционерное общество "Фирма "БИОМ" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-10-30
публикация патента:

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения аполипопротеина А1 и аполипопротеина В сыворотки крови с целью выявления факторов риска атеросклероза коронарных артерий при скрининге у населения. Способ включает пропускание ультразвука с изменяющейся частотой через пробы с дистиллированной водой и через пробы с сывороткой крови при двух разных температурах, измерение скоростей прохождения ультразвука через пробы и определение величин относительных скоростей прохождения ультразвука через пробы, при этом используют пару проб с дистиллированной водой и пару проб с сывороткой крови, при этом температуру одной из проб в паре поддерживают ниже, чем другой, но температуру проб в парах поддерживают одинаковыми в интервале температур 25-40°C, затем определяют коэффициент поглощения ультразвука в дистиллированной воде и коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови и его зависимость от частоты в диапазоне частот 4-15 МГц, а также зависимость от температуры скорости ультразвука в сыворотке крови, после чего определяют аполипопротеин А1 и аполипопротеин В путем решения системы линейных уравнений относительно двух неизвестных. Изобретение обеспечивает повышение точности и информативности, сокращение сроков проведения исследований. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения аполипопротеина A1 и аполипопротеина B сыворотки крови с целью выявления факторов риска атеросклероза коронарных артерий при скрининге у населения.

Для определения содержания аполипопротеина A1 (апоA1) и аполипопротеина B (апоB) сыворотки крови применяют разные методические подходы. Разделение апоЛП на основании их физико-химических свойств (электрофорез на разных поддерживающих средах, изоэлектрическое фокусирование) используют для качественного определения аполипопротеинов, а также (в сочетании со сканирующей денситометрией) для оценки соотношения аполипопротеинов. Методы применяют в научных исследованиях или используют как диагностические тесты в специализированных лабораториях, их применение в обычной лабораторной практике в настоящее время затруднительно.

Большая часть методов определения апоЛП основана на принципах иммунохимического анализа: иммунотурбидиметрия и иммунонефелометрия, радиальная иммунодиффузия и иммуноэлектрофорез, иммуноферментный и радиоиммунный анализ. Для количественного иммунохимического определения необходимо иметь специфическую антисыворотку и стандарт.

Используемые в настоящее время методы определения аполипопротеина A1 и аполипопротеина B сыворотки крови обладают рядом существенных недостатков, общими из которых является: длительное время проведения анализа; зависимость результатов от качества используемых реактивов; чувствительность существующих методов к температуре, мутность сыворотки, обусловленная высокой концентрацией липопротеидов, богатых триглицеридами.

Кроме того, каждый из известных способов предназначен для определения только одного из компонентов. Отсутствует единый универсальный метод одновременного определения аполипопротеина A1 и аполипопротеина B сыворотки крови.

Известен метод радиоиммунологического анализа (РИА) сыворотки крови с целью определения аполипопротеина A1 и аполипопротеина B с использованием моноклональных антител. К недостаткам метода следует отнести использование радиоактивных изотопов (обычно 125 I), для работы с которыми требуются специальные условия и дорогостоящее оборудование. Кроме того, метод требует постоянного обновления реактивов (1 раз в 2 месяца) из-за относительной нестабильности 125 I.

Радиальная иммунодиффузия (РИД) и иммуноэлектрофорез (ИЭФ) - методы менее чувствительны по сравнению с РИА, и для их выполнения необходимо значительно большее количество антисыворотки, что приводит к удорожанию метода. Кроме того, применение ИЭФ не позволяет определить общее содержание апоB в сыворотке крови, что обусловлено различиями в скорости движения при электрофорезе липопротинов разных классов в геле. РИД и ИЭФ занимают много времени, и поэтому их затруднительно использовать для большого количества образцов.

Иммунотубидиметрический анализ (ИТА) более прост для проведения анализов в клинических лабораториях, занимает мало времени, но требует реагентов, и, следовательно, качество анализа зависит от качества реагентов, поэтому лучшие результаты можно получить, используя дорогие реактивы.

Иммунонефелометрический анализ (ИНА) подобен ИТА, однако требует специальные приборы-нефелометры, поскольку при ИНА определяют изменение светорассеяния пробы, а не мутности образца, как при ИТА. Выполнение анализа ИНА методом также требует качественных реактивов, и поэтому стоимость анализа этим методом достаточно высока.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к предлагаемому изобретению является способ диагностики внутренних органов и способ получения контрольного образца для его осуществления (варианты), защищенный патентом RU 2082318 C1, A61B 8/08, опубл. 27.06.1997 г., принятый за ближайший аналог (прототип).

Способ по прототипу включает исследования сыворотки крови пациента в сравнении с контрольным образцом путем пропускания через них ультразвука переменной частоты в интервале 3-20 МГц для лабораторной диагностики заболеваний внутренних органов опухолевого генеза. Измерения проводят дважды, определяя величины относительных скоростей прохождения ультразвука для сыворотки крови и контрольного образца при двух температурах из диапазона температуры 15-40°C. После этого определяют величину П по формуле:

П=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 (S)·способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 (mS)·S0·(mS)0·10 10;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

(mS)0=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 (mS)+способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 3, где

T1 - температура в устройстве № 1;

T2 - температура в устройстве № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1 - относительное изменение скорости ультразвука в контрольном образце относительно дистиллированной воды при температуре T1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды при температуре T1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 3 - относительное изменение скорости ультразвука в контрольном образце относительно дистиллированной воды при температуре T2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 4 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды при температуре T2.

При значении величины П, равном 300 и/или менее, диагностируют заболевание опухолевого происхождения внутренних органов.

Недостатками способа по прототипу является его длительность и сложность, поскольку требуется изготовление контрольного образца с применением химических реактивов - раствора трихлоруксусной кислоты и раствора двууглекислого натрия (NaHCO 3), которые смешивают с сывороткой крови. Кроме этого с помощью данного метода можно диагностировать только наличие опухолевого поражения внутренних органов, т.к. на основании исследования сыворотки крови определяется не конкретный компонент, а критерий, определяющий данное заболевание.

В практической медицине более ценным является определение конкретных биохимических показателей крови, характеризующих те или иные обменные процессы.

Задачей изобретения является создание нового способа определения аполипопротеина А1 и аполипопротеина В сыворотки крови.

Техническим результатом от использования изобретения является повышение точности и информативности, сокращение сроков проведения исследования.

Это достигается тем, что в способе определения аполипопротеина А1 и аполипопротеина В сыворотки крови, включающем пропускание ультразвука с изменяющейся частотой через пробы с дистиллированной водой и через пробы с сывороткой крови при двух разных температурах, измерение скоростей прохождения ультразвука через пробы и определение величин относительных скоростей прохождения ультразвука через пробы, используют пару проб с дистиллированной водой и пару проб с сывороткой крови, при этом температуру одной из проб в паре поддерживают ниже, чем другой, но температуру проб в парах поддерживают одинаковыми, затем определяют коэффициент поглощения ультразвука в дистиллированной воде при соответствующих температурах и коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови и его зависимость от частоты, а также зависимость от температуры скорости ультразвука в сыворотке крови, после чего определяют аполипопротеин А1 и аполипопротеин В путем решения системы линейных уравнений относительно двух неизвестных:

К1· (апоА1)+К2· (апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t

К3· (апоА1)+К4· (апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f,

где:

(апоА1) - аполипротеин А, в г/л,

(апоВ) - аполипротеин В, в г/л,

К1 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина А1,

К2 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина В,

К3 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина А1,

К4 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина В,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f - частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови; температуры проб поддерживают в интервале 25-40°C.

Такой способ определения аполипротеина А1 и аполипротеина B в сыворотке крови является правомерным потому, что эти компоненты сыворотки крови содержат в своей структуре и липиды, скорость ультразвука в которых зависит от температуры, и белок, поглощение ультразвука в котором зависит от частоты ультразвукового сигнала.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Сначала помещают дистиллированную воду в акустические ячейки двух аналогичных устройств № 1 и № 2 для контроля биологических жидкостей, подключенных к компьютеру, в которых поддерживают температуру от 25°C до 40°C, которая в устройстве № 1 ниже, чем в устройстве № 2, на оба устройства подают электрический высокочастотный сигнал с генератора, также подключенного к компьютеру, в устройствах электрический сигнал преобразуется в ультразвуковой на пьезоизлучателе и обратно в электрический на пьезоприемнике, и определяют скорость прохождения и коэффициент поглощения ультразвука в дистиллированной воде при различных температурах в диапазоне от 25°C до 40°C и различных частотах в диапазоне от 4 до 15 МГц, затем в оба устройства заливают сыворотку крови и аналогичным образом определяют скорость прохождения и коэффициент поглощения ультразвука в ней, на основании полученных данных определяют относительные изменения скоростей ультразвука в сыворотке крови при соответствующих температурах и дополнительно определяют частотный коэффициент поглощения и температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови, после чего определяют концентрацию аполипопротеина А1 (апоА1) и аполипопротеина В (апоВ) в г/л, решая систему уравнений, рассматривая в качестве неизвестных указанные компоненты сыворотки крови:

К1· (апоА1)+К2· (апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t

К3· (апоА1)+К4· (апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f,

где:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t=(способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1-способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2)/способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f=(способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1-способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2)/способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды, помещенных в устройство № 1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды, помещенных в устройство № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t=t1-t2 - разность температур между устройством № 2 и № 1,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1 - разность коэффициентов поглощения ультразвука в сыворотке крови и дистиллированной воде в устройстве № 1 при частоте f1,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2 - разность коэффициентов поглощения ультразвука в сыворотке крови и дистиллированной воде в устройстве № 2 при частоте f3,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f=f2-f1 - разность частот между устройством № 2 и устройством № 1,

К1 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина А1,

К2 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина В,

К3 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина А1,

К4 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина В,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f - частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови.

Ультразвук пропускают через дистиллированную воду и сыворотку крови с частотой, изменяющейся в диапазоне от 4 до 15 МГц. Температуру в акустических ячейках устройств № 1 и № 2 изменяют в диапазоне от 25 до 40°C.

Ниже приведены примеры конкретного использования предложенного способа, подтверждающие промышленную применимость изобретения.

Пример 1

У пациента из локтевой вены натощак забирают 5 мл крови без антикоагулянта и оставляют на 1,5 часа при комнатной температуре для образования сыворотки крови. Затем пробирку с кровью центрифугируют. Затем помещают дистиллированную воду в акустические ячейки двух аналогичных устройств № 1 и № 2 для контроля биологических жидкостей, подключенных к компьютеру, в которых поддерживают температуру от 25 до 40°C, которая в устройстве № 1 ниже, чем в устройстве № 2. На оба устройства для контроля биологических жидкостей подают сигнал частотой, изменяющейся на 5 МГц из любой части диапазона от 4 до 15 МГц (например, от 7,0 до 12,0 МГц), с высокочастотного генератора (например, ГЧ - 164), управляемого персональным компьютером. В устройствах электрический сигнал преобразуется на пьезоизлучателе в ультразвуковой сигнал той же частоты, который распространяется в дистиллированной воде, находящейся в акустических ячейках устройств. Пьезоприемники преобразуют ультразвуковой сигнал в высокочастотный электрический сигнал, который поступает на высокочастотный переключатель, управляемый компьютером, который через этот переключатель, подсоединяет к высокочастотному микровольтметру (например, В3-48) то одно, то другое устройство для контроля биожидкостей. Продетектированный высокочастотный сигнал с выхода высокочастотного микровольтметра поступает на вольтметр постоянного тока (например, В7 - 53), также управляемый компьютером. В результате обработки данных, получаемых с пьезоприемников устройств для контроля биологических жидкостей, в памяти компьютера фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в выбранном диапазоне частот (например, от 5,0 до 15,0 МГц) для дистиллированной воды. Затем в оба устройства помещают сыворотку крови, и аналогично в памяти компьютера фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне (например, от 5,0 до 15,0 МГц) для сыворотки крови. Затем компьютер вычисляет среднюю разность частотного расстояния между резонансными пиками и номер выбранного резонансного пика по следующей формуле:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где: N - число частотных расстояний между резонансными пиками в выбранном частотном диапазоне;

j - номер выбранного резонансного пика;

f j - резонансная частота j-го резонансного пика;

fj+1 - резонансная частота j+1-го резонансного пика.

Затем выбирают значения центральных частот резонансных пиков одного и того же номера для дистиллированной воды, сыворотки крови и контрольных образцов № 1 и № 2 и вычисляют соответствующие скорости ультразвука по формулам:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в дистиллированной воды в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - центральные частоты резонансных пиков номера j для дистиллированной воды в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - продольные волновые числа в устройствах № 1 и № 2 с дистиллированной водой;

R - радиус устройства для контроля биосред.

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в сыворотке крови в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - центральные частоты резонансных пиков номера j для сыворотки крови в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - продольные волновые числа в устройствах № 1 и № 2 с сывороткой крови;

R - радиус устройства для контроля биосред.

На основании результатов, полученных по формулам для способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 , способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 , вычисляют относительные изменения скорости ультразвука в сыворотке крови в устройствах № 1 и № 2, относительно дистиллированной воды по формулам:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в дистиллированной воды в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в сыворотке крови в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды, помещенных в устройство № 1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды, помещенных в устройство № 2;

определяют частотный коэффициент поглощения ультразвука при изменении частоты на 5 МГц в диапазоне частот от 4 до 15 МГц по формуле:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - частотный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови для устройства № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови в устройстве № 2 при частоте 12 из диапазона от 4 до 15 МГц;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови в устройстве № 2 при частоте f1 из диапазона от 4 до 15 МГц;

и температурный коэффициент скорости ультразвука при изменении температуры на 5 C в диапазоне температур от 25 до 40 C по формуле:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t1 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды в устройстве № 1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t2 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды в устройстве № 2;

после чего определяют концентрацию аполипопротеина A1 (апоА1) и аполипротеина В (апоВ) в г/л из решения системы уравнений:

К1· (апоА1)+К2· (апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t

К3· (апоА1)+К4· (апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f,

К1 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина A1,

К2 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина В,

К3 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина A1,

К4 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина В,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f - частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови.

Величины концентрационных коэффициентов в системе уравнений для определения апоA1 и апоВ находят общепринятым образом для каждого конкретного устройства № 1 и № 2 после выбора температур T1 и Т22>T1) и частот f1 и f 2 (f2>f1) с использованием сывороток с известными значениями апоА1 и апоВ (см. Справочник «Медицинские лабораторные технологии», том 2, под редакцией Ф.И. Карпищенко, Санкт-Петербург, 1999 г., стр.59-60), например сывороток крови фирмы Human (Германия): Serodos - сыворотка с паспортными значениями в области нормальных показателей апоА1 апоВ и Serodos plus - сыворотка с паспортными значениями в области патологии апоА1 и апоВ.

Пример 2

Больная Н., 58 лет, диагноз гипертония II степени. Из локтевой вены натощак забирают 5 мл крови без антикоагулянта и оставляют на 1,5 часа при комнатной температуре для образования сыворотки крови. Затем пробирку с кровью центрифугируют. Затем помещают дистиллированную воду в акустические ячейки двух аналогичных устройств № 1 и № 2 для контроля биологических жидкостей, подключенных к компьютеру, в которых поддерживают температуру от 25 до 40°C, которая в устройстве № 1 ниже, чем в устройстве № 2. На оба устройства для контроля биологических жидкостей подают сигнал частотой, изменяющейся на 10 МГц из любой части диапазона от 4 до 15 МГц (например, от 7,0 до 12,0 МГц), с высокочастотного генератора (например, ГЧ-164), управляемого персональным компьютером. В устройствах электрический сигнал преобразуется на пьезоизлучателе в ультразвуковой сигнал той же частоты, который распространяется в дистиллированной воде, находящейся в акустических ячейках устройств. Пьезоприемники преобразуют ультразвуковой сигнал в высокочастотный электрический сигнал, который поступает на высокочастотный переключатель, управляемый компьютером, который через этот переключатель подсоединяет к высокочастотному микровольтметру (например, В3-48) то одно, то другое устройство для контроля биожидкостей. Продетектированный высокочастотный сигнал с выхода высокочастотного микровольтметра поступает на вольтметр постоянного тока (например, В7-53), также управляемый компьютером. В результате обработки данных, получаемых с пьезоприемников устройств для контроля биологических жидкостей, в памяти компьютера фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в выбранном диапазоне частот (например, от 7,0 до 12,0 МГц) для дистиллированной воды. Затем в оба устройства помещают сыворотку крови, и аналогично в памяти компьютера фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне (например, от 7,0 до 12,0 МГц) для сыворотки крови. Затем компьютер вычисляет среднюю разность частотного расстояния между резонансными пиками и номер выбранного резонансного пика по следующей формуле:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где: N - число частотных расстояний между резонансными пиками в выбранном частотном диапазоне;

j - номер выбранного резонансного пика;

fj - резонансная частота j-го резонансного пика;

fj+1 - резонансная частота j+1-го резонансного пика.

Затем выбирают значения центральных частот резонансных пиков одного и того же номера для дистиллированной воды, сыворотки крови и контрольных образцов № 1 и № 2 и вычисляют соответствующие скорости ультразвука по формулам:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в дистиллированной воды в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - центральные частоты резонансных пиков номера j для дистиллированной воды в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - продольные волновые числа в устройствах № 1 и № 2 с дистиллированной водой;

R - радиус устройства для контроля биосред.

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в сыворотке крови в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - центральные частоты резонансных пиков номера j для сыворотки крови в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - продольные волновые числа в устройствах № 1 и № 2 с сывороткой крови;

R - радиус устройства для контроля биосред.

На основании результатов, полученных по формулам для способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 , способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 вычисляют относительные изменения скорости ультразвука в сыворотке крови в устройствах № 1 и № 2 относительно дистиллированной воды по формулам:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в дистиллированной воды в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - скорость ультразвука в сыворотке крови в устройствах № 1 и № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 1 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды, помещенных в устройство № 1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 2 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды, помещенных в устройство № 2;

определяют частотный коэффициент поглощения ультразвука при изменении частоты на 5 МГц в диапазоне частот от 4 до 15 МГц по формуле:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - частотный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови для устройства № 2;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови в устройстве № 2 при частоте f2 из диапазона от 4 до 15 МГц;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 - коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови в устройстве № 2 при частоте f1 из диапазона от 4 до 15 МГц;

и температурный коэффициент скорости ультразвука при изменении температуры на 5°C в диапазоне температур от 25 до 40°C по формуле:

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142

где способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t1 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды в устройстве № 1;

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t2 - относительное изменение скорости ультразвука в сыворотке крови относительно дистиллированной воды в устройстве № 2;

после чего определяют концентрацию аполипопротеина A1 (апоA1) и аполипротеина В (апоВ) в г/л из решения системы уравнений:

К1·(апоА1)+К2·(апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t

К3· (апоА1)+К4·(апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f,

К1 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина А1,

К2 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина В,

К3 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина А1,

К4 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина В,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f - частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови.

Величины концентрационных коэффициентов в системе уравнений для определения апоА1 и апоВ находят общепринятым образом для каждого конкретного устройства № 1 и № 2 после выбора температур T1 и T2 (T2>T1) и частот f1 и f 2 (f2>f1) с использованием сывороток с известными значениями апоА1 и апоВ (см. Справочник «Медицинские лабораторные технологии», том 2, под редакцией Ф.И. Карпищенко, Санкт-Петербург, 1999 г., стр.59-60), например сывороток крови фирмы Human (Германия): Serodos - сыворотка с паспортными значениями в области нормальных показателей апоА1 апоВ и Serodos plus - сыворотка с паспортными значениями в области патологии апоА1 и апоВ. Результаты измерений передают в компьютер. За 1 минуту получают следующие компоненты сыворотки крови:

Аполипопротеин А1 - 1.26 г/л,

Аполипопротеин В - 1.43 г/л,

что соответствует диагнозу больной Н.

Пример 3

Больной А., 47 лет, диагноз сахарный диабет. Из локтевой вены натощак взята кровь, после 1,5-часового отстаивания и центрифугирования получена сыворотка крови. Сыворотку крови помещают в устройство для ультразвукового контроля биологических жидкостей и измеряют скорость и поглощение ультразвука при различных частотах и температурах. В результате применения акустического метода получены следующие результаты:

Аполипопротеин A1 - 0.98 г/л,

Аполипопротеин В - 1.49 г/л,

что соответствует патологическим значениям апоA1 и апоВ, имеющим место при атеросклерозе коронарных артерий.

Таким образом, предлагаемый способ обладает высокой точностью и информативностью, сокращает время проведения исследования, позволяет в короткие сроки (в течение 1 минуты) одновременно определить оба компонента - аполипопротеин A1 и аполипопротеин В сыворотки крови без применения реагентов, не подвергая компоненты сыворотки крови какому-либо воздействию, что позволяет выявлять факторы риска атеросклероза коронарных артерий при скрининге у населения, оценивать тяжесть заболевания, глубину метаболических нарушений, отслеживать динамику патологического процесса при установленном диагнозе, эффективность проводимой терапии и необходимость своевременной ее коррекции.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ определения аполипопротеина А1 и аполипопротеина В сыворотки крови, включающий пропускание ультразвука с изменяющейся частотой через пробы с дистиллированной водой и через пробы с сывороткой крови при двух разных температурах, измерение скоростей прохождения ультразвука через пробы и определение величин относительных скоростей прохождения ультразвука через пробы, отличающийся тем, что используют пару проб с дистиллированной водой и пару проб с сывороткой крови, при этом температуру одной из проб в паре поддерживают ниже, чем другой, но температуру проб в парах поддерживают одинаковой в интервале температур 25-40°C, затем определяют коэффициент поглощения ультразвука в дистиллированной воде и коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови и его зависимость от частоты в диапазоне частот 4-15 МГц, а также зависимость от температуры скорости ультразвука в сыворотке крови, после чего определяют аполипопротеин А1 и аполипопротеин В путем решения системы линейных уравнений относительно двух неизвестных:

К1·(апоА1)+К2·(апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t

К3·(апоА1)+К4·(апоВ)=способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f,

где:

(апоА1) - аполипротеин А, в г/л,

(апоВ) - аполипротеин В, в г/л,

К1 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина А1,

К2 - концентрационный коэффициент относительной скорости ультразвука для аполипопротеина В,

К3 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина А1,

К4 - концентрационный коэффициент поглощения ультразвука для аполипопротеина В,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 t - температурный коэффициент скорости ультразвука в сыворотке крови,

способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 способ определения аполипопротеина а1 и аполипопротеина в сыворотки   крови, патент № 2535142 f - частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2535142

patent-2535142.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс G01N33/49 крови

Патенты РФ в классе G01N33/49:
способ отбора подростков в группу риска по развитию артериальной гипертензии -  патент 2528901 (20.09.2014)
способ прогнозирования стадии рассеянного склероза с учетом показателей иммунологического статуса -  патент 2528882 (20.09.2014)
способ прогнозирования развития рассеянного склероза с учетом иммуно-метаболических показателей -  патент 2528879 (20.09.2014)
устройство для определения концентрации гемоглобина и степени оксигенации крови в слизистых оболочках -  патент 2528087 (10.09.2014)
способ исследования скорости всасывания аминокислот в пищеварительном тракте -  патент 2527349 (27.08.2014)
способ определения глутатиона в эритроцитах периферической крови -  патент 2526832 (27.08.2014)
способ прогнозирования эффективности лечения и течения опухолевого процесса у больных раком носоглотки -  патент 2526830 (27.08.2014)
способ диагностики аутоиммунного поражения вегетативных структур желудочно-кишечного тракта -  патент 2526812 (27.08.2014)
способ определения тактики лечения детей с хроническим гастродуоденитом -  патент 2526167 (20.08.2014)
способ оценки степени выраженности реактивного ответа организма -  патент 2526154 (20.08.2014)


Наверх