способ получения лапчатки белой (potentilla alba)

Формула изобретения

Способ размножения растений лапчатки белой (Potentilla alba) методом культуры in vitro, включающий отделение вегетативных почек от корневища, стерилизацию, высаживание на питательные среды, микроразмножение побегов, укоренение побегов, адаптацию растений-регенерантов к нестерильным условиям.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для массового получения качественного посадочного материала лекарственного растения лапчатки белой.

Известен способ размножения лапчатки семенами. Недостатком данного способа (аналога) является низкий процент всхожести семян, менее 10%, растянутые сроки прорастания, медленное развитие сеянцев.

Наиболее близким - прототипом является способ получения растений лапчатки белой с использованием вегетативного размножения (Смык Г.К., Меньшова В.А., Корпачев В.В. Опыт вегетативного размножения Potentilla alba L. // Растительные ресурсы, т. XVIII, вып.2, 1982). Корневище растения делят на черенки с почками. От одного растения можно получить от 10 до 50 черенков. Посадочный материал высаживают весной или осенью. Через 4-5 лет от взрослого растения получают до 50 штук черенков.

Недостатками прототипа является низкий коэффициент размножения. Максимально от одного растения можно получить 10 саженцев в год.

Заявляемый способ размножения растений лапчатки белой (Potentilla alba) методом культуры in vitro позволяет за один год получить до 160 тысяч штук от одного экспланта за счет увеличения коэффициента размножения на питательных средах с использованием фитогормонов.

Сущность изобретения заключается в том, что способ размножения растений лапчатки белой (Potentilla alba) методом культуры in vitro, включающий отделение вегетативных почек от корневища, стерилизацию, высаживание на питательные среды, микроразмножение побегов, укоренение побегов, адаптацию растений-регенерантов к нестерильным условиям, способ позволяет в качестве эксплантов использовать вегетативные почки корневища, которые высаживают на питательные среды для введения в культуру ткани. Изменяют гормональный состав питательных сред, микропобеги размножают и укореняют в последующих пассажах. После адаптации к нестерильным условиям и доращивания получают стандартные саженцы лапчатки белой (Potentilla alba) с закрытой корневой системой.

Способ реализуют следующим образом.

Вегетативные почки побегов в весеннее время отделяют от корневища. Перед стерилизацией промывают под проточной водой в течение 15-25 минут. Стерилизацию проводят в условиях ламинар-бокса 0,1% раствором сулемы 10 минут. Затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой. Этот способ стерилизации позволяет получить до 70% эксплантов «стерильными» и жизнеспособными. Питательные среды готовят по прописи Мурасиге-Скуга (MS), содержащие 1,0-2,5 мкМ БАП (Фиг.1. Рост побегов у эксплантов вегетативных почек лапчатки белой). Через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения, содержащие 1,0 мкМ БАП+0,5 мкМ ИУК+0,05 мкМ ГК (гиббереловая кислота) (таблица 1) для микроразмножения (Фиг.2. Микроразмножение лапчатки белой). Образовавшися конгломераты микропобегов легко делятся на одиночные, которые пересаживают на среды, содержащие 0,5 мкМ БАП. Укореняют побеги на среде Мурасиге-Скуга, дополненной 3 мкМ ПУК. Число побегов на один эксплант за один пассаж составляет от 3 до 15 штук. Адаптацию растений-регенерантов лапчатки белой (Potentilla alba) к нестерильным условиям проводят на гидропонной установке, используя ¼ минерального состава среды MS (Фиг.4. Растение-регенерант лапчатки белой после адаптации в гидропонной установке).

Через 25-30 суток растения высаживают в стаканчики с грунтом. Растения доращивают не менее 30 суток в условиях зимних теплиц, 90% саженцев от общего числа растений-регенерантов успешно проходят адаптацию. Затем доращивают стандартные саженцы лапчатки белой (Potentilla alba) с закрытой корневой системой и готовят к высадке в открытый грунт (Фиг.5. Саженцы лапчатки белой с закрытой корневой системой).

На основании теоретического расчета по формуле B_n=B₁×G (где n - количество месяцев культивирования, B₁ - количество микропобегов, G - коэффициент размножения) от одного растения при данном способе культивирования можно получить за 12 месяцев 159432 саженца лапчатки белой, если коэффициент размножения равен 3,0.

Используемый метод культуры ткани позволяет получить более 150 тысяч саженцев в год от одного экспланта. Высокая эффективность процесса, тиражируемость, адаптация к нестерильным условиям определяют промышленную применимость предлагаемого способа.

Таблица 1
Гормональный состав питательной среды, мкМ	Высота растений, мм	Коэффициент размножения	Наличие корней
Безгормональная	20,12±0,1	1,0	есть
1,0 кинетин	17,34±0,2	1,8±0,1	есть
1,0 БАП	15,71±0,2	2,5±0,5	нет
2,5 БАП	5,5±0,1	17,2±0,8	нет
1,0 БАП+0,5ИУК+0,05 ГК	12,3±0,3	9,3±0,6	нет

Гормональный состав питательных сред на основе MS на этапе собственно микроразмножения лапчатки белой (Potentilla alba)