ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза

Классы МПК:A01H1/00 Способы модификации генотипов
A01H4/00 Разведение растений из тканевых культур
A01H5/00 Цветковые, например покрытосеменные растения
Автор(ы):, , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской Академии наук (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-02-12
публикация патента:

(57) Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Листовые экспланты, вычлененные из тридцатидневных асептических растений исходных сортов, выращенных в сосудах 1 л, помещают в чашки Петри с жидкой средой определенного состава и прединкубируют, кокультивируют и культивируют на питательных средах определенного состава. При появлении регенерантов размером не менее 10 мм их срезают и переносят на среду определенного состава. Проводят первый этап отбора форм, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, путем культивирования срезанных регенерантов на среде МС с 50 мл/л канамицина сульфата в течение 30-45 дней при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк при 16-часовом фотопериоде с последующим отбором укоренившихся регенерантов картофеля с зелеными листьями и стеблями. Проводят второй этап отбора форм, устойчивых к возбудитялям фитофтороза и альтернариоза, включающий проверку укоренившихся растений методом ПЦР на наличие целевой ДНК и размножение регенерантов с подтвержденной ПЦР вставкой целевой ДНК микрочеренкованием. Использование заявленного способа позволяет получить устойчивые к возбудителям фитофтороза и альтернариоза формы картофеля. 5 табл.

Область применения

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии, в частности к способам получения трансгенных форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, и может быть использовано для создания новых трансгенных форм картофеля, способных давать стабильный урожай в разных почвенно-климатических зонах.

Уровень техники

Известен способ получения форм картофеля, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, традиционными методами половой гибридизации с дикими формами картофеля, которые являются донорами R-генов устойчивости ["Broad spectrum late blight resistance in potato differential set plants MaR8 b MaR9 is conferred by multiple stacked R genes", Hoyoun-Joung Kim; Heung-Ryul Lee; Kwang-Ryong J.O.; Sm Mahdi Mortazavian; Dirk Jan Huigen; Bert Evenhuis; Greert Kessel; Richard G.F. Visser; Evert Jacobsen; Jack H/Vossen. Theor.Appl.Genet.,2012, March,124(5),923-935].

Недостатком этого способа является то, что R-гены устойчивости из диких форм картофеля часто наследуются сцепленно с повышенным содержанием гликоалкалоидов и некоторыми другими признаками, снижающими качество урожая, а именно низкий урожай клубней, пониженное содержание крахмала. Очень трудно получить формы картофеля, сочетающие повышенную устойчивость как к фитофторозу, так и к альтернариозу методом традиционной селекции. Кроме того, метод традиционной селекции трудоемок и ведет к большим затратам времени (10-15 лет).

Задача изобретения

Задачей изобретения является создание нового способа получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, преодолевающим недостатки традиционной селекции, что приведет к получению форм картофеля с повышенной устойчивостью как к возбудителю фитофтороза, так и альтернариоза при сохранении сортовых признаков.

Решение задачи

Поставленная задача решается созданием нового способа получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, заключающегося в том, что листовые экспланты, вычлененные из тридцатидневных асептических растений исходных сортов, выращенных в сосудах 1 л, помещают в чашки Петри с жидкой средой следующего состава:

Макросоли по Мурасиге - Скугу (МС) 50,0 мл/л,
Микросоли по МС 1,0 мл/л,
CaCl 2348,5 мг/л
Fe-хеллат по МС5,0 мл/л
Тиамин1,0 мг/л
Пиридоксин1,0 мг/л
Глюкоза16,0 г/л
Гидролизат козеина1,0 г/л
Мезоинозит100,0 мг/л
Нафтилуксусная кислота (НУК) 5,0 мг/л
Бензиламинопурин 0,2 мг/л
рН 5,8
Дистиллированная вода до 1 л среды

и прединкубируют в течение 18-24 часов и температуре 22-24°C, затем вносят пипеткой 300 мкл на одну чашку ночной суспензионной культуры агробактерии, несущей плазмиду с геном антимикробного пептида proSmAMP-1 из звездчатки средней (мокрицы) -(Stellaria media L.), кокультивируют с агробактериальной суспензией в течение 15-30 мин при периодическом встряхивании, обсушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги и помещают в другие чашки Петри с аналогичной средой и посткокультивируют в течение 18-24 часов при температуре 22-24°C на рассеянном свету, затем экспланты таким же образом обсушивают и переносят в чашки Петри с аналогичной средой с добавлением 7 г/л агара и 800 мг/л цефотаксима и инкубируют в течение 5-7 суток на рассеянном свету при 22-24°C, затем переносят на регенерационные среды состава:

Макросоли по МС50,0 мл/л,
Микросоли по МС 1,0 мл/л,
CaCl2 348,5 мг/л
Fe-хеллат по МС5,0 мл/л
Тиамин1,0 мг/л
Пиридоксин1,0 мг/л
Глюкоза16,0 г/л
Гидролизат козеина1,0 г/л
Мезоинозит100,0 мг/л
Биотин1,0 мг/л
Кальций пантетонат 5,0 мг/л
Аденинсульфат 40,0 мг/л
НУК 0,1 мг/л
Зеатин 2,0 мг/л*
Цефотаксим 800,0 мг/л*
Агар 7,0 г/л
рН 5,8
Дистиллированная вода до 1 л среды

* Добавлять после автоклавирования (холодной стерилизации)

и культивируют в течение 10-14 суток при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк, затем культивируют на аналогичной среде с цефотаксимом 500 мг/л и канамицин сульфатом (Km) 15 мг/л 3 пассажа по 21 дню, затем культивируют 1 пассаж без канамицина сульфата и снова 3 пассажа с канамицином, при появлении регенерантов размером не менее 10 мм их срезают и переносят на среду состава:

Макросоли по МС50,0 мл/л,
Микросоли по МС 1,0 мл/л,
CaCl2 - 348,5 мг/л
Fe-хеллат по МС5,0 мл/л
Тиамин1,0 мг/л
Пиридоксин1,0 мг/л
Сахароза20,0 г/л
Канамицин сульфат50,0 мг/л*
Цефотаксим200,0 мг/л*
Агар7,0 г/л
рН5,8
Дистиллированная вода до 1 л среды

*Добавлять после автоклавирования (холодной стерилизации);

затем проводят первый этап отбора: срезанные регенеранты культивируют на среде МС с 50 мл/л Km в течение 30-45 дней при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк при 16-часовом фотопериоде, далее отбирают укоренившиеся регенеранты картофеля с зелеными листьями и стеблями, потом проводят второй этап отбора: укоренившиеся растения проверяют методом ПЦР (Метод создания конструкций, метод ПЦР-анализа: «Генная инженерия растений», лабораторное руководство, Москва, «Мир», 1991 под редакцией Дж. Дрейпера, Р. Скотта, Ф. Армитиджа, Р. Уолдена, стр.304-383.) на наличие целевой ДНК и регенеранты с подтвержденной ПЦР вставкой целевой ДНК размножают микрочеренкованием для проведения дальнейших исследований.

Сущность изобретения

Сущность изобретения заключается в том, что встройка плазмиды с вектором экспрессии, содержащим ген антимикробного пептида proSmAMP-1 из звездчатки средней (мокрица) -(Stellaria media L.), обеспечивает повышение устойчивости картофеля одновременно к двум признакам: возбудителям фитофтороза и альтернариоза.

Новизна изобретения

Новизной изобретения является вся совокупность заявляемых признаков. При получении трансгенных форм картофеля заявляемым способом происходит повышение общего адаптационного потенциала растения картофеля.

Выход за заявленные пределы интервалов

При прединкубации эксплантов менее 18 часов не накапливается достаточного числа клеток на нужной стадии клеточного цикла, способных акцептировать целевую ДНК. Увеличение длительности прединкубации более 24 часов ведет к гибели эксплантов. Температура прединкубации ниже 22°C и выше 24°C ведет к уменьшению числа клеток, способных акцептировать целевую ДНК.

При кокультивации с агробактериальной суспензией менее 15 минут частота встройки целевой ДНК очень низка. При кокультивации свыше 30 минут происходит гибель эксплантов вследствие избыточного заражения агробактерией.

При посткокультивации менее 18 часов частота встроек низка, а более 24 часов приводит к гибели эксплантов вследствие избыточного заражения агробактерией, что приводит к загниванию тканей. При посткокультивации при температуре менее 22°C уменьшается число клеточных делений и частота встроек низка. Посткокультивация при температуре выше 24°C приводит к гибели эксплантов вследствие избыточного заражения агробактерией. Добавление цефотаксима необходимо для того, чтобы подавить рост агробактерии, чтобы предотвратить гибель эксплантов.

При инкубировании на рассеянном свету менее 5 суток не удается получить достаточное число клеток, готовых к морфогенезу. Инкубирование более 7 суток приводит к обильному каллусообразованию, что, в свою очередь, приводит к повышению самоклональной вариабельности, что затрудняет выявление форм картофеля с целевой ДНК. Температура 22-24°C оптимальна для клеточных делений. При культивировании менее 10 суток не все клетки со встройкой успевают перейти к регенерации, что удлиняет процесс получения регенерантов. Удлинение же этого периода более 14 суток приводит к снижению уровня цитокинина (зеатина) в среде и гибели эксплантов. Данный температурный 22-25°C и световой режим - освещенность 6000-10000 лкс и 16-часовой фотопериод - является оптимальным для регенерации растений картофеля. Культивирование на регенерационной среде с цефотаксимом менее 500 мг/л приводит к обильному росту агробактерии и гибели эксплантов, а более высокие концентрации цефотаксима токсичны для регенерирующих тканей. Концентрация канамицин сульфата 15 мг/л ниже 1/3 летальной дозы для растений. При культивировании в более 3 пассажей накапливается предельное содержание канамицин сульфата в тканях, которое может привести к гибели эксплантов, а культивирование в менее 1 пассажа без канамицина сульфата в течение 21 дня приводит к снижению его концентрации в тканях и позволяет культуре дальше регенерировать. При срезании и перенесении регенерантов размером менее 10 мм на среду для укоренения с канамицин сульфатом происходит замедление укоренения, роста и гибель побега.

Все полученные растения проверяют методом ПЦР на наличие вставки целевой ДНК (Метод создания конструкций, метод ПЦР-анализа: «Генная инженерия растений», лабораторное руководство, Москва, «Мир», 1991 под редакцией Дж. Дрейпера, Р. Скотта, Ф. Армитиджа, Р.Уолдена, стр.304-383).

Результаты изобретения

Результаты исследования полученных растений представлены в таблицах 1,2,3,4,5. Таблица результатов заражения клубней трансгенных растений с геном proSmAMP - 1 возбудителем альтернариоза не приводится, так как заражение клубней не приводит к значительным потерям при хранении

Как показывают результаты таблицы 1, эффективность трансформации повышается при использовании в качестве исходных эксплантов листьев тридцатидневных асептических растений картофеля шириной 8-10 мм,

выращенных в сосудах 1 л для сорта Удача с 3,57 до 6, 67%, для сорта Скороплодный -29 с 36 до 90%, а для сорта Скороплодный -7 с 3,03 до 33,3%.

Из таблицы 2 следует, что использование заявленного способа позволяет повысить устойчивость листьев трансгенных растений с геном proSmAMP-1 к возбудителю фитофтороза. (%) трансгенных линий, превосходящих по устойчивости листьев к фитифторозу исходный сорт, для сорта Скороплодный-7 составляет 41,38%; для сорта Скороплодный -29 - 45,45%; для сорта Удача - 100%; для сорта Жуковский ранний - 77,42%.

Из таблицы 3 следует, что встройка гена proSmAMP - 1 приводит к снижению индекса поражения у трансгенных растений, что означает повышение устойчивости к альтернариозу. (%) трансгенных линий, превосходящих по устойчивости к альтернариозу исходный сорт для сорта Скороплодный-7, составляет 68,42%; для сорта Скороплодный -29 - 66,67%; для сорта Удача - 100%; для сорта Жуковский ранний - 83,33%. Из таблицы 4 следует, что использование заявленного способа позволяет повысить устойчивость клубней трансгенных растений с геном proSmAMP-1 к возбудителю фитофтороза. % трансгенных линий, превосходящих по устойчивости клубней к фитифторозу исходный сорт, для сорта Скороплодный - 7 составляет 89,47%; для сорта Скороплодный-29 - 71,43%; для сорта Удача - 75%; для сорта Жуковский ранний - 78,95%.

Из таблицы 5 следует, что использование заявленного способа позволяет повысить устойчивость трансгенных растений с геном proSmAMP-1 к возбудителю фитофтороза и альтернариоза одновременно. (%) трансгенных линий, сочетающих устойчивость к обоим патогенам, для сорта Скороплодный-7 составляет 39,1%; для сорта Скороплодный - 29-33,3%; для сорта Удача - 25,0%; для сорта Жуковский ранний - 45,0%.

Таблица 1.
Эффективность агробактериальной трансформации листовых эксплантов картофеля геном proSmaAMP-1 из звездчатки средней (Stellaria media L.).
Исходный сорт Количество исходных эксплантов, шт. Ширина листа,

мм
Количество выживших эксплантов, шт% выжив

ших

эксплантов
Количество регенерантов, укоренившихся на Km 50 мг/лКоличество трансгенных линий (по ПЦР)% трансгенных линий
Удача 2853 10,7111 3,57
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 159 12805 16,67
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 2010 15754 15
Скороплодный-29 259 1968,4213 936
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 208 178519 1890
Скороплодный-7 129 1083,335 433,33
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 335 1236,361 13,03

Таблица 2.
Результаты оценки устойчивости листьев трансгенных растений картофеля с геном proSmAMP-1 к возбудителю фитофтороза*.
Исходный сортПоказатели устойчивости исходного сорта, баллКоличество оцененных трансгенных линий, шт.Показатели устойчивости трансгенных линий, балл% трансгенных линий, превосходящих по устойчивости исходный сорт
Скороплодный-75,10-5,33 585,5-7,5 41,38
Скороплодный-29 3,30-4,83115,3-8,8 45,45
Удача 4,0-5,564 6,0-6,6100
Жуковский ранний (восприимчи

вый стандарт)
3,89-4,33314,8-5,7 77,42
Никулинский (устойчивый стандарт)7,56-9,0 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
* «Методические указания по оценке селекционного материала картофеля на устойчивость к фитофторозу, ризоктониозу, бактериальным болезням и механическим повреждениям.» Шнейдер Ю.И., Яшина И.М., Ерохина С.А., Филина Н.И., Воловик А.С., Захарова - Кукушкинас Л.Н., РАСХН, 1980, с.46

Таблица 3.
Результаты оценки устойчивости листьев с геном proSmAMP-1 трансгенных растений картофеля с геном proSmAMP-1 к возбудителю альтернариоза по показателю индекса поражения.
Исходный сортИндекс поражения исходного сорта, %Количество оце

ненных транс

генных

линий, шт.
Индекс поражения

трансгенных

линий, %
% трансгенных линий, превосходящих по устойчивости исходный сорт
Скороплодный-7 35,8 -47,39383,77-29,9 68,42
Скороплодный-29 21,55-21,929 2,56-19,3366,67
Жуковский ранний31,76-31,96 187,69-23,0283,33
Удача41,06-48,46 414,4-26,54 100
Никулинский (устойчивый стандарт) 0,2-3,35способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424

Методика оценки устойчивости растений картофеля к возбудителю альтернариоза (Козловский Б.Е., Квасенюк И.Я. «Стимуляция спороношения Macrosporium solani Ell. Et. Mart. На питательной среде с помощью экстракта листьев картофеля», 1984, Микология и фитопатология, т.18, вып.2, стр.139-140).

Таблица 4
Результаты заражения клубней трансгенных растений с геном proSmAMP-1 зооспорами возбудителя фитофтороза*.
Исходный сортУстойчивость клубней исходного сорта, баллКоличество изученных трансгенных линий, шт.Показатели устойчивости трансгенных линий, балл% линий с показателем устойчивости выше, чем у исходного сорта
Скороплодный-7 6,119 6,3-989,47
Скороплодный-295,9 77,0-8,171,43
Удача7,1 49,0 75,00
Жуковский ранний (восприимчи

вый стандарт)
4,8 186,1-9,078,95
Никулинский (устойчивый стандарт) 9,0способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
* «Методические указания по оценке селекционного материала картофеля на устойчивость к фитофторозу, ризоктониозу, бактериальным болезням и механическим повреждениям.» Шнейдер Ю.И., Яшина И.М., Ерохина С.А., Филина Н.И., Воловик А.С., Захарова - Кукушкинас Л.Н., РАСХН, 1980, с.47

Таблица 5.
Результаты оценки устойчивости листьев трансгенных растений картофеля с геном proSmAMP-1 к возбудителю альтернариоза и фитофтороза.
Исходный сорт КоличествоКоличество % трансгенных
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 изученныхтрансгенных линий,линий, устойчивых к
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 трансгенных линий, устойчивых к обоимобоим патогенам
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424 шт.патогенам, шт.способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
Скороплодный-7 23939,1
Скороплодный-299 333,3
Удача41 25,0
Жуковский ранний 20945,0

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, заключающийся в том, что листовые экспланты исходных сортов, вычлененные из тридцатидневных асептических растений исходных сортов, выращенных в сосудах 1 л, помещают в чашки Петри с жидкой средой следующего состава:

Макросоли по Мурасиге-Скугу (МС) 50,0 мл/л,
Микросоли по МС 1,0 мл/л,
CaCl 2348,5 мг/л
Fe-хеллат по МС5,0 мл/л
Тиамин1,0 мг/л
Пиридоксин1,0 мг/л
Глюкоза16,0 г/л
Гидролизат козеина1,0 г/л
Мезоинозит100,0 мг/л
Нафтилуксусная кислота (НУК) 5,0 мг/л
Бензиламинопурин 0,2 мг/л
рН 5,8
Дистиллированная вода до 1 л среды


и прединкубируют в течение 18-24 часов и температуре 22-24°C, затем вносят пипеткой 300 мкл на одну чашку ночной суспензионной культуры агробактерии, несущей плазмиду с геном антимикробного пептида proSmAMP-1 из звездчатки средней (мокрица) - (Stellaria media L.), кокультивируют с агробактериальной суспензией в течение 15-30 минут при периодическом встряхивании, обсушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги и помещают на другие чашки Петри с аналогичной средой и посткокультивируют в течение 18-24 часов при температуре 22-24°C на рассеянном свету, затем экспланты таким же образом обсушивают и переносят в чашки Петри с аналогичной средой с добавлением 7 г/л агара и 800 мг/л цефотаксима и инкубируют в течение 5-7 суток на рассеянном свету при 22-24°C, затем переносят на регенерационные среды состава:

Макросоли по МС50,0 мл/л,
Микросоли по МС 1,0 мл/л,
CaCl2 348,5 мг/л
Fe-хеллат по МС5,0 мл/л
Тиамин1,0 мг/л
Пиридоксин1,0 мг/л
Глюкоза16,0 г/л
Гидролизат козеина1,0 г/л
Мезоинозит100,0 мг/л
Биотин1,0 мг/л
Кальций пантетонат 5,0 мг/л
Аденинсульфат 40,0 мг/л
НУК 0,1 мг/л
Зеатин (добавлять после способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
автоклавирования (холодной способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
стерилизации)) 2,0 мг/л
Цефотаксим (добавлять послеспособ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
автоклавирования (холодной способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
стерилизации)) 800,0 мг/л
Агар 7,0 г/л
pH 5,8
Дистиллированная вода до 1 л среды


и культивируют в течение 10-14 суток при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк, затем культивируют на аналогичной среде с цефотаксимом 500 мг/л и канамицин сульфатом 15 мг/л 3 пассажа по 21 дню, затем 1 пассаж без канамицина сульфата и снова 3 пассажа с канамицином, при появлении регенерантов размером не менее 10 мм их срезают и переносят на среду состава:

Макросоли по МС50,0 мл/л,
Микросоли по МС 1,0 мл/л,
CaCl2 348,5 мг/л
Fe-хеллат по МС5,0 мл/л
Тиамин1,0 мг/л
Пиридоксин1,0 мг/л
Сахароза20,0 г/л
Канамицин сульфат (добавлять послеспособ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
автоклавирования (холодной способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
стерилизации)) 50,0 мг/л
Цефотаксим (добавлять послеспособ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
автоклавирования (холодной способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям   фитофтороза и альтернариоза, патент № 2524424
стерилизации)) 200,0 мг/л
Агар 7,0 г/л
pH 5,8
Дистиллированная вода до 1 л среды,


затем проводят первый этап отбора форм, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, путем культивирования срезанных регенерантов на среде МС с 50 мл/л канамицина сульфата в течение 30-45 дней при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк при 16-часовом фотопериоде с последующим отбором укоренившихся регенерантов картофеля с зелеными листьями и стеблями, потом проводят второй этап отбора форм, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, включающий проверку укоренившихся растений методом ПЦР на наличие целевой ДНК и размножение регенерантов с подтвержденной ПЦР вставкой целевой ДНК микрочеренкованием.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2524424

patent-2524424.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A01H1/00 Способы модификации генотипов

Патенты РФ в классе A01H1/00:
способ экспресс-определения симбиотической эффективности грибов арбускулярной микоризы и индексов микоризации -  патент 2528864 (20.09.2014)
новая мутация, вовлеченная в повышенную толерантность растений к имидазолиноновым гербицидам -  патент 2525933 (20.08.2014)
способ выращивания гибридного сорта капусты "валентина" -  патент 2525271 (10.08.2014)
способ отбора селекционных образцов растений гречихи -  патент 2525134 (10.08.2014)
способ идентификации стерильности/фертильности подсолнечника -  патент 2524135 (27.07.2014)
способ оценки реализации элементарных двойных диплоидных геномов в полиплоидных полигеномных пшеницах -  патент 2520835 (27.06.2014)
способ тестирования солеустойчивости сельскохозяйственного растения -  патент 2520744 (27.06.2014)
способ возделывания адаптивных систем сортов пшеницы (варианты) -  патент 2517849 (10.06.2014)
способ стабилизации транскрипции хлоропластных генов рапса в условиях хлоридного засоления -  патент 2514641 (27.04.2014)
способ оценки зимостойкости плодовых растений -  патент 2514400 (27.04.2014)

Класс A01H4/00 Разведение растений из тканевых культур

Класс A01H5/00 Цветковые, например покрытосеменные растения

Патенты РФ в классе A01H5/00:
новая мутация, вовлеченная в повышенную толерантность растений к имидазолиноновым гербицидам -  патент 2525933 (20.08.2014)
растения с измененным ростом и/или развитием и способ их создания -  патент 2522480 (20.07.2014)
ячмень с низким содержанием гордеинов -  патент 2518241 (10.06.2014)
трансгенные растения -  патент 2515927 (20.05.2014)
гены и способы обеспечения устойчивости к фитофторозу пасленовых -  патент 2511423 (10.04.2014)
новое соединение, содержащееся в голубой розе -  патент 2507206 (20.02.2014)
растения, имеющие усиленные признаки, связанные с урожайностью, и способ их получения -  патент 2503721 (10.01.2014)
масло, семена и растения подсолнечника с модифицированным распределением жирных кислот в молекуле триацилглицерина -  патент 2502793 (27.12.2013)
гибридный инсектицидный белок, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая такой белок, трансгенные растения и их семена, содержащие такой белок, способ получения белка и его применение -  патент 2497830 (10.11.2013)
понижающая регуляция экспрессии гена с помощью искусственных микрорнк -  патент 2492239 (10.09.2013)


Наверх