ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ изготовления вакцины против ящура

Классы МПК:A61K39/135 вирус ящура
A61P31/12 противовирусные средства
Автор(ы):, , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное унитарное предприятие "Щелковский биокомбинат" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-03-06
публикация патента:

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура. Способ изготовления вакцины против ящура включает культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, при этом очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8. В качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида. Изобретение обеспечивает повышение уровня очистки вирусной суспензии от балластных примесей и повышение иммуногенности целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.,16 пр.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура.

Известен способ изготовления вакцины против ящура типа О, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-15 часов при 36-37 °С, причем культивирование прекращают при достижении количества мертвых клеток 90-95%, после чего вирус ящура подвергают инактивации, очищают от балластных примесей, концентрируют полученный антиген и соединяют концентрат антигена с адъювантом. Вакцина, полученная данным способом, содержит авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных компонентов (146S+75S) вируса ящура типа О, гель гидроокиси алюминия, сапонин и поддерживающую среду (патент РФ № 2212895, МПК А61К 39/135, C12N 7/00, 27.09.2003).

Недостатком известного способа изготовления вакцины является негарантированный уровень полученного антигенного материала в связи с оценкой его количества методом определения (1465+758)-компонентов, т.к. капсид вируса 75S как неполная структура антигена склонен к разрушению до капсомеров 12S при температурных колебаниях и других физико-химических факторах.

Известен также способ изготовления вакцины против ящура, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, причем начиная с 6-8 часов культивирования вирусного антигена через каждые 2 часа определяют процент мертвых клеток, и при достижении его уровня 95% и выше осуществляют дальнейшее культивирование в течение 2-8 часов в зависимости от типа вируса (патент РФ № 2332233, МПК А61К 39/135. Бюл. № 24, 27.08.2008).

Однако в известном способе недостаточно эффективно проводится очистка вирусной суспензии от балластных примесей, что ведет к снижению иммуногенности целевого продукта.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа изготовления вакцины против ящура, позволяющего повысить уровень очистки вирусной суспензии от балластных примесей и иммуногенность целевого продукта.

Поставленная задача решается в способе изготовления вакцины против ящура, включающем культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом тем, что очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8%.

Поставленная задача также решается в способе изготовления вакцины против ящура тем, что в качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида.

Известны производные полигуанидинов, в частности дигидрохлорида 1,12-дигуанидиногексана, дигидрохлорида бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида, используемые в качестве как антитуберкулезные, противовирусные, фунгицидные, противоплесневые и антитрипаносомные препараты (Патент РФ «Производные полигуанидинов» № 2230734, МПК С07С 279/02, 2004).

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы в способе изготовления вакцины против ящура, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».

Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

В задачу создания изобретения входило разработать способ технического процесса промышленного производства изготовления вакцины против ящура с учетом современных факторов. Нами впервые установлено, что очистка вирусной суспензии от балластных примесей при получении вакцины против ящура проводят добавлением производных полигуанидинов к вирусной суспензии при определенных режимах.

Пример 1. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 1 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 2. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1468-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 2 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 3. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 3 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 4. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 4 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 5. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 5 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 6. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 6 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 7. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 7 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 8. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 8 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 9. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана), взятых в весовых соотношениях 40:1, соответственно, до конечной концентрации 0,4% в реакционной среде и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 9 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 10. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки.

При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана), взятых в весовых соотношениях 160:1, соответственно, до конечной концентрации 0,8% в реакционной среде и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 10 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 11. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 11 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 12. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смеси производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) и хлороформа, взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 12 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 13. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 13 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 14. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина), взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 14 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 15. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 15 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 16.

Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида), взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 16 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Качество вакцин 1-16, полученных согласно примерам 1-16, проводилось в сравнении с прототипом, данные приведены в таблице.

Таким образом, заявленный способ изготовления вакцины против ящура позволяет повысить в 1,3-1,7 раз уровень очистки вирусной суспензии от балластных примесей и в 1,3-1,5 раз повысить иммуногенность целевого продукта.

ГруппаСодержание балластного белка (мг/мл)Содержание ИмД 50Микробная контаминация (% случаев)
Вакцина 1 0,6116-
Вакцина 20,56 18-
Вакцина 30,52 16-
Вакцина 40,6016 -
Вакцина 5 0,5418-
Вакцина 60,52 16-
Вакцина 70,58 18-
Вакцина 80,5618 -
Вакцина 9 0,6016-
Вакцина 100,54 16-
Вакцина 110,54 16-
Вакцина 120,6018 -
Вакцина 130,5818 -
Вакцина 140,6116 -
Вакцина 150,5816 -
Вакцина 160,5616 -
Прототип (очистка хлороформом)0,89 12100

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ изготовления вакцины против ящура, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, отличающийся тем, что очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8%.

2. Способ изготовления вакцины против ящура по п.1, отличающийся тем, что в качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2522868

patent-2522868.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K39/135 вирус ящура

Патенты РФ в классе A61K39/135:
вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная -  патент 2526570 (27.08.2014)
применение этония в качестве адъюванта для производства сорбированной противоящурной вакцины -  патент 2521513 (27.06.2014)
полиэпитопный белок, нуклеотидная последовательность, кодирующая полиэпитопный белок, плазмида с последовательностью, кодирующей полиэпитопный белок, и препарат полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура -  патент 2467014 (20.11.2012)
состав полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура -  патент 2453557 (20.06.2012)
штамм а 2045/киргизия/2007 вируса ящура aphtae epizooticae типа а для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа а -  патент 2451745 (27.05.2012)
способ изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против гриппа птиц и вакцина инактивированная эмульгированная против гриппа птиц -  патент 2358760 (20.06.2009)
способ изготовления вакцины против ящура и вакцина против ящура -  патент 2332233 (27.08.2008)
штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов -  патент 2297452 (20.04.2007)
вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а -  патент 2294760 (10.03.2007)
вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа а -  патент 2294759 (10.03.2007)

Класс A61P31/12 противовирусные средства

Патенты РФ в классе A61P31/12:
способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ получения противовирусных фракций (антивирус-с) -  патент 2526799 (27.08.2014)
средство для снижения репродукции вируса гепатита с -  патент 2526179 (20.08.2014)
применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций -  патент 2524304 (27.07.2014)
пептидные производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусное действие -  патент 2524216 (27.07.2014)
способ получения противовирусного средства и противовирусное средство -  патент 2522880 (20.07.2014)
способ получения антирабической вакцины -  патент 2522866 (20.07.2014)
способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы -  патент 2522483 (20.07.2014)


Наверх