Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09)

Классы МПК:C07C211/50 связанных с атомами углерода шестичленных ароматических ядер углеродного скелета
C07C211/41 содержащего конденсированные циклические системы
C07C217/90 атом кислорода по меньшей мере одной из простых эфирных групп связан с атомом углерода шестичленного ароматического кольца, например простые аминодифениловые эфиры
A61P31/16 против гриппа или риновирусов
Автор(ы):, , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) (RU),
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа" Минздрава России) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2013-02-08
публикация патента:

Изобретение относится к новым симметричным дииминам на основе камфоры общей формулы 1a-f, которые являются ингибиторами репродукции вируса гриппа (штамм A/California/07/09 (H1N1) pdm09). В общей формуле 1a-f.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Соединения наряду с выраженной противовирусной активностью в отношении указанного вируса гриппа обладают низкой токсичностью. Химиотерапевтический индекс например соединений (1a-d) превышает таковой у известных препаратов сравнения в три и более раз. 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к медицине и фармацевтике, конкретно к биологически активным веществам, симметричным дииминам на основе камфоры формулы 1a-f, которые могут использоваться в качестве ингибиторов репродукции вируса гриппа (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09).

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Разработка новых лекарственных средств лечения и профилактики вирусных инфекций - одна из актуальных задач современной фармакологии и медицинской химии, поскольку глобализация, мобильность населения и характер передачи вирусных инфекций способствуют их активному распространению по всему миру. Эпидемия «птичьего» гриппа H5N1 (1997-2006) и затем пандемия гриппа 2009 г., вызванная вирусом свиного происхождения A(H1N1)pdm09, сделали настоятельно необходимой ревизию состояния проблемы с разработкой противовирусных препаратов [Киселев О.И. Химиопрепараты и химиотерапия гриппа. Санкт-Петербург, Росток, 2012].

Как показала практика, наиболее перспективным источником для разработки противовирусных лекарственных средств являются природные соединения [Advances in Antiviral Drug Design. Vol.5. Ed. by E. De Clercq. Publ. by Elsever, 2007]. Среди разрешенных в последние десятилетия для клинического использования в США новых лекарств около половины - это природные вещества и их химически модифицированные производные. Противовирусные средства для лечения гриппа представляют собой крайне ограниченную группу лекарственных препаратов, а для большинства из них известна лекарственная резистентность. Создание противовирусных препаратов - это ближайшая перспектива развития медицинской науки в области создания средств лечения и профилактики вирусных инфекций [Еропкин М.Ю., Зарубаев В.В. Современное состояние разработок новых антивирусных препаратов против гриппа и ОРВИ // Фармацевтический бюллетень - 2012. № 1. - С 68].

Благодаря особенностям организации генома (отсутствие механизма коррекции ошибок репликации) и короткому жизненному циклу вирус гриппа обладает высокой скоростью мутаций. Как результат, антигенная структура вируса в высокой степени подвержена изменениям в результате селективного давления иммунной системы организма-хозяина. Кроме того, применение химиопрепаратов воспринимается вирусом как фактор селекции, в результате чего также происходит формирование устойчивых штаммов. Эти два процесса приводят к появлению вариантов вирусов, способных избегать как активности нейтрализующих антител, и тем самым ускользать от иммунного ответа организма, так и преодолевать действие химиопрепаратов, исходно направленных на определенный этап репродукции вируса. Сложность проблемы состоит в том, что каждый тип вируса имеет свой механизм приспособления к химическому препарату [Ison M.G. Antivirals and resistance: influenza virus // Current Opinion in Virology. - 2011. - V.1. P. 563-573]. Известно, что ингибировать репродукцию вируса гриппа можно на разных стадиях его жизненного цикла.

Основой современной химиотерапии гриппа является использование нескольких классов соединений, действие которых направлено на подавление репликации вируса гриппа (см. рис.1). Это ингибиторы нейраминидазы - Озельтамивир (Тамифлю) [Jong M.D., Thanh Т.Т., Khanh Т.Н., Hien V.M., Smith G.J.D., Chau N.V., Cam B.V., Qui P.T., Ha D.Q., Malik Peiris J.S., Hien T.T., Farrar J. Oseltamivir Resistance during Treatment of Influenza A (H5N1) Infection // N. Engl. J. Med. -2005. - V 25. P.2667-72.] и Занамивир (Реленза) [Collins 1 P.J., Hairel L.F., Lin Y.P., Liu J., Russell R.J., Walker P.A., Skehel J.J., Martin S.R., Hay A.J. Gamblin S.J. Crystal structures of oseltamivir-resistant influenza virus пеш-aminidase mutants // Nature 2008. - V.453 - P.1258.], они действуют на этапе почкования вновь синтезированных вирионов гриппа из оболочки клетки, блокируя отщепление частиц вирусного потомства от поверхности клеток. Практика применения ингибиторов нейраминидазы в лечении гриппа показала, что высокая эффективность этой группы препаратов ограничена ранней стадией инфекции. Рибавирин - противовирусный препарат широкого спектра действия с высокой ингибирующей активностью в отношении ДНК- и преимущественно РНК-содержащих вирусов [Leyssen P., Clercq E.D., Neyts J. The Anti-Yellow Fever Virus Activity of Ribavirin Is Independent of Error-Prone Replication // Mol. Pharmacol. - 2006. - V.69. - P.1461]. Являясь аналогом нуклеозидов, рибаверин эффективен в субтоксических концентрациях и системное его применение вызывает побочные реакции, в частности анемию и тератогенный эффект при употреблении во время беременности. В России в клинической практике при терапии гриппа рибаверин не используется.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Наиболее известными практическому здравоохранению противовирусными препаратами прямого действия на репликацию вирусов гриппа являются римантадин (симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 -метил-1-адамантилметиламина гидрохлорид) и амантадин (1-аминоадамантан) [Davies, W.L.; Grunert, R.R.; Haff, R.F.; McGahen, J.W.; Neumayer, E.M.; Paulshock, M.; Watts, J.C.; Wood, T.R.; Hermann, E.C.; Hoffmann, С.E. Antiviral Activity of 1-Adamantanamine (Amantadine) // Science. - 1964. - V.144. - P.862]. Данные соединения блокируют белок M2 вируса гриппа, играющий роль ионного канала в вирусной мембране, препятствуя тем самым процессу расщепления гемагглютинина и слияния мембран вируса и лизосомальной вакуоли [Scholtissek С., Quack G., Klenk H.D., Webster R.G. // Antiviral Res. 1998. - V.37. - P.83-95]. Механизм действия этих препаратов изучен достаточно полно [Cady S.D., Schmidt-Rohr К., Wang J., Soto C.S., DeGrado W.F., Hong M.H. Structure of the amantadine binding site of influenza M2 proton channels in lipid bilayers // Nature. 2010. - Vol.463. - P.689-692].

Адамантаны как класс каркасных соединений явились стартовой основой в конструировании большого класса противовирусных препаратов [Zoidis G., Kolocouris N., Naesens L., Clercq E.D. Design and synthesis of 1,2-annulated adamantane piperidines with anti-influenza virus activity // Bioorganic & Medicinal Chemistry - 2009. - N.17. P.1534]. Наиболее близкими к классическим адамантанам являются каркасные соединения - бананины-ингибиторы репликации коронавируса SARS [Tanner J.A., Zheng B.J., Zhou J., Watt R.M., Jiang J.Q., Wong K.L., Lin Y.P., Lu L.Y., He M.L., Kung H.F., Kesel A.J. The Adamantane-Derived Bananins Are Potent Inhibitors of the Helicase Activities and Replication of SARS Coronavirus // Chemistry & Biology, - 2005. - V.12. P.303]. Каркасные соединения остаются привлекательными в качестве основы для дизайна противовирусных препаратов. Так, дейтифорин - (2-(Г-аминоэтил)бицикло[2.2.1]гептан, является одним из наиболее интересных препаратов на основе природных бициклических каркасных соединений - борнанов [Патент РФ № 2448692. Киселев О.И., Тандура С.Н., Деева Э.Г. Фармацевтические соли аминобицикло[2.2.1]гептанов как ингибиторы транскрипционного фактора NF-KB с противовирусной активностью и их применение]. При этом важно подчеркнуть, что данное соединение фактически имеет природное происхождение, а борнеол и изоборнеол широко известны в народной медицине как противовоспалительные средства.

Задачей изобретения является расширение ассортимента ингибиторов репродукции вируса гриппа.

Задача решается новыми соединениями формулы la-f:

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

обладающими свойствами ингибиторов репродукции вируса гриппа.

Исследования биологической активности соединений 1a-f, проведенные в отношении вируса гриппа (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09), показали их высокую эффективность как ингибиторов репродукции этого вируса. В результате исследований выявлено, что соединения 1a, b и 1d наиболее активно влияют на репродукцию вируса гриппа, что подтверждается приведенными ниже данными (Пример 8). Камфора является бициклическим терпеноидом с жестким типом остова, доступным как в правовращающих, так и в левовращающих энантиомерах.

Полученные количественные показатели ингибирования подтверждают высокую степень подавления репликации вируса гриппа в культуре клеток MDCK соединениями 1a-f, превышающую тот же показатель у эталонов сравнения - амантадина и римантадина в 5 и более раз. Использование в качестве препаратов сравнения адамантановых производных обусловлено наличием жестких структурных фрагментов как в полученных нами соединениях, так и в указанных препаратах. Наиболее активными являются симметричные диимины, имеющие алифатический линкер. Следует отметить, что длина алифатической цепочки в первую очередь влияет на токсичность соединений. Так, наименее токсичным является соединение 1d, имеющее в своем остове -C12H24- линкер.

Заявляемые соединения получают следующим образом:

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

В качестве исходных соединений для синтеза целевых веществ используют (+)-(1R)-камфору и диамины различного строения. Способ взаимодействия камфоры с 1,2-диаминэтаном, приводящий к образованию диастереометрически чистого диимина, в результате восстановления которого получают стереоселективный экзо-экзо диамин, в литературе описан [Caselli, A., Giovenzanna, G.В., Palmisano, G., Sisti, М., Pilati, Т.Synthesis of C 2-syrnmetrical diamine based on (1R)-(+)-camphor and application to oxidative aryl coupling of naphthols // Tetrahedron:Asymmetry - 2003 - V.14 - P.1451-1454]. В результате взаимодействия камфоры с алифатическими диаминами в одну стадию получают заявляемые диимины 1a-d. Реакции проводят в условиях азеотропной отгонки воды с использованием в качестве катализатора эфирата трехфтористого бора. Степень конверсии контролируют отбором проб и анализом по ГЖХ, ХМС. Соединения le,f получают при взаимодействии камфоры с ароматическими диаминами в среде тетраэтоксисилана, используемого в качестве дегидратирующего агента, как описано в методике [Love В.Е., Ren J. J. Synthesis of Sterically Hidered Imines // Org. Chem. - 1993 - V.58 - P.5556-5557]. Соединения 1a-f очищают колоночной хроматографией, все полученные вещества ранее в литературе не были описаны.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Получение N1,N6-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден)гексан-1,6-диамина (1а)

К раствору 3 г (1R)-(+) камфоры (19.7 ммоль) в толуоле (30 мл) добавляют 1,6-диаминогексан (9.8 ммоль), 0.14 мл BF3·Et2O в 5 мл толуола. Реакцию ведут при постоянном кипении 28 ч, с помощью насадки Дина-Старка азеотропно удаляют воду. Контроль над реакцией осуществлялся по ГЖХ и ХМС. Реакционную смесь промывают насыщенным раствором NaCl, экстрагируют CH2Cl2, сушат Na 2SO4, удаляют растворитель. Диимин 1a очищают методом колоночной хроматографии, элюент гексан/этилацетат (100:0симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 0:100)+метанол (1%), выделают с выходом 46%.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Спектр ЯМР 1H (CDCl 3, симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м. д): 0.70 s и 0.87 s (С8Н3, С 8'Н3 и С9Н3, С 9'Н3), 0.91 s (С10Н3 , С10'Н3), 1.13 ddd (H4n , H4n', 2J 12.5, J4n,5n 9.3, J4n,5k 4.1 Гц), 1.24-1.32 м (2Н13, 2Н13, H5n, H5'n), 1.50-1.57 м (2Н12, 2Н12'), 1.60 ddd (H5k , H5k', 2J 13.0, J5k,4k 12.2, J5k,4m 4.1 Гц), 1.77 d (H2n , H2'n, 2J 16.8 Гц), 1.75-1.83 м (H 4k, H4'k), 1.87 dd (H3, H 3', J3,2k=J3,4k=4.3 Гц), 2.27 ddd (H2k, H2'k, 2 J 16.8, J2k,3 4.3, J2k,4k 3.2 Гц), 3.08-3.2 м (2H11, 2H11'). Спектр ЯМР 13 C (CDCl3), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д.: 180.99 s (C1, С1'), 35.211 (C2, С2'), 43.71 d (C3, С3'), 27.371 (С4, С4' ), 32.09 t (С5, С5'), 53.23 s (С 6, С6'), 46.66 s (С7, С7' ), 19.40 k и 18.83 k (С8, С8' и С 9, С9'), 11.31 k (С10, С 10'), 52.191 (С11, С11'), 30.441 (С12, С12'), 27.311 (С13 , С13'). симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 (CHCl3, с 1.0). Найдено: m/z 384.3499 [М] + C26H44N2. Вычислено: M=384.3503.

Пример 2.

Получение N1,N7-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден)гептан-1,7-диамина (1b).

К раствору 3 г (1R)-(+) камфоры (19.7 ммоль) в толуоле (30 мл) добавляют 1,7-диаминогептан (9.8 ммоль), 0.14 мл BF3·Et2O в 5 мл толуола. Реакцию проводят, как описано в примере 1, выдерживая реакционную смесь в течение 32 ч, выделяют соединение (1b) с выходом 65%.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Спектр ЯМР 1H (CDCl 3, симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д): 0.70 s и 0.87 s (C8H3, C 8'H3 и C9H3, C 9'H3), 0.91 s (C10H3 , C10'H3), 1.13 m (H4n, H4n'), 1.18-1.32 м (2H13, 2H13 , H5n, H5'n, 2H14), 1.50-1.57 м (2H12, 2H12'), 1.60 м (H5k , H5k'), 1.77 d (H2n, H2'n ), 1.75-1.83 м (H4k, H4'k), 1.87 м (H3, H3'), 2.27 м (H2k, H2'k), 3.08-3.2 м (2H11, 2H11' ). Спектр ЯМР 13C (CDCl3), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д.: 180.97 s (С1, С1'), 35.211 (С2, С2'), 43.73 d (С3, С3'), 27.381 (С4, С4' ), 32.101 (С5, С5'), 53.23 s (С 6, С6'), 46.67 s (С7, С7' ), 18.83 k (С8, С8'), 19.40 k (С 9, С9'), 11.32 k (С10, С 10'), 52.26 t (С11, С11'), 30.391 (С12, С12'), 27.401 (С13 , С13'), 29.281 (С14). симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 (СНС13, c=0.66). Найдено: m/z 398.3656 [М] + C27H46N2. Вычислено: M=398.3653.

Пример 3

Получение N1,N8-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден)октан-18-диамина (1c).

К раствору 3 г (1R)-(+) камфоры (19.7 ммоль) в толуоле (30 мл) добавляют 1,8-диаминооктан (9.8 ммоль), 0.14 мл BF3·Et2O в 5 мл толуола. Реакцию проводят, как описано в примере 1, выдерживая реакционную смесь в течение 35 ч, выделяют соединение (1c) с выходом 67%.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Спектр ЯМР 1H (CDCl 3, симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д): 0.69 s и 0.86 s (С9Н3, С 9'Н3 и С8Н3, С 8'Н3), 0.91 s (С10Н3 , С10'Н3), 1.13 двд (H4n , H4n', 2J 12.3, J4n,5n 9.3, J4n,5k 4.2 Гц), 1.19-1.30 м (2Н13, 2Н13, 2Н14, 2Н14), 1.29 ddd (Н, Н5н', 2J 13, J 5н,4н 9.3, J5н,4k 4.4 Гц), 1.47-1.56 м (2Н12, 2Н12'), 1.59 ддд (H5k , Н5к'2J 13.0, J5k,4k 12.2, J5k,4н 4.2 Гц),), 1.77 д (H2n, H2'n , 2J 16.7 Гц), 1.74-1.82 м (Н, Н 4'к), 1.86 дд (Н3, Н3' J 3,2k=J3,4k=4.4 Гц), 2.27 ддд (H2k , H2'k, 2J 16.7, J2k,3 4.4, J2k,4k 3.2 Гц), 3.12 дт (H11a, H11'a , 2J 12.1, J11a,12 7.3 Гц), 3.16 д.т (Hllв, Н11'в, 2 J 12.1, J11в,12 7.3 Гц) Спектр ЯМР 13C (CDCl3), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д.: 180.00 s (С1, С1'), 35.191 (С2, С2'), 43.71 d (С3, С3'), 27.35 t (С4, С4' ), 32.07 t (С5, С5), 53.23 s (С6 , С6'), 46.66 s (С7, С7' ), 19.38 k и 18.81 k (С8, С8' и С 9, С9'), 11.29 k (С10, С 10'), 52.22 t (С11, С11'), 30.37 t (С12, С12'), 27.33 t (С 13, С13'), 29.32 т (С14, С 14'). симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 (CHCl3, c=0.92). Найдено: m/z 412.3813 [М] + C28H48N2. Вычислено: M=412.3812.

Пример 4.

Получение N1,N12-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден)додекан-1,12-диамина (1d).

К раствору 3 г (1R)-(+) камфоры (19.7 ммоль) в толуоле (30 мл) добавляют 1,12-диаминододекана (9.8 ммоль), 0.14 мл BF3·Et2O в 5 мл толуола. Реакцию проводят, как описано в примере 1, выдерживая реакционную смесь в течение 48 ч, выделяют с выходом 41%.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Спектр ЯМР 1H (CDCl 3, симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м. д): 0.71 s и 0.88 s (C8H3, C 8'H3 и C9H3, C 9'H3), 0.92 s (C10H3 , C10'H3), 1.15 ddd (H4n , H4n', 2J 12.2, J4n,5n 9.3, J4n,5k 4.2 Гц), 1.18-1.28 м (2H13, 2H13', 2H14, 2Н14' 15, 2Н15', 2Н16, 2Н16' ), 1.30 ddd (Н, Н5н', 2 J 12.8, J5k,4k 9.3, J5h,4k 4.3 Гц), 1.49-1.57 м (2Н12, 2Н12'), 1.61 ddd (H5k, H5k', 2J 12.8, J5k,4k 12.2, J5m,4Н 4.1 Гц), 1.78 d (H 2n, H2'n, 2J 16.8 Гц), 1.76-1.84 м (H4k, H4'k), 1.88 dd (H3 , H3', J3,2k=J3,4k=4.4 Гц), 2.28 ddd (H2k, H2'k, 2J 16.8, J2k,3 4.3, J2k,4k 3.2 Гц), 3.13 д.т (H11a, H11'a2J 12.1, J 11a,12 7.3 Гц), 3.17 д.т (Н11в, Hn'в , 2J 12.1, J11в.12 7.3 Гц). Спектр ЯМР 13C (CDCl3), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д.: 180.98 s (C1, С1'), 35.23 t (С2, С2'), 43.75 d (С3 , C3'), 27.401 (С4, С4' ), 32.11 t (С5, C5'), 53.25 s (С 6, С6'), 46.68 s (С7, С7' ), 18.85 k (С8, С8') 19.41 k (С 9, С9'), 11.33 k (С10, С 10'), 52.261 (С11, С11'), 30.421 (С12, С12'), 27.411 (С13 , С13'), 29.38 t (С14, С14' ), 29.46 t (С15, С15'), 29.49 t (С 16, С16'). симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 (CHCl3, с=0.8). Найдено: m/z 468.4435 [М] + C32H56N2. Вычислено: M=468.4435.

Пример 5.

Получение N,N'-4,4'-метиленбис(N-(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден)анилина (1e).

К 3 г (19.8 ммоль) камфоры добавляют 1.95 г (9.9 ммоль) 4,4'-метилендибензенамина и 0.1 мл конц. H 2SO4, 4.1 мл (19.8 ммоль) Si(OEt)4 , кипятят 10 ч в атмосфере аргона. Удаляют остатки спирта, который образовывался из тетраэтоксисилана отгонкой на ротационном испарителе, добавляют насыщенный раствор NaHSO3, экстрагируют эфиром. Органический слой сушат MgSO4, удаляют растворитель. Далее в реакционную смесь добавляют 4 мл 1 М КОН и 20 мл EtOH. Перемешивают в течение 20 мин, затем отфильтровывают образовавшиеся силикаты, органический слой промывают насыщенным раствором NaCl, экстрагируют эфиром, сушат Na2SO4. Удаляют серный эфир, получают 3.8 г реакционной смеси. Колоночной хроматографией на 40 г SiO2, элюент гексан/этилацетат (100:0симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 0:100)+метанол(1%) выделяют диимин (1e) с выходом 41%.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Спектр ЯМР 1H (CDCl 3, симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д): 0.83 s и 0.94 s (С8Н3, С 8'Н3 и С9Н3, С 9'Н3), 1.06 s (С10Н3 , С10'Н3), 1.17-1.25 м (H4n , Н4'п) м 1.52-1.46 (H5n, H5'n ), м 1.70-1.77 (H2n, H2'n, H5k , H5k') м 1.81-1.88 (H4k, H4k , Н3), м 2.15-2.22 (H2k,H2k' ), s 3.87 (2Н17), м 6.63 (н13,15,13',15' ), м 7.04 (Н12,16,12'16'). Спектр ЯМР 13C (CDCl3), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д.: 184.43 s (C1, С1'), 36.141 (С2, С2'), 43.71 d (С3, С3'), 27.341 (C4, С4' ), 31.971 (С5, С5'), 53.81 s (С 6, С6'), 46.99 s (С7, С7' ), 18.93 k (С8, С8') 19.45 k (С 9, С9'), 11.12 k (С10, С 10'), 150.01 s (С11, С11' ), 119.37 d (С12, С12'), 129.24 d (С 13, С13'), 137.86 s(C14, С 14'), 129.24 d (С15, С15' ), 119.37 d (С16, С16') 40.58 t (С 17), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 (CHCl3, c=0.6). Тпл=129-130°C. Найдено: m/z 466.3343 [М]+ C33H42 N2. Вычислено: M=466.3347

Пример 6.

Получение N-(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден)-4-(4-(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиденамино)фенокси)анилина (1f).

К 3 г (19.8 ммоль) камфоры добавляют 1.95 г (9.9 ммоль) 4,4'-оксидибензенамина и 0.1 мл конц. H 2SO4, 4.1 мл (19.8 ммоль) Si(OEt)4 , кипятят 10 ч в атмосфере аргона. Дальнейшую обработку реакции проводят, как описано в примере 5. Соединение (1f) выделяют с выходом 46%.

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

Спектр ЯМР 1H (CDCl 3, симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д): 0.83 s и 0.94 s (С8Н3, С 8'Н3 и С9Н3, С 9'Н3), 1.07 s (С10Н3 , С10'Н3), 1.19-1.26 м (H4n , H4'n) м 1.53-1.46 (H5n, H5'n ), м 1.70-1.80 (H2n, H2'n, H5k , H5k) м 1.81-1.92 (H4k, H4k , Н3), м 2.18-2.25 (H2k, H2k ), м 6.68 (Н13,15,13',15'), м 6.89 (Н 12,16,12',16'). Спектр ЯМР 13C (CDCl 3), симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 , м.д.: 184.94 s (C1, С1'), 36.141 (С2, С2'), 43.70 d (С3, С3'), 27.31 t (С4, С4' ), 31.93 t (С5, С5'), 53.86 s (С 6, С6'), 46.98 s (С7, C'), 18.89 k (С8, С8'), 19.43 k (С9 , С9'), 11.10 k (С10, С10' ), 147.29 s (С11, С11'), 120.53 d (С 12, С12'), 118.98 d (С13, С 13'), 153.36 s (С14, С14' ), 118.98 d (С15, С15'), 120.53 d (С 16, С16'). симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 (CHCl3, c=0.56). Тплав=165С*. Найдено: m/z 468.3138 [M]+симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 . Вычислено: M=468.3135.

Пример 7.

Изучение токсичности препаратов.

Токсичность продуктов была изучена в отношении клеток MDCK. Клетки MDCK сеяли в 96-луночные планшеты и культивировали при 37°C в среде MEM с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота в атмосфере 5% CO2 (в газопроточном инкубаторе Sanyo-175) до состояния монослоя. Из исследуемых препаратов готовили маточный раствор концентрации 10 мг/мл в диметилсульфоксиде, после чего готовили серию двукратных разведений препаратов в среде MEM от 1000 до 3,75 мкг/мл. Растворенные препараты вносили в лунки планшетов и инкубировали 2 суток при 37°C. По истечении этого срока клетки промывали 2 раза по 5 мин фосфатно-солевым буфером, и количество живых клеток оценивали при помощи микротетразолиевого теста (МТТ). С этой целью в лунки планшетов добавляли по 100 мкл раствора (5 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазолил-2)2,5-дифенилтетразолия бромида (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) на физиологическом растворе. Клетки инкубировали при 37°C в атмосфере 5% СО 2 в течение 2 ч и промывали 5 мин фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в 100 мкл на лунку ДМСО, после чего оптическую плотность в лунках планшетов измеряли на многофункциональном ридере Victor 1420 (Perkin Elmer, Finland) при длине волны 535 нм. По результатам теста для каждого продукта определяли 50% цитотоксическую дозу (CTD50), т.е. концентрацию препарата, вызывающую гибель 50% клеток в культуре. Результаты приведены в таблице.

Пример 8.

Противовирусная активность препаратов.

Определение противовирусной активности препаратов проводили на клетках MDCK в 96-луночных планшетах для клеточных культур. Соединения растворяли в поддерживающей среде для клеток, вносили в лунки панелей с клеточным монослоем и инкубировали в течение 1 ч при 36°C в атмосфере 5% CO 2.

Из вируссодержащей жидкости (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09) готовили серию десятикратных разведении от 10 -1 до 10-7, добавляли в лунки с препаратами и инкубировали при 36°C в течение 48 ч в атмосфере 5% CO 2. По окончании срока инкубации 100 мкл культуральной жидкости смешивали с равным объемом 1% куриных эритроцитов в отдельных планшетах с круглым дном. Учет результатов проводили через 60 мин инкубации при 20°C. За титр вируса принимали величину, обратную десятичному логарифму наибольшего разведения исходного вируса, способного вызвать положительную реакцию гемагглютинации в лунке, и выражали в количестве 50% инфекционных доз (ID 50). Вирусингибирующее действие исследуемых соединений оценивали по снижению титра вируса в опыте по сравнению с контролем. На основании полученных данных рассчитывали 50% ингибирующую дозу ED50, то есть концентрацию препарата, снижающую уровень вирусной репликации вдвое (на 0,3 lg ID50), и химиотерапевтический индекс или индекс селективности (SI), представляющий собой отношение CTD50 к ED50 .

В процессе исследования ингибирования репродукции вируса гриппа соединениями la-f и эталонами сравнения (амантадином и римантадином) были получены результаты, приведенные в таблице.

Таким образом, заявляемые соединения проявляют выраженную противовирусную активность наряду с низкой токсичностью. Химиотерапевтический индекс соединений (1a-d) превышает таковой у препаратов сравнения в три и более раз. Преимуществом перечисленных соединений является их активность в отношении римантадин-устойчивого штамма вируса гриппа A/California/07/09 (HlNl)pdm09, что свидетельствует о перспективности их применения для терапии современных эпидемически актуальных вирусов, подавляющее большинство которых устойчивы к римантадину.

Таблица.
СоединениеФормула CTD50, мкг/млEC50 , мкг/млSI
1a симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 517 5,889
1b симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 >500 9,155
1c симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 161 10,016
1d симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 1039 21,149
1e симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 >500 1643
1f симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 >500 1753
симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 Амантадин 42.99.74
симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967 Римантадин 60125

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Симметричные диимины на основе камфоры формулы 1a-f,

симметричные диимины на основе камфоры - ингибиторы репродукции   вируса гриппа (штамм a/california/07/09 (h1n1)pdm09), патент № 2520967

проявляющие свойства ингибиторов репродукции вируса гриппа (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09).


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2520967

patent-2520967.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07C211/50 связанных с атомами углерода шестичленных ароматических ядер углеродного скелета

Патенты РФ в классе C07C211/50:
химическая установка -  патент 2508287 (27.02.2014)
способ удаления полифенилполиаминов, связанных мостиковыми метиленовыми группами, из водного потока -  патент 2503654 (10.01.2014)
способ получения ди- и полиаминов дифенилметанового ряда и способ получения ди- и полиизоцианатов дифенилметанового ряда -  патент 2501784 (20.12.2013)
соединения алкилированного 1,3-бензолдиамина и способы их получения -  патент 2493144 (20.09.2013)
способ получения 4-(1-адамантил)-1,2-диаминобензола -  патент 2454401 (27.06.2012)
способ получения м-толуилендиамина -  патент 2424226 (20.07.2011)
совмещенный способ получения 4-амино-2,6-динитро- и 2,4,6-триаминотолуолов -  патент 2368598 (27.09.2009)
1-[2-(9-антрилметиламино)фенилиминометил]-2-нафтол - селективный флуоресцентный хемосенсор на катионы hg2+ -  патент 2338738 (20.11.2008)
способ получения диаминодифенилметана и его высших гомологов -  патент 2330016 (27.07.2008)
способ получения 4-аминодифениламина -  патент 2223259 (10.02.2004)

Класс C07C211/41 содержащего конденсированные циклические системы

Класс C07C217/90 атом кислорода по меньшей мере одной из простых эфирных групп связан с атомом углерода шестичленного ароматического кольца, например простые аминодифениловые эфиры

Патенты РФ в классе C07C217/90:
способ получения 1,3- и 1,4-бис(2-амино-4-(трифторметил)фенокси)бензола -  патент 2453533 (20.06.2012)
способ получения хлоргидрата 1,3-бис(3,4-диаминофенокси)бензола -  патент 2439052 (10.01.2012)
способ получения сложных эфиров 4-(3,4-диаминофенокси)бензойной кислоты -  патент 2409555 (20.01.2011)
способ получения 4-(3,4-диаминофенокси)бензойной кислоты -  патент 2409554 (20.01.2011)
способ получения 3,4'-диамино-4-r-бензгидролов -  патент 2365578 (27.08.2009)
сверхразветвленные полиимиды и 4,5-бис-(3-аминофенокси)фталевая кислота для их получения -  патент 2260016 (10.09.2005)
производные урацила, промежуточные продукты, гербицидная композиция и способ подавления роста сорняков -  патент 2259359 (27.08.2005)
новые трициклические производные (варианты), фармацевтическая композиция (варианты), способ подавления иммуной реакции или лечения и/или предупреждения аллергических заболеваний (варианты) -  патент 2216533 (20.11.2003)
замещенные бициклические соединения, исходные и промежуточные продукты для их получения и фармацевтическая композиция на их основе -  патент 2203272 (27.04.2003)
бис-(3-амино-5-фенокси)фениловый эфир гидрохинона и полиимиды на его основе для термостойких материалов -  патент 2072350 (27.01.1997)

Класс A61P31/16 против гриппа или риновирусов

Патенты РФ в классе A61P31/16:
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
штамм бактерий serratia species, являющийся продуцентом внеклеточной рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью -  патент 2528064 (10.09.2014)
способ лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностого антигена н1n1 и лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена н1n1 -  патент 2527688 (10.09.2014)
варианты гемагглютинина и нейрамидазы вируса гриппа -  патент 2523587 (20.07.2014)
способ защиты организма от инфекции, вызванной штаммами субтипа h1n1 вируса гриппа а препаратом на основе альфа-2 интерферона человека -  патент 2523554 (20.07.2014)
моно и дифторзамещенные этил (3r,4r,5s)-5-азидо-4-ацетиламино-3-(1-этилпропокси)-циклогексен-1-карбоксилаты, способ получения и применения -  патент 2521593 (27.06.2014)
(3r,4r,5s)-4-амино-5-(2,2-дифторацетиламино)-3-(1-этилпропокси)-циклогекс-1-енкарбоновая кислота и ее эфиры, способ их получения и применения -  патент 2520836 (27.06.2014)
применение изоосмотических ионных растворов на основе морской воды для изготовления медицинских устройств, применяемых для предупреждения возникновения осложнений от насморка или гриппоподобного синдрома -  патент 2519671 (20.06.2014)
композиции для лечения заболеваний верхних дыхательных путей и симптомокомплекса гриппа -  патент 2518738 (10.06.2014)
способ и средство активации irf-3 для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых (+) phk-содержащими вирусами -  патент 2518314 (10.06.2014)


Наверх