способ получения инъекционного заменителя синовиальной жидкости

Классы МПК:A61K35/12 материалы из млекопитающих животных или птиц
A61K38/39 пептиды соединительной ткани, например коллаген, эластин, ламинин, фибронектин, витронектин, холодный нерастворимый глобулин (CIG)
A61K41/00 Лекарственные препараты, получаемые из материалов путем воздействия на них волновой энергии или облучения частицами
A61P19/02 для лечения заболеваний суставов, например артритов, артрозов
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государтсевнное бюджетное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А. Илизарова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-12-27
публикация патента:

Изобретение относится к медицине и касается способа получения инъекционного заменителя синовиальной жидкости, включающего измельчение, экстракцию, протеолиз и осаждение шкуры сельскохозяйственных животных. Сначала готовят лиофилизат комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов и белков, далее готовят лиофилизат коллагена, на завершающем этапе готовят 2% раствор комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов и белков в дистиллированной воде и смешивают его с лиофилизатом коллагена до получения вязкости 8,0-8,2 относительно дистиллированной воды, полученный препарат упаковывают во флаконы и стерилизуют потоком быстрых электронов дозой 18+5 кГр. Изобретение обеспечивает получение целевого продукта с наименьшими затратами на его производство. 1 пр., 1 ил

.

Рисунки к патенту РФ 2517237

способ получения инъекционного заменителя синовиальной жидкости, патент № 2517237

Изобретение относится к медицине, в частности к артрологии, и может быть использовано для лечения дегенеративно-дистрофических процессов в суставах путем периартикулярного введения искусственной синовиальной жидкости.

Известна технология синовиального протезирования препаратами экзогенного гиалуроната натрия высокой степени очистки с очень хорошими вязкоупругими свойствами (Сущук Е.А., 2007). Введение синовиальных протезов уменьшает болевой синдром, улучшает подвижность суставов, позволяет пациентам сократить употребление нестероидных противовоспалительных препаратов, а также отсрочить проведение ортопедической операции протезирования сустава.

В качестве прототипа является средство «Ферматрон» (FERMATHRON) - вязкоэластичный препарат на основе гиалуроната натрия, применяемый для инъекций в синовиальное пространство коленного сустава пациентов, страдающих слабой или умеренной степенью остеоартроза. Введение «Ферматрона» в полость сустава вызывает улучшение вязко-эластичных и защитных свойств синовиальной жидкости. Препарат представляет собой 1% раствор гиалуронана (гиалуронат натрия, натриевая соль гиалуроновой кислоты) и синтезируется путем ферментации Streptococcus equi и тщательно очищается.

Однако данный препарат рекомендуется на ранних стадиях болезни, когда обнаруживаются лишь слабовыраженные признаки разрушения хряща. Кроме того, гиалуроновую кислоту - действующее вещество ферматрона получают бактериальным синтезом, что обусловливает его высокую стоимость.

Задачей настоящего изобретения является разработка и создание препарата, оказывающего стимулирующее хондрогенез, лубрикационное и обезболивающее влияние на суставной хрящ при различных стадиях остеоартроза и способ его получения на основе гиалуроновой кислоты в комплексе с сульфатированными гликозаминогликанами и белками из шкур и коллагена из костной ткани сельскохозяйственных животных.

Указанная задача решается тем, что очищенную шкуру от сала и жира замораживают и измельчают до стружки, после этого замораживают повторно и осуществляют экстракцию нагретым до 80°С раствором 0,9% хлорида натрия, экстракт фильтруют, добавляют папаин из расчета 1 мг на 1 л экстракта, термостатируя экстракт при температуре 40°С 24 часа, затем осаждают гликозаминогликаны из протеолизата с добавлением равного объема 4% калия ацетата в этаноле, осадок отделяют декантацией и вновь растворяют в дистиллированной воде, после чего полученный раствор подвергают вакуумной сушке в течение 48 часов с достижением остаточной влажности 5%, далее готовят лиофилизат коллагена, для этого отмытую от остатков жира костную ткань подвергают декальцинации 0,5 М хлороводородной кислоты, из полученного костного матрикса экстрагируют неколлагеновые белки 8 М мочевиной с добавлением 1% 2-меркаптоэтанола, к 500 г диссоциативно экстрагированного костного матрикса добавляют 1 л 0,01 М раствора соляной кислоты, в котором растворяют 2 г пепсина, смесь периодически перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 48 часов, после чего из смеси декантированием и фильтрацией отделяют коллоидный раствор солюбилизированного костного коллагена, а нерастворившийся матрикс вновь заливают раствором пепсина в 0,01 М соляной кислоты, процедуру протеолиза повторяют до полного растворения матрикса, далее растворы коллагена на каждом этапе объединяют, полученный раствор освобождают от нерасворившихся частиц центрифугированием, высаливают хлоридом натрия, диализуют и лиофильно высушивают, определяют концентрацию коллагена, на завершающем этапе готовят 2% раствор комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов и белков в дистиллированной воде и смешивают его с лиофилизатом коллагена до получения вязкости 8,0-8,2 относительно дистиллированной воды, полученный препарат упаковывают во флаконы и стерилизуют потоком быстрых электронов дозой 18+5 кГр.

Настоящее изобретение поясняют подробным примером его осуществления и схемой, на которой иллюстрированы основные этапы осуществления способа.

Инъекционный заменитель синовиальной жидкости получают следующим способом.

На первом этапе готовят лиофилизат комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов и белков. Для этого после предварительной механической очистки шкур свиней от сала и жира шкуры замораживают и измельчают до стружки. Полученную стружку вновь замораживают, после чего прибавляют нагретый до 80°С раствор 0,9%-го хлорида натрия в тройном объеме от количества стружки. Полученный экстракт фильтруют на складчатом фильтре. После чего помещают в емкость и добавляют папаин из расчета 100 мг на 1 л экстракта. Емкость помещают в термостат при температуре 40°С на 24 часа. Осаждение комплекса гликозаминогликанов и гликопротеинов из протеолизата осуществляют добавлением равного объема 4%-го калия ацетата в этаноле. Осадок отделяют декантацией и вновь растворяют в дистиллированной воде. После этого полученный раствор комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов, белков подвергают вакуумной сушке в течение 48 часов с достижением остаточной влажности 5%.

Вторым этапом из минерализованной соединительной ткани готовят лиофилизат коллагена. Кортикальную костную ткань очищают от остатков мягких тканей, надкостницы и костного мозга. Очищенную ткань отмывают от остатков жира смесью спирт-диэтиловый эфир в соотношении 1:1, при этом количество обезжиривающей смеси должно быть втрое больше костной ткани по объему. Подготовленную таким образом костную ткань высушивают в токе воздуха в течение суток. Далее костную ткань измельчают, полученная фракция размером менее 0,5 см. Затем навеску очищенной, отмытой, измельченной костной ткани заливают пятикратным объемом раствора 0,5 М хлороводородной кислоты. Из полученного костного матрикса экстрагируют неколлагеновые белки 8 М мочевиной с добавлением 1% 2 - меркаптоэтанола. К 500 г диссоциативно экстрагированного костного матрикса добавляют 1 л 0,01 М раствора соляной кислоты, в котором растворяют 2 г пепсина, смесь при периодическом перемешивании выдерживают при комнатной температуре 48 ч, после чего из смеси декантированием и фильтрацией через марлю отделяют коллоидный раствор солюбилизированного костного коллагена, а нерастворившийся матрикс вновь заливают раствором пепсина в 0,01 М соляной кислоты. Процедуру протеолиза повторяют до полного растворения матрикса.

Растворы коллагена на каждом этапе объединяют, полученный раствор освобождают от нерасворившихся частиц центрифугированием, высаливают хлоридом натрия (при его концентрации, составляющей 25-30% от таковой в насыщенном растворе) и диализуют против дистиллированной воды и лиофильно высушивают. Аликвоту коллагенового золя прецизионно взвешивают, лиофильно высушивают и определяют концентрацию коллагена в полученном лиофилизате повторным взвешиванием.

Завершающим этапом готовят 2% раствор комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов, белков в дистиллированной воде и смешивают его с лиофилизатом коллагена до получения вязкости 8,0-8,2 относительно дистиллированной воды, равную таковой у нормальной синовиальной жидкости.

Затем препарат упаковывают во флаконы и стерилизуют потоком быстрых электронов дозой 18+5 кГр на ускорителе ЛУЭ-8-5 М, У003 MB. Этапы осуществления способа отражены на схеме.

Полученный препарат содержит (мг/100 мг):

Кальций - 0,330×10 -3

Фосфор - 0,150×10-3

Общий белок - 56,0

Сиаловые кислоты - 0,350

Уроновые кислоты - 0,9

Коллаген - 27,94

Гиалуроновая кислота - 2,4

Предлагаемый способ изготовления инъекционного заменителя из неминерализованной соединительной ткани показал, что его применение в клинической практике позволяет воспроизводить его в условиях лаборатории лечебного учреждения, для его осуществления не требуется применения дорогостоящих реактивов. Кроме того, предложенный целевой продукт является многокомпонентым, оказывая действие на различные звенья патогенеза дегенеративно-дистрофических заболеваний суставов.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения инъекционного заменителя синовиальной жидкости, включающий измельчение, экстракцию, протеолиз и осаждение шкуры сельскохозяйственных животных, отличающийся тем, что сначала готовят лиофилизат комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов и белков, для этого очищенную шкуру от сала и жира замораживают и измельчают до стружки, после этого замораживают повторно и осуществляют экстракцию нагретым до 80°С раствором 0,9% хлорида натрия, экстракт фильтруют, добавляют папаин из расчета 1 мг на 1 л экстракта, термостатируя экстракт при температуре 40°С 24 часа, затем осаждают гликозаминогликаны из протеолизата с добавлением равного объема 4% калия ацетата в этаноле, осадок отделяют декантацией и вновь растворяют в дистиллированной воде, после чего полученный раствор подвергают вакуумной сушке в течение 48 часов с достижением остаточной влажности 5%, далее готовят лиофилизат коллагена, для этого отмытую от остатков жира костную ткань подвергают декальцинации 0,5 М хлороводородной кислоты, из полученного костного матрикса экстрагируют неколлагеновые белки 8 М мочевиной с добавлением 1% 2-меркаптоэтанола, к 500 г диссоциативно экстрагированного костного матрикса добавляют 1 л 0,01 М раствора соляной кислоты, в котором растворяют 2 г пепсина, смесь периодически перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 48 часов, после чего из смеси декантированием и фильтрацией отделяют коллоидный раствор солюбилизированного костного коллагена, а нерастворившийся матрикс вновь заливают раствором пепсина в 0,01 М соляной кислоты, процедуру протеолиза повторяют до полного растворения матрикса, далее растворы коллагена на каждом этапе объединяют, полученный раствор освобождают от нерастворившихся частиц центрифугированием, высаливают хлоридом натрия, диализуют, лиофильно высушивают и определяют концентрацию коллагена, на завершающем этапе готовят 2% раствор комплекса сульфатированных и несульфатированных гликозаминогликанов и белков в дистиллированной воде и смешивают его с лиофилизатом коллагена до получения вязкости 8,0-8,2 относительно дистиллированной воды, полученный препарат упаковывают во флаконы и стерилизуют потоком быстрых электронов дозой 18+5 кГр.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2517237

patent-2517237.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K35/12 материалы из млекопитающих животных или птиц

Патенты РФ в классе A61K35/12:
способ лечения трофических язв -  патент 2528973 (20.09.2014)
способ восстановления кожного покрова у пациентов с обширными ранами с дефектом мягких тканей (варианты) -  патент 2526814 (27.08.2014)
мазь для лечения ожогов, фолликулита, фурункулеза, васкулита и заживления ран -  патент 2526152 (20.08.2014)
способ комплексного лечения хронического эндометрита у коров -  патент 2524623 (27.07.2014)
способ создания продукта спортивного питания -  патент 2524550 (27.07.2014)
композиции внеклеточного матрикса для лечения рака -  патент 2523339 (20.07.2014)
средство для лечения маститов у коров и способ его применения -  патент 2522247 (10.07.2014)
способ промышленного получения фибрин-мономера из плазмы крови -  патент 2522237 (10.07.2014)
способ коррекции морфофункционального состояния спортсменов -  патент 2521324 (27.06.2014)
способ получения вещества, стимулирующего антигеннезависимую дифференцировку в-лимфоцитов -  патент 2521230 (27.06.2014)

Класс A61K38/39 пептиды соединительной ткани, например коллаген, эластин, ламинин, фибронектин, витронектин, холодный нерастворимый глобулин (CIG)

Патенты РФ в классе A61K38/39:
способ местного лечения ран с помощью биологической повязки, содержащей живые клетки линии диплоидных фибробластов человека -  патент 2526811 (27.08.2014)
способ хирургического лечения несросшихся переломов и ложных суставов трубчатых костей при наличии дефицита мягких тканей в проекции несросшихся переломов и ложных суставов -  патент 2515146 (10.05.2014)
способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений при лечении травматолого-ортопедических пациентов с использованием аппаратов внешней фиксации -  патент 2508062 (27.02.2014)
способ лечения скелетных осложнений у больных с литическими метастазами в длинные трубчатые кости -  патент 2505299 (27.01.2014)
способ комплексной переработки рыбного сырья для получения гиалуроновой кислоты и коллагена -  патент 2501812 (20.12.2013)
пептидные фрагменты для индукции синтеза белков внеклеточного матрикса -  патент 2501807 (20.12.2013)
способ замещения дефекта периферического нерва -  патент 2499565 (27.11.2013)
способ получения нового полимерного соединения, обладающего противовирусной активностью, сополимеризацией 2,5-дигидроксибензойной кислоты и желатина с помощью фермента лакказы -  патент 2494119 (27.09.2013)
стерильный аутологичный, аллогенный или ксеногенный имплантат и способ его изготовления -  патент 2478403 (10.04.2013)
биополимерный матрикс для пролиферации клеток и регенерации нервных тканей -  патент 2478398 (10.04.2013)

Класс A61K41/00 Лекарственные препараты, получаемые из материалов путем воздействия на них волновой энергии или облучения частицами

Патенты РФ в классе A61K41/00:
способ лечения радиационного, химического и/или биологического поражения организма и способ получения глобулинов для лечения радиационного, химического и/или биологического поражения организма -  патент 2524612 (27.07.2014)
применение 5-аминолевулиновой кислоты и ее производных в твердой форме для фотодинамического лечения и диагностики -  патент 2521228 (27.06.2014)
матрица для клеточной трансплантологии -  патент 2521194 (27.06.2014)
конъюгаты rgd-(бактерио)хлорофилл для фотодинамической терапии и визуализации некротических опухолей -  патент 2518296 (10.06.2014)
способ введения sirna в клетки фотохимической интернализацией -  патент 2510826 (10.04.2014)
магнитные преобразователи -  патент 2500622 (10.12.2013)
гель-основа для ранозаживляющих и косметических средств и способ его получения -  патент 2485938 (27.06.2013)
способ подготовки измельченного лекарственного растительного сырья (лрс) для таблетирования методом прямого прессования -  патент 2484838 (20.06.2013)
способ профилактики и/или лечения раковых заболеваний -  патент 2480201 (27.04.2013)
полимерный носитель лекарственных средств для доставки под визуальным контролем -  патент 2477146 (10.03.2013)

Класс A61P19/02 для лечения заболеваний суставов, например артритов, артрозов

Патенты РФ в классе A61P19/02:
биологический материал, подходящий для терапии остеоартроза, повреждения связок и для лечения патологических состояний суставов -  патент 2529803 (27.09.2014)
способ восстановительного лечения нервно-мышечного аппарата у больных с ложным суставом шейки бедренной кости после эндопротезирования тазобедренного сустава -  патент 2528637 (20.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
способ приготовления средства, обладающего свойством стимуляции регенерации хрящевой, костной, мышечной тканей и способ стимуляции регенерации хрящевой, костной, мышечной тканей с использованием приготовленного средства -  патент 2527701 (10.09.2014)
ингибиторы поли(адф-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила -  патент 2527457 (27.08.2014)
способ сопроводительного лечения при эндопротезировании крупных суставов -  патент 2527159 (27.08.2014)
способ лечения артрита -  патент 2526201 (20.08.2014)
комбинированные препараты с антагонистом цитокина и кортикостероидом -  патент 2526161 (20.08.2014)
новый пептид и его применение -  патент 2525913 (20.08.2014)
способы контроля и профилактики воспаления и ослабления воспалительных состояний у животных компаньонов -  патент 2525579 (20.08.2014)


Наверх