способ диагностики задержки развития легких плодов и новорожденных

Формула изобретения

Способ диагностики задержки развития легких у погибших плодов и новорожденных 22-40 недель гестации путем морфологического исследования легких, отличающийся тем, что в бронхиальном эпителии иммуногистохимическим методом оценивают индекс экспрессии эпидермального фактора роста (ЭФР) и инсулиноподобного фактора роста I (ИПФР-I), определяют соотношение индекса экспрессии ЭФР к индексу экспрессии ИПФР-I и при значении соотношения более 1,0 диагностируют морфофункциональную зрелость легких, а при значении менее 1,0 - задержку развития структур легких.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии, и может быть использовано для диагностики задержки внутриутробного развития легких плода и новорожденного 22-40 недель гестации в практике детских патологоанатомов.

Актуальность

Под зрелостью понимают готовность органов и систем ребенка к обеспечению его внеутробного существования. Так, среди доношенных новорожденных могут встречаться незрелые, как и недоношенные младенцы могут быть достаточно зрелыми в функциональном отношении к своему гестационному возрасту. Следовательно, для патологоанатома остается важным вопрос диагностики морфологической и функциональной степени зрелости органов плода, в частности - легочной паренхимы, так как уровень развития системы органов дыхания, или легочной системы, в значительной степени определяет жизнеспособность младенца. В классической литературе с учетом структурных преобразований внутриутробное развитие бронхиального и альвеолярного компонентов легких условно делят на несколько стадий: псевдожелезистую, каналикулярную, терминального мешка и альвеолярную (Волкова О. В., Пекарский М. И. Эмбриогенез и возрастная гистология внутренних органов человека. - М., 1976). Однако временные периоды для каждой стадии развития легких плода в антенатальном периоде вариабельны, согласно сведениям, изложенным в различных литературных источниках (Mills S.E. Histology for Pathologists, 3rd Edition: Lippincott W & W. - 2007. - P.474). Неоднозначный подход к оценке стадий развития легких затрудняет диагностику патологии органов. Кроме того, морфологическая зрелость структур легких может не соответствовать функциональной.

Для диагностики зрелости легких и уточнения патогенетических механизмов перинатальных потерь большое значение имеет патолого-анатомический анализ плодов и новорожденных 22-40 недель гестации. С морфологических позиций наиболее важна оценка зрелости органов у плодов 22-27 недель гестации, которая, в свою очередь, позволит на последующих этапах разработать подходы к эффективной профилактике самопроизвольного прерывания беременности. В судебно-медицинской практике точно установленный срок гестации новорожденных является основным доказательством гестационной зрелости органов.

Известен способ диагностики задержки внутриутробного развития у плодов 25-27 недель гестации по респираторной паренхиме легких с точностью 86% (патент № 2063633. Российская Федерация. Способ диагностики задержки внутриутробного развития плода / Кулида Л.В., Перетятко Л.П., Милованов П.А., Проценко Е.В. // Изобретения. - 1996. - № 19. - С.260). Гистостереометрически определяют соотношение альвеолоцитов первого, второго порядков к субэпителиально расположенным капиллярам в субплевральных зонах и при уменьшении последнего менее 1:4 диагностируют задержку внутриутробного развития плода. Недостатками данного способа являются: во-первых, диагностика осуществляется только на фрагментах легкого определенной топографии, а именно субплевральных отделов, что может быть неинформативно при выраженной гипоплазии легких или недоступно при исследовании архивного материала; во-вторых, данный способ применим только для диагностики задержки внутриутробного развития плода (ЗВРП) 25-27 недель гестации.

Известен способ прогнозирования задержки внутриутробного развития на основании исследования в сыворотке крови беременной содержания инсулиноподобного фактора роста (ИФР) и сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР). Рассчитывают коэффициент отношения факторов и при величине коэффициента, равной 28,5 и ниже, диагностируют задержку развития плода (патент № 2246733. Российская Федерация. Способ прогнозирования задержки внутриутробного развития плода / Орлов А.В., Крукиер И.И., Маркарьян И.В., Друккер Н.А., Погорелова Т.Н., Мелконов Э.Ю. // Изобретения. Полезные модели. - 2005. - № 5). Однако следует заметить, что вышеназванные факторы роста синтезируются как в плаценте, так и в тканях плода и беременной женщины. Соотношение и взаимовлияние материнской, плодовой и плацентарной фракций факторов роста не известно. Последний факт не позволяет считать данный метод объективным в плане прогноза ЗВРП, поскольку факторы общие для матери и плода. Кроме того, данный способ не применим в патолого-анатомической практике.

Наиболее близким по техническому решению является используемый в патолого-анатомической практике способ диагностики задержки развития легких плода 12-40 недель гестации, основанный на определении соответствия гистологического строения паренхимы легких сроку гестации (Т.В. Андреева. Обследование конечного респираторного тракта для определения соответствия легких сроку гестации в перинатальном периоде. Норма // Архив патологии. - 1994. - № 2. - С.69-73). Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков: во-первых, данный способ предусматривает комплексную сложную морфологическую оценку многих структурных компонентов легкого (бронхиального дерева, респираторной паренхимы, стромально-сосудистых структур); во-вторых, требуется использование комплекса обзорных и элективных методов окраски гистологических срезов (гематоксилином и эозином, специфические окраски на гликоген и дифференциально-диагностическая окраска на эластические/коллагеновые и ретикулярные волокна соединительной ткани); в-третьих, предлагаются только качественные или относительные показатели изучаемых структур (больше-меньше, плотнее и др.), что относится к субъективным критериям оценки.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемым техническим результатом является расширение арсенала морфологических диагностических средств выявления задержки развития легких плода и новорожденного, позволяющее использовать специфические (объективные) маркеры диагностики, что дает возможность уточнить срок гестации плода и зрелость легких, соответствие структуры легких сроку гестации, объективизировать не только задержку развития, но и механизм гибели плода и новорожденного на основании одного микропрепарата без использования целого ряда элективных методов окраски.

Технический результат достигается тем, что при иммуногистохимическом исследовании бронхиального эпителия у погибших плодов и новорожденных 22-40 недель гестации оценивают индекс экспрессии эпидермального фактора роста (ЭФР) и инсулиноподобного фактора роста I (ИПФР-I) с последующим определением соотношения индексов экспрессии ЭФР к ИПФР-I. При значении соотношения менее 1,0 диагностируют задержку развития структур легких, а при значении более 1,0 - морфофункциональную зрелость легких.

Отличительные признаки способа заключаются в том, что иммуногистохимическим методом в бронхиальном эпителии оценивают индекс экспрессии эпидермального фактора роста (ЭФР) и инсулиноподобного фактора роста I (ИПФР-I), определяют соотношение индекса экспрессии ЭФР к индексу экспрессии ИПФР-I и при значении соотношения более 1,0 диагностируют морфофункциональную зрелость легких, а при значении менее 1,0 - задержку развития структур легких.

Новизна способа

В качестве объекта исследования избраны бронхиальные структуры легких плода, так как изменения в вышеуказанных структурах при данном методе исследования сходны с особенностями респираторной паренхимы, которая относится к основным критериям жизнеспособности плода, в то время как морфофункциональная зрелость других органов (почки, печень и др.) не является жизненно важной на первых этапах внеутробной жизни.

Впервые предложен способ морфологической диагностики задержки развития легких плода и новорожденного, основанный на оценке результатов иммуногистохимической реакции с антителами к ЭФР и ИПФР-I в легких плода и новорожденного. Авторами предложен критерий морфофункциональной зрелости легких у плодов и новорожденных 22-40 недель гестации.

Используемые факторы роста играют ведущую роль в регуляции процессов эмбриогенеза. Инсулиноподобный фактор роста-I (ИПФР-I) осуществляет регуляцию процессов роста, развития и дифференцировки клеток и тканей организма. Фактор роста играет основную роль в клеточной пролиферации, ингибировании апоптоза, посредством паракринного эффекта ускоряет рост эпителиальных клеток (Hellawell G.O., Brewster S.F. Growth factors and teir receptors in prostate cancer // BJU. - 2002. - Vol.89, № 3. - C. 230-240). Во многих случаях уровень ИПФР-I является маркером для оценки продукции гормона роста. После повреждения тканей ИПФР-I участвует в регуляции нейрогенеза, синаптогенеза и нейропротекции (Gunnell D., Miller L.L., Rogers I., Holly J.M. Association of Insulin-like Growth Factor I and Insulin-like Growth Factor-Binding Protein-3 with Intelligence Quotient Among 8- to 9-Year-Old Children in the Avon Longitudinal Study of Parents and Children // Pediatrics. - 2005. - Vol.116, № 5. - P. 681). В последние годы определена роль фактора в канцерогенезе (Hellawell G.O., Brewster S.F. Growth factors and their receptors in prostate cancer // BJU. - 2002. - Vol.89, № 3. - P. 230-240). Известно, что ИПФР-I вызывает гипертрофию скелетных мышц (Lewis M.I., Feinberg А.Т., Fournier М. IGF-I and/or growth hormone preserve diaphragm fiber size with moderate malnutrition // J. Appl. Physiol. - 1998. - Vol.85, № 1. - P. 189-197). Во время беременности плацентой продуцируется инсулиноподобный и эпидермальный факторы роста. У пациенток, беременность которых осложнилась ЗВРП, установлено снижение уровня ИПФР-I со 2-го триместра по сравнению с неосложненной беременностью в 1,36-1,68 раза (Стрижаков А. Н., Тимохина Е. В., Тарабрина Т. В. Клиническое значение инсулиноподобного фактора роста при синдроме задержки развития плода // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2009. - Т. 8, № 5. - С.5-9). Уровень ИПФР-I в крови беременных может являться ранним прогностическим маркером, характеризующим начальные нарушения в функциональной системе «мать-плацента-плод» при ЗВРП. Кроме того, концентрацию инсулиноподобного фактора роста в сыворотке крови используют для дифференциальной диагностики хронического гепатита С и цирроза печени (RU 2005140116 А, 27.06.2007).

Эпидермальный фактор роста (ЭФР) присутствует в клетках всех тканей организма, стимулирует пролиферацию эпителиальных клеток (Gregory Н. Isolation and structure of urogastrone and its relationship to epidermal growth factor // Nature. - 1975. - № 257. - P. 325-327), а также фибробластов и кератиноцитов, почечного эпителия, глиальных клеток, клеток гранулезы яичников и тиреоидных клеток in vitro (Carpenter G., Cohen S. Epidermal growth factor // J. Biol. Chem. - 1990. - № 265. - P. 7709-7712). Фактор стимулирует пролиферацию эмбриональных клеток, а также способствует увеличению высвобождения кальция из костной ткани, т.е. способствует резорбции кости и является сильным хемоаттрактантом для фибробластов и эпителиальных клеток. Самостоятельно ЭФР и в комбинации с другими цитокинами является важнейшим звеном, опосредующим процессы заживления ран и ангиогенеза (Barnham K.J., Torres A.M., Alewood D., Alewood P.F., Domagala Т., Nice E.C., Norton R.S. Role of the 6-20 disulfide bridge in the structure and activity of epidermal growth factor // Protein Science. - 1998. - Vol.7, № 8. - P. 1738-49). Фактор роста играет важную роль в регуляции обменных и восстановительных процессов. ЭФР обнаружен в крови, моче, цереброспинальной жидкости, молоке, слюне, желудочном и панкреатическом соке. Самое большое количество фактора выявлено в неизмененной предстательной железе (Gregory Н., Willshire I., Kavanagh J., Blacklock N., Chowdury S., Richards R. Urogastrone-epidermal growth factor concentrations in prostatic fluid of normal individuals and patients with benign prostatic hypertrophy // Clin Sci. - 1986. - Vol.70. - P. 359-63). В определенных условиях ЭФР может вызывать малигнизацию клеток (Peehl D, Wong S, Bazinet М, Stamey Т. In vitro studies of human prostatic epithelial cells: attempts to identify distinguishing features of malignant cells // Growth Factors. - 1989. - Vol.1. - P. 237-50). В гинекологии ЭФР используется для диагностики гиперпластического процесса эндометрия (RU 2295917 С1, 27.03.2007), для дифференциальной дооперационной диагностики быстрорастущей лейомиомы матки (RU 2258222 С2, 10.08.2005).

Представления различных авторов о зрелости плода неоднозначны (De Farias Aragao V.M., Barbieri M.A., Moura Da Silva A.A. et al. Risk factors for intrauterine growth restriction: a comparison between two Brazilian cities // Pediatr Res. - 2005. - Vol.57, № 5, Pt 1. - P.674-679). Для незрелых плодов типично не только снижение массы тела и других соматических параметров, но и ряд морфологических, физиологических, метаболических особенностей (Евсеенко Д.А., Ещенко Ю.В. Изменения в фетоплацентарном комплексе при острой и хронической внутриутробной гипоксии // Педиатрия. - 2002. - № 1. - С.5-9). Сталкиваясь с дефицитом нутриентов, тканевые структуры, характеризующиеся более высоким уровнем дифференцировки и зрелости, имеют «приоритет» в росте и могут продолжать свое развитие даже за счет других органов и тканей. Данное обстоятельство определяет, какие органы и ткани оказываются максимально вовлеченными в патологический процесс, а следовательно, предопределяет наличие или отсутствие диспропорции в их размерах и функции (Gogia Т. Risk of iugr syndrome development during preeclampsia of the pregnant // Georgian Med News. - 2005. - Vol.128. - P. 15-17). Система дыхания является основной из основных в обеспечении гомеостатического равновесия в организме ребенка (Макаров О.В., Козлов П.В., Насырова Д.В. Синдром задержки развития плода: современные подходы к фармакотерапии // Рос. вестник акушера-гинеколога. - 2003. - Т. 3, № 6. - С.18-22). Негативные условия развития плода, приводящие к формированию задержки его внутриутробного развития, одновременно способствуют нарушению респираторной адаптации новорожденных в раннем неонатальном периоде (Wilson-Costello D., Friedman Н., Minich N., Siner В., Taylor G., Schluchter M. and Hack M. Improved Survival Rates With Increased Neurodevelopmental Disability for Extremely Low Birth Weight Infants in the 1990s // Pediatrics. - 2005. - Vol.115. - P. 997-1003).

Принимая во внимание то обстоятельство, что ИПФР-I является основным фетальным фактором в раннем эмбриогенезе, а ЭФР относится к ключевым факторам, обеспечивающим высокую метаболическую активность и стимулирующим размножение клеток, изменения их экспрессии можно считать патогенетической основой задержки развития легких. Кроме того, ИПФР-I является медиатором для соматотропного гормона, роль которого в регуляции роста плодов и новорожденных, а также в формировании и развитии органов общеизвестна.

Так, по мнению авторов, иммуногистохимическое исследование в воздухоносных путях легких у плодов и новорожденных 22-40 недель гестации с оценкой индекса экспрессии эпидермального фактора роста (ЭФР) и инсулиноподобного фактора роста I (ИПФР-I) в эпителии бронхов поможет охарактеризовать морфофункциональную зрелость органов дыхания. При соотношении индекса экспрессии ЭФР к индексу экспрессии ИПФР-I менее 1,0 диагностируют задержку развития структур легких.

Метод позволяет осуществить диагностику задержки внутриутробного развития легких, определить гестационный срок жизни плода, а также сформулировать и оформить патолого-анатомический диагноз, правильно трактовать механизм гибели плода и новорожденного.

Способ осуществляется следующим образом.

Аутопсийный секционный материал (по 1 фрагменту легочной ткани 0,5×0,5 см из прикорневой зоны правого и левого легкого) фиксируют в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 часов. После гистологической проводки кусочки ткани заливают в парафин, изготавливают срезы толщиной 5 мкм. Иммуногистохимическую реакцию проводят с использованием первичных антител фирмы Santa Cruz Biotechnology (мышиные моноклональные антитела класса IgG _2a к инсулиноподобному фактору роста - 1 и IgG₁ к эпидермальному фактору роста в рабочем разведении 1:100) и системы детекции LSAB + System HRP (Dako) по следующему протоколу.

1. Депарафинирование.

2. Демаскировка антигенных структур путем кипячения в скороварке в нитратном буфере рН 6,0 в течение 10 минут, остывание до комнатной температуры.

3. Блокирование эндогенной пероксидазы - инкубация с 3% перекисью водорода 20 минут во влажной камере при комнатной температуре.

4. Инкубация с первичными антителами в течение 20 часов во влажной камере при температуре +4°C.

5. Инкубация с вторичными биотинилированными антителами 20 минут во влажной камере при комнатной температуре.

6. Инкубация со стрептавидин-пероксидазным комплексом 20 минут во влажной камере при комнатной температуре.

7. Реакция с DAB-хромогеном 3 минуты при комнатной температуре.

8. Докраска ядер гематоксилином, заключение срезов.

После каждого этапа срезы промывают в фосфатном буфере рН 7,4.

Оценку иммуногистохимической реакции проводят путем подсчета индекса экспрессии на 100 клеток бронхиального эпителия в 10 полях зрения микроскопа при увеличении х400.

В каждой клетке оценивают интенсивность иммуногистохимической реакции в баллах по следующему алгоритму:

0 баллов - отсутствие реакции;

1 балл - слабо положительная реакция;

2 балла - умеренное окрашивание;

3 балла - выраженное окрашивание клеток.

Индекс экспрессии изучаемых факторов в условных единицах (у.е.) высчитывают по формуле:

Индекс экспрессии = P(i)·i,

где i - интенсивность реакции в баллах от 0 до 3;

P(i) - процент клеток бронхиального эпителия, окрашенных с разной интенсивностью.

Соотношение индекса экспрессии ЭФР к индексу экспрессии ИПФР-I менее 1,0 подтверждает задержку развития легких плода.

Сущность способа поясняется следующими примерами.

Пример 1

Женщина Б-ва, 33 года. Диагноз: поздний самопроизвольный выкидыш в 22-23 недели беременности. Фетоплацентарная недостаточность 1 степени. Внутриутробная гибель плода.

Девочка с массой тела 510 г, рост - 38 см.

Патолого-анатомический диагноз

Основное заболевание: поздний самопроизвольный выкидыш мертвым плодом женского пола при беременности 22-23 недели, аспирация инфицированной околоплодной жидкостью.

Патология матери: отягощенный акушерский анамнез, носитель TORCH-инфекции (хламидиоз).

Патология беременности: угроза невынашивания.

Послед: плацентит.

При гистологическом исследовании легких плода: резкое венозное полнокровие, респираторная паренхима соответствует каналикулярной стадии развития. Сформированы 18 генераций бронхов до уровня респираторных бронхиол, выстланных кубическим эпителием. В просвете воздухоносных путей слизистый секрет. Хрящи в бронхах 4-5 порядка содержат гладкомышечные волокна. Перибронхиальная соединительная ткань сформирована очагово. Различим ацинус. Капиллярная инвазия частичная, сосуды микроциркуляторного русла полнокровны. Межальвеолярные перегородки неравномерной толщины. Различим альвеолярный эпителий I и II типов. Встречаются первичные ателектазы. Единичные бронхиолы и альвеолы воздушны.

При морфологической оценке легкие плода незрелые, что соответствует сроку гестации 22-23 недели.

Проведено иммуногистохимическое исследование. Индекс экспрессии ЭФР в бронхиальном эпителии правого легкого 12,8 у.е., для ИПФР-I - 42,2 у.е.; для левого легкого - ЭФР 13,5 у.е., ИПФР-I - 39,5 у.е. Согласно заявляемому способу отношение ЭФР/ИПФР-I в правом легком равно 0,3, в левом - 0,38 у.е., отношение индексов экспрессии в обоих легких меньше 1,0, что свидетельствует о морфофункциональной незрелости легких плода. Плод соответствует сроку гестации.

Заключение: при стандартном и иммуногистохимическом методе исследования легкие незрелые, не способны поддерживать самостоятельное дыхание плода, что соответствует сроку гестации 22-23 недели.

Пример 2

Женщина Г-ва, 24 года. Самопроизвольные роды в 27 недель беременности. Осложненный акушерский анамнез. Фетоплацентарная недостаточность. Преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты (ПОНРП). Дородовое кровотечение 200 мл. Извлечение плода за ножку.

Мальчик с массой тела 900 г, рост - 23 см.

Патолого-анатомический диагноз

Основное заболевание: внутриутробная асфиксия плода, обусловленная рецидивирующей ПОНРП: острое венозное полнокровие внутренних органов, жидкая кровь в полостях сердца и просвете крупных сосудов. Субарахноидальные кровоизлияния в теменно-затылочной области (4×5 см) и на базальной поверхности правого полушария (5,5×3 см).

Фоновое заболевание: дисхронии развития (ретардантный тип) надпочечников, поджелудочной и щитовидной желез.

Сопутствующее заболевание: внутриутробная интерстициальная пневмония.

При гистологическом исследовании структуры легких соответствуют стадии терминального мешка. Сформированы 19 генераций бронхов, респираторные бронхиолы выстланы низким кубическим эпителием, заканчиваются терминальными мешочками. В бронхах присутствует реснитчатый эпителий, в просвете слизь. Межальвеолярные перегородки неравномерной толщины. Сосуды микроциркуляторного русла резко полнокровны, капилляры связаны с альвеолами. Положительная реакция на сурфактант. Механическое расширение интраацинарных структур. В просвете отдельных альвеол эпителиальные клетки.

При стандартном микроскопическом исследовании легкие плода соответствуют сроку гестации.

При проведении иммуногистохимического исследования индекс экспрессии ЭФР в бронхиальном эпителии правого легкого - 11,4 у.е., ИПФР-I - 12,8 у.е., в левом - ЭФР равен 10,8 у.е., ИПФР-I - 11,7 у.е. Согласно заявляемому способу отношение ЭФР/ИПФР-I в правом легком равно 0,89, в левом соответствует 0,92. Результаты в обоих легких менее 1,0 и свидетельствуют о морфофункциональной незрелости легких плода. Имеет место задержка внутриутробного развития легких плода.

Заключение: иммуногистохимическое исследование, как более точный, специфический и высокоинформативный метод исследования по сравнению с окраской гематоксилином и эозином, доказало функциональную незрелость легких, не способных обеспечить самостоятельное внеутробное дыхание плода. Имеет место задержка внутриутробного развития легких.

Пример 3

Женщина Р-ва, 20 лет. Вторые самопроизвольные роды в 40 недель гестации. Фетоплацентарная недостаточность. Кольпит. Надлобковое кесарево сечение в нижнем сегменте матки.

Живорожденный мальчик массой 2314 г, рост - 47 см, жил 23 часа 15 минут.

Патолого-анатомический диагноз

Основное заболевание: врожденный порок развития - врожденная правосторонняя диафрагмальная грыжа.

Осложнение основного заболевания: синдром дыхательных расстройств III. Геморрагический синдром: легочное кровотечение, кровоизлияние в почки, мозговой слой надпочечников. Общий отечный синдром: двусторонний гидроторакс, гидроперикард, асцит.

Сопутствующие заболевания: недоношенность I ст. Персистенция фетальных коммуникаций: открытое овальное окно, открытый боталлов проток.

При гистологическом исследовании легких: в правом легком каналикулярная стадия развития. Широкие межальвеолярные перегородки, капилляры в толще стенки. Недоразвитие фиброзно-хрящевых структур бронхиального дерева, сужение и облитерация ветвей легочной артерии с периваскулярным склерозом. Сформированы 14 генераций бронхов до уровня респираторных бронхиол, выстланных кубическим эпителием. В просвете воздухоносных путей слизистый секрет и десквамированный эпителий. Различим ацинус. Сосуды микроциркуляторного русла полнокровны. Различим альвеолярный эпителий I и II типов. Положительная реакция на сурфактант.

Левое легкое - стадия альвеолярного мешка. Межальвеолярные перегородки неравномерно утолщены, капилляры связаны с альвеолоцитами. Сформированы 17 генераций бронхов до уровня респираторных бронхиол 1-3 порядка, которые заканчиваются альвеолярными ходами. Различим альвеолярный эпителий I и II типов. Положительная реакция на сурфактант. Первичные ателектазы и дистелектазы. Альвеолы в основном воздушны, эмфизематозно расширены. Формируются гиалиновые мембраны. Полнокровие вен, капилляростаз.

При стандартном гистологическом исследовании левое легкое морфологически соответствует сроку гестации, правое легкое отстает в развитии от срока беременности.

При проведении иммуногистохимического исследования индекс экспрессии ЭФР в бронхиальном эпителии правого легкого составил 0,8 у.е., ИПФР-I - 122,0 у.е., в левом легком - 97,2 и 95,0 - соответственно. Согласно заявляемому способу отношение ЭФР/ИПФР-I для правого легкого равно 0,007 у.е., что существенно меньше 1,0, для левого легкого - 1,02 у.е., что свидетельствует о выраженной морфофункциональной незрелости правого легкого и относительной зрелости левого легкого с учетом гестационного срока новорожденного. У новорожденного задержка развития обоих легких.

Заключение: иммуногистохимическое исследование подтвердило и уточнило результаты, полученные при окраске гематоксилином и эозином, доказало функциональную незрелость правого легкого плода и выявило относительную зрелость левого легкого с учетом гестационного срока новорожденного. Имеет место задержка развития обоих легких, которые в комплексе не способны обеспечить самостоятельное внеутробное дыхание новорожденного, таким образом, доказана роль дыхательной недостаточности как ключевого звена танатогенеза.

Преимущества способа

1. Является объективным морфологическим методом специфической диагностики морфофункциональной зрелости легких плодов и новорожденных 22-40 недель гестации.

2. Оценивается состояние воздухоносных путей на местном уровне.

3. В диагностике используются специфические для эпителиальной ткани ростовые факторы, непосредственно контролирующие процессы эмбриогенеза легких.

4. Метод позволяет уточнить срок гестации и соответствие структуры легких гестационному сроку развития плода и новорожденного.

5. Повышает качество гистологического заключения, позволяет диагностировать задержку развития легких плода на тканевом уровне независимо от антропометрических параметров и срока гестации плода, объективизировать механизм гибели плодов и новорожденных, правильно сформулировать и оформить патолого-анатомический диагноз и эпикриз.

6. Заявленный способ высокоинформативен и прост в осуществлении оценки результатов.

7. Использование предлагаемого способа даст врачам других специальностей (неонатологам, реаниматологам) необходимую информацию для разработки и совершенствования подходов к выхаживанию, лечению и реабилитации детей, в том числе с экстремально низкой, очень низкой и низкой массой тела.