ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии

Классы МПК:A61K31/475  содержащие индольное кольцо, например йохимбин, резерпин, стрихнин, винбластин
A61P11/00 Лекарственные средства для лечения дыхательной системы
Автор(ы):, , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-03-22
публикация патента:

Изобретение относится к применению резерпина в качестве средства, обладающего противовоспалительным и антифибротическим действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии. Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств, применяемых для фармакологической коррекции воспаления и фиброза в легочной ткани, развивающегося при назначении цитостатиков. 1 ил., 6 табл., 1 пр.

Рисунки к патенту РФ 2479312

средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312

Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции воспаления и фиброза в легочной ткани, развивающихся при назначении цитостатиков.

Одним из серьезных осложнений цитостатической химиотерапии является интерстициальная пневмония, которая может приводить к идиопатическому фиброзу легких. Идиопатический фиброз легких, хроническое прогрессирующее заболевание неясной этиологии, характеризуется развитием воспаления, интерстициального фиброза и нарастающей дыхательной недостаточностью с неблагоприятным исходом [1]. Терапия фиброза легких направлена главным образом на профилактику быстрого прогрессирования заболевания, а не на его предупреждение. Для этого в настоящее время используют глюкокортикостероиды, часто в комбинации с цитостатическими агентами, антиоксиданты (N-ацетилцистеин), антифиброзные средства (D-пеницилламин, колхицин) [2].

Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала средств, обладающих противовоспалительным и антифибротическим действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии.

Поставленная задача достигается применением резерпина в качестве средства, обладающего противовоспалительным и антифибротическим действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии.

Новым в предлагаемом изобретении является использование курсового введения резерпина после введения цитостатика.

Нами впервые выявлена способность резерпина препятствовать развитию воспаления и фиброза в легочной ткани, развивающихся при использовании цитостатических препаратов.

Применение резерпина по новому назначению стало возможным благодаря выявленному авторами его новому свойству препятствовать развитию воспаления и фиброза в легочной ткани при введении цитостатиков.

Основным фармакологическим свойством резерпина является его симпатолитическое действие. Препарат, действуя на варикозные утолщения адренергических нервных окончаний, депонируется в мембранах везикул, нарушает вход дофамина в везикулы (и, следовательно, синтез норадреналина) и обратный захват норадреналина везикулами. Содержание норадреналина в везикулах снижается, уменьшается выделение норадреналина на нервные импульсы. Вследствие симпатолитического действия резерпин снижает стимулирующее влияние симпатической иннервации на сердце и кровеносные сосуды [3]. Действие резерпина распространяется и на ЦНС. Первоначально до появления современных нейролептиков препарат применяли для лечения психических заболеваний. В настоящее время резерпин используют в качестве антигипертензивного средства в ранних стадиях артериальных гипертензий, он также входит в состав ряда комбинированных лекарственных средств и применяется в качестве фармакологического агента при экспериментальных исследованиях [3]. На моделях невротических воздействий и миелосупрессий показана эффективная коррекция резерпином нарушений гемопоэза, в частности грануломоноцитарного и лимфоидного ростков кроветворения [4, 5].

Воспаление и фиброз легочного интерстиция, воздухоносных пространств, следующая за ними дезорганизация структурно-функциональных единиц паренхимы легких приводят к нарушению газообмена и развитию дыхательной недостаточности [6]. Считается, что развитие фиброза легких может быть обусловлено аномально активированными альвеолярными эпителиальными клетками, которые вырабатывают медиаторы, стимулирующие образование фибробластов и миофибробластов [7]. В очагах воспаления фибробласты и миофибробласты выделяют избыточное количество коллагена, способствующего, в свою очередь, рубцеванию и разрушению архитектуры легких. Предполагают, что адренергическая система может контролировать синтез коллагена в легких [8]. Кроме того, установлено, что развитие воспалительного процесса в легочной ткани при блеомицин-индуцированном фиброзе легких влияет на количество адренорецепторов в легких [9].

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и не очевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Изобретение может быть использовано для повышения устойчивости легочной ткани к воспалению и отложению фибротических масс при химиотерапии в эксперименте и клинике.

Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Предлагаемое действие резерпина изучено в экспериментах на 7-8 недельных мышах линии C57BL/6J в количестве 155 штук. Животные первой категории, инбредные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН (сертификат имеется). Использование животных в экспериментах обосновано и согласовано с Комиссией по контролю за содержанием и использованием лабораторных животных ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН.

Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенного к нему рисунка 1.

На рис.1 изображено легкое мыши, при окрашивании ткани легкого гематоксилином и эозином: а - интактной, б - получавшей блеомицин, в - получавшей резерпин на фоне моделирования фиброза; легкое мыши, при окрашивании ткани легкого по Ван-Гизону на соединительную ткань: г - интактной; д - получавшей блеомицин; е - получавшей резерпин на фоне моделирования фиброза.

Изобретение осуществляют следующим образом.

Фиброз легкого моделировали однократным интратрахеальным введением 80 мкг блеомицина («Блеомицетин», ОАО «Лэнсфарм», Россия) в 30 мкл физиологического раствора. Контрольным животным в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем физиологического раствора (контроль). Блеомицин относится к группе противоопухолевых антибиотиков. Его механизм действия до конца не выяснен, хотя известно, что он способен подавлять синтез нуклеиновых кислот (преимущественно ДНК) и белка. Препарат активен в отношении клеток, находящихся как в митотическом цикле, так и вне его, но проявляет большую активность в фазе G2. Основное токсическое действие цитостатик оказывает на легкие: вызывает пневмонию, фибротические изменения в паренхиме легких [3].

Резерпин ("Sigma", США) вводили внутрибрюшинно на 1-7, 9, 11, 13-е сутки после введения блеомицина в дозе 1 мг/кг внутрибрюшинно. Сроки введения и доза резерпина подобраны экспериментальным путем как наиболее оптимальные для моделирования истощения депо катехоламинов в нервной системе. Объем вводимого раствора составил 100 мкл. Непосредственно перед использованием препарат растворяли в стерильном физиологическом растворе. В качестве фона использовали интактных животных (интактный контроль).

На 7, 14, 21, 25 и 60 сут после введения блеомицина мышей умерщвляли передозировкой СО2, изучали морфологическую картину легких. Для гистологического исследования кусочки легких фиксировали в 10% формалине. По стандартной гистологической методике выполняли проводку материала, заливали объекты исследования в парафиновые блоки, с которых делали гистологические срезы толщиной 5 мкм. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону на соединительную ткань [10]. С помощью компьютерного графического анализа на стандартной площади гистологического среза измеряли площадь коллагеновых волокон в ткани легкого. Затем вычисляли долю этих показателей от стандартной площади среза.

На 7, 14, 21, 25 сут после введения блеомицина у животных определяли показатели периферической крови и костномозгового кроветворения стандартными гематологическими методами. Культуральными методами в костном мозге изучали содержание колоний гранулоцито-эритроидно-макрофагально-мегакариоцитарного типа (КОЕ-ГЭММ), состоящих из 4 различных типов гемопоэтических клеток (эритрокариоцитов, гранулоцитов, макрофагов и мегакариоцитов) и гранулоцитарных ассоциаций (КОЕ-Г) [11].

Математическую обработку результатов производили с применением стандартных методов вариационной статистики. Достоверность различий оценивали с использованием непараметрического U критерия Манна-Уитни.

Пример.

При окрашивании ткани легкого гематоксилином и эозином выявляется развитие отека межальвеолярных перегородок, инфильтрация интерстиция альвеол нейтрофилами, лимфоцитами, макрофагами и плазматическими клетками, что приводит к значительному нарушению гистоархитектоники легочной ткани мышей, получавших блеомицин (рис.1б). В стенках альвеол наблюдается венозное полнокровие и кровоизлияния. В просвете альвеол появляются плазматические клетки, нейтрофильные и эозинофильные лейкоциты, альвеолярные макрофаги, гистиоциты. В центральных отделах органа встречаются участки, где легочный рисунок отсутствует, часть альвеол эмфизематозно расширена.

При окрашивании легкого по Ван-Гизону на соединительную ткань в интерстиции альвеол мышей, получавших блеомицин, отмечается усиление образования коллагеновых волокон и прогрессирующее разрастание соединительной ткани (рис.1д). На 7 сут эксперимента соединительная ткань располагается в основном периваскулярно и перибронхиально, содержание соединительной ткани составляет 1,98±0,28% от площади ткани легкого (табл.1). На 14, 21 сут опыта наблюдается диффузное распространение фибротических масс. Картина пневмофиброза наиболее выражена на 25 сут наблюдения (рис.1д), когда содержание коллагеновых волокон составляет 5,45±0,74% от площади ткани легкого (табл.1).

Резерпин снижает интенсивность воспаления в блеомициновых легких мышей на протяжении всего периода наблюдения. Так, в условиях введения резерпина отек эпителия и гиперемия альвеолярных перегородок снижается, при этом сохраняется воздушность легочной ткани (рис.1в). Клеточная инфильтрация оказывается преимущественно перибронхиальной и периваскулярной. В отличие от мышей блеомицинового контроля у животных, получавших цитостатик и резерпин, отмечается незначительный выход воспалительных клеток в просвет альвеол. Одновременно с подавлением воспалительной реакции резерпин препятствует распространению фибротических масс в легких (рис.1е, табл.1).

Таблица 1
Содержание соединительной ткани (% от площади ткани) в легких мышей линии C57BL/6J в условиях интратрахеального введения блеомицина и курсового назначения резерпина на фоне моделирования фиброза легких (M±m)
Сроки исследования, сутки БлеомицинБлеомицин + резерпин
Интактный контроль 1,03±0,20
71,98±0,26 *1,33±0,06 *&
143,09±0,23 *2,94±0,27 *
21 3,02±0,44 * 2,75±0,42 *
25 5,45±0,74 * 3,85±0,58 *&
403,47±0,21 *2,58±0,30 *
60 2,77±0,25 * 1,59±0,39 &
Примечание: отмечена достоверность (Р<0,05) различия показателя: от интактного контроля - *, от блеомицинового контроля - &.

Изучение реакций системы крови при пневмофиброзе позволило выявить, что наряду с активацией воспалительного процесса в легочной ткани инсталляция блеомицина вызывает лейкоцитоз в периферической крови (3, 14 сут). Повышение общего количества лейкоцитов было связано с повышением количества лимфоцитов (3 сут) и нейтрофилов (3, 7, 14 сут) (табл.2). Увеличение содержания нейтрофильных гранулоцитов (3, 7, 21, 25 сут) и лимфоцитов (7, 14, 21 сут) регистрируется и в костном мозге (табл.4).

Таблица 2
Динамика содержания общего количества лейкоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов (×109 клеток/л) в периферической крови у мышей в условиях введения блеомицина средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312
Сроки исследов., сутки Общее количество лейкоцитов Нейтрофильные гранулоциты Лимфоциты
Интактный контроль 13,90±1,44 2,01±0,3510,54±1,25
3 17,40±1,22 * 3,07±0,37 * 13,11±1,08 *
714,75±1,34 3,20±0,57 * 10,60±0,99
14 16,58±1,37 * 3,04±0,40 * 12,3±1,11
2114,40±1,30 2,01±0,62 11,61±0,63
2515,20±0,53 2,97±0,26 11,35±0,30
Примечание: * достоверность различия от интактного контроля (Р<0,05).

Резерпин отменяет нейтрофильный лейкоцитоз (3, 7 сут) и лимфоцитоз (3, 7, 14, 21 сут) в периферической крови мышей с пневмофиброзом (табл.2, 3). Аналогичным образом резерпин действует на костномозговые клетки: препарат уменьшает количество нейтрофильных гранулоцитов (3, 21, 25 сут) и лимфоцитов (7, 14, 21 сут) до уровня интактного контроля (табл.4, 5).

Пневмофиброз сопровождается увеличением количества гранулоцито-эритроидно-макрофагально-мегакариоцитарных (3 сут) и гранулоцитарных (3, 7, 14, 21 сут) клеток-предшественников в костном мозге (табл.6). Под влиянием резерпина происходит уменьшение содержания КОЕ-ГЭММ (3, 7 сут) и КОЕ-Г (3, 7, 14 сут) по сравнению с животными, получавшими только блеомицин (табл.6).

Таблица 3
Влияние резерпина на динамику содержания общего количества лейкоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов (×109 клеток/л) в периферической крови у мышей в условиях введения блеомицина средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312
Сроки исследования, сутки Общее количество лейкоцитов Нейтрофильные гранулоциты Лимфоциты
Интактный контроль 13,9±1,442,01±0,35 10,54±1,25
3 12,40±1,22 & 2,30±0,29 & 9,03±0,98 &
710,20±0,41 &1,91±0,19 &7,16±0,38 &
14 12,70±0,80 2,76±0,40 8,66±0,79 &
213,38±1,13 *, &2,20±1,10 1,16±0,01 *, &
25 14,75±2,18 2,97±0,5810,96±1,73
Примечание: * достоверность различия от интактного контроля (Р<0,05), & достоверность различия у мышей в условиях введения блеомицина.

Таблица 4
Динамика содержания общего количества кариоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в костном мозге (×106 клеток/бедро) у мышей в условиях введения блеомицина средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312
Сроки исследования, сутки Общее количество кариоцитов Нейтрофильные гранулоциты Лимфоциты
НезрелыеЗрелые
Интактный контроль 10,10±0,85 0,65±0,13 4,29±0,342,55±0,3
3 14,39±0,55 * 1,36±0,19 * 7,06±0,14 * 2,78±0,23
712,48±1,46 1,02±0,15 * 5,21±0,68 3,47±0,37 *
1414,39±1,18 *0,77±0,07 5,31±0,48 4,24±0,53 *
2115,36±0,71 *1,26±0,11 *6,34±0,17 *4,34±0,34 *
25 12,29±0,84 1,11±0,13 * 5,82±0,49 2,71±0,22
Примечание: * достоверность различия от интактного контроля (Р<0,05).

Таблица 5
Влияние резерпина на динамику содержания общего количества кариоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в костном мозге (×10 6 клеток/бедро) у мышей в условиях введения блеомицина средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312
Сроки исследов., сутки Общее количество кариоцитов Нейтрофильные гранулоциты Лимфоциты
НезрелыеЗрелые
Интактные животные 10,1±0,85 0,65±0,134,29±0,34 2,55±0,3
3 11,61±0,78 & 1,09±0,125,34±0,46 &2,18±0,28
7 11,44±0,49 1,02±0,124,70±0,38 2,33±0,23 &
14 12,76±1,13 0,64±0,126,53±0,72 2,22±0,43 &
21 9,36±0,14 & 0,71±0,15 & 3,93±0,40 & 2,58±0,18 &
2510,44±1,20 0,68±0,16 & 4,41±0,98 2,45±0,86
Примечание: * достоверность различия от интактного контроля (Р<0,05), & достоверность различия у мышей в условиях введения блеомицина.

Таблица 6
Влияние резерпина на содержание КОЕ-ГЭММ и КОЕ-Г (×10 5 клеток) в костном мозге мышей в условиях введения блеомицина средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312
Сроки исследования, сутки КОЕ-ГЭММ КОЕ-Г
Физ. растворРезерпин Физ. раствор Резерпин
Интактный контроль 2,50±0,432,50±0,43 1,00±0,26 1,00±0,26
310,17±0,98 *4,00±0,43 *&9,33±1,94 *3,33±0,45 *&
72,00±0,37 0,67±0,11 *& 5,67±0,84 * 2,33±0,32 *&
14 0,83±0,18 * 0,17±0,07 *& 2,83±0,48 * 0,33±0,21 *
213,17±0,31 2,00±0,46 6,67±1,36 * 7,17±0,88 *
Примечание: * достоверность различия от интактного контроля (Р<0,05), & достоверность различия у мышей в условиях введения блеомицина.

Таким образом, применение резерпина на фоне введения блеомицина препятствует развитию воспалительной реакции в интерстиции легких и отложению фибротических масс. Противовоспалительный эффект связан с угнетением активности кроветворных клеток-предшественников гранулоцито-эритроидно-макрофагально-мегакариоцитарного и гранулоцитарного типа.

Литература

1. Илькович М.М., Новикова Л.Н., Сперанская А.А. Идиопатический фиброзирующий альвеолит // Участковый терапевт - 2009. - № 6. - С.1-3.

2. Андреева И.И. Фиброзирующие альвеолиты. В кн.: Саперов В.Н., Андреева И.И., Мусалимова Г.Г. (ред.) Практическая пульмонология. Чебоксары: Изд-во Чуваш. гос. ун-та; 2007. С.511-514.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: «Новая волна», Издатель Умеренков, 2008. - С.453-454, 1003-1004.

4. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Суслов Н.И. Роль нервной системы в регуляции кроветворения. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2004. - С.87-90.

5. Дыгай A.M., Хмелевская Е.С., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Андреева Т.В., Ермакова Н.Н. Особенности регуляции катехоламинами стромальных предшественников и стволовых кроветворных клеток при цитостатической миелосупрессии // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2011. - Т.152, № 12. - С.665-671.

6. Мостовая И.Д., Каредина B.C., Лучанинова В.Н. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки бронхиального дерева и альвеолярной ткани в динамике экспериментальной пневмонии // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2007. - № 1. - С.18-20.

7. King Т.Е., Pardo A. Selman М. Idiopathic pulmonary fibrosis // LANCET. - 2011. - V.378, № 9807. - P.1949-1961.

8. Berg R.A., Moss J., Baum B.J., Crystal R.G. Regulation of Collagen Production by the (средство, обладающее противовоспалительным и антифибротическим   действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии, патент № 2479312 -Adrenergic System // Journal of Clinical Investigation. - 1981. - V.67, May. - P.1457-1462.

9. Giri S.N., Sanford D.A., Jr., Robinson T.W., Tyler N.K. Impairment in coupled beta-adrenergic receptor and adenylate cyclase system during bleomycin-induced lung fibrosis in hamsters // Exp Lung Res. - 1987. - V.13, № 4. - P.401-416.

10. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - СПб: Медицина, 1969. - С.14, 36-38, 58, 98-100, 163, 170.

11. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск, 1992. - 264 с.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применение резерпина в качестве средства, обладающего противовоспалительным и антифибротическим действием в легочной ткани при цитостатическом воздействии.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2479312

patent-2479312.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K31/475  содержащие индольное кольцо, например йохимбин, резерпин, стрихнин, винбластин

Патенты РФ в классе A61K31/475:
лекарственный препарат винкамина в форме матричных таблеток для улучшения мозгового кровообращения и способ его изготовления -  патент 2525433 (10.08.2014)
фармацевтическая композиция, содержащая силденафил или алпростадил, миноксидил или эуфиллин, тестостерон или йохимбин и липосомы для местного применения -  патент 2482847 (27.05.2013)
стабильная фармацевтическая композиция водорастворимой соли винорелбина -  патент 2476208 (27.02.2013)
конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами -  патент 2470668 (27.12.2012)
стабильная фармацевтическая композиция, содержащая водорастворимую соль винфлунина -  патент 2462248 (27.09.2012)
способ лечения лимфомы ходжкина iia стадии -  патент 2457874 (10.08.2012)
безводные кристаллические соли винфлунина, способ их получения и их применение в качестве лекарства, и способ очистки винфлунина -  патент 2456291 (20.07.2012)
способ комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого ii и iii стадии -  патент 2455986 (20.07.2012)
лиофилизированная инъецируемая фармацевтическая композиция полусинтетических алкалоидов vinca и углевода, стабильная при комнатной температуре -  патент 2449791 (10.05.2012)
комбинации терапевтических средств, предназначенные для лечения рака -  патент 2447891 (20.04.2012)

Класс A61P11/00 Лекарственные средства для лечения дыхательной системы

Патенты РФ в классе A61P11/00:
лекарственное средство для лечения патологического синдрома и способ лечения острых и хронических заболеваний дыхательноый системы и синдрома кашля -  патент 2529783 (27.09.2014)
способ лечения внебольничной пневмонии у детей -  патент 2529782 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
6-замещенные изохинолины и изохинолиноны полезные в качестве ингибиторов rho-киназы -  патент 2528229 (10.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ лечения острых и хронических заболевания дыхательной системы и синдрома кашля -  патент 2528093 (10.09.2014)
2, 5-дизамещенные арилсульфонамидные антагонисты ссr3 -  патент 2527165 (27.08.2014)
способ предоперационной коррекции дыхательных расстройств у больных колоректальным раком -  патент 2526828 (27.08.2014)
способ профилактики и лечения бронхиальной астмы, осложняющих ее респираторных вирусных инфекций и других воспалительных заболеваний дыхательных путей -  патент 2526146 (20.08.2014)
тозилатная соль производного 5-пиразолил-2-пиридона, полезная в лечении copd -  патент 2526038 (20.08.2014)
способ профилактики массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней молочных поросят -  патент 2524664 (27.07.2014)


Наверх