ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

штамм bifidobacterium longum, используемый для получения бифидосодержащей продукции

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
A61K35/74 бактерии
A23L1/30 содержащие добавки
A61P1/14 способствующие пищеварению, например кислоты, энзимы, стимуляторы аппетита, средства против диспепсии, тонизирующие средства, ветрогонные средства
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2011-04-21
публикация патента:

Изобретение относится к биохимии. Штамм Bifidobacterium longum B-NH выделен от здорового ребенка грудного возраста, активно размножается в питательной среде с накоплением производственной биомассы в короткие, 12-18 ч, сроки культивирования с высокой концентрацией бифидобактерий, способен сквашивать молоко. Штамм Bifidobacterium longum B-NH обладает кислотообразующей активностью, антагонистической активностью в отношении к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Это позволяет использовать штамм Bifidobacterium longum B-NH в составе бифидосодержащей продукции - бактерийных препаратах, биологически активных добавках к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктах, гигиенических и косметических средствах, обеспечивающих нормализацию микробиоценозов организма человека, в т.ч. желудочно-кишечного и урогенитального трактов, кожных и слизистых покровов, и расширяет арсенал средств коррекции микрофлоры человеческого организма. Штамм Bifidobacterium longum B-NH депонирован в ВКПМ под номером ВКПМ Ас-1876. Изобретение позволяет повысить активность бифидосодержащей продукции. 2 табл., 5 пр.

В связи с неблагоприятными экологическими условиями, стрессами, длительной антибактериальной, лучевой и химиотерапией, дисбиозами, возникающими вследствие перенесенных заболеваний, увеличивается количество людей, страдающих нарушениями нормальной микрофлоры организма. Для лечения и профилактики этих нарушений все большее внимание уделяется как препаратам, обладающим пробиотическим действием, так и пищевым продуктам, содержащим бифидобактерии.

В кишечнике человека в основном встречаются 5 видов бифидобактерии - B. bifidum, B. longum, B. adolescentis, B. breve и B. infantis. Из них с наибольшей частотой в биоценозе обнаруживаются виды B. bifidum и B. longum. Вид B. adolescentis чаще встречается у взрослых людей, а виды B. breve и B. infantis - преимущественно у детей грудного возраста.

Известны зарубежные моно- и комплексные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B.bifidum, B.lonqum, B.adolescentis, B.breve (патент № 2336886, патент № 2411008, Франция; патент № 637297, Швейцария; патент № 2134179, патент № 2421066, ФРГ; патент № 05227946, патент № 0430642, Япония; патент № 4645667, США, патент № 6063935, Япония, патент № 5922375, США, патент № 5902743, США, патент № 6746672, США, патент № 6548057, США). У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов, биологически активных добавок, продуктов лечебно-диетического питания применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов B.bifidum 1,791,792; B.lonqum В379М, Я-2, Я-4; B. adolescentis МС - 42, Г 7513; В.breve 79-119; B.infantis 79-43 (авторское свидетельство № 343588, патент РФ № 1347221, патент РФ № 849779, патент РФ № 2108383, патент РФ № 2152993, патент РФ № 863639, патент РФ № 2120991, патент РФ № 2078814, патент РФ № 2111248).

Качество лечебных продуктов и препаратов во многом обусловлено свойствами штамма-продуцента - его специфической активностью и технологичностью. Большой ассортимент биологически активных и технологичных штаммов бифидобактерий делает возможной разработку новых моно- и комплексных продуктов лечебного питания и бакпрепаратов, способных обеспечивать высокую колонизационную резистентность кишечника человека, восстановить его нормальную микрофлору и снизить заболеваемость различными кишечными инфекциями.

Задачей настоящего изобретения является получение штамма микроорганизмов вида Bifidobacterium longum B-NH с высокой биологической активностью, устойчивостью к условиям внешней среды, обладающего стабилизирующим кислотообразованием во всем температурном диапазоне развития клеток, хорошо сквашивающего молоко и быстро размножающегося на искусственных питательных средах.

Штамм Bifidobacterium longum B-NH выделен от здорового ребенка грудного возраста, депонирован в ВКПМ, ФГУП ГосНИИгенетика, коллекционный номер Ас-1876.

Заявляемый штамм может быть использован при производстве кисломолочной продукции, ферментированных пищевых продуктов, например квас, пиво и т.п., неферментированных пищевых продуктов, например соки, напитки и т.п., заквасок для приготовления кисломолочной продукции и биологически активных добавок к пище. Также штамм Bifidobacterium longum B-NH может широко использоваться для производства гигиенических и косметических средств, например кремов, лосьонов, салфеток, мыла, присыпок, тампонов, питательных масок, гелей, женских прокладок, косметического молочка, различных пудр и т.д. Кроме того, штамм Bifidobacterium longum B-NH может быть использован при производстве бактериальных препаратов в виде свечей, пероральных и других средств.

Техническим результатом заявленного изобретения является получение штамма Bifidobacterium longum B-NH, который может быть использован в качестве биологически активного компонента в составе различных пробиотических средств коррекции микробиоценозов организма человека, обладающего биологически и технологически значимыми свойствами, такими как высокая кислотообразующая активность, способность наращивать микробную биомассу в искусственных питательных средах за короткие сроки культивирования, сквашивать молоко, антагонистически активного по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам.

Культурально-морфологические свойства штамма.

Клетки представляют собой гр+полиморфные палочки с утолщением на 1-2-х концах, встречаются с бифуркацией, в жидких питательных средах растут по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза. Отдельно выросшие колонии на Бифидум-среде имеют шарообразную форму колоний. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 12-18 ч культивирования.

Физико-биохимические свойства штамма.

Бесспоровый, неподвижный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 38±1°C. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L+молочной кислот, без образования газа, закисляя среду выращивания до рН 4,3-3,8. Ферментирует лактозу, мелецитозу, раффинозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, целлобиозу, галактозу, не ферментирует маннит, сорбит, инозит. Штамм сквашивает молоко к 12-16 ч культивирования.

Штамм Bifidobacterium longum B-NH обладает антагонистической активностью по отношению к патогенной и условно-патогенной микрофлоре (табл.1).

Таблица 1
Антагонистическая активность штамма B.longum B-NH
Штамм Зона задержки роста тест-культур мм/M±m
Sh. sonnciSh. flexneriЕ. coli S. aureus Pr. vulgaris
В. longum B-NH28±1,6 22±1,4 20±2,216±1,8 26±1,2

Штамм активно наращивает микробную массу при росте на гидролизатно-молочной среде (ГМ), Бифидум-среде (БФ), молоке (М), продуцируя кислоты (табл.2).

Таблица 2
Накопление микробной массы (КОЕ/мл lg 10) и активность кислотообразования (в градусах Тернера) штамма В. longum B-NH в динамике развития
штамм bifidobacterium longum, используемый для получения бифидосодержащей   продукции, патент № 2460777 ВРЕМЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА 12 ч 24 ч 48 ч
КОЕ °T КОЕ°T КОЕ °T
ГМ 8,2 989,2 1327,4 172
БФ 8,6 928,6 1167,0 142
М 8,0 869,0 1087,6 132

Штамм максимально накапливает микробную массу к 12-18 ч, достигая в 1 мл lg 8-9 микробных клеток, активно продуцирует кислоты.

Таким образом, предлагаемый штамм Bifidobacterium longum B-NH технологичен, поскольку размножается в различных питательных средах с накоплением производственной биомассы с высокой концентрацией бифидобактерий; обладает кислотообразующей активностью, а также антагонистической активностью в отношении к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам.

Кисломолочные, ферментированные, неферментированные пищевые продукты, гигиенические, косметические средства, биологически активные добавки и бактерийные препараты, содержащие штамм Bifidobacterium longum B-NH, могут найти широкое применение в пищевой, медицинской, биотехнологической и косметической отраслях промышленности. Способность штамма Bifidobacterium longum B-NH наращивать биомассу в питательной среде в короткие сроки культивирования, кислотообразующая, антагонистическая активность по отношению к патогенной и условно-патогенной микрофлоре, а также другие полезные для организма человека свойства, характерные для вида Bifidobacterium longum, делают возможным использование штамма в составе различных корригирующих средств лечебно-профилактического назначения.

Пример 1. Использование штамма Bifidobacterium longum B-NH в составе биологически активных добавок.

1 пассаж: лиофилизированный штамм Bifidobacterium longum B-NH в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и титруют методом десятикратных разведений до 10-9 . Инкубируют при температуре 38±1°C до образования видимого роста в последних разведениях.

2 пассаж: выросшую культуру из 10-7-9 разведений в объеме до 10% вносят в питательную среду и культивируют при температуре 38±1°C в течение 12-18 ч до образования густого роста с видимой зоной аэробиоза.

3 пассаж: полученную биомассу в количестве до 10% объема вносят в среду накопления и культивируют 12-18 ч при 38±1°C до получения биомассы с содержанием живых бифидобактерий не менее 108/мл.

В результате получают биологически активную добавку, которая представляет собой жидкий концентрат с высоким, не менее 108/мл, содержанием бифидобактерий.

Пример 2. Использование штамма Bifidobacterium longum B-NH для приготовления ферментированных и неферментированных пищевых продуктов.

1 пассаж: лиофилизированный штамм Bifidobacterium longum B-NH в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и титруют методом десятикратных разведений до 10-9. Инкубируют при 38±1°C до образования видимого роста в последних разведениях.

2 пассаж: выросшую культуру из 10-7-9 разведений в объеме до 10% вносят в питательную среду и культивируют при температуре 38±1°C в течение 12-18 ч до образования густого роста с хорошо видимой зоной аэробиоза.

3 пассаж: полученную биомассу в количестве до 10% объема вносят в среду накопления и культивируют 12-18 ч при 38±1°С до получения биомассы с содержанием живых бифидобактерий не менее 108/мл.

Получение ферментированного или неферментированного пищевого продукта: выросшую биомассу вносят в пищевое сырье (молоко, соки, пиво, квас и пр.) в количестве до 10% от объема, перемешивают и разливают в емкости. В результате получают продукт с концентрацией живых бифидобактерий не менее 106/мл.

Пример 3. Использование штамма Bifidobacterium longum B-NH для приготовления кисломолочного продукта.

1 пассаж: лиофилизированный штамм вносят в среду культивирования и титруют методом десятикратных разведений до 10-9. Инкубируют при 38±1°C до образования видимого роста в последних разведениях. Или сухую лиофилизированную биомассу бифидобактерий вносят в количестве 1-2 дозы в пробирку с 30 мл питательной среды. Культивируют при температуре 38±1°C до получения биомассы с содержанием живых бифидобактерий не менее 107/мл.

2 пассаж: выросшую культуру штамма Bifidobacterium longum B-NH из последних разведений или из пробирки с выросшей биомассой вносят в среду накопления объемом до 10% и культивируют при температуре 38±1°C до получения биомассы с содержанием бифидобактерии не менее 108/мл.

3 пассаж: полученную биомассу штамма Bifidobacterium longum B-NH в объеме до 10% вносят в стерильное молоко, культивируют до образования сгустка (кисломолочный продукт). Количество пассажей № 2 может быть увеличено в зависимости от объема производства.

Пример 4. Использование штамма Bifidobacterium longum B-NH для получения бактерийных препаратов.

Культуру штамма 1-го или 2-го пассажа (пример 1) вносят в питательную среду, культивируют при температуре 38±1°C до получения биомассы бифидобактерий с содержанием живых клеток не менее 10 8 в 1 мл. К полученной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахарозо-желатиновая среда, обезжиренное молоко). Полученную суспензию разливают в ампулы, флаконы и другие емкости, замораживают при температуре минус 35-45°C и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит не менее 107 живых клеток бифидобактерий. Данное содержание бифидобактерий согласуется с научно-технической документацией на аналогичный бифидосодержащий препарат "Бифидумбактерин сухой" и является достаточным для использования полученного средства в качестве препарата - эубиотика.

Пример 5. Использование штамма Bifidobacterium longum B-NH для получения гигиенических и косметических средств.

Культуру штамма 1-го или 2-го пассажа (пример 1) вносят в питательную среду, культивируют при температуре 38±1°C до получения биомассы бифидобактерий с содержанием живых клеток не менее 10 8 в 1 мл. Полученную биомассу бифидобактерий штамма Bifidobacterium longum B-NH вводят в количестве не более 1% в состав мыла или крема.

Клиническая эффективность Bifidobacterium longum изучалась на базе Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова в составе жидкой биологически активной добавки (БАД) - «Нормофлорин». Под наблюдением находились 20 взрослых человек с воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК) - язвенный колит, болезнь Крона, хронический колит.

Больные, наряду с базисной терапией, получали «Нормофлорин» по 1 столовой ложке перед едой в течение 30 дней. В результате у больных отмечено снижение отрицательных проявлений диспепсического синдрома (тошнота, отрыжка, снижение аппетита), абдоминального синдрома (вздутие живота, метеоризм, частота и характер стула). Нежелательные явления не наблюдались.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Штамм Bifidobacterium longum, ВКПМ Ac-1876, используемый для получения бифидосодержащей продукции.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2460777

patent-2460777.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)

Класс A61K35/74 бактерии

Патенты РФ в классе A61K35/74:
способ лечения больных с онкологическими заболеваниями и/или иммунодепрессиями -  патент 2528877 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
продукт для хранения лиофилизированных молочно-кислых бактерий, смешанных с порошком для раствора для пероральной регидратации -  патент 2527515 (10.09.2014)
способ предотвращения развития кишечной инфекции бактериальной природы -  патент 2526806 (27.08.2014)
оздоровительная композиция для введения в форме капель и способ ее получения -  патент 2524656 (27.07.2014)
способ комплексного лечения хронического эндометрита у коров -  патент 2524623 (27.07.2014)
штамм бактерий lactobacillus acidophilus используемый для приготовления кисломолочного продукта -  патент 2524117 (27.07.2014)
применение штамма вifidobacterium для получения композиции, предназначенной для профилактики и/или лечения проявлений аллергического типа -  патент 2522282 (10.07.2014)
профилактика и лечение аллергической диареи -  патент 2522240 (10.07.2014)

Класс A23L1/30 содержащие добавки

Патенты РФ в классе A23L1/30:
улучшение памяти у пациентов с оценкой 24-26 баллов по краткой шкале оценки психического статуса -  патент 2529815 (27.09.2014)
синергетическая смесь бета-галактоолигосахаридов с бета-1,3 и бета-1,4/1,6 связями -  патент 2529160 (27.09.2014)
нуклеиноваяя кислота, обладающая активностью гена фосфатазы фосфатидной кислоты (варианты), белок, рекомбинантный вектор, трансформант и способ получения композиции жирной кислоты -  патент 2528875 (20.09.2014)
биологически активная добавка к пище -  патент 2528438 (20.09.2014)
жировая эмульсия для искусственного питания тяжелобольных, нуждающихся в интенсивной терапии -  патент 2528108 (10.09.2014)
фармацевтические и/или пищевые композиции на основе короткоцепочечных жирных кислот -  патент 2528106 (10.09.2014)
продукт для хранения лиофилизированных молочно-кислых бактерий, смешанных с порошком для раствора для пероральной регидратации -  патент 2527515 (10.09.2014)
биологически активная добавка к пище для профилактики заболеваний остеопорозом -  патент 2527042 (27.08.2014)
пробиотический сокосодержащий напиток -  патент 2525927 (20.08.2014)
биологическая активная добавка к пище "апиферрум" -  патент 2525763 (20.08.2014)

Класс A61P1/14 способствующие пищеварению, например кислоты, энзимы, стимуляторы аппетита, средства против диспепсии, тонизирующие средства, ветрогонные средства

Патенты РФ в классе A61P1/14:
способ лечения больных с синдромом диспепсии в сочетании с избыточной массой тела -  патент 2528641 (20.09.2014)
препарат для стимуляции обменных процессов, профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний телят в ранний постнатальный период -  патент 2521369 (27.06.2014)
способ лечения недоношенных новорожденных детей с низкой массой тела -  патент 2514346 (27.04.2014)
кристаллические формы соединения 3-карбоксипропил-аминотетралина -  патент 2512390 (10.04.2014)
препарат для профилактики диарей у новорожденных телят -  патент 2504386 (20.01.2014)
способ уменьшения урчания в животе путем введения бактерий рода bifidobacterium -  патент 2492869 (20.09.2013)
композиция на основе пробиотических бактерий совместно с пребиотиком и ее применение в предупреждении и/или лечении респираторных патологий и/или инфекций и для улучшения функций кишечника -  патент 2491081 (27.08.2013)
способ лечения вторичной лактазной недостаточности -  патент 2477633 (20.03.2013)
применение варианта сплайсинга грелина для лечения кахексии, и/или анорексии, и/или анорексии-кахексии, и/или нарушения питания, и/или липодистрофии, и/или мышечного истощения, и/или стимуляции аппетита -  патент 2470940 (27.12.2012)
пробиотики в пред- и/или послеоперационный период -  патент 2470652 (27.12.2012)


Наверх