способ лечения пародонтита

Формула изобретения

Способ восстановления кости и ткани пародонта, включающий удаление патологически измененных структур и введение в дефектную полость мезенхимальных стволовых клеток, суспендированных в носителе, отличающийся тем, что в качестве стволовых клеток используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты эмбриона, полученные после нормальных родов, при этом осуществляют введение клеток путем инъекции 1-2 мл плазмы крови пациента, содержащего 5-10·10⁶ клеток.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может применяться в хирургической стоматологии при лечении заболеваний пародонтита.

Заболевание пародонта занимает по распространению среди населения 4-е место в перечне неинфекционных заболеваний, причем возраст заболевших не играет роли: к 30 годам болезнь регистрируют у 50% населения.

В процессе развития пародонтита задействованы экзогенные и эндогенные факторы, а также такие, как состав и свойства слюны, микрофлора, образование зубного камня и т.д. Иммунные и гормональные факторы являются основными в запуске механизма развития тяжелых форм воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта. Пародонт характеризуется тем, что у больных поражены все структуры пародонта с резорбцией костной ткани альвеолярного отростка, в результате чего происходит гибель удерживающего аппарата зубов и потеря зубов. Осуществляя лечение пародонтита, необходимо ускорить процессы неоангио- и остеогенеза и восстановить все ткани, пострадавшие в результате болезни.

Известен способ восстановления ткани пародонта в месте дефекта с помощью остеопластического материала «Церасорб», с обогащенной тромбоцитарной плазмой (Пародонталогия, 2004, № 3(32). Недостатком способа является то, что остеокондуктивный материал насыщают тромбоцитарной плазмой. Из-за наличия только элементов крови процесс регенерации тканей пародонта протекает медленно.

Известен метод лечения пародонта с использованием коллагеновой губки «Коллахит» и постнатальных фибробластов человека непосредственно в области пародонтального дефекта (Пародонталогия, 2004, № 3(32)), используемый материал - коллагено-хитозановый гель. Недостатком способа является применение постнатальных фибробластов и использование многокомпонентной системы в геле, а также срок изготовления геля от 1 до 3 суток.

Современным и активно разрабатываемым способом лечения дефектов пародонта является лечение с использованием стволовых клеток, в частности мезенхимальных стволовых клеток.

Известен способ лечения воспалительных заболеваний пародонта с использованием композиции на основе клеточных культур, содержащей культуру фибробластов, среду роста, остеопластический материал (пат. РФ № 2210352). В качестве культуры фибробластов она содержит штамм диплоидных клеток легкого эмбриона человека ЛЭЧ-4(81), в качестве среды роста среду ИГЛА-МЕМ с добавлением 10%-ной сыворотки крови плодов крупного рогатого скота, в качестве остеопластического материала Гапкол или Коллапан. При использовании известного способа возможна иммунная реакция у пациента. И самое главное клинические и гистологические результаты после таких вмешательств отличаются крайней неоднозначностью: формируется нефункциональный рубец, отмечается разрастание краевого эпителия и отсутствие нормального зубодесневого прикрепления в зоне заживления тканей пародонта, в замещенном участке челюстной кости отмечается избыточное обызвествление с нарушением скелетных функций ткани, нередко наблюдаются реакции на инородное тело вплоть до пирогенных эффектов. Не исключен риск передачи человеку инфекций животных.

Известен способ лечения с помощью мезенхимальных стволовых клеток (МСК) (пат. РФ № 2265445). По этому способу суспензию МСК или хондропрогениторных клеток или их комбинации вводят интралигаментарно с латеральной и медиальной сторон каждого пораженного парадонтозом зуба и/или поднадкостнично в пародонтальные участки верхней и нижней челюстей. Мезенхимальные стволовые клетки по этому способу получают из фетального донорского материала или из собственных тканей реципиента (например, из костного мозга, жировой ткани). В качестве клеточного материала используют чужеродные хондропрогениторные клетки, иногда в сочетании также с чужеродными МСК. Внесенные МСК медленно и не полностью приобретают функциональные свойства остеоцитов. Срок лечения 6 месяцев, причем на ортопантограмме заметно увеличение оптической плотности кости альвеолярных отростков по сравнению с «до лечения» на 49±3%, p=0,05. По сравнению с известным способом аутологичные МСК имеют преимущества, т.к. исключают иммунные реакции, гематоэнцефалические реакции. В лечении комбинируют как клеточный состав, так и вводимые объемы суспензии клеток.

Наиболее близким способом лечения парадонтита является способ восстановления кости альвеолярного гребня челюсти и тканей пародонта с редуцированным потенциалом, включающий удаление патологически измененных структур, заполнение дефекта кровяным сгустком из кости челюсти и/или периодонтальной связки. При этом в область тканевого дефекта трансплантируют аутологичную васкулярно-клеточную фракцию, содержащую мезенхимные стволовые клетки - фибробластоподобные клетки, выделенные из жировой ткани и очищенные от зрелых адипоцитов, без предварительного культивирования, причем при рецессии тканей пародонта оголенные поверхности корней зубов предварительно покрывают небным подэпителиальным соединительнотканным лоскутом (пат. РФ 2320285). При использовании данного способа не удалось устранить риск развития неопластических процессов и сократить сроки лечения.

Задача, которую решает предлагаемое изобретение, заключается в повышении эффективности восстановления выраженного пародонтального дефекта, связанного с заболеваниями пародонта, сокращение сроков лечения.

Сущностью изобретения является использование способа восстановления кости и ткани пародонта, включающего удаление патологически измененных структур и введение в дефектную полость мезенхимальных стволовых клеток, суспендированных в носителе. В качестве стволовых клеток используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты эмбриона, полученные после нормальных родов, при этом осуществляют введение клеток путем инъекции 1-2 мл плазмы крови пациента, содержащего 5-10·10 ⁶ клеток.

Пример 1. Получение мезенхимальных стволовых клеток

Мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты были получены в соответствии со стандартной методикой следующим образом. Образцы пуповины или плаценты собирали после нормальных родов на 39-40 неделе гестации. Вены пуповины и плаценты канюлировали и промывали сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы I типа, приготовленым на среде DMEM без сыворотки, и инкубировали при 37°C 30 мин. Затем сосуды вновь промывали раствором Хенкса, ткань подвергали непродолжительному мягкому механическому воздействию и собирали отделившиеся клетки. Полученные клетки осаждали центрифугированием. Осадок ресуспендировали в среде DMEM, содержащей 10% сыворотки, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов ( -FGF), переносили в культуральные чашки и культивировали до формирования монослоя, сменяя среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевали в соотношении 1:3. В случае использования культуры клеток при клинической апробации метода после последнего пересева при культивировании вместо фетальной сыворотки теленка использовали сыворотку, полученную из собственной крови пациента.

Пример 2. Лабораторные испытания на животных.

Способ апробирован в эксперименте на 16 крысах, в клинике на 7 больных. Крыс-самцов весом 300-350 г подвергали легкому наркозу. Периодонтит вызывали наложением давящей лигатуры из нейлоновой нити вокруг шейки первого нижнего правого моляра. 16 крысам через 7 дней после наложения лигатуры в десну вводили 500 тысяч клеток в стерильном физиологическом р-ре. 8 контрольным животным в десну инъецировали физиологический р-р. Еще через 2 недели всех животных забивали и подвергали исследованию периодонт и альвеолярную кость в области 1 нижнего левого моляра. У контрольных животных наблюдали выраженное воспаление периодонта и признаки деструкции альвеолярной кости, а также повышение активности металлопротеиназ. У 14 экспериментальных животных эти явления отсутствовали полностью, а у двух были выражены слабо.

Эксперимент на животных продемонстрировал существенное ускорение процесса первичного заживления раны при использовании мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты эмбриона, полученных после нормальных родов.

Пример 3. Клинические испытания.

Пациент с жалобами на подвижность зубов. По данным осмотра 2-3 степень, кровотечение десен. На основании клинико-ренгенологического обследования поставлен диагноз - пародонтит тяжелой формы с атрофией более 1 альвеолярного отростка. Пациенту проведено: профессиональная гигиена полости рта, зубы верхней и нижней челюсти шинированы, избирательно проведен глубокий кюретаж патологических карманов. После проведения вышеуказанной терапии на основании добровольного информированного согласия пациента проведена заместительная клеточная терапия в соответствии с заявленным способом лечения с использованием для инъекции крови пациента.

При использовании заявленного способа в клинических испытаниях также были получены положительные результаты. Введение клеток осуществляли путем инъекции 1-2 мл плазмы крови пациента, содержащего 5-10·10 ⁶ клеток. У всех 7 больных в сроки до 5 дней уменьшились пародонтальные карманы, исчез запах изо рта, прекратилось кровотечение десен, слизистая оболочка приобрела бледно-розовый цвет, т.е. визуализировалась положительная динамика заболевания. При ренгенологическом контроле через 6 месяцев определялся прирост костной ткани, уменьшение глубины и ширины пародонтальных карманов, что свидетельствует о реминерализации костной ткани. Подвижность зубов исчезла.

Использование в качестве стволовых клеток мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты эмбриона, полученных после нормальных родов, позволило повысить эффективность лечения, увеличить воспроизводимость результатов и избежать нежелательных эффектов.