соединения и композиции в качестве ингибиторов протеазы, активирующей каналы

Формула изобретения

1. Соединение формулы (1):



или его фармацевтически приемлемые соли и стереоизомеры, где

-J-(R¹⁰)_р вместе представляет собой или ;

Z представляет собой О или S;

Z¹ , Z², Z³ или Z⁴ независимо представляют собой СН или С, когда присоединены к R¹⁰;

Z⁵, Z⁶ или Z⁷ независимо представляют собой N, О, S, СН или С, когда присоединены к R¹⁰;

R¹ представляет собой -(CR₂)₁ -NR₂, -(CR₂)₁-NRC(=NR)-NR ₂;

W-R² представляет собой заместитель в любом положении кольца А;

W представляет собой -O(CR ₂)_k-;

R² представляет собой необязательно замещенный галогеном фенил, С_3-7-циклоалкил, или W-R² вместе образуют С_1-6 алкил или фенил;

R³ представляет собой NR⁷ R⁸ или R⁶;

R⁴ и R ⁵ независимо представляют собой Н или ОН;

R ⁷ и R⁸ независимо представляют собой Н или R ⁷ и R⁸ вместе с атомом N могут образовывать пиперидинил;

Х представляет собой C_5-7 циклоалкил, фенил;

R⁶ представляет собой C_5-7 -циклоалкил, пиридил, тиазолил, пиперидинил, фенил, каждый из которых необязательно замещен галогеном, С_1-6алкилом или группой -L-(CH₂)₁-R¹³;

L представляет собой связь, О, SO₂, NHCO, NHSO ₂ или SO₂NH;

R¹⁰ представляет собой С_1-6алкил или -(CR₂)₁-R ¹¹;

R¹¹ представляет собой фенил или C_5-7 циклоалкил;

R¹³ представляет собой необязательно галогенированный С_1-6алкил, морфолинил, фенил, необязательно замещенный галогеном, или пиперидинил;

каждый R представляет собой Н;

i обозначает 0-1;

k и l независимо обозначают 0-1;

m и n независимо обозначают 1-6; и

р обозначает 0-1.

2. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой -(CH₂ )₁-NH₂ или -(СН₂)₁ -NHC(=NH)-NH₂, где каждый 1 обозначает 0-1.

3. Соединение по п.1, где W представляет собой -O(CR₂ )_k- и k обозначает 1.

4. Соединение по п.1, где R, R⁴, R⁵, R⁷ и R⁸ каждый представляет собой Н.

5. Соединение по п.1, где Х представляет собой циклогексил или фенил.

6. Соединение по п.1, где J представляет собой бензотиазолил или бензоксазолил.

7. Соединение по п.1, где J представляет собой тиазолил или оксадиазолил.

8. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из следующих соединений:

1
2
3
4
5

7
8
9
10
11

12
13
14
15
16

17
18
19
20
21

22
23
24
25
26

27
28
29
30
31

32
33
34
35
36

37
38
39
40
41

42
43
44
45
46

47
48
49
50

51
52
53

или их фармацевтически приемлемых солей и стереоизомеров.

9. Соединение, обладающее формулой



или его фармацевтически приемлемые соли, или стереоизомеры.

10. Фармацевтическая композиция для ингибирования простазина или трипсина, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 9 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

11. Способ ингибирования простазина или трипсина, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или 9, или его фармацевтически приемлемых солей, или содержащих их фармацевтических композиций.

12. Применение соединения по п.1 или 9, или его фармацевтически приемлемых солей, или содержащих их фармацевтических композиций для ингибирования простазина или трипсина.

13. Применение соединения по п.1 или 9, или его фармацевтически приемлемых солей, или содержащих их фармацевтических композиций для изготовления лекарственного средства для ингибирования простазина или трипсина.

Описание изобретения к патенту

Ссылки на заявки-аналоги

Настоящая заявка является продолжением заявки US 60/808014, поданной 23.05.2006; и US 60/860622, поданной 22.11.2006. Каждая из этих заявок приведена здесь полностью в качестве ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение в целом относится к ингибиторам протеазы, активирующей каналы (САР).

Уровень техники

Простазин является трипсиноподобной сериновой протеазой, которая присутствует в различных тканях млекопитающего. Она является мембранозакрепленной протеазой, которая экспрессируется на внешней клеточной мембране клеток, но также может секретироваться в жидкостях организма, таких как сперма, моча и жидкость поверхности дыхательных путей. Простазин (PRSS8) вместе с протеазами, такими как матрипатаза, САР2, САР3, трипсин, PRSS22, TMPRSS11, катепсин А и нейтрофилэластаза, могут стимулировать активность амилоридчувствительного эпителиального натриевого канала (ENaC). Ингибирование этих ферментов может вызывать изменения в эпителиальном ионном транспорте и, следовательно, гомеостазе жидкости через эпителиальные мембраны. Например, ингибирование САР в почках, как полагают, промотирует диурез, тогда как ингибирование САР в легочных путях промотирует выведение слизи и мокроты из легких. Ингибирование САР в почках, следовательно, может использоваться терапевтически для лечения гипертензии. Ингибирование САР в легочных путях предотвращает застой секреции дыхательных путей, который делает пациентов незащищенными по отношению ко вторичным бактериальным инфекциям.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, фармацевтическим композициям и способам применения таких соединений для моделирования протеаз, активирующих каналы (САР). Например, соединения и композиции по изобретению могут использоваться для модулирования простазина, PRSS22, TMPRSS11 (например, TMPRSS11B, TMPRSS11E), TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4 (MTSP-2), матриптазы (MTSP-1), САР2, САРЗ, трипсина, катепсина А и нейтрофилэластазы.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1):

и их фармацевтически приемлемым солям, гидратам, сольватам и стереоизомерам, где

J представляет собой 5-12-членное моноциклическое или конденсированное карбоциклическое кольцо, арил, гетероарил или гетероциклическое кольцо, содержащее N, О и/или S;

R¹ представляет собой -(CR₂)_1-NR₂, -(CR₂ )₁-NRC(=NR)-NR₂, -(CR₂) ₁-C(=NR)-NR₂ или 5-7-членное азотсодержащее неароматическое гетероциклическое кольцо;

W-R ² представляет собой заместитель в любом положении кольца А;

W представляет собой -O(CR₂) _k-, -S(CR₂)_k-, -S(O)(CR₂ )_k-, -SO₂(CR₂)_k- или -OC(O)(CR₂)_k-;

R ² представляет собой C₁-₆алкил, С _2-6алкенил, С_2-6алкинил, R⁶, -CR ⁹=CR⁹-R⁶ или где кольцо Е представляет собой необязательно замещенное 5-7-членное моноциклическое или конденсированное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо; или W-R² вместе образуют C_1-6алкил, 5-7-членный арил или -OC(O)NR⁷ R⁸;

R³ представляет собой NR⁷R⁸ или R⁶;

R⁴ и R⁵ независимо представляют собой Н, С_1-6алкил, ОН или С_1-6алкокси;

R⁷ и R⁸ независимо представляют собой Н, C_1-6алкил, С_2-6алкенил, С_2-6 алкинил

или -(CR₂)₁-R ⁶; или R⁷ R⁸ вместе с атомом N могут образовывать необязательно замещенное 5-7-членное моноциклическое или конденсированное гетероциклическое кольцо;

R⁹ представляет собой Н или С_1-6алкил;

R¹⁰ представляет собой галоген, С _1-6алкил, С_1-6алкокси, OR¹¹ или -(CR ₂)₁-R¹¹;

R⁶ , R¹¹ и Х независимо представляют собой необязательно замещенное 5-7-членное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил; или R¹¹ представляет собой Н или C_1-6алкил;

каждый R представляет собой Н или С_1-6алкил, С_2-6алкенил или С_2-6алкинил, где атом углерода необязательно может быть замещенным или замещен NR, О или S;

i обозначает 0-1;

k и l независимо обозначают 0-6;

m и n независимо обозначают 1-6; и

р обозначает 0-3.

В описанной выше формуле (1) R¹ представляет собой -(CH₂)₁-NH₂ , -(CH₂)₁-NHC(=NH)-NH₂ или -(CH ₂)_1-C(=NH)-NH₂NH₂, где каждый 1 обозначает 0-1; или R¹ представляет собой пиперидинил. В конкретных примерах R¹ представляет собой -(CH₂)_1-NH₂, -(CH ₂)_1-NHC(=NH)-NH₂ или -(CH₂ )_1-C(=NH)-NH₂NH₂.

В описанной выше формуле (1) W представляет собой -O(CR₂ )k-, -S(CR₂)_k-, -S(O)(CR₂) _k-, -SO₂(CR₂)_k- или -OC(O)(CR ₂)_k-; и k обозначает 1. В конкретных примерах W представляет собой -O(CR₂)k-.

В некоторых вариантах осуществления R² представляет собой необязательно замещенный фенил, С_5-7циклоалкил, тиенил, фуранил, пиперидинил, метиленциклогексил,

, или . В конкретных примерах R² представляет собой фенил или С_5-7циклоалкил.

В других вариантах осуществления R³ представляет собой необязательно замещенный фенил, пиридил, тиазолил, пиперидинил или NR⁷ R⁸; где R⁷ и R⁸ оба представляют собой Н, или R⁷ и R⁸ вместе с атомом N образуют необязательно замещенный пиперидинил. В некоторых примерах R, R⁴, R⁵, R⁷ и R⁸ каждый представляет собой Н.

В других вариантах осуществления R⁶ представляет собой необязательно замещенный фенил, С_3-7циклоалкил, пиридил, тиазолил, пиперидинил, циклогексанол, имидазолил, тиенил, фуранил, , или . В конкретных примерах R⁶ представляет собой необязательно замещенный фенил, С_3-7циклоалкил, пиридил, тиазолил или пиперидинил.

В других вариантах осуществления X представляет собой циклогексил, фенил или пиперидинил, каждый из которых может быть необязательно замещен C_1-6алкилом, С_1-6алкокси, галогеном или их комбинацией. В некоторых примерах X представляет собой циклогексил или фенил.

В приведенной выше формуле (1) -J-(R¹⁰)_p вместе может представлять собой:

или

Z представляет собой О или S;

Z¹, Z², Z³ или Z⁴ независимо представляют собой N, СН или С, когда присоединены к R¹⁰;

Z⁵, Z⁶ или Z⁷ независимо представляют собой N, О, S, СН или С, когда

присоединены к R¹⁰;

R¹⁰ представляет собой C_1-6 алкил или -(CR₂)₁-R¹¹;

R¹¹ представляет собой фенил или С_5-7циклоалкил; и

р обозначает 0-1.

В некоторых примерах J представляет собой бензотиазолил, бензоксазолил, тиазолил или оксадиазолил.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (2А) или (2В):

или

где Z представляет собой О или S;

R¹ представляет собой NH₂, -NHC(=NH)-NH₂ или -C(=NH)-NH₂;

W представляет собой -O(СН₂)k- или -S(O)(CH₂ )k-;

R² представляет собой необязательно замещенный фенил, или W-R² вместе образуют С_1-6 алкил или необязательно замещенный фенил;

R, R ⁴ и R⁵ независимо представляют собой Н;

Y представляет собой 5-7-членный арил, гетероарил или гетероциклическое кольцо, содержащее N, О или S;

R¹² представляет собой галоген, C_1-6алкил или -L-(CH ₂)₁-R¹³;

L представляет собой связь О, SO₂, NHCO, NHSO₂ или SO ₂NH;

R¹³ представляет собой необязательно галогенированный С_1-6алкил или необязательно замещенный С_3-7циклоалкил или 5-7-членный арил, гетероарил или гетероциклическое кольцо;

i обозначает 0;

k обозначает 1;

l обозначает 0-1;

m и n независимо обозначают 1-4; и

q обозначает 0-3.

В приведенной выше формуле (2А) или (2В) Y может представлять собой

фенил, пиридил, тиазолил или пиперидинил. В некоторых примерах R¹² представляет собой -L-(CH₂)₁-R¹³; и R ¹³ представляет собой необязательно галогенированный С _1-6алкил, С_3-7циклоалкил, морфолинил, фенил или пиперидинил.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы (1), (2А) или (2В), и фармацевтически приемлемый эксципиент.

Настоящее изобретение также относится к способам модулирования протеазы, активирующей каналы, включающим введение в систему или субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формул (1), (2А) или (2В) или его фармацевтически приемлемых солей, или содержащих его фармацевтических композиций, модулируя указанную протеазу, активирующую каналы.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам облегчения состояния, опосредованного протеазой, активирующей каналы, включающим введение в систему или субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул (1), (2А) или (2В) или его фармацевтически приемлемых солей, или содержащих его фармацевтических композиций, и необязательно в комбинации со вторым терапевтическим агентом, излечивая указанное состояние. Примеры второго терапевтического агента, который может использоваться с соединениями по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, противовоспалительное средство, бронхорасширяющее средство, антигистамин, противокашлевое средство, антибиотик или ДНКазу.

Примеры протеазы, активирующей каналы, которая может модулироваться соединениями по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, простазин, PRSS22, TMPRSS11 (например, TMPRSS1 1B, TMPRSS11E), TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4 (MTSP-2), матриптазу (MTSP-1), САР2, САР3, трипсин, катепсин А или нейтрофилэластазу. В конкретных примерах настоящее изобретение относится к способам модулирования простазина или к способам лечения состояния, опосредованного простазином.

В описанных выше способах для применения соединений по изобретению соединение формул (1), (2А) или (2В) может вводиться в систему, включающую клетки или ткани. Например, соединение формул (1), (2А) или (2В) может контактировать с бронхиальными эпителиальными клетками, которыми могут быть клетки человека. В других вариантах осуществления соединение формул (1), (2А) или (2В) может вводиться человеку или животному субъекту.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам облегчения состояния, связанного с движением жидкости через эпителий, переносящий ионы, или накоплением слизи и мокроты в респираторных тканях, или их комбинации. Например, состояние может представлять собой циститный фиброз, первичную цилиарную дискинезию, легочную карциному, хронический бронхит, хроническое обструктивное легочное заболевание, астму или инфекцию дыхательных путей.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению соединения формул (1), (2А) или (2В) или его фармацевтически приемлемых солей или содержащих его фармацевтических композиций, и необязательно в комбинации со вторым терапевтическим агентом, для модулирования протеазы, активирующей каналы (например, для ингибирования простазина). Настоящее изобретение также относится к применению соединения формул (1), (2А) или (2В) или его фармацевтически приемлемых солей или содержащих его фармацевтических композиций, и необязательно в комбинации со вторым терапевтическим агентом, для изготовления лекарственного средства для лечения состояния, опосредованного протеазой, активирующей каналы (например, состояния, опосредованного простазином).

Определения

"Алкил" как группа и в качестве структурного элемента других групп, например, галогензамещенного алкила и алкокси, может быть линейным или разветвленным. Необязательно замещенный алкил, алкенил или алкенил, как здесь используется, может быть необязательно галогенирован (например, CF₃), или может содержать один или несколько атомов углерода, которые являются замещенными или заменены гетероатомом, таким как NR, О или S (например, -ОСН₂СН₂ О-, алкилтиолы, тиоалкокси, алкиламины и т.д.).

"Арил" обозначает моноциклическое или конденсированное бициклическое ароматическое кольцо, содержащее атомы углерода. Например, арил может представлять собой фенил или нафтил. "Арилен" обозначает двухвалентный радикал, образованный от арильной группы.

"Гетероарил", как здесь используется, является таким, как определено выше для арила, где один или несколько членов кольца представляют собой гетероатом. Примеры гетероарилов включают, но не ограничиваются ими, пиридил, индолил, индазолил, хиноксалинил, хинолинил, бензофуранил, бензопиранил, бензотиопиранил, бензо[1,3]диоксол, имидазолил, бензоимидазолил, пиримидинил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, триазолил, тетразолил, пиразолил, тиенил и т.д.

"Карбоциклическое кольцо", как здесь используется, обозначает насыщенное или частично ненасыщенное, моноциклическое, конденсированное бициклическое или мостиковое полициклическое кольцо, содержащее атомы углерода, которые необязательно могут быть замещены, например, с помощью =O. Примеры карбоциклических колец включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопропилен, циклогексанон и т.д.

"Гетероциклическое кольцо", как здесь используется, является таким, как определено выше для карбоциклического кольца, где один или несколько кольцевых атомов углерода являются гетероатомами. Например, гетероциклическое кольцо может содержать N, О, S, -N=, -S-, -S(O), -S(O)₂- или -NR-, где R может представлять собой водород, С_1-4алкил или защитную группу. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваются ими, морфолино, пирролидинил, пирролидинил-2-он, пиперазинил, пиперидинил, пиперидинилон, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]дец-8-ил и т.д.

Термины "совместное введение" или "объединенное введение" или им подобные, как здесь используется, обозначают осуществление введения выбранных терапевтических агентов отдельному пациенту и включают режимы лечения, при которых агенты необязательно вводят одним способом введения или в одно время.

Термин "фармацевтическая комбинация", как здесь используется, обозначает продукт, полученный смешением или объединением активных ингредиентов, и включает фиксированные и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин "фиксированная комбинация" обозначает, что активные ингредиенты, например, соединение формул (1), (2А) или (2В), и совместно вводимый агент, оба вводятся пациенту одновременно в форме одного целого или одной дозировки. Термин "нефиксированная комбинация" обозначает, что активные ингредиенты, например, соединение формул (1), (2А) или (2В), и совместно вводимый агент, оба вводятся пациенту раздельными частями одновременно, параллельно или последовательно без особых временных интервалов, где такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни активных ингредиентов в организме пациента. Последнее также относится к коктейльной терапии, например, введению трех или более активных ингредиентов.

Термин "терапевтически эффективное количество" обозначает количество соединения, которое вызывает биологический или медицинский отклик в клетке, ткани, органе, системе, животном или человеке, которое устанавливается исследователем, ветеринаром, доктором или другим врачом.

Термин "введение" и/или "вводимый" соединения обозначает обеспечение соединения по изобретению и его пролекарства, для индивидуальных потребностей лечения.

Как здесь используется, термины "лечить", "излечение" и "лечение" относятся к способу облегчения или ослабления заболевания и/или сопровождающих его симптомов.

Термин "простазин" также может обозначаться как: протеаза, активирующая каналы человека (hCAP); протеаза, активирующая каналы-1; и PRSS8, MERPOPS ID S01, 159.

Способ осуществления изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, фармацевтическим композициям и способам применения таких соединений для модулирования протеаз, активирующих каналы (САР).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1):

и их фармацевтически приемлемым солям, гидратам, сольватам и стереоизомерам, где

J представляет собой 5-12-членное моноциклическое или конденсированное карбоциклическое кольцо, арил, гетероарил или гетероциклическое кольцо, содержащее N, О и/или S;

R¹ представляет собой -(CR₂)₁-NR₂, -(CR₂ )₁-NRC(=NR)-NR₂, -(CR₂) ₁-C(=NR)-

NR² или 5-7-членное азотсодержащее неароматическое гетероциклическое кольцо;

W-R² представляет собой заместитель в любом положении кольца А;

W представляет собой -O(CR₂ )_k-, -S(CR₂)_k-, -S(O)(CR ₂)_k-, -SO₂(CR₂)_k - или -OC(O)(CR₂)_k-;

R ² представляет собой С_1-6алкил, С_2-6 алкенил, С_2-6алкинил, R⁶, -CR⁹ =CR⁹-R⁶

или где кольцо Е представляет собой необязательно замещенное 5-7-членное моноциклическое или конденсированное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо; или W-R² вместе образуют С_1-6алкил, 5-7-членный арил или -OC(O)NR⁷ R⁸;

R³ представляет собой NR⁷R⁸ или R⁶;

R⁴ и R⁵ независимо представляют собой Н, С_1-6алкил, ОН или C_1-6алкокси;

R⁷ и R⁸ независимо представляют собой Н, C_1-6алкил, С_2-6алкенил, С_2-6 алкинил

или -(CR₂)₁-R ⁶; или R⁷ и R⁸ вместе с атомом N могут образовывать необязательно замещенное 5-7-членное моноциклическое или конденсированное гетероциклическое кольцо;

R⁹ представляет собой Н или C_1-6алкил;

R¹⁰ представляет собой галоген, C _1-6алкил, C_1-6алкокси, OR¹¹ или -(CR ₂)₁-R¹¹;

R⁶ , R¹¹ и X независимо представляют собой необязательно замещенное 5-7-членное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил; или R¹¹ представляет собой Н или С_1-6алкил;

каждый R представляет собой Н или C_1-6алкил, С_2-6алкенил или С_2-6алкинил, где атом углерода необязательно может быть замещенным или заменен NR, О или S;

i обозначает 0-1;

k и 1 независимо обозначают 0-6;

m и n независимо обозначают 1-6; и

р обозначает 0-3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формул (2А) или (2В):

или

где Z представляет собой О или S;

R¹ представляет собой NH₂, -NHC(=NH)-NH₂ или -C(=NH)-NH₂;

W представляет собой -O(CH₂)_k- или -S(O)(CH ₂)]_k-;

R² представляет собой необязательно замещенный фенил, или W-R вместе образуют C_1-6алкил или необязательно замещенный фенил;

R, R⁴ и R⁵ независимо представляют собой Н;

Y представляет собой 5-7-членный арил, гетероарил или гетероциклическое кольцо содержащее N, О или S;

R¹² представляет собой галоген, C_1-6алкил или -L-(CH₂)_1-R¹³;

L представляет собой связь, О, SO₂, NHCO, NHSO ₂ или SO₂NH;

R¹³ представляет собой необязательно галогенированный С_1-6 алкил или необязательно замещенный С_3-7циклоалкил или 5-7-членный арил, гетероарил или гетероциклическое кольцо;

i обозначает 0;

k обозначает 1;

l обозначает 0-1;

m и n независимо обозначают1-4; и

q обозначает 0-3.

В каждой приведенной выше формуле X, R⁶ и R¹¹ альтернативно может представлять собой необязательно замещенный С_3-7циклоалкил.

В каждой приведенной выше формуле R¹ может представлять собой NR'R'', NH-C(NR'R'')=NH, NH-C(NHR')=NR'', NH-C(R')=NR'', S-C(NR'R'')-NH, S-C(NHR') -NR'', C(NR'R'')=NH, C(NHR')=NR'' или CR=NR''; где R'R'' являются одинаковыми или различными и представляют собой Н, С _1-6алкил, С_1-3арилалкил, арил, или где R'R'' образуют циклическое кольцо, содержащее (СН₂) _р, где р имеет значение от 2 до 5.

В каждой приведенной выше формуле каждая необязательно замещенная группа может быть замещена галогеном,=О, амино, гуанидинилом, амидино, С_1-6алкокси; С_1-6алкилом, С_2-6 алкенилом или С_2-6алкинилом, каждый из которых необязательно может быть галогенированным или необязательно может содержать атом углерода, который может быть замещенным или заменен N, О или S; CO₂R¹¹, O-(CR₂)_m -C(O)-R¹¹; -(CR₂)_m-R¹¹ , -(CR₂)_m-C(O)R¹¹ или -(CR ₂)_m-SO₂-R¹¹; или их комбинации, где каждый R¹¹ представляет собой Н, С_1-6 алкил или необязательно замещенное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил.

Соединения и композиции по изобретению могут использоваться для модулирования протеазы, активирующей каналы. Примеры протеаз, активирующих каналы, которые могут модулироваться соединениями и композициями по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, простазин, PRSS22, TMPRSS11 (например, TMPRSS11B, TMPRSS11E), TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4 (MTSP-2), матриптазу (MTSP-1), САР2, САР3, трипсин, катепсин А или нейтрофилэластазу. Новые соединения настоящего изобретения также могут ингибировать активность протеазы, которые стимулируют активность ионных каналов, таких как эпителиальные натриевые каналы, и могут использоваться для лечения САР-связанных заболеваний.

Фармакология и полезность

Соединения по изобретению модулируют активность протеазы, активирующей каналы, например, трипсиноподобных сериновых протеаз, таких как простазин, и как таковые являются полезными для лечения заболеваний или нарушений, при которых простазин участвует в патологии и/или симптомологии заболевания.

Заболевания, опосредованные ингибированием протеазы, активирующей каналы, например, трипсиноподобной сериновой протеазы, такой как простазин, включают заболевания, связанные с регулированием объемов жидкости через эпителиальные мембраны. Например, объем жидкости поверхности дыхательных путей является ключевым регулятором мукоцилиарного клиренса и поддержания здоровья легких. Ингибирование протеазы, активирующей каналы, вызывает накопление жидкости на слизистой стороне эпителия дыхательных путей, тем самым вызывая мукоцилиарный клиренс и предотвращение накопление слизи и мокроты в респираторных тканях (включая легочные пути). Такие заболевания включают респираторные заболевания, такие как циститный фиброз, первичную цилиарную дискинезию, хронический бронхит, хроническое обструктивное легочное заболевание (COPD), астму, инфекции дыхательных путей (острые и хронические; вирусные и бактериальные) и легочную карциному. Заболевания, опосредованные ингибированием протеаз, активирующих каналы, также включают заболевания, отличные от респираторных заболеваний, которые связаны с нарушением регулирования потока через эпителий, вероятно включающим нарушенную физиологию жидкостей защитных поверхностей на их поверхности, например, сухость слизистой оболочки рта (сухой рот) или сухой кератоконъюнктивит (сухие глаза). Кроме того, регулирование CAP ENaC в почках могли бы использоваться для защиты диуреза, и тем самым вызывать гипотензивный эффект.

Хроническое обструктивное легочное заболевание включает хронический бронхит или связанную с ним одышку, эмфизему, а также обострение гиперреактивности легочных путей вследствие терапии другими лекарственными средствами, в частности, терапии другими ингалируемыми лекарственными препаратами. Настоящее изобретение также включает лечение бронхита любого типа или генеза, включая, например, острый, арахиновый, катаральный, фибринозный, хронический или фтиноидный бронхит.

Соединения по изобретению могут использоваться для лечения астмы, включая но не ограничиваясь ими, врожденную (неаллергическую) астму и приобретенную (аллергическую) астму, легкую астму, астму средней степени, тяжелую астму, бронхиальную астму, вызванную физическими упражнениями астму, профессиональную астму и астму, вызванную бактериальной инфекцией. Лечение астмы также следует понимать как включающее лечение субъектов, например возраста менее 4 или 5 лет, проявляющих свистящие симптомы и диагностированные как "свистящие младенцы", категория пациентов основного медицинского назначения и сейчас идентифицируемая как начальная или астматики ранней фазы, или как "синдром свистящих младенцев".

Приспособленность ингибитора протеазы, активирующей каналы, такого как ингибитор простазина, для лечения заболевания, опосредованного ингибированием протеазы, активирующей каналы, может тестироваться путем определения ингибирующего эффекта ингибитора протеазы, активирующей каналы, в соответствии с анализами, описанными далее, и используя способы, известные из предшествующего уровня техники.

В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения любого заболевания или нарушения, описанного выше, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формул (1), (2А) или (2В) или его фармацевтически приемлемой соли. Для любого из описанных выше применений необходимая дозировка будет зависеть от способа введения, конкретного излечиваемого состояния и желаемого эффекта.

Введение и фармацевтические композиции

Обычно соединения по изобретению вводят в терапевтически эффективных количествах любым обычным и приемлемым способом, известным из предшествующего уровня техники, отдельно или в комбинации с одним или несколькими терапевтическими агентами.

Ингибиторы протеаз, активирующих каналы, по изобретению также используются в качестве совместно вводимых терапевтических агентов для применения в комбинации с другими лекарственными веществами, такими как противовоспалительные, бронхорасширяющими, антигистаминовыми или противокашлевыми лекарственными веществами, конкретно для лечения циститного фиброза или обструктивных или воспалительных заболеваний легочных путей, таких как указанные выше заболевания, например, в качестве усилителей терапевтической активности таких лекарственных препаратов или в качестве средств для снижения необходимой дозировки или возможных побочных эффектов таких лекарственных препаратов.

Ингибитор протеазы, активирующей каналы, может быть смешан с другим лекарственным веществом в фиксированной фармацевтической композиции, или он может вводиться раздельно, перед, одновременно или после другого лекарственного вещества.

Соответственно настоящее изобретение может включать комбинацию ингибитора протеазы, активирующей каналы, с противовоспалительным, бронхорасширяющим, антигистаминовым, противокашлевым веществом, антибиотиком или ДНКазой, причем указанный ингибитор протеазы, активирующей каналы, и указанное лекарственное вещество находятся в одной или различных фармацевтических композициях.

Подходящие противовоспалительные лекарственные вещества включают стероиды, в частности глюкокортикостероиды, такие как будесонид, дипропионат бекламетазона, пропионат флутиказона, циклесонид или фуроат мометазона; или стероиды, описанные в документах WO 02/88167, WO 02/12266, WO 02/100879, WO 02/00679 (особенно соединения примеров 3, 11, 14, 17, 19, 26, 34, 37, 39, 51, 60, 67, 72, 73, 90, 99 и 101), WO 03/35668, WO 03/48181, WO 03/62259, WO 03/64445, WO 03/72592, WO 04/39827 и WO 04/66920; нестероидные агонисты глюкокортикоидного рецептора, такие как соединения, описанные в документах DE 10261874, WO 00/00531, WO 02/10143, WO 03/82280, WO 03/82787, WO 03/86294, WO 03/104195, WO 03/101932, WO 04/05229, WO 04/18429, WO 04/19935 и WO 04/26248; антагонисты LTD4, такие как монтелукаст и зафирлукаст; ингибиторы PDE4, такие как циломиласт (Ariflo® GlaxoSmithKline), рофлумиласт ® (Byk Gulden),V-l 1294А (Napp), BAY19-8004 (Bayer), SCH-351591 (Schering-Plough), арофиллин® (Almirall Prodesfarma), PD189659 / PD168787 (Parke-Davis), AWD-12-281 (Asta Medica), CDC-801 (Celgene), SelCID(TM) CC-10004 (Celgene), VM554/UM565 (Vernalis), T-440 (Tanabe), KW-4490 (Kyowa Hakko Kogyo) и соединения, описанные в документах WO 92/19594, WO 93/19749, WO 93/19750, WO 93/19751, WO 98/18796, WO 99/16766, WO 01/13953, WO 03/104204, WO 03/104205, WO 03/39544, WO 04/000814, WO 04/000839, WO 04/005258, WO 04/018450, WO 04/018451, WO 04/018457, WO 04/018465, WO 04/018431, WO 04/018449, WO 04/018450, WO 04/018451, WO 04/018457, WO 04/018465, WO 04/019944, WO 04/019945, WO 04/045607 и WO 04/037805; и антагонисты аденозинового рецептора A_2B, такие как соединения, описанные в документе WO 02/42298, каждый из которых приведен здесь полностью в качестве ссылки.

Подходящие бронхорасширяющие лекарственные препараты включают агонисты бета-2 адренорецептора, такие как албутерол (салбутамол), метапротеренол, тербуталин, салметерол, фенотерол, прокатерол, формотерол или кармотерол и их фармацевтически приемлемые соли, и соединения формулы (1), как описано в документе WO 00/75114 (в свободной форме или форме соли или сольвата), которые приведены здесь полностью в качестве ссылки, такое как соединение формулы:

и его фармацевтически приемлемые соли; соединения формулы (1) документа WO 04/16601; а также соединения документов ЕР 1440966, JP 05025045, WO 93/18007, WO 99/64035, US 2002/0055651, WO 01/42193, WO 01/83462, WO 02/66422, WO 02/ 70490, WO 02/76933, WO 03/24439, WO 03/42160, WO 03/42164, WO 03/72539, WO 03/91204, WO 03/99764, WO 04/16578, WO 04/22547, WO 04/32921, WO 04/33412, WO 04/37768, WO 04/37773, WO 04/37807, WO 04/39762, WO 04/39766, WO 04/45618 WO 04/46083 и WO 04/80964, каждый в свободной форме или форме соли или сольвата. Каждая из этих публикаций приведена здесь полностью в качестве ссылки.

Подходящие бронхорасширяющие лекарственные препараты также включают антихолинергические или антимускариновые агенты, в частности бромид ипратропия, бромид окситропия, соли тиотропия и CHF 4226 (Chiesi), гликопирролят, а также соединения, описанные в документах ЕР 424021, US 3714357, US 5171744, WO 01/04118, WO 02/00652, WO 02/51841, WO 02/53564, WO 03/00840, WO 03/33495, WO 03/53966, WO 03/87094, WO 04/018422 и WO 04/05285, каждый из которых приведен здесь полностью в качестве ссылки.

Подходящие двойные противовоспалительные и бронхорасширяющие лекарственные препараты включают двойной агонист бета-2 адренорецептора / антагонисты мускаринового рецептора, такие как соединения, описанные в документах US 2004/0167167, WO 04/74246 и WO 04/74812, каждый из которых приведен здесь полностью в качестве ссылки.

Подходящие антигистаминные лекарственные вещества включают гидрохлорид цетиризина, ацетаминофен, фумарат клемастина, прометазин, лоратидин, деслоратидин, дифенгидрамин и гидрохлорид фексофенадина, активастин, астемизол, азеластин, эбастин, эпинастин, мизоластин и тефенадин, а также соединения, описанные в документах JP 2004107299, WO 03/099807 и WO 04/026841, каждый из которых приведен здесь полностью в качестве ссылки.

Подходящие антибиотики включают макролидные антибиотики, например тобрамицин (TOBI ).

Подходящие лекарственные вещества ДНКазы включают дорназу альфа (PULMOZYME ), высокоочищенный раствор рекомбинантной дезоксирибонуклеазы I человека (rhDNase), которые селективно расщепляет ДНК. Дорназа альфа используется для лечения циститного фиброза.

Другими полезными комбинациями ингибиторов протеазы, активирующей каналы, с противовоспалительными лекарственными препаратами являются комбинации с антагонистами хемокиновых рецепторов, например, CCR-1, CCR-2, CCR-3, CCR-4, CCR-5, CCR-6, CCR-7, CCR-8, CCR-9 и CCR10, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, особенно антагонистами CCR-5, такими как антагонисты Шеринга-Плуга SC-351125, SCH-55700 и SCH-D; антагонисты Такеда, такие как хлорид N-[[4-[[[6,7-дигидро-2-(4-метилфенил)-5H-бензо-циклогептен-8-ил]карбонил]амино]фенил]метил]тетрагидро-N,N-диметил-2H-пиран-4-аминия (ТАК-770); и антагонисты CCR-5, описанные в документах US 6166037, WO 00/66558, WO 00/66559, WO 04/018425 и WO 04/026873, каждый из которых приведен здесь полностью в качестве ссылки.

Для лечения заболевания, опосредованного ингибированием простазина в соответствии с изобретением, ингибитор протеазы, активирующей каналы, по изобретению в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли может вводиться любым подходящим способом, например перорально, например в форме таблетки, капсулы или в жидкой форме; парентерально, например в форме инъекционного раствора или суспензии; интраназально, например в форме аэрозоля или другого измельченного состава, используя подходящее интраназальное устройство для доставки, например, назальный спрей, такой как спреи, известные из предшествующего уровня техники; или ингаляцией, такой как с помощью аэрозольного устройства.

Ингибитор протеазы, активирующей каналы, может вводиться в фармацевтической композиции вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Такие композиции могут представлять собой, например, сухие порошки, таблетки, капсулы и жидкости, а также инъекционные растворы, инфузионные растворы или ингаляционные суспензии, которые могут быть получены, используя другие ингредиенты состава и методики, известные из предшествующего уровня техники.

Дозировка ингибитора протеазы, активирующей каналы, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, может зависеть от различных факторов, таких как активность и длительность действия активного ингредиента, степени тяжести излечиваемого состояния, способа введения, типа, пола, этнического происхождения, возраста и веса субъекта и/или от его индивидуального состояния. В обычном случае суточная дозировка для введения, например, перорального введения теплокровному животному, конкретно человеку, весом около 75 кг, составляет приблизительно от 0,7 мг приблизительно до 1400 мг; или в некоторых примерах приблизительно от 5 мг приблизительно до 200 мг. Эта дозировка может вводиться одной дозой или несколькими частичными дозами, например, от 5 до 200 мг.

Когда композиция включает аэрозольный состав, она может содержать газ-вытеснитель гидрофторалкана (HFA), такой как HFA134a или HFA227 или их смесь; один или несколько сорастворителей, известных из уровня техники, таких как этанол (вплоть до 20 вес.%); одно или несколько поверхностно-активных веществ, таких как олеиновая кислота или триолеат сорбита; и/или один или несколько наполнителей, таких как лактоза. Когда композиция включает состав в виде сухого порошка, она предпочтительно содержит, например, ингибитор протеазы, активирующей каналы, с диаметром частиц вплоть до 10 микрон, необязательно вместе с разбавителем или носителем, таким как лактоза, желаемого распределения размера частиц, и соединением, которое помогает защитить продукт от появления повреждения вследствие влаги (например, стеарат магния). Когда композиция включает аэрозольный состав, она может содержать, например, ингибитор протеазы, активирующей каналы, в растворенной или суспендированной форме, в носителе, содержащем воду, сорастворитель, такой как этанол или пропиленгликоль, и стабилизатор, которым может быть поверхностно-активное вещество.

Изобретение включает (А) соединение по изобретению в ингалируемой форме, например в аэрозольной или другой распыляемой композиции, или в ингалируемой измельченной, например, микронизированной форме; (Б) ингалируемое лекарственное средство, включающее соединение по изобретению в ингалируемой форме; (В) фармацевтический продукт, включающий такое соединение по изобретению в ингалируемой форме вместе с ингаляционным устройством; и (Г) ингаляционное устройство, содержащее соединение по изобретению в ингалируемой форме.

Способы получения соединений по изобретению

Настоящее изобретение также включает способы получения соединений по изобретению. В описанных реакциях реакционные функциональные группы, при необходимости в конечном продукте (например, гидрокси, амино, имино, тио или карбоксигруппы), могут быть защищены, используя защитные группы, известные из предшествующего уровня техники, для устранения их нежелательного участия в реакциях. Обычные защитные группы могут использоваться в соответствии со стандартной практикой, например, см. книгу T.W. Greene и P.G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991.

Соединения по изобретению могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакции I:

Схема I

где R^1' представляет собой (CR₂)_n-X_i-R¹ ;

R^2' представляет собой (CR ²)_kR²;

R¹ , R², R³, X, Z, i, k и n являются такими, как определено в формуле (1);

R⁷ представляет собой алкилкарбаматную защитную группу (например, метил, этил, трет-бутил или бензил и им подобные).

Промежуточное соединение II может быть получено реакцией

промежуточного соединения Iaa с алкильным реагентом типа R^2'-Y, где Y представляет собой уходящую группу, в присутствии подходящего основания и подходящего органического растворителя. Примеры уходящих групп в алкильных реагентах R^2'-Y включают, но не ограничиваются ими, галогениды, такие как хлориды и бромиды, или тозилатные, мезилатные или безилатные уходящие группы, и им подобные. Эти реакции могут осуществляться при температуре от около 0°С до около 60°С и могут занимать до 24 часов до окончания.

Промежуточное соединение IV может быть получено реакцией промежуточного соединения II с реагентом III с подходящим конденсирующим пептидным реагентом и подходящим основанием в присутствии подходящего растворителя. Подходящие основания для этой реакции включают, но не ограничиваются ими, триэтиламин, DIEA, пиридин, 2,4,6-коллидин и другие подходящие основания, известные из предшествующего уровня техники. Реакция может протекать при температуре от около 0°С до около 40°С и может занимать до 24 часов до окончания.

В описанной выше схеме реакции I промежуточное соединение V может быть получено удалением карбаматной защитной группы (например, где R⁷ представляет собой трет-бутил) из промежуточного соединения IV с помощью подходящей кислоты, и необязательно в присутствии подходящего органического растворителя. Подходящие кислоты включают, но не ограничиваются ими, ТФУК, n-TsOH, TfOH, HCl, HBr, HF, HBF₄ и другие подходящие кислоты, известные специалисту в данной области техники. Реакция может протекать при температуре от около -20°С до около 40°С и может занимать до 24 часов до окончания.

Альтернативно промежуточное соединение V может быть получено удалением карбаматной защитной группы из промежуточного соединения IV (например, где R представляет собой бензил или любое бензильное производное) газообразным водородом в присутствии подходящего катализатора и подходящего растворителя или воды. Примеры подходящих катализаторов включают, но не ограничиваются ими, Pd/C, Pt, PtO₂ , Pt/C, Rh/C и другие подходящие катализаторы, известные из предшествующего уровня техники. Реакция может протекать при температуре от около 0°С до около 80°С, при давлении водорода от около 15 psi до около 80 psi и может занимать до 24 часов до окончания.

Альтернативно, соединение формулы V может быть получено удалением карбаматной защитной группы из соединения формулы IV (например, где R⁷ представляет собой аллил или любое аллильное производное), реакцией соединения формулы IV с подходящим акцептором аллильной группы (например, Et₂NH, морфолин, пиперидин, пирролидин, NaBH₄ и им подобные) в присутствии подходящего катализатора (например, Pd₂(dba)₃ , PdCl₂, Pd(PPh₃)₄ и им подобные) в присутствии подходящего растворителя (например, вода, метанол, этанол, изопропанол, трет-бутанол, н-пропанол, н-бутанол, циклогексанол и их смеси и им подобные).

Промежуточное соединение VII может быть получено реакцией промежуточного соединения V с реагентом VI в присутствии подходящего пептидного конденсирующего реагента и подходящего основания (Et₃N, DIEA, пиридин, 2,4,6-коллидин и им подобные) в присутствии подходящего растворителя. Реакция может протекать при температуре от около 0°С до около 40°С и может занимать до 24 часов до окончания.

Конечное соединение VIII может быть получено реакцией соединения формулы VII с подходящим окислителем в присутствии подходящего органического растворителя или воды. Подходящие окислители включают, но не ограничиваются ими, периодинан Десса-Мартина, 2-йодбензойную кислоту с оксоном, TEMPO с трихлоризоциануровую кислоту, TEMPO с NaOCl, ДМСО с оксалилхлоридом, хлорхромат пиридиния, MnO₂, CrO₂ и другие подходящие окислители, известные специалисту в данной области техники. Реакция может протекать при температуре от около 0°С до около 40°С и может занимать до 24 часов до окончания.

Подходящие пептидные конденсирующие реагенты для применения в реакциях, описанных на схеме реакций I, включают, но не ограничиваются ими, ДЦК, DIC, HATU, ВОР, РуВОР, EDC и другие конденсирующие реагенты, известные специалисту в данной области техники.

Подходящие основания для применения в реакциях, описанных на схеме реакций I, включают, но не ограничиваются ими, гидроксиды, такие как NaOH, КОН или NOH; карбонаты, такие как К₂СО₃ или CsCO₃; гидриды, такие как NaH или КН и им подобные. Другими подходящими основаниями являются амины, DIEA, пиридин, 2,4,6-коллидин и другие подходящие основания, известные специалисту в данной области техники.

Подходящие органические растворители для применения в реакциях, описанных на схеме реакций I, включают, но не ограничиваются ими, ДМСО, ТГФ, ДМФА, DMAc, ацетонитрил, ацетон, 2-пропанон, бутанон, НМРА, NMP, дихлорметан, хлороформ, 1,2-дихлорэтан, диэтиловый эфир, метанол, этанол, трет-бутанол, изопропанол, пропанол, н-бутанол, циклогексанол, ацетонитрил, диоксан, МТВЕ, бензол, толуол и их смеси и другие подходящие растворители, известные специалисту в данной области техники.

Дополнительные способы получения соединений по изобретению

Соединение по изобретению может быть получено в виде фармацевтически приемлемой кислотной аддитивной соли реакцией формы свободного основания соединения с фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислотой. Альтернативно, фармацевтически приемлемая основная аддитивная соль соединения по изобретению может быть получена реакцией формы свободной кислоты соединения с фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим основанием.

Альтернативно, формы соли соединений по изобретению могут быть получены, используя соли исходных материалов или промежуточных соединений.

Формы свободной кислоты или свободного основания соединений по изобретению могут быть получены из соответствующей формы основной аддитивной соли или кислотной аддитивной соли соответственно. Например, соединение по изобретению в форме кислотной аддитивной соли могут быть превращены в соответствующее свободное основание обработкой подходящим основанием (например, раствором гидроксида аммония, гидроксида натрия и им подобными). Соединение по изобретению в форме основной аддитивной соли может быть превращено в соответствующую свободную кислоту обработкой подходящей кислотой (например, хлористоводородной кислотой и т.д.).

Соединения по изобретению в неокисленной форме могут быть получены из N-оксидов соединений по изобретению обработкой восстанавливающим агентом (например, сера, диоксид серы, трифенилфосфин, боргидрид лития, натрийборгидрид, трихлорид фосфора, трибромид или им подобные) в подходящем инертном органическом растворителе (например, ацетонитрил, этанол, водный диоксан или им подобные) при температуре от 0 до 80°С.

Пролекарственные производные соединений по изобретению могут быть получены способами, известными специалисту в данной области техники (например, более подробно см. статью Saulnier и др., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 1994, Т.4, с.1985). Например, подходящие пролекарства могут быть получены реакцией незамещенного соединения по изобретению с подходящим карбамилирующим агентом (например, 1,1-ацилоксиалкилкарбанохлоридатом, пара-нитрофенилкарбонатом или им подобными).

Защищенные производные соединений по изобретению могут быть получены способами, известными специалисту в данной области техники. Подробное описание методик, использующихся для создания защитных групп, и их удаление может быть обнаружено в книге Т.W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3^-e издание, John Wiley and Sons, Inc., 1999.

Соединения настоящего изобретения могут быть получены обычным образом, или в ходе способа по изобретению в виде сольватов (например, гидратов). Гидраты соединений настоящего изобретения могут быть получены обычным образом перекристаллизацией из смеси водный/органический растворитель, используя органические растворители, такие как диоксин, тетрагидрофуран или метанол.

Соединения по изобретению могут быть получены в виде их индивидуальных стереоизомеров реакцией рацемической смеси соединения с оптически активным расщепляющим агентом с образованием пары диастереоизомерных соединений, разделением диастереомеров и выделением оптически чистых энантиомеров. Расщепление энантиомеров может осуществляется, используя ковалентные диастереомерные производные соединений по изобретению или используя диссоциируемые комплексы (например, кристаллические диастереомерные соли). Диастереомеры имеют различные физические свойства (например, точки плавления, точки кипения, растворимости, реакционоспособность и т.д.) и могут быть легко разделены на основании этих различий. Диастереомеры могут быть разделены хроматографией или методиками разделения/расщепления на основании различий в растворимости. Оптически чистый энантиомер затем извлекают вместе с расщепляющим агентом любыми обычными способами, которые не приводят к рацемизации. Более подробное описание методик, использующихся для выделения стереоизомеров соединений из их рацемической смеси, может быть обнаружено в книге Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981.

В целом, соединения формулы (1) могут быть получены способом, который включает:

(а) реакции схемы I;

(б) необязательно превращение соединения по изобретению в фармацевтически приемлемую соль;

(в) необязательно превращение формы соли соединения по изобретению в форму, отличную от соли;

(г) необязательно превращение неокисленной формы соединения по изобретению в фармацевтически приемлемый N-оксид;

(д) необязательно превращение формы N-оксида соединения по изобретению в его неокисленную форму;

(е) необязательно выделение индивидуального изомера соединения по изобретению из смеси изомеров;

(ж) необязательно превращение свободного соединения по изобретению в фармацевтически приемлемое пролекарственное производное; и

(з) необязательно превращение пролекарственного производного соединения по изобретению в его свободную форму.

Несмотря на то что получение исходных материалов конкретно не описано, соединения являются известными или могут быть получены аналогично способам, известным из предшествующего уровня техники, или как описано далее в примерах. Специалисту в данной области техники ясно, что описанные выше превращения только иллюстрируют способы получения соединений настоящего изобретения и что другие хорошо известные способы могут аналогично использоваться. Настоящее изобретение далее представлено примерами, но не ограничивается ими, следующих промежуточных соединений (ссылочные соединения) и примеров, которые иллюстрируют получение соединений по изобретению.

В приведенных далее методиках синтеза используются следующие общие сокращения, известные из предшествующего уровня техники: ДХМ (дихлорметан); ТГФ (тетрагидрофуран) и DIEA (диизопропилэтиламин).

Ссылочное соединение 1

На приведенной выше схеме реакции реагенты и условия являются следующими: (а) изо-BuOCOCl, Et ₃N, ТГФ; NaB₄, Н₂О. (б) периодинан Десса-Мартина, CH₂Cl₂; (в) изо-PrMgCl, бензоксазол, ТГФ, -20°С, 30 мин, затем 1-С, от -20°С до Кт. (г) Н₂ (40 psi), EtOH, Pd/C 10%, КТ, 18 ч.

1-В: Сырой исходный материал, Z-Lys(Boc)OH 1-А (320 г, 842 ммоля), растворяли в ТГФ (2,5 л) и раствор охлаждали до -10°С, затем добавляли триэтиламин (115,2 мл, 1,0 эквив.) и по каплям добавляли изо-бутилхлороформат (118,7 мл, 1,1 эквив.). Полученную суспензию перемешивали в течение 2 ч при 0°С. Реакционную смесь отфильтровывали и охлаждали до -10°С. Растворяли NaBH₄ (64,6 г, 2,1 эквив.) в воде (500 мл) при 0°С и раствор добавляли порциями к раствору ТГФ (бурное выделение СО₂). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение одного часа. Реакционную смесь подкисляли 1N раствором HCl и водную фазу экстрагировали несколько раз EtOAc. Объединенные органические слои промывали водой, насыщенным водным раствором NaHCO₃ и насыщенным раствором хлорида натрия; сушили MgSO₄, и растворитель удаляли в вакууме.

Продукт очищали ускоренной колоночной хроматографией (гексан/этилацетат) с получением целевого продукта в виде белой пены.

1-С: Спирт 1-В (200 г, 545,8 ммоля) растворяли в ДХМ (2,0 л) и охлаждали до 0°С. Порциями добавляли раствор реагента Десса-Мартина (231 г, 1,0 эквив.) в ДХМ (2,0 л). Суспензию оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали до окончания превращения (1-4 ч). Добавляли смесь 1:1 насыщенного водного раствора NaHCO₃ и 1М раствора Na₂S ₂O₃ и полученную бифазную систему перемешивали интенсивно в течение 20 мин. Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали один раз ДХМ. Объединенные органические слои перегоняли в вакууме и полученное масло переносили в EtOAc и промывали шесть раз смесью NaHCO₃/Na₂S ₂O₃, водой и насыщенным раствором хлорида натрия; сушили MgSO₄, и растворитель удаляли в вакууме с получением сырого альдегида в виде желтоватого масла. Материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

1-D: К раствору хлорид изопропилмагния (1,67 эквив. относительно альдегида, 390 мл 2М раствора ТГФ от Sigma-Aldrich) в ТГФ (1,5 л) добавляли бензоксазол (92,8 г, 1,67 эквив.) в ТГФ (1,0 л) при -20°С. Реакционную смесь перемешивали при -20°С в течение 30 мин (цвет менялся на темно-красный) и медленно добавляли раствор альдегида 1-С (170 г, 466 ммолей) в ТГФ (1,5 л) при контролируемой температуре от -20°С до -15°С. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали до окончания. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NH₄ Cl и растворитель удаляли в вакууме. Водную фазу экстрагировали три раза EtOAc, и объединенные органические слои обильно промывали 1N раствором HCl, водой и насыщенным раствором хлорида натрия; сушили MgSO₄, и растворитель удаляли в вакууме с получением сырого бензоксазола в виде темно-красного масла. Очистка на силикагеле смесью EtOAc/гексан (от 1:5 до 1:1) приводила к получению бензоксазола в виде желтого твердого вещества.

1-Е: Раствор промежуточного соединения 1-D (25,0 г, 51,7 ммоля) растворяли в этаноле (150 мл). Добавляли Pd/C (10%, влажный, типа Degussa), и колбу помещали в аппарат Парра в течение ночи и обрабатывали газообразным водородом при 40 psi. Катализатор отфильтровывали через целит и растворитель удаляли в вакууме. Сырой материал очищали ускоренной хроматографией, используя сначала градиент гексан/EtOAc для удаления менее полярных и окрашенных примесей, затем градиент ДХМ/МеОН для элюирования целевого соединения. Растворитель удаляли в вакууме, и соединение обрабатывали несколько раз диэтиловым эфиром с получением целевого ссылочного соединения 1 в виде белого порошка. ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ , 400 МГц) 7,73-7,70 (2Н, m), 7,40-7,34 (2Н, m), 6,78-6,73 (1Н, m), 4,55-4,51 (1Н, m), 3,05-3,01 (1Н, m), 2,92-2,83 (2Н, m), 1,48-1,18 (14Н, m). LCMS: 350,5 (М+Н)⁺.

Ссылочное соединение 2

Схема 2

На приведенной выше схеме 2 реагенты и условия являются следующими: a) Cbz-OSu, Et₃N, ТГФ, H₂O, КТ, 18 ч, (б) i. изо-BuOCOCl, Et₃N, ТГФ; ii. NaBH₄, H₂O; (в) периодинан Десса-Мартина, CH₂Cl₂; (г) изо-PrMgCl, бензоксазол, ТГФ, -20°С, 30 мин, затем 2-D, от -20°С до КТ; (д) индий, NH₄C1, EtOH, кипение, 5 ч; (е) N,N-Bis (трет-бутоксикарбонил)-1Н-пиразол-1-карбоксамидин, DIEA, МеОН; (ж) Н₂, (40 psi), 10% Pd/C, EtOH.

2-В: Гидрохлорид L-нитрофенилаланина (4,45 г, 18,0 ммолей) и N-(бензилоксикарбонилокси)сукцинимид (Cbz-OSu) (4,49 г, 18,0 ммолей) добавляли в круглодонную колбу, содержащую ТГФ (60 мл) и воду (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре и добавляли Et₃N (10,1 мл, 72,0 ммоля), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Прозрачный раствор разбавляли EtOAc (200 мл) и промывали 1N HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (1×100 мл), и сушили MgSO₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением соединения 2-В в виде белого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

От 2-С до 2-Е: Эти промежуточные соединения получали способами, аналогичными описанным для получения промежуточных соединений от 1-В до 1-D ссылочного соединения 1, соответственно.

2-F: Нитрофенильный аналог 2-Е (1,85 г, 4,15 ммоля) растворяли в EtOH (50 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником. Добавляли насыщенный водный раствор NH₄Cl (5 мл), затем порошковый индий (3,2 г, 27,9 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при кипении с обратным холодильником в течение 5 ч, охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли в вакууме. Сырой материал суспендировали в EtOAc (100 мл) и промывали насыщенным NaHCO₃ (3×100 мл), сушили MgSO ₄ и отфильтровывали через целит. Растворитель удаляли в вакууме с получением анилина 2-F в виде беловатого воскоподобного твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

2-G: Анилин 2-F (1,52 г, 3,67 ммоля) растворяли в МеОН (10 мл) и добавляли DIEA (0,7 мл, 4,4 ммоля) и N,N-бис(трет-бутоксикарбонил)-1Н-пиразол-1-карбоксамидин (1,37 г, 4,4 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 4 ч добавляли еще 0,5 эквив. N,N-бис(трет-бутоксикарбонил)-1Н-пиразол-1-карбоксамидина (0,685 г, 2,2 ммоля), и реакционную смесь затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли EtOAc (100 мл) и органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия; и сушили MgSO₄. Растворитель удаляли в вакууме и сырой материал очищали хроматографией на силикагеле с помощью EtOAc/гексан (от 0 до 100% градиент) с получением целевого продукта 2-G в виде масла.

2-Н: Это соединение получали из соединения 2-G, используя способы, аналогичные способам, описанным для получения промежуточного соединения 1-Е ссылочного соединения 1.

Ссылочное соединение

Схема 3

На приведенной выше схеме 3 реагенты и условия являются следующими: (a) HN(OMe)Me·HCl, ВОР, Et ₃N, ДМФА, от 0°С до КТ; (б) n-BuLi (2,5М в гексане), бензотиазол, ТГФ, -78°С, затем 3-В, ТГФ, от -70°С до КТ; (в) NaBH₄, МеОН; (г) n-TsOH, CH₂Cl ₂, 6 ч.

3-В: ВОР (50 г, 112 ммоля) добавляли одной порцией к перемешиваемому раствору соединения 3-А (49,92 г, 102,6 ммоля), гидрохлорида N,O-диметилгидроксиламина (30,4 г, 224 ммоля) и триэтиламина (88 мл, 616 ммолей) в сухом ДМФА (200 мл) в атмосфере аргона при 0°С. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение 2 ч, отфильтровывали через диатомовую землю и концентрировали в вакууме.

Остаток растворяли в этилацетате, промывали Н₂О, 1М водным раствором KHSO₄ , насыщенным водным раствором NaHCO₃ и насыщенным раствором хлорида натрия; сушили и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением соединения 3-В.

3-С: н-Бутиллитий (2,5 М в гексане, 272,2 мл, 681,4 ммоля) добавляли по каплям при -78°С в атмосфере аргона к перемешиваемому раствору бензотиазола (115,72 г, 850,7 ммоля) в сухом ТГФ (1660 мл) при такой скорости, чтобы поддерживать температуру реакции ниже -64°С. После окончания добавления реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -70°С и добавляли раствор соединения 3-В (45 г, 85,7 ммоля) в сухом ТГФ (300 мл) при такой скорости, чтобы поддерживать температуру реакции ниже -70°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин, гасили насыщенным водным раствором NH₄Cl и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Полученный органический слой отделяли, разбавляли этилацетатом, промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия; сушили и концентрировали в вакууме и очищали хроматографией на силикагеле с получением соединения 3-С.

3-D: К раствору соединения 3-С (33,7 г, 55,82 ммоля) в МеОН (407 мл) при 0°С добавляли NaBH₄ (9,98 г). Реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 1 ч затем нагревали при 45°С в течение 1 ч, и затем охлаждали до комнатной температуры. Реакцию гасили ацетоном (60 мл) и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате, промывали насыщенным раствором хлорида натрия и сушили MgSO₄. Сырой материал очищали хроматографией на силикагеле с получением продукта 3-D.

3-Е : n-TsOH добавляли к перемешиваемому раствору соединения 3-D (28,2 г) в CH₂Cl₂ (300 мл) при комнатной температуре до получения насыщенного раствора. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Добавляли воду, и органический слой экстрагировали EtOAc, промывали смесью 1:1 (об.) насыщенного раствора хлорида натрия и 10% водного раствора Na₂SO₃, сушили Na₂SO₄ и очищали хроматографией на силикагеле с получением продукта 3-Е.

Ссылочное соединение 4 Схема 4

Для получения промежуточного соединения 4-В н-бутиллитий (1,6 М в гексане, 11,3 мл, 17,9 ммоля) добавляли по каплям к раствору i-Pr₂NH (2,53 мл, 17,9 ммоля) в ТГФ (25 мл), охлажденном до -78°С, и перемешивали в течение 10 мин. По каплям добавляли кетон 4-А (3,25 г, 16,3 ммоля), и раствор продолжали перемешивать при -78°С в течение 25 мин. По каплям добавляли N-фенил-бис-(трифторметансульфонамид) (6,26 г, 17,5 ммоля), растворенный в ТГФ (25 мл), и реакционную смесь помещали в баню вода/лед при 0°С и перемешивали в течение 4 ч. Растворитель упаривали и сырой остаток переносили в минимальное количество гексана и затем отфильтровывали через слой оксида алюминия, используя смесь гексан:EtOAc/9:1 в качестве элюента. Растворитель удаляли в вакууме с получением целевого трифлата 4-В.

Промежуточные соединения 4-В (715 мг, 2,16 ммоля) и 4-С (514 мг, 1,96 ммоля) растворяли в диоксане (10 мл) в реакционном сосуде для микроволнового излучения. Добавляли К₃РО₄ (874 мг, 4,12 ммоля), растворенный в воде (2,5 мл), и раствор дегазировали тремя циклами замораживание жидким азотом - насос - оттаивание. Добавляли катализатор PdCl ₂(dppf) (143 мг, 0,196 ммоля) и сосуд насыщали азотом и закрывали. Реакционную смесь нагревали в реакторе для микроволнового излучения Emrys Personal Chemistry при 150°С в течение 25 мин. Диоксан упаривали в вакууме и остаток переносили и разделяли между EtOAc (50 мл) и 10% водным раствором лимонной кислоты (50 мл). Слои разделяли и органическую фазу промывали 10% водным раствором лимонной кислоты (2×50 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушили Na₂ SO₄ и упаривали и сырой остаток очищали хроматографией на силикагеле (градиент гексан/EtOAc) с получением промежуточного соединения 4-D.

Промежуточное соединение 4-D (45 мг, 0,142 ммоля) растворяли в EtOH (10 мл) в 25 мл колбе, оснащенной резиновой септой. Добавляли каталитическое количество Pd/C (10%) и газообразный водород вводили из баллона с помощью иглы, вставленной в септу. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до исчезновения исходного материала (по данным LCMS). Катализатор затем отфильтровывали и растворитель упаривали досуха с получением ссылочного соединения 4.

Ссылочное соединение 5

Схема 5

На приведенной выше схеме 5 реагенты и условия являются следующими: a) Cbz-OSu, Et₃N, ТГФ, H₂O, КТ, 18 ч; (б) i. изо-BuOCOCl, Et₃N, ТГФ; ii. NaBH₄, H₂O; (в) периодинан Десса-Мартина, CH₂Cl₂; (г) изо-PrMgCl, бензоксазол, ТГФ, -20°С, 30 мин, затем 5-D, от -20°С до КТ; (д) NaBH ₄, NiCl₂, Boc₂O, МеОН, 0°С, (е) Н₂, (40 psi), 10% Pd/C, EtOH.

От 5-В до 5-Е: Это соединение получали из L-4-цианофенилаланина (5-А), используя способы, аналогичные описанным, для получения промежуточного соединения 2-В ссылочного соединения 2. Промежуточные соединения от 5-С до 5-Е получали способами, аналогичными описанным, для получения промежуточных соединений от 1-В до 1-D ссылочного соединения 1 соответственно.

5-F: Нитрил 5-Е (3,68 г, 8,64 ммоля) растворяли в метаноле (60 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли Вос₂О (3,77 г, 2 эквив.), затем NiCl₂ (210 мг, 0,1 эквив.). Смесь перемешивали и медленно небольшими порциями добавляли NaBH₄ (2,29 г, 7 эквив.). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Добавляли диэтилентриамин (0,94 мл, 1 эквив.) и смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин и затем растворитель упаривали в вакууме. Остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (2×100 мл). Раствор сушили MgSO₄ и растворитель упаривали в вакууме. Сырой материал очищали ускоренной хроматографией на силикагеле с помощью градиента 0-100% EtOAc и гексана с получением указанного в заголовке соединения в виде масла.

5-G: Это соединение получали из соединения 5-F способами, аналогичными способам, описанным для получения промежуточного соединения 1-Е ссылочного соединения 1.

Ссылочное соединение 6

Схема 6

6-В: (11)-Вос-нипекотиновую кислоту (2,50 г, 10,9 ммоля) и НОВt (1,77 г, 13,1 ммоля) растворяли в ДМФА (50 мл) и добавляли EDC (2,30 г, 12,0 ммолей). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и добавляли 30% водный раствор аммиака (2,8 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь затем разбавляли EtOAc (200 мл) и разделяли водой (100 мл). Органический слой промывали насыщенным водн. раствором NaHCO₃ (3×200 мл) и затем сушили MgSO ₄. Растворитель удаляли в вакууме с получением амида 6-В в виде воскоподобного твердого вещества.

6-С : Амид 6-В (2,40, 10,5 ммоля) растворяли в ТГФ (50 мл). Добавляли реагент Лавессона (2,64 г, 6,54 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Растворитель упаривали и сырой материал очищали хроматографией на силикагеле, используя градиент 0-5% МеОН в CH₂Cl₂ в качестве элюента. Растворитель упаривали с получением целевого тиоамида.

6-D: Тиоамид 6-С (1,27 г, 5,20 ммоля) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл). Добавляли этил-4-хлорацетоацетат (0,8 мл, 5,72 ммоля) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Растворитель удаляли в вакууме и сырой остаток затем растворяли в EtOH (50 мл). Добавляли активированные порошковые молекулярные сита (1,2 г) и реакционную смесь нагревали при кипении в течение 18 ч. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры и отфильтровывали через целит. Добавляли к отфильтрованному раствору насыщенный водн. раствор NaHCO₃ (50 мл) и затем экстрагировали EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили (MgSO ₄). Растворитель упаривали в вакууме и сырой материал очищали ускоренной хроматографией на силикагеле, используя градиент 0-100% EtOAc и гексана с получением тиазола 6-D.

Ссылочное соединение 6: LiOH·Н₂О (65 мг, 1,55 ммоля) растворяли в воде (5 мл) и добавляли по каплям к перемешиваемому раствору этилового эфира 6-D, растворенного в диоксане (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч и диоксан упаривали. Сырой остаток разделяли между EtOAc и 1М NaHSO₄; объединенные органические слои сушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме; и сырой материал очищали ВЭЖХ с обратной фазой (H₂O/MeCN подвижная фаза).

Ссылочное соединение 7

Схема 7

На приведенной выше схеме 7 реагенты и условия являются следующими: a) i. изо-BuOCOCl, Et₃ N, ТГФ; ii. NaBH₄, Н₂О; (б) трихлоризоциануровая кислота, TEMPO, от 0°С до КТ, CH₂Cl₂ , (в) триметиловый эфир Cbz- -фосфоноглицина, DBU, ДХМ; (г) Н₂ (60 psi), (S,S)-Me-BPE-Rh(COD)⁺OTf^-, МеОН, 96 ч; (д) LiOH, диоксан, вода; (е) i. изо-BuOCOCl, Et₃N, ТГФ; ii. NaBH₄, Н₂О; (ж) периодинан Десса-Мартина, CH₂Cl₂; (з) изо-PrMgCl, бензоксазол, ТГФ, -20°С, 30 мин, затем 7-G, от -20°С до КТ; (i) Н ₂, (40 psi), 10% Pd/C, EtOH.

7-А : Это соединение получали из транс-4-(трет-бутоксикарбониламинометил)циклогексанкарбоновой кислоты (7-А), используя способы, аналогичные способам, описанным для получения промежуточного соединения 1-В ссылочного соединения 1 на схеме 1.

7-В: Спирт 7-А (4,14 г, 17,0 ммолей) растворяли в CH₂Cl₂ (35 мл) и раствор охлаждали до 0°С. Добавляли трихлоризоциануровую кислоту (4,15 г, 17,8 ммоля), затем TEMPO (28 мг, 0,17 моля). Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Образовывался остаток, и реакционную смесь отфильтровывали через целит и промывали CH₂Cl₂. Объединенный раствор CH₂ Cl₂ (~100 мл) промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (2×50 мл), 1M HCl (2×50 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл), сушили (MgSO₄), и растворитель упаривали и использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

7-С : Триметиловый эфир N-бензилоксикарбонил- -фосфоноглицина (5,63 г, 17 ммоля) растворяли в CH ₂Cl₂ (35 мл); добавляли DBU (5,1 мл, 34 ммоля) и раствор перемешивали в течение 20 мин. По каплям добавляли альдегид 7-В (4,09 г, 17 ммоля) в виде раствора в CH₂ Cl₂ (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, затем растворитель упаривали и остаток растворяли в EtOAc (100 мл) и промывали 1М NaHSO₄ (2×50 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме. Сырой материал очищали ускоренной хроматографией, используя градиент 0-100% EtOAc/гексан с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества.

7-D: Олефин 7-С (2,04 г, 4,56 ммоля) растворяли в МеОН (100 мл) и раствор дегазировали до добавления катализатора, (-)-1,2-бис-((2S,3S)-2,5-диметилфосфоно)этан(циклооктадиен)родий(1)-трифторметансульфонат (28 мг, 1 мол.%). Реакционную смесь помещали в аппарат Парра и перемешивали при 60 psi в Н₂ в течение 4 суток. Растворитель затем упаривали в вакууме и сырой материал очищали ускоренной хроматографией, используя градиент 0-100% EtOAc/гексан, с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества.

7-Е: Метиловый эфир 7-D (1,81 г, 4,04 ммоля) растворяли в диоксане (50 мл) и перемешивали при 0°С. По каплям добавляли LiOH (203 мг, 4,84 ммоля), растворенный в воде (10 мл), и раствор затем нагревали до комнатной температуры. После исчезновения исходного материала (по данным LCMS), растворитель упаривали, и сырой материал растворяли в EtOAc (100 мл), промывали 1 N раствором NaHSO₄ (2×50 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл), и сушили (MgSO₄). Растворитель удаляли в вакууме и продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

От 7-F до 7-Н: Промежуточные соединения от 7-F до 7-Н получали способами, аналогичными способам, описанным для получения промежуточных соединений ссылочного соединения 1.

7-I: Это соединение получали из соединения 7-Н способами, аналогичными способам, описанным для получения промежуточного соединения 1-Е ссылочного соединения 1. MS m/z 404,2 (М+1); ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) d 7,66-7,64 (1Н, m), 7,49-7,47 (1H, m), 7,31-7,26 (2Н, m), 4,85-4,64 (1H, m), 3,44-3,16 (1Н, m), 2,96-2,88 (2Н, m), 1,80-1,55 (4Н, m), 1,39-1,14 (13Н, m), 0,89-O,72 (4Н, m).

Ссылочное соединение 8

Ссылочное соединение 8 получали из (S)-Вос-нипекотиновой кислоты способами, аналогичными способам, описанным для получения ссылочного соединения 6.

Ссылочное соединение 9

Ссылочное соединение 9 получали исходя из 3-цианофенилаланина способами, аналогичными способам, описанным для получения ссылочного соединения 5.

Ссылочное соединение 10

Ссылочное соединение 10 получали исходя из Вос-изонипекотиновой кислоты способами, аналогичными способам, описанным для получения ссылочного соединения 6.

Ссылочное соединение 11

Вос-изонипекотиновую кислоту (3,24 г, 14,1 ммоля), гидрохлорид метилового эфира DL-4-амино-3-гидроксибутановой кислоты (2,40 г, 14,1 ммоля) и DIEA (7,0 мл, 42,3 мл) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл). Добавляли HATU (5,9 г, 15,5 ммоля) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель упаривали и сырой остаток переносили в EtOAc (100 мл). Органическую фазу промывали 0,1 М HCl (2×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл), сушили MgSO ₄ и упаривали в вакууме. Сырой материал очищали ускоренной хроматографией на силикагеле (градиент EtOAc/гексан) с получением промежуточного соединения 11-В.

11-С: Спирт 11-В окисляли до кетона способом, аналогичным используемому для получения примера 1-F.

11-D: Кетон 11-С (1,10 г, 3,21 ммоля) растворяли в ТГФ (100 мл). Добавляли реагент Лавессона (650 мг, 1,61 ммоля), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Растворитель удаляли в вакууме, и сырой материал очищали ускоренной хроматографией на силикагеле (градиент EtOAc/гексан 0:100).

11: Метиловый эфир 11-D омыляли, используя способы, аналогичные способам получения ссылочного соединения 6.

Ссылочное соединение 12

Реагенты и условия в приведенной выше реакции ссылочного соединения 12 являются следующими: а) (циклогексилкарбонилокси)сукцинимид, пиридин, ДМАП, КТ, ТГФ; (б) 1 N NaOH в воде.

Этиловый эфир (4-аминофенил)уксусной кислоты (0,895 г, 5,0 ммолей) и N-(циклогексилкарбонилокси)сукцинимид (1,051 г, 5,0 ммолей) добавляли в круглодонную колбу, содержащую ТГФ (20 мл), пиридин (0,60 мл) и ДМАП (10 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор разбавляли EtOAc (200 мл), промывали 1N HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили MgSO₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением промежуточного соединения 12-В в виде белого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

Этиловый эфир 12-В (1,46 г, 5 ммолей) растворяли в 1N NaOH (15 мл, 15 ммолей). После исчезновения исходного материала (по данным LCMS) реакционную смесь подкисляли 1 N HCl с получением ссылочного соединения 12 в виде белого осадка.

Ссылочное соединение 13

Реагенты и условия в приведенной выше реакции ссылочного соединения 13 являются следующими: a) MeSO ₂Cl, пиридин, КТ, ТГФ; (б) 1 N NaOH в воде.

Этиловый эфир (3-аминофенил)уксусной кислоты (0,895 г, 5,0 ммолей) и (0,281 мл, 5,0 ммолей) добавляли в круглодонную колбу, содержащую ТГФ (20 мл) и пиридин (0,60 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор разбавляли EtOAc (200 мл), промывали 1N HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили MgSO₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением промежуточного соединения 13-В в виде белого твердого вещества. Этиловый эфир 13-В омыляли способами, аналогичными описанным для получения ссылочного соединения 12, с получением ссылочного соединения 13.

Ссылочное соединение 14

Реагенты и условия в приведенной выше реакции ссылочного соединения 14 являются следующими: а) СН ₃СОС1, пиридин, ДМАП, КТ, ТГФ; (б) 1 N NaOH в воде.

Этиловый эфир (3-аминофенил)уксусной кислоты (0,895 г, 5,0 ммолей) и ацетилхлорид (0,26 мл, 5,0 ммолей) добавляли в круглодонную колбу, содержащую ТГФ (20 мл), пиридин (0,60 мл) и ДМАП (10 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор разбавляли EtOAc (200 мл), промывали 1N HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили MgSO₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением промежуточного соединения 14-В в виде белого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки. Этиловый эфир 14-В омыляли способами, аналогичными описанным выше, с получением ссылочного соединения 14.

Ссылочное соединение 15

Реагенты и условия в приведенной выше реакции ссылочного соединения 15 являются следующими: a) EtNH ₂, CH₂Cl₂, ДМАП; (б) 1 N NaOH в воде.

20 Метиловый эфир (4-хлорсульфонилфенил)уксусной кислоты (0,895 г, 5,0 ммолей) и диэтиламин (1 мл) добавляли в круглодонную колбу, содержащую CH₂Cl₂ (20 мл) и ДМАП (10 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор разбавляли EtOAc (200 мл), промывали 1N HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (1×25 100 мл) и сушили MgSO₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением промежуточного соединения 15-В, которое очищали от реакционной смеси, используя колонку с силикагелем. Этиловый эфир 15-В омыляли способами, аналогичными описанным выше, с получением ссылочного соединения 15.

Ссылочное соединение 16

Реагенты и условия в приведенной выше реакции ссылочного соединения 16 являются следующими: a) 4-Cl-PhB(OH) ₂, C₂H₄Cl₂, Cu(OAc) ₂, пиридин, 4А молекулярные сита; (б) 1 N NaOH в воде.

Метиловый эфир (3-гидроксифенил)уксусной кислоты (0,268 г, 1,6 ммоля), 4-хлорфенилборную кислоту (755 мг, 4,84 ммоля), пиридин (0,388 мл, 4,8 ммоля) и ацетат меди(II) (477 мг, 2,4 ммоля) добавляли в круглодонную колбу, содержащую 1,2-дихлорэтан (10 мл), и 4Е молекулярные сита (300 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор разбавляли EtOAc (200 мл), промывали 1N HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили MgSO ₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением промежуточного соединения 16-В, которое очищали от реакционной смеси, используя колонку с силикагелем. Метиловый эфир 16-В омыляли способами, аналогичными описанным выше способам, с получением ссылочного соединения 16.

Пример 1

1-В: Тонкоизмельченный порошок КОН (35 г, 0,622 моля) растворяли в ДМСО и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин и затем охлаждали до 0°С. N-Cbz-транс-4-гидрокси-L-пролин (Cbz-Hyp-OH, 1-А) (10 г, 43,3 ммоля) растворяли в ДМСО (10 мл) и добавляли и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 10 мин при 0°С. Затем добавляли бромметилциклогексан (33 г, 0,204 моля) и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение дополнительных 15 минут, после чего ледяную баню удаляли, и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешиваться в течение 4 ч. Реакционную смесь выливали в воду (300 мл), и реакционный сосуд промывали дополнительным количеством воды (300 мл). Объединенные водные слои экстрагировали диэтиловым эфиром (2×300 мл) и выгружали. Водный слой подкисляли 87% Н₃РО₄ до значения рН 2,3 и затем экстрагировали диэтиловым эфиром (3×300 мл). Объединенные эфирные экстракты промывали водой (2×400 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (2×400 мл), сушили MgSO₄, отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле с получением соединения 1-В в виде прозрачного масла.

1-С: В сосуд объемом 40 мл загружали соединение 1-В (250 мг, 0,695 ммоля), ссылочное соединение 1-Е (243 мг, 0,695 ммоля, 1 эквив.), HATU (291 мг, 0,765 ммоля, 1,1 эквив.), iPr₂EtN (0,15 мл, 0,834 ммоля, 1,2 эквив.) и CH ₂Cl₂ (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Летучие реагенты удаляли при пониженном давлении, и реакционную смесь растворяли в EtOAc. Органические слои промывали NaHSO₄, водным насыщенным раствором NaHCO₃ и насыщенным раствором хлорида натрия. Органические слои затем сушили MgSO₄, и продукт очищали от реакционной смеси хроматографией на силикагеле с получением соединения 1-С, которое использовали для получения соединения 1-D.

1-D: В реакционный сосуд аппарата Парра загружали соединение 1-С (2,5 г, 3,6 ммоля), Pd/C (3,6 г, 0,36 ммоля, 1 эквив.), трет-ВиОН (20 мл) и воду (5 мл). Сосуд помещали в аппарат Парра и перемешивали в течение 18 ч под давлением 50 psi газообразного Н₂. Реакционную смесь отфильтровывали через слой целита с получением соединения 1-D, которое использовали непосредственно для получения соединения 1-Е.

1-Е: В сосуд объемом 40 мл загружали соединение 1-D (100 мг, 0,18 ммоля), 4-фенилбутановую кислоту (30 мг, 0,18 ммоля, 1 эквив.), HATU (75 мг, 0,20 ммоля, 1,1 эквив.), iPr₂ EtN (0,04 мл, 0,22 ммоля, 1,2 эквив.) и CH₂Cl ₂ (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Летучие реагенты удаляли при пониженном давлении, и реакционную смесь растворяли в EtOAc. Органические слои промывали NaHSO₄, водой, насыщенным раствором NaHCO₃ и насыщенным раствором хлорида натрия. Органические слои затем сушили MgSO₄, и продукт очищали от реакционной смеси хроматографией на силикагеле с получением соединения 1-Е, которое использовали для получения соединения 1-F.

1-F: Спирт 1-Е (127 мг, 0,18 ммоля) растворяли в ДХМ (2 мл) и добавляли периодинан Десса-Мартина (85 мг, 0,2 ммоля). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, и сырой продукт очищали ускоренной хроматографией (колонка с 4 г силикагеля), используя градиент EtOAc:гексан с получением кетона 1-F в виде белой пены, которую использовали для получения соединения 1-G.

1-G: Кетон 1-F (128 мг, 0,18 ммоля) растворяли в ДХМ (1 мл) и добавляли ТФУК 50% в ДХМ (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, и растворитель удаляли в вакууме. Сырой материал очищали ВЭЖХ с обратной фазой, и растворитель лиофилизовали с получением соединения 1-G в виде белого порошка.

Примеры 2-7

Пример 2 получали способами, аналогичными описанным в примере 1, используя 3-трет-бутоксикарбониламинопропионовую кислоту, с получением промежуточного соединения 2-Е.

Пример 3 получали способами, аналогичными описанным в примере 1, используя ссылочное соединение 13, с получением промежуточного соединения 3-Е.

Пример 4 получали способами, аналогичными описанным в примере 1, используя ссылочное соединение 14, с получением промежуточного соединения 4-Е.

Пример 5 получали способами, аналогичными описанным в примере 1, используя (4-этансульфониламинофенил)уксусную кислоту (полученную способом, аналогичным описанному для ссылочного соединения 13), с получением промежуточного соединения 5-Е.

Пример 6 получали способами, аналогичными описанным в примере 1, используя ссылочное соединение 12, с получением промежуточного соединения 6-Е.

Пример 7 получали способами, аналогичными описанным в примере 1, используя 4-(метансульфониламино)фенилуксусную кислоту с получением промежуточного соединения 7-Е.

Пример 8

8-В: транс-4-Гидроксипролин (Нур-ОН) (7,90 г, 60,1 ммоля) и N-(аллилохукарбонилокси)сукцинимид (12,0 г, 60,1 ммоля) добавляли в круглодонную колбу, содержащую ТГФ (220 мл), триэтиламин (21 мл, 150,3 ммоля) и воду (55 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор подкисляли 1N HCl (100 мл) и экстрагировали EtOAc (4×150 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили MgSO ₄. Растворитель упаривали в вакууме с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

8-С: Это соединение получали алкилированием соединения 8-В и 1-хлор-4-хлорметилбензола, используя способы, аналогичные способам, описанным для получения промежуточного соединения 1-В в примере 1.

8-D: Это соединение получали конденсацией HATU с соединением 8-С и ссылочным соединением 1-Е, используя способы, аналогичные способам, описанным для получения промежуточного соединения 1-С в примере 1.

8-Е: В круглодонную колбу объемом 50 мл загружали спирт 8-D (780 мг, 1,16 ммоля), Et ₂NH (1,8 мл, 17,43 ммоля, 15 эквив.), Pd₂(dba) ₃ (55 мг, 0,06 ммоля 0,05 эквив.), фосфиновый лиганд dppe (26 мг, 0,06 ммоля, 0,05 эквив.) и ТГФ (5 мл). Реагенты перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин и затем концентрировали досуха. Продукт (в виде смеси диастереомеров) очищали от реакционной смеси хроматографией на силикагеле, используя градиент 2-9% МеОН в CH₂Cl₂. Амин 8-Е затем использовали для получения соединения 8-F.

8-F: Следуя способам, аналогичным описанным для получения промежуточного соединения 1-Е в примере 1, соединение 8-F получали HATU конденсацией соединения 8-Е и (4-этансульфониламинофенил)уксусной кислоты (полученной способом, аналогичным описанному для получения 4-(метансульфониламино)фенилуксусной кислоты, которую получали способами, аналогичными описанным для получения ссылочного соединения 13).

8-G : Это соединение получали окислением соединения 8-F, используя способы, аналогичные описанным для получения промежуточного соединения 1-F в примере 1.

8-Н: Это соединение получали снятием защитных групп с соединения 8-G, используя способы, аналогичные описанным для получения примера 1.

Примеры 9-30

Пример 9 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя ссылочное соединение 15, с получением промежуточного соединения 9-F.

Пример 10 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (4-метоксифенил)уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 10-F.

Пример 11 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя пиридин-4-илуксусную кислоту с получением промежуточного соединения 11-F.

Пример 12 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (3-хлорфенил)уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 12-F.

Пример 13 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя [4-(морфолин-4-сульфонил)фенил]уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 13-F.

Пример 14 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (3,5-дихлорфенил)уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 14-F.

Пример 15 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (4-фенилфенил) уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 15-F.

Пример 16 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (2-хлорфенил)уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 16-F.

Пример 17 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (3-феноксифенил)уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 17-F.

Пример 18 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (2-фенилтиазол-4-ил)уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 18-F.

Пример 19 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя (4-фенилметансульфониламинофенил)уксусную кислоту (полученную аналогичный способам получения ссылочного соединения 13), с получением промежуточного соединения 19-F.

Пример 20 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя [4-(пиперидин-1-сульфонил)фенил]уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 20-F.

Пример 21 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя ссылочное соединение 16 [3-(4-хлорфенокси)фенил]уксусную кислоту, с получением промежуточного соединения 21-F.

Пример 22 получали способами, аналогичными описанным в примере 8, используя [4-(трифторэтансульфониламино)фенил]уксусную кислоту (способами, аналогичными описанным для ссылочного соединения 13), с получением промежуточного соединения 22-F.

Пример 23: Это соединение получали из 1-Вос-пиперидин-4-илпропионовой кислоты способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 24: Это соединение получали из N-Вос-4-пиперидин-4-илбутановой кислоты способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 25: Это соединение получали из 1-Вос-пиперидин-4-илуксусной кислоты способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 26: Это соединение получали из 1-Вос-пиперидин-3-илуксусной кислоты способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 27: Это соединение получали из 1-Вос-пиперидин-3-илпропионовой кислоты способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Примеры 28-30 получали способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 31

31-В: Тонкоизмельченный порошок КОН (19,4 г, 0,346 моля) растворяли в ДМСО и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин и затем охлаждали до 0°С. N-Вос-транс-4-гидрокси-L-пролин (Вос-Нур-ОН, 1-А) (10 г, 43,3 ммоля) растворяли в ДМСО (10 мл) и добавляли, и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 10 мин при 0°С. Затем добавляли 4-хлорбензилхлорид (33 г, 0,204 моля) и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение дополнительных 15 мин, после чего ледяную баню удаляли и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь выливали в воду (300 мл), и реакционный сосуд промывали дополнительным количеством воды (300 мл). Объединенные водные слои экстрагировали диэтиловым эфиром (2×300 мл) и отделяли. Водный слой подкисляли 87% Н₃РО₄ до значения рН 2,3 и затем экстрагировали диэтиловым эфиром (3×300 мл). Объединенные эфирные экстракты промывали водой (2×400 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (2×400 мл), сушили MgSO₄, отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле с помощью смеси EtOAc/гексан (градиент от 0 до 100%) с получением соединения 1-В в виде прозрачного масла. MS m/z 256,1 (М+1 - Boc); ¹H ЯМР (ДМСО-D₆, 400 МГц) 7,39-7,31 (4Н, m), 4,52-4,40 (2Н, m), 4,16-4,10 (2Н, m), 3,48-3,41 (2Н, m), 2,40-2,30 (1Н, m), 2,03-1,94 (1Н, m), 1,39-1,34 (9Н, m).

31-С: Раствор (триметилсилил)диазометана (2М в диэтиловом эфире) (4,7 мл, 9,45 ммоля) добавляли к карбоновой кислоте 1-В (2,4 г, 8,6 ммоля), растворенной в смеси ДХМ/МеОН (5:1, 25 мл). Когда исходный материал исчезал, что определяли по данным LCMS, реакционную смесь концентрировали в вакууме, и сырой остаток очищали ускоренной хроматографией (градиент EtOAc:гексан) с получением метилового эфира в виде прозрачного масла.

31-D: В круглодонную колбу помещали мешалку и соединение 1-С (510 мг, 1,38 ммоля). Добавляли ТФУК (50%) в ДХМ (6 мл) и раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, добавляли гексан и затем снова досуха упаривали в вакууме и повторяли при необходимости до азеотропы оставшейся ТФУК. Сырой материал использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

31-Е: Это соединение получали из соединения 31-D и коммерчески доступной {2-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-5-метил-1,3-тиазол-4-ил}уксусной кислоты, используя способы, аналогичные описанным для получения примера 1-Е.

31-F: Это соединение получали из соединения 31-Е омылением в соответствии со способами, описанными для получения ссылочного соединения 6.

31-G : Это соединение получали из соединения 31-F и ссылочного соединения 3, используя способы, аналогичные описанным для получения примера1-С.

31-Н: Это соединение получали из 31-G, используя способы, аналогичные описанным для получения примера 1-F.

31: Ссылочное соединение 31 получали из соединения 31-Н, используя способы, аналогичные описанным для получения примера 1-G.

Примеры 32-43

Пример 32 получали из ссылочного соединения 10 способами, аналогичными описанным для получения примера 31.

Пример 33 получали способами, аналогичными описанным для получения примера 31.

Пример 34 получали из ссылочного соединения 11 способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 35 получали из ссылочного соединения 8 способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 36 получали из ссылочного соединения 6 способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 37 получали из ссылочного соединения 2 способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 38 получали из ссылочного соединения 2 способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 39 получали из ссылочного соединения 2 способами, аналогичными описанным для получения примера 8.

Пример 40 получали из ссылочного соединения 5 и {2-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-5-метил-1,3-тиазол-4-ил}уксусной кислоты способами, аналогичными описанным в примере 8.

Пример 41 получали из ссылочного соединения 9 и {2-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-5-метил-1,3-тиазол-4-ил}уксусной кислоты способами, аналогичными описанным в примере 8.

Пример 42 получали из ссылочного соединения 7 и {2-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-5-метил-1,3-тиазол-4-ил}уксусной кислоты способами, аналогичными описанным в примере 8.

Пример 43 получали из ссылочного соединения 2 и {2-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]-5-метил-1,3-тиазол-4-ил}уксусной кислоты способами, аналогичными описанным в примере 8.

В таблице 1 показаны соединения формулы (1), как описано в примерах 1-42.

Примеры 51-53

Примеры 51-53 в таблице 2 представляют соединения по изобретению формулы (1), содержащие 3-алкил- или 3-арилзамещенные пролины, которые могут быть получены методиками, описанными в приведенных выше примерах, используя подходящие исходные материалы, известные специалисту в данной области техники.

Анализы

Приспособленность ингибитора протеазы, активирующей каналы, такого как ингибитор простазина, для лечения заболевания, опосредованного ингибированием протеазы, активирующей каналы, может быть протестирована определением ингибирующего действия ингибитора протеазы, активирующей каналы, на: (1) нативной, выделенной, очищенной или рекомбинантной протеазе, активирующей каналы, используя подходящий формат биологических испытаний, используя способ, описанный в статье Shipway и др.; Biochem. Biophys. Res. Commun., 2004; 324(2), cc.953-63); и/или (2) функции ионного канала/ионного транспорта в подходящих выделенных клетках или собранном эпителии, используя способы, описанные в статьях Bridges и др.; Am.J.Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2001; 281(1), cc.L16-23; и Donaldson и др.; J. Biol. Chem., 2002; 277(10), cc.8338-45.

Биохимические анализы

Рекомбинантный простазин и матриптазу человека и простазин морской свинки получали в соответствии со способами, описанными в статье Shipway и др., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2004; 324(2), cc.953-63. Рекомбинантные ферменты инкубировали в электролитном буфере, содержащем тестируемые соединения или носитель, в подходящей многолуночной планшете для анализа, такой как 96- или 384-луночная планшета. Через определенное время после смешения фермента с соединением или носителем в аналитическую смесь добавляли подходящий флуоресцентный пептидный субстрат. Когда субстрат расщеплялся активным ферментом, флуоресценция (измеренная с помощью подходящего флуоресцентного планшетного счетчика) повышалась, и может быть количественно определена скорость обращения субстрата (т.е. активность фермента) и, таким образом, ингибирующее действие любого тестируемого соединения. Эффективность тестируемых соединений выражали как концентрацию, которая вызывает 50% уменьшение активности фермента (K_i).

Обычно соединения по изобретению могут иметь значения K_i от 0,1 нМ до 5 мкМ. В некоторых примерах соединения по изобретению могут иметь значения K_i от 0,1 нМ до 500 нМ; от 0,1 нМ до 50 нМ; от 0,1 нМ до 5 нМ; или от 0,1 нМ до 0,5 нМ. В конкретных примерах соединения по изобретению могут иметь значения K _i от 0,1 нМ до 0,5 нМ; от 0,5 нМ до 5 нМ; от 5 нМ до 50 нМ; от 50 нМ до 500 нМ; или от 500 нМ до 5 мкМ. В других примерах соединения могут иметь значения К_i менее 0,1 нМ или более 5 мкМ.

Эпителиальный ионный транспорт

Бронхиальные эпителиальные клетки человека культурировали в соответствии со способами, описанными в статье Danahay и др., Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2002; 282(2), cc.L226-36. При нужной дифференциации (день 14-21 после установления верхней воздушной поверхности) эпителиальные клетки обрабатывали либо носителем, апротинином (200 мкг/мл), либо тестируемым соединением в течение 90 минут. Эпителий затем помещали внутрь, используя камеры, как описано в статье Danahay и др., Am.J.Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2002; 282(2), cc.L226-36, поддерживая концентрацию носителя, апротинина или тестируемого соединения на внешней стороне эпителия. Затем измеряли ток короткого замыкания (ISC) по фиксированию напряжения эпителия до нуля милливольт. Амилорид-чувствительный ISC затем измеряли добавлением амилорида (10 мкМ) на внешнюю поверхность эпителия. Активность тестируемого соединения выражали как концентрацию, вызывающую 50% ингибирование общего апротининчувствительного компонента амилоридчувствительного ISC.

Обычно соединения по изобретению могут иметь значения IC₅₀ от 1 нМ до 10 мкМ. В некоторых примерах соединения по изобретению могут иметь значения IC₅₀ от 1 нМ до 1 мкМ; или более конкретно от 1 нМ до 100 нМ. В других примерах соединения по изобретению могут иметь значения IC₅₀ от 100 нМ до 1 мкМ или от 1 мкМ до 10 мкМ. В других примерах соединения могут иметь значения IC₅₀ менее 1 нМ или более 10 мкМ.

Трахеальная разница потенциалов (in vivo)

Морских свинок анестезировали, используя ингаляционную анестезию короткого действия, такую как галотан и N₂O. В короткое действие анестезии пероральную иглу вставляли в трахею ротоглоточным способом. При помещении в трахею небольшой объем (50-200 мкл) носителя или тестируемого соединения, в подходящем водном разбавителе, вводили в легочные пути. Животные затем восстанавливались и не контролировались. Альтернативно, тестируемые соединения могут вводиться животным, используя аэрозоль или дозировку сухого порошка. В определенное время после введения дозы животных хирургически анестезировали, используя подходящую анестезию, такую как кетамин и ксилазин. Трахею затем открывали, и пластиковый агаровый мостиковый электрод встраивали в трахеальный просвет. Ссылочной электрон также встраивали в слои мышц шеи животного. Затем измеряли трахеальную разницу потенциалов, используя подходящий вольтметр высокого сопротивления, как описано в статье Takahashi и др., Toxicol Appl Pharmacol., 1995; 131(1), cc.31-6. Активность тестируемого соединения выражали как дозу, вызывающую 50% снижение чувствительного компонента трахеальной разницы потенциалов.

Следует понимать, что описанные здесь примеры и варианты осуществления являются только иллюстрирующими и что различные модификации или изменения в его смысле ясны специалисту в данной области техники и включены в сущность и содержание настоящей заявки и объем прилагаемой формулы изобретения. Все приведенные здесь публикации, патенты и заявки на патенты указаны здесь полностью в качестве ссылки.