способ улучшения репродуктивной функции у самок жвачных млекопитающих

Формула изобретения

1. Способ улучшения репродуктивной функции у самок жвачных млекопитающих, включающий скармливание самкам жвачных млекопитающих композиции, включающей сопряженные линолевые кислоты (CLA) цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 в количествах, эффективных для улучшения репродуктивной функции, в которой сопряженные линолевые кислоты состоят, по существу, из цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12, и которая включает от 1 до 15 г каждого изомера сопряженной линолевой кислоты.

2. Способ по п.1, в котором цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 изомеры CLA присутствуют в соотношении от 1:2 до 2:1.

3. Способ по п.1, в котором цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 изомеры CLA присутствуют в соотношении примерно 1:1.

4. Способ по п.1, в котором жвачное млекопитающее выбрано из группы, состоящей из коров, овец и коз.

5. Способ по п.4, в котором корова представляет собой мясную или молочную корову.

6. Способ по п.5, в котором корова представляет собой молочную корову и ей скармливают от 3 до 13 г/день каждого изомера.

7. Способ по п.6, в котором молочным коровам скармливают от 5 до 10 г/день каждого изомера.

8. Способ по п.1, в котором используют изомеры, защищенные от воздействия в рубце, где защиту от воздействия в рубце осуществляют способом, выбранным из группы, состоящей из инкапсулирования в липидных составах, защиты формальдегидом, защиты солями кальция и защиты за счет образования амидных связей.

9. Способ по п.1, в котором улучшенная репродуктивная функция выбрана из группы, состоящей из

(a) более короткого интервала между отелом и первой овуляцией;

(b) улучшенного сохранения беременности;

(c) повышенной эмбриональной выживаемости;

(d) повышенной вероятности беременности;

(e) более короткого периода времени, пока коровы не забеременеют; и

(f) уменьшения работ, связанных с оплодотворением.

10. Способ по п.9, в котором улучшенная репродуктивная функция выбрана из группы, состоящей из улучшенного сохранения беременности и повышенной эмбриональной выживаемости.

11. Способ по п.1, в котором скармливание CLA заканчивают примерно через 200 дней после отела.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение в целом относится к области фертильности млекопитающих, более конкретно обеспечивает композиции и способы улучшения плодовитости у лактирующих коров.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Издержки, связанные с низкой фертильностью крупного рогатого скота в США, оцениваются в 1 миллиард долларов в год. Для фермеров оказывается полезным синхронизировать эструс у таких животных, как крупный рогатый скот (как молочный, так и мясной), овцы, козы, лошади и т.п., если используется искусственное осеменение. В качестве примера, молочных коров следует оплодотворять раз в год для поддержки молочного цикла, при котором молоко вырабатывается в течение 10 месяцев с продолжительностью периодов покоя, в течение которых корова остается яловой, в два месяца. При заданной продолжительности беременности у молочной коровы задача состоит в том, чтобы оплодотворить корову в пределах 83 дней после отела. Эффективное управление молочным стадом, таким образом, требует, чтобы коровы поддерживались на пике фертильности, для обеспечения повторного осеменения, в течение 83 дней.

Таким образом, производители крупного рогатого скота и специалисты в области молочного животноводства ведут постоянный поиск пищевых добавок, обеспечивающих фертильность молочных коров. Жирные кислоты рыбьего жира стали основным объектом многочисленных исследовательских программ, старающихся воспользоваться их питательными и физиологическими свойствами. WO 99/66877 Amir et al. описывает использование омега-3 жирных кислот, получаемых из рыбьего жира, для повышения фертильности у животных, включая крупный рогатый скот. Среди омега-3 жирных кислот описаны эйкозапентаноевая кислота (ЕРА) и докозагексаноевая кислота (DHA).

WO 02/054886 Lanna et al. описывает улучшенную репродуктивную функцию у коров, которым скармливали одну дневную дозу 150 г/день кальциевых солей, содержащих 70% жирных кислот. Изомеры сопряженной линолевой кислоты (CLA) составляют 60% жирных кислот, содержащихся в кальциевых солях состава. Из всех изомеров CLA приблизительно 24% составляло цис/транс-9, -11, 35% составляло цис/транс-10, -12, 15% составляло цис/транс-8, -10, 17% составляло транс-11, транс-13, и оставшиеся 9% были другими. Зная концентрацию отдельных изомеров, расчет количеств цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 показывает, что доза, используемая в этой ссылке, составляла примерно 15 г цис-9, транс-11 и 22 г транс-10, цис-12 в день. Наблюдался улучшенный энергетический баланс, а также улучшенная репродуктивная функция. Всесторонние исследования установили, что технологии и осуществления на практике, которые вызывают улучшения в энергетическом балансе у коров в период ранней лактации, вызывают улучшения репродуктивной характеристики (Butler, Animal Science Occational Publication No 26 (Vol. 1): 133-145, 2001; Butler, Livest. Prod. Sci. 83: 211-218, 2003; Darwash et al. Animal Science 72: 539-546, 2001) и, действительно, Lanna et al. связывают наблюдаемое улучшение репродуктивной функции с улучшенным энергетическим балансом.

Bernal-Santos et al. (J. Dairy Sci., 86: 3218-3228, 2003) описывают введение одной дозы 30 г/день смеси CLA, включающей смесь различных изомеров. Авторы заключают, что не было отмечено отрицательных воздействий на зачатие и сохранение беременности. Однако авторы признают, что в связи с тем, что в их исследовании использовалось ограниченное число животных, они не могут дать определенных заключений, дополнительно, использование смеси CLA изомеров, по сравнению с выбранными изомерами, не дает авторам возможности связывать наблюдаемые эффекты с определенными изомерами.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение обеспечивает композиции и способ улучшения репродуктивной характеристики у млекопитающих. Настоящее изобретение основано на наблюдениях, что улучшенная репродуктивная характеристика наблюдалась у коров при использовании композиций, включающих определенные изомеры CLA.

Композиция включает смесь CLA с высоким содержанием двух изомеров: цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12. Для описанного улучшения репродуктивной функции не требуется содержания никаких других изомеров CLA в данной композиции в каком-либо значительном количестве. Также наблюдали диапазон доз для улучшения репродуктивной функции. Выше этого диапазона доз ожидается ослабление улучшения.

Таким образом, изобретение также описывает способ улучшения репродуктивной характеристики у млекопитающих. Способ включает скармливание млекопитающим, предпочтительно млекопитающим, у которых осуществляется искусственное осеменение, более предпочтительно коровам в период лактации, композиции, включающей два изомера CLA, цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12, в дозе 15 г/день или менее каждого изомера. В одном из вариантов осуществления два изомера цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 составляют по крайней мере 70% всех CLA, более предпочтительно по крайней мере 80% и еще более предпочтительно по крайней мере 90% всех CLA. Этот способ можно использовать для улучшения репродуктивной функции у млекопитающих, предпочтительно у крупного рогатого скота (мясного и молочного), овец, коз, лошадей, свиней, кроликов и собак.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фигура 1 представляет собой графическое изображение эффекта скармливания изомеров CLA цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 коровам в период лактации на число овуляций.

Фигура 2 представляет собой графическое изображение анализа жизнестойкого поддержания беременности у коров, которым скармливали две концентрации CLA, по сравнению с контролем.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изомеры сопряженной линолевой кислоты (CLA) представляют собой смесь позиционных и геометрических изомеров октадекадиеновой (линолевой) кислоты с сопряженными двойными связями. Существует 28 возможных изомеров CLA. Возможные изомеры включают имеющие двойные связи в положении 7 и 9, 8 и 10, 9 и 11, 10 и 12 или 11 и 13 и изомеры, которые имеют пары двойных связей в геометрической конфигурации цис-цис, транс-транс, цис-транс и транс-цис.

Данное изобретение основано на наблюдении, что смесь изомеров CLA, включающая по крайней мере два изомера, транс-10, цис-12 CLA и цис-9, транс-11 CLA в определенном диапазоне доз обеспечивает улучшение репродуктивной функции у молочных коров. Таким образом, данное изобретение обеспечивает диапазон дозировки двух изомеров CLA, которые при скармливании млекопитающим улучшают их репродуктивную функцию. Выше этого диапазона улучшающий эффект на репродуктивную функцию уменьшается. Более того, при концентрациях, пригодных для улучшения репродуктивной характеристики, ожидается, что не существует значительного эффекта на энергетический баланс.

Определение определенных изомеров, для которых наблюдается зависимое от дозы улучшение в репродуктивной функции, представляется важным, поскольку известно, что изомеры CLA иногда обладают различными или даже противоположными действиями. Например, транс-10, цис-12 CLA вызывает снижение количества молока и жирового тела, тогда как цис-9, транс-11 CLA не оказывает такого действия. Напротив, предполагают, что цис-9, транс-11 CLA улучшает эффективность кормления и рост у молодых грызунов (Pariza et al, 2001, Prog. Lipid Res., 40(4): 283-298).

Настоящее изобретение обеспечивает способы улучшения репродуктивной характеристики у млекопитающих. В предпочтительном варианте осуществления композиции включают преимущественно два CLA изомера цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 в таких количествах, что введение или скармливание CLA коровам приведет к дневной дозе менее чем 15 г/день для каждого изомера. В различных вариантах осуществления цис-9, транс-11 и транс-10, цис-9 изомеры могут составлять более чем 70, 80 или 90% CLA. В одном из вариантов осуществления в композициях процентное содержание 11, 13 изомеров, 8, 10 изомеров и двойных транс-изомеров составляет менее одного процента. В предпочтительном варианте осуществления соотношение двух изомеров, цис-9, транс-11 и транс-10, цис-9 составляет в диапазоне от 1:5 до 5:1. В более предпочтительном варианте осуществления соотношение составляет в диапазоне от 1:2 до 2:1 и в еще более предпочтительном варианте осуществления соотношение составляет примерно 1:1. Получение таких композиций описано в патенте США № 6015833, включенном в описание в качестве ссылки. В одном из вариантов осуществления композицию скармливают коровам таким образом, что вводят дозу каждого изомера 1-15, предпочтительно 2-14, более предпочтительно 3-13, более предпочтительно 4-12 и особенно предпочтительно 5-10 г/день. В еще более предпочтительном варианте осуществления дневная доза каждого изомера составляет 6-14, предпочтительно 7-13, более предпочтительно 8-12 г/день.

Способ по настоящему изобретению включает обеспечение композиции, включающей преимущественно цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 изомеры и скармливание CLA композиции млекопитающим (включая, но не ограничиваясь перечисленным, собак, лошадей, свиней и кроликов), предпочтительно жвачным, таким как коровы, овцы или козы, более предпочтительно жвачным в период лактации, таким как молочные коровы или мясные коровы. Животные получают корм, содержащий описанные выше сопряженные линолевые кислоты, в концентрациях, таких, что при скармливании корма коровам репродуктивная функция животных увеличивается, предпочтительно в концентрациях в диапазоне 6-14, предпочтительно 7-13, более предпочтительно 8-12 г/день для каждого изомера.

Под улучшенной репродуктивной функцией или улучшенной фертильностью подразумевают, что улучшение проявляется в одном или нескольких из перечисленного: интервал между отелом и первой овуляцией, улучшение сохранения беременности, повышенная эмбриональная выживаемость или процентное содержание забеременевших млекопитающих женского пола, преимущественно коров, в стаде, период (промежуток) времени пока млекопитающее не забеременеет, уменьшение работ, связанных с оплодотворением, и жизнеспособность ранних эмбрионов.

Для жвачных CLA композиции можно доставлять инфузией непосредственно в сычуг, таким образом избегая бактериальной ферментации в рубце. Однако в коммерческой практике это практически неосуществимо, так что пищевые добавки CLA должны быть составлены таким образом, чтобы они были защищены с целью минимизации их метаболизма бактериями рубца и могли проходить непосредственно в сычуг. Доступные в настоящее время способы защиты в рубце для минимизации метаболизма бактериями рубца включают инкапсулирование в липидно-белковые матрицы или в нерастворимые в воде липиды, обработку формальдегидом, образование солей кальция и связывание амидными связями.

Защита формальдегидом инкапсулирует липид в белковый матрикс и за счет поперечных связей, образующихся между формальдегидом и белком, которые придают устойчивость к микробной атаке в рубце (Scott and Cook, 1975, pp.510-523 в Digestion and Metabolism in the Ruminant. I.W. McDonald and A.C. I. Warner, ed. The University of New England Publishing Unit, Sydney, Australia). Механизм, посредством которого соли кальция обеспечивают «защиту», относится к смертности комплекса кальций - жирная кислота при пищеварении в рубце; не похоже, чтобы это было связано с защитой от биогидрогенизации в рубце. Микроинкапсулирование представляет собой способ защиты на основе липидов, при котором или активный ингредиент внедряют в липидный матрикс, или получают небольшие сферы питательного вещества, которые инкапсулируют (Wu and Papas, 1997, Advanced Drug Delivery Reviews, 28: 323-334).

Ряд недавних исследований показал, что все четыре упомянутых выше способа обеспечивают защиту CLA при скармливании молочным коровам в период лактации и были эффективными для уменьшения количества вырабатываемого жирного молока, обычно связываемого с понижением жирности молока (MFD) (Bernal-Santos, 2003, Moore et al., 2004, J. Dairy Sci. 87: 1886-1895; и Perfield et al., 2004, J. Dairy Sci. 87: 3010-3016). В общем, наблюдалось, что уровень защиты при использовании солей кальция или липидного инкапсулирования был сходным. Определение уровня защиты при использовании других способов можно проводить при использовании обычных способов и находится вполне в пределах компетентности специалистов в данной области техники.

Коммерчески доступный тип рубцовой защиты, используемый для добавок, представляет собой инкапсулированный липидом CLA (BASF, Ludwigshafen, Germany; Balchem Encapsulates, USA).

Настоящий способ может быть использован для улучшения репродуктивной характеристики у млекопитающих, включая жвачных, таких как коровы (включая мясной и молочный крупный рогатый скот), козы и овцы. Хотя характерные примеры и дозы представлены по отношению к коровам, специалистам в данной области техники будет очевидно, что на основе приведенной здесь информации могут быть легко определены приемлемые дозы для других жвачных, а также для других млекопитающих.

Скармливание CLA композиции млекопитающим можно начинать перед отелом или в момент отела и можно продолжать в течение по крайней мере периода в диапазоне от 50 до 75, предпочтительно в течение по крайней мере периода от 76 до 100, более предпочтительно от 101 до 125, особенно предпочтительно от 126 до 150, наиболее предпочтительно от 151 до 200 дней после отела. Однако терапию можно продолжать после 200 дней после отела. Например, скармливание CLA можно начинать около 2 недель перед отелом. Хотя предпочтительно, чтобы молочным коровам скармливали композицию ежедневно, таким образом, чтобы животное получало дозу 1-15 г/день каждого из цис-9, транс-11 CLA и транс-10, цис-12 CLA, специалистам в данной области техники будет понятно, что схема скармливания включает моменты, в которые композицию непреднамеренно или намеренно (как по причине временного медицинского состояния) исключают из дневного рациона на короткий период времени, в ходе периода применения. Предпочтительно, чтобы такой перерыв в применении CLA не превышал 14 последовательных дней и более предпочтительно, чтобы он не превышал 7 последовательных дней.

Несмотря на то что настоящее изобретение проиллюстрировано при помощи последующих примеров, примеры имеют значение только для иллюстрации определенных вариантов осуществления настоящего изобретения и никаким образом не имеют ограничивающего значения.

ПРИМЕР 1

Данный пример описывает эффект смеси изомеров CLA, вводимых в две дозы на репродуктивную характеристику у коров. Все процедуры, касающиеся животных, были одобрены Комитетом Корнельского Университета по Попечению и Использованию животных в условиях стационара (Cornell University Institutional Animal Care and Use Comitee). Неоднократно рожавших коров гольштинской породы (n=48) из Корнельского университета (Cornell University Dairy teaching and research facility) отбирали по способности к деторождению и по 305-дневной зрелой эквивалентной удойности при предыдущей лактации и распределяли случайным образом по группам в одну из следующих 3 диетотерапий: 1) контроль, состоящий в 271 г/д Ca солей дистиллята пальмовых жирных кислот (EnerGII; Bioproducts Inc., Fairlawn, OH); 2) сопряженная линолевая кислота в дозе 1 (CLA-1), состоящая из 147 г/день Ca солей смешанных изомеров CLA (Bioproduct Inc.) и 136 г/день Ca солей дистиллята пальмовых жирных кислот; или 3) сопряженная линолевая кислота в дозе 2 (CLA-2), состоящая из 295 г/день Ca солей смешанных изомеров CLA. Вес коров гольштинской породы в период лактации обычно составлял от 500 до 700 кг.

Добавки Са солей дистиллята пальмовых жирных кислот и Са солей CLA содержали 85 и 78% жира, соответственно. Указанные 3 добавки обеспечивали одинаковое потребление жира (230 г/день) и наносились один раз в день на общие смешанные рационы (TMR) с 21 дня перед ожидаемым днем отела до 63 дня выработки молока (DIM). CLA-1 и CLA-2 терапии обеспечивали 31,6 и 63,2 г/день CLA изомеров, соответственно. 4 преобладающих CLA изомера в добавках представляли собой транс-8, цис-10 (21,2%), цис-9, транс-11 (21,8%), транс-10, цис -12 (29,0%) и цис-11, транс-13 (28,0%). Таким образом, CLA-1 обеспечивала 6,8 г/день цис-9, транс-11 CLA и 9,2 г/день транс-10, цис-12 CLA, тогда как CLA-2 обеспечивала в 2 раза большие количества. Преобладающие жирные кислоты в Са солях дистиллята жирных кислот представляли собой пальмитиновую (42,6%), олеиновую (40,6%) и линолевые кислоты (10,1%).

Коров содержали в стойлах на привязи и кормили без ограничения, позволяя оставаться около 10%. Индивидуальное потребление пищи регистрировали с 14-го дня перед ожидаемым сроком отела до 63 дня DIM. В ходе периода после терапии (с 64 по 126 DIM) коров разбивали на группы вне зависимости от полученной терапии и кормили обычным рационом. Вода и минеральные блоки были доступны в течение всего периода исследований. Вес тела и показатель состояния животного (BCS) (по 5-бальной системе; Wildman et al., 1982, J. Dairy Sci., 65: 495-501) регистрировали один раз в неделю после утренней дойки. После отела коров доили 3×/день и регистрировали вес молока. Образцы молока от каждой коровы отбирали 1 день в неделю и составляли композит на основании пропорции ежедневного выхода. Композитные образцы молока хранили при 4°С с консервантом (таблетка бронопола; D&F Control System, San Ramon, CA) до момента анализа на жирность, стабильный белок и лактозу (Dairy One Cooperative Inc.) при использовании аналитических и калибрационных способов, описанных Bernal-Santos Et Al. (2003). Дополнительные аликвоты молока отбирали и составляли композит в течение с 1 по 6 неделю после родов. Указанный композит немедленно замораживали и хранили при -20°С до анализа на жирные кислоты. Образцы крови отбирали на 10 и 5 день до родов, 3×/неделю в течение первых 11 недель лактации и один раз в неделю с 12 по 18 неделю после родов. Кровь (10 мл) получали за счет пункции хвостовой вены и собирали в пробирки под вакуумом (Becton Dickinson Vacutainer Systems, Franklin Lakes, NJ), содержащие натрия гепарин (100 Е/мл крови). Плазму собирали в течение 20 минут после отбора центрифугированием (2800 × g в течение 15 мин при 4°С) и хранили при -20°С до анализа на метаболиты и гормоны. Образцы печени получали подкожной трокарной биопсией (Veenhuizen et al., 1991, J. Dairy Sci., 74: 4238-4253) на 2±1 д и на 21±1 д после родов (среднее ± среднеквадратическое отклонение (SD)). Образцы печени немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С до анализа на содержание триглицеридов. Эструс синхронизировали внутримышечной инъекцией 100 мг аналога GnRH (Цисторелин; Abbott Laboratories, North Chicago, IL) на 70±3 д (среднее ± среднеквадратическое отклонение (SD)) после родов; через 7 дней коровы получали инъекцию 30 мг аналога PGF2 (Лутализ; Pharmacia & Upjohn, Kalamazoo, MI); через 48 часов они получали инъекцию 100 мг GnRH и их осеменяли через от 4 до 8 часов. Беременность определяли ректальной пальпацией на 42 день после осеменения. После экспериментального периода (>126 DIM) не беременных коров повторно синхронизировали или осеменяли после визуального определения эструса; если зачатие происходило до 185 дня после родов, его регистрировали и использовали для статистического анализа.

Всего 46 из 48 коров завершило период терапии. По одной корове из каждой группы CLA терапии исключили по причинам, связанным со здоровьем (хронический ламинит). Дополнительно, 2 коровы из CLA-1 группы терапии завершили период терапии, но не прошли период после терапии из-за хронического ламинита и смерти, вызванной респираторным осложнением.

Концентрацию прогестерона и эстрадиола в плазме определяли радиоиммунологическим анализом (Elrod and Buttler, 1993, J. Animal. Sci., 71: 694-701; Beam and Butler, 1997, Biol. Reprod., 56: 133-142). Прогестерон определяли в образцах плазмы, полученных 3×/неделю в течение первых одиннадцати недель лактации, тогда как эстрадиол определяли в образцах плазмы, первых трех недель после родов. Овуляцию определяли на основе временной модели и концентрации прогестерона в плазме, согласно критериям, описанным Butler et al. (1981). Результаты исследования представлены в таблице 1. Среднее и медиана дней первой овуляции были ниже для коров, подкармливаемых CLA-1 ( P = 0,05). Пропорция коров, забеременевших ранее 185 дней, различалась между методами терапии (P = 0,07), с наибольшей величиной, наблюдаемой для группы CLA-1. Процент коров, забеременевших ранее 126 DIM, двух CLA групп был сходным (31,1 и 33,3%) и количественно больше, чем контрольной группы (18,7%). Как показано в анализе на выживаемость (Фигура 2), CLA-1 доза значительно увеличивала процент коров, беременных в интервале после 135 дня после родов. Эти результаты предполагают, что CLA-1 добавка понижает смертность эмбрионов, приводя, таким образом, к заметному улучшению коэффициента выживаемости при беременности.

Таблица 1 Данные по репродуктивной характеристики для Примера 1
	Терапия1
Переменная	Контроль	CLA-1	CLA-1	Р-величина
Дней до первой овуляции
Среднее	32,6	27,3	41,4	0,05
Медиана	34,0ab	21,5b	41,3a	0,05
Дней до беременности
Среднее2	160	135	151	0,81
Медиана3	146	137	124	0,54
Овуляция перед синхронизацией4,5	1,6	1,7	1,5	0,63
Коровы, беременные до 126 DIM, %	18,7	31,3	33,3	0,63
Коровы, беременные до 185 DIM, %	43,7	81,3	53,3	0,07
Процедур по осеменению	2,5	2,2	2,0	0,57
Пропорция коров с эстроген-активными фолликулами в течение первых 21 DIM 6, %	73,3	57,1	60,0	0,63
Пропорция коров с овуляцией в течение первых 21 DIM, %	18,8	46,7	7,1	0,63
Пик прогестерона при первой овуляции нг/дл	7,7	6,5	6,8	0,58
1 Коровы получали в рационе жировую добавку, состоящую из Са солей дистиллята пальмовых жирных кислот (271 г/день) (контрольная терапия), Са соли смеси изомеров сопряженных жирных кислот (147 г/день, содержащих 32 г/день CLA изомеров; 9 г/день CLA транс -10, цис-12) плюс дистиллят пальмовых жирных кислот (136 г/день) (CLA-1), или Са солей смеси изомеров сопряженных жирных кислот (295 г/день, содержащих 63 г/день CLA изомеров; 18 г/день CLA транс-10, цис-12)(CLA-2). 2 Беременности, зарегистрированные до 185 дней после родов. 3 Коров удаляли, если они не беременели ранее 185 дней после родов (3 из CLA-1 группы, 5 из CLA-2 группы и 8 из группы контроля). 4 Синхронизация производилась на 67 день после родов. 5 Овуляцию определяли, когда уровни прогестерона в плазме составляли выше 0,5 нг/мл в крайней мере 5 последовательных образцах и превышали 2 нг/мл для по крайней мере двух последовательных образцов. 6 Фолликулярную активность в течение первого 21 дня после родов принимали, если уровень эстрогена > 2 пг/мл.

Сходный эффект наблюдали, когда коров кормили композицией, в которой два изомера - цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 составляли более чем 90% общей CLA.

ПРИМЕР 2

Данный пример описывает эффект двух CLA изомеров на репродуктивную функцию и устанавливает критическую дозу для наблюдаемого улучшения репродуктивной функции. При использовании различных доз двух изомеров наблюдали зависимый от дозы эффект на репродуктивную функцию. Эффекты защищенной от воздействия в рубце CLA на репродуктивную характеристику изучали при использовании 4 доз защищенных от воздействия в рубце CLA добавок (BASF, Ludwigshafen, Germany), содержащих преимущественно изомеры цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12. Тип защиты от воздействия в рубце, используемый для добавки, представлял собой липидную инкапсуляцию, коммерчески доступную от Balchem Encapsulates, New Hampton, NY. CLA добавка содержала 10% каждого из цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 CLA изомеров (всего 20%) и четыре терапевтических уровня, обеспечивающие 0, 5, 10 и 15 г/день каждого CLA изомера. Добавку скармливали раз в день, нанося сверху на основной корм (свободно скармливаемый) коровам, получающим дополнительную концентрированную добавку. Эксперимент начинали в момент отела и пищевые добавки продолжали, пока у всех коров не наблюдалась лактация в течение 91 дня. Животных также наблюдали после периода терапии, так что можно было полностью определить эффект CLA терапии на репродуктивные индексы.

Репродуктивную характеристику оценивали, как описано в Примере 1. Результаты показывают, что CLA терапия улучшила абсолютный коэффициент осеменения (Р = 0,03) и уменьшила среднее число дней до беременности (Р = 0,07) (Таблица 2). Наблюдаемый эффект представлял собой квадратический ответ на дозу. Квадратическая зависимость показывает, что в то время как доза CLA увеличивается, улучшается репродуктивная характеристика, но если доза увеличивается свыше определенного уровня, положительный эффект на репродуктивную функцию уменьшается. Квадратическая зависимость также показывает, что хотя для высоких CLA иногда репродуктивная характеристика кажется лучшей по сравнению с контролем (численно), на самом деле характеристика при этой высокой дозе уменьшается. Это позволяет определить диапазон доз для улучшения репродуктивной характеристики. Таким образом наилучшее улучшение в репродуктивной характеристике происходит при низких и средних дозах (5 и 10 г/день каждого из CLA изомеров). Дополнительно, наблюдается уменьшение числа процедур по осеменению (таблица 2) и меньшее число овуляций на корову (рассчитанной как число циклов эструса перед наступлением беременности; Фигура 1) при низких и средних уровнях дозировки, однако при высоком уровне терапии (15 г/день каждого из CLA изомеров) наблюдали тенденцию к уменьшению эффекта. Сходным с примером 1 образом, характер репродуктивных переменных показывает, что эмбриональная выживаемость улучшена по сравнению с низкими и средними дозами CLA.

Таблица 2 Репродуктивная характеристика коров, получающих четыре дозы CLA
	Терапия	Р
Контроль	Низкая CLA	Средняя CLA	Высокая CLA	квадратичная
Процедуры по осеменению	2,1	1,7	1,5	2,0	0,25
Дней до беременности, медиана	136	110	92	100	0,07
Коэффициент осеменения, %	64	87	100	80	0,03

Данные результаты показывают, что CLA добавка, которую скармливают для обеспечения цис-9, транс-11 и транс-10, цис-12 CLA доз в диапазоне 5-15 г/день (каждого изомера), будет улучшать репродуктивную характеристику. При дозах выше указанного диапазона ( 15 г/день каждого изомера) благоприятный эффект на репродуктивную характеристику может уменьшаться.

Целью представленного выше описания определенных вариантов осуществления изобретения является иллюстрация и его не следует истолковывать как ограничивающее. Из указаний настоящего изобретения специалисты в данной области техники поймут, что можно совершать различные модификации и изменения без отхода от области применения данного изобретения.