способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней
Классы МПК: | A61K39/40 бактериальные |
Автор(ы): | Школьников Ефим Эмануилович (RU), Коломнина Галина Федоровна (RU), Самуйленко Анатолий Яковлевич (RU), Гринь Светлана Анатольевна (RU), Шегидевич Эдуард Алиевич (RU), Ставцева Лилия Яковлевна (RU), Сидоров Михаил Анисимович (RU), Скородумов Дмитрий Иванович (RU), Панин Александр Николаевич (RU), Малик Евгений Васильевич (RU), Крыжановская Елена Викторовна (RU), Чулков Алексей Константинович (RU) |
Патентообладатель(и): | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2007-06-26 публикация патента:
10.06.2009 |
Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida серовариантов А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II, Streptococcus suis серовара II (штамм Касли), грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта. При этом в качестве продуцентов используют волов, а гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных тел с интервалом 2-3 дня. Грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных тел, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Способ нетрудоемок, прост в исполнении, позволяет увеличить выход сыворотки в 3,2-3,5 раза. 2 табл.
Формула изобретения
Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida серовариантов А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II, Streptococcus suis серовара II (штамм Касли), грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют волов, при этом гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных тел с интервалом 2-3 дня, а грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных тел, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см 3 гидроокиси алюминия.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней. Известен способ изготовления гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, получаемой от продуцентов свиней (RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 - прототип).
Однако данный способ экономически нецелесообразен, т.к. срок эксплуатации свиней составляет 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Кроме того, процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Целесообразно использовать в качестве продуцентов волов, срок эксплуатации которых не менее 5 лет.
Технический результат заявляемого изобретения состоит в повышении выхода целевого продукта и упрощении способа, а также применении препарата одновременно против трех заболеваний.
Указанный технический результат предлагаемого способа достигается тем, что для создания грундиммунитета волам (не более один раз в пять лет) двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированные и концентрированные гемофилезный, стрептококковый и пастереллезный антигены: сначала по 10-15 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см3 Al(ОН)3, а через 14 дней - по 20-25 млрд м.т.
Гипериммунизацию волов проводят 7-10-внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах инактивированных и концентрированных антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общей дозе каждого антигена 1800-2400 млрд микробных тел с интервалом 2-3 дня.
В процессе эксплуатации после каждого взятия крови (16-17 см3 крови на 1 кг массы тела) через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного гемофилезного, стрептококкового и пастереллезного антигенов в дозе по 400-500 млрд м.т каждого, а через 8-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь.
Способ осуществляют следующим образом.
Пример 1. Гипериммунизацию волов проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного и концентрированного гемофилезного, стрептококкового и пастереллезного антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общем количестве 2400 млрд м.т каждого антигена с интервалом 2-3 дня по схеме:
40-60-100-150-250-350-450 - 2-недельный перерыв - 200-300-500 млрд м.т.
Результаты определения активности
Титры полученной сыворотки составили:
контроль (прототип) | ||
к Pasteurella multocida | А 1:128 | 1:128 |
реакция пассивной | В 1:512 | 1:512 |
гемагглютинации (РПГА) | Д 1:128 | 1:128 |
Haemophilus pleuropneumoniae 5870 | 1:320 | 1:320 |
Реакция агглютинации (PA) ГУ-19 | 1:640 | 1:640 |
Streptococcus suis Касли | ||
Реакция агглютинации (РА) | 1:200 | 1:200 |
Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и дозы антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций в общем количестве 3000 млрд м.т каждого антигена по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 - 2-недельный перерыв - 200-300-500-600 млрд м.т.
Результаты определения активности
Титры получаемой сыворотки составили:
Контроль (прототип) | |||
к P.multocida | A | 1:128 | 1:128 |
РПГА | В | 1:512 | 1:512 |
Д | 1:128 | 1:128 | |
H.pleuropneumoniae 5870 | 1:320 | 1:320 | |
РА | ГУ-19 | 1:640 | 1:640 |
Str. Suis (PA) | 1:200 | 1:200 |
Увеличение числа инъекций больше 10 и общего количества антигенов больше 2400 млрд м.т не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и не выгодно с экономической точки зрения.
Пример 3. Уменьшили количество инъекций до 7 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1800 млрд м.т:
40-60-100-200-300-500-600 млрд. м.т.
Титры полученной сыворотки составили:
Контроль (прототип) | |||
к P.multocida | A | 1:128 | 1:128 |
РПГА | В | 1:512 | 1:512 |
Д | 1:128 | 1:128 | |
H.pleuropneumoniae | 5870 | 1:320 | 1:320 |
PA | ГУ-19 | 1:640 | 1:640 |
Str. Suis (PA) | 1:200 | 1:200 |
Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества антигенов до 1800 млрд м.т не привело к снижению титра антител в сыворотке.
Пример 4. Уменьшили количество инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т по схеме:
40-60-150-250-350-450 млрд м.т.
Титры полученной сыворотки составили:
Контроль (прототип) | |||
к P.multocida | A | 1:64 | 1:128 |
РПГА | В | 1:256 | 1:512 |
Д | 1:64 | 1:128 | |
H.pleuropneumonie | 5870 | 1:160 | 1:320 |
PA | ГУ-19 | 1:320 | 1:640 |
Str. Suis (PA) | 1:100 | 1:200 |
Уменьшение числа инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т каждого антигена привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.
Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях.
Предложенный способ в отличие от известного обладает следующими преимуществами:
1. Увеличивается выход сыворотки в 3,2-3,5 раза (табл.2).
Таблица 2 | |||
Вид продуцента | Вес, | Кол-во крови с 1 кг живого веса | Выход, |
(кг) | животного, | (мл) | |
(мл) | |||
свиньи | 150-160 | 13 | 1950-2080 |
волы | 400-450 | 16 | 6400-7200 |
2. Более прост в исполнении и менее трудоемок.
Срок эксплуатации свиней 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Напротив, срок эксплуатации волов не менее 5 лет.
Отсюда вытекает, что грунд- и гипериммунизация свиней проводится раз в 5-6 месяцев, в то время как волов - раз в 5 лет.
3. Более экономически целесообразен, что вытекает из пунктов 1 и 2. Кроме того, данная сыворотка может использоваться для лечения и профилактики гемофилеза, стретококкоза и пастереллеза одновременно.