способ моделирования хронической токсической гепатопатии

Формула изобретения

Способ моделирования хронической токсической гепатопатии, включающий введение химического вещества экспериментальным животным, отличающийся тем, что в качестве токсического вещества используют 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле, вводимый через зонд в желудок ежедневно однократно в течение трех недель в дозе 5 мг на 100 г массы тела.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно экспериментальной токсикологии, фармакологии, и может быть использовано при изучении хронических токсических поражений печени и в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов.

Задача, решаемая данным изобретением, - это создание модели хронической гепатопатии.

Наиболее близким по совокупности признаков к заявленному изобретению является способ моделирования токсического гепатита (см. а.с. №1469516, кл. G09В 23/28, БИ №12. 30.03.89 г.) путем подкожного введения 50%-ного масляного раствора четыреххлористого углерода на оливковом масле из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного. Инъекции производили каждый 4-й день в течение 8 недель, всего 14 инъекций.

Известный способ не является физиологичным, так как многократное подкожное введение масляного раствора химического вещества вызывает некробиотические изменения на месте введения и очень медленно достигает органа - мишени. Кроме того, способ моделирования является продолжительным и длится 8 недель.

Техническим результатом изобретения является безопасное воспроизведение патологии, сокращение сроков моделирования и приближение к клиническому течению хронического процесса в печени за счет развития структурных и функциональных изменений в гепатоцитах при действии химического вещества.

Технический результат достигается тем, что в желудок лабораторного животного через зонд ежедневно однократно в течение трех недель вводят 50% раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле в дозе 5 мг на 100 г массы тела.

Повышение воспроизводимости и формирования хронического патологического процесса в печени достигается за счет использования производного фенола - 2,4-дихлорфенола, являющегося приоритетным загрязнителем окружающей среды (см. Доклад Рабочей группы ВОЗ. Токсикологическая оценка галогенированных ароматических соединений в связи с загрязнением подземных вод. Европейское региональное бюро ВОЗ. Копенгаген. 1981. - С.28-30; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления. Руководство для врачей. - М.: Медицина, 2000. - С.215-217).

Способ моделирования позволяет изучить патологию в динамике развития, выявленные нарушения функций печени у животных идентичны с изменениями в печени больных хроническим токсическим гепатитом.

Экспериментальная хроническая токсическая гепатопатия (ХТГ) подтверждена биохимическими и морфогистохимическими показателями.

Способ осуществляется следующим образом.

Лабораторному животному ежедневно однократно в течение трех недель через зонд в желудок вводят 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле в дозе 5 мг на 100 г массы тела.

Готовят 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле из расчета 1 часть 2,4-дихлорфенола и 2 части оливкового масла, перемешивают и вводят через зонд в желудок лабораторным животным.

ПРИМЕР. Крысе, 200 г, 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле вводится ежедневно однократно в течение трех недель в дозе 5 мг на 100 г массы тела. Гибель животных в течение эксперимента не установлена. Сравнение и оценка полученных данных (показателей: поведенческих реакций, биохимических, морфологических, гистохимических) во время эксперимента проводили до и после моделирования. После трех недельного введения 2,4 дихлорфенола отмечены изменения показателей поведенческих реакций. Так после моделирования уменьшилось количество пересеченных квадратов на 58% и число заглядываний «норковый рефлекс» на 61,5% по сравнению с данными, полученными до моделирования (см. табл.1).

Таблица 1 Показатели поведенческих реакций
Показатели	До моделирования ХТГ	После моделирования
Открытое поле, кол-во пересеченных квадратов за 2 мин	9,5	ХТГ 5,5
«Норковый рефлекс», кол-во заглядываний за 2 мин	6,5	4,0

По истечении трех недель проведена декапитация животного под легким эфирным наркозом. Экспериментальная хроническая токсическая гепатопатия подтверждена изменениями биохимических, морфологических и гистохимических показателей (см. табл.2-4).

В сыворотке крови выявлено повышение активности основных ферментов - индикаторов цитолитического синдрома: аланинаминотрансферазы (на 79,1%), аспартатаминотрансферазы (на 50%), лактатдегидрогеназы (на 87,6%) и индикатора холестаза: щелочной фосфатазы на 21,8% (см. табл.2)

Таблица 2 Биохимические показатели
Показатели	До моделирования ХТГ	После моделирования ХТГ
Аланинаминотрансфераза, моль/ч.л.	32,1	57,5
Аспартатаминотрансфераза, моль /ч.л.	10,8	16,2
Лактатдегидрогеназа, моль/ч.л.	29,9	56,1
Щелочная фосфатаза, моль/ч.л.	15,1	18,44
Триглицериды, моль/л	1,2	2,6

Создание модели привело к увеличению относительной массы печени (на 57,0%), количества безъядерных гепатоцитов и уменьшению содержанию двухъядерных гепатоцитов и Купферовских клеток (см. табл.3). Морфометрическими исследованиями препаратов печени выявлено снижение ядерно-цитоплазматического отношения, отношение стромы к паренхиме.

Таблица 3 Морфологические показатели
Показатели	До моделирования ХТГ	После моделирования ХТГ
Относительная масса печени, мг/г	32,1	50,4
Безъядерные гепатоциты, %	4,0	14,6
Двухъядерные гепатоциты, %	12,0	9,3
Купферовские клетки, %	4,3	2,8
Ядерно-цитоплазматическое отношение, у.е.	0,43	0,19
Отношение стромы к паренхиме, у.е.	0,25	0,13

На гистологических препаратах в поле зрения большое количество нектротизированных гепатоцитов, некоторые из них с вакуолизированными ядрами, видно огрубление и отек стромы, вокруг клеток в инфильтратах много лимфоцитов. Гепатоциты в состоянии белковой и жировой дистрофии, в основном находятся в перипортальной зоне.

Гистохимический анализ ткани печени показал снижение содержания гликогена (на 20,0%), активности сукцинатдегидрогеназы (на 14,2%) и АТФ-азы (на 33,9%), увеличение активности кислой (на 20,0%) и щелочной (на 76,4%) фосфатазы и количества липидов на 14,2% (см. табл.4).

Таблица 4 Гистохимические показатели
Показатели	До моделирования ХТГ	После моделирования ХТГ
Липиды, у.е.	8,4	9,6
Гликоген, у.е.	8,5	6,8
Сукцинатдегидрогеназа, у.е.	8,12	7,01
Кислая фосфатаза, у.е.	7,5	9,0
Щелочная фосфатаза, у.е.	8,9	15,7
АТФ-аза, у.е.	7,0	4,7

Предлагаемым способом воспроизводится надежная модель хронического токсического гепатита, что подтверждено морфогистохимическим анализом печени и биохимическими показателями. Модель позволяет изучать хроническую патологию печени в динамике его развития при воздействии токсичных химических веществ.

Предлагаемый способ моделирования хронического токсического гепатита, в сравнении с известным способом, позволяет безопасное воспроизвединие модели, при сокращенных сроках эксперимента и в более упрощенном виде приблизиться к клиническому течению хронической патологии печени вследствие развития структурных и функциональных изменений в гепатоцитах, что подтверждено морфогистохимическим анализом, биохимическими показателями и оценкой поведенческих реакций.

Предлагаемый способ моделирования хронической токсической гепатопатии является эффективным, позволяет изучать функциональные нарушения в печени в динамике развития и может быть использовано в разработке и поиске эффективных гепатозащитных средств для лечения и профилактики данной патологии.