способ прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции

Формула изобретения

Способ прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции путем определения в биологической жидкости уровня ИЛ-12, отличающийся тем, что в слизи цервикального канала определяют уровень ИЛ-12 и при его значениях 102,0 пг/мл и выше прогнозируют высокий риск невынашивания беременности в 1 и 2 триместре.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции.

Невынашивание беременности в настоящее время остается одной из самых актуальных и сложных проблем современного акушерства, несмотря на многочисленные исследования в этой области (В.М.Сидельникова, З.С.Ходжаева, А.А.Агаджанова и др. Актуальные проблемы невынашивания беременности: цикл клинических лекций. - М: Медицина, 2001. - 167 с.).

В генезе невынашивания беременности важная роль отводится активации клеток иммунной системы и изменению уровня продуцируемых цитокинов. Основными факторами, стимулирующими синтез цитокинов в моноцитах, макрофагах с последующим развитием каскада патологических иммунных реакций, являются инфекционные агенты, приводящие к увеличению продукции провоспалительных цитокинов или дисбалансу соотношения оппозиционных пулов, следствием чего является цитокин-опосредованное поражение эмбриона и развитие преждевременной родовой деятельности. (Г.Т.Сухих, Л.В.Ванько. Иммунные механизмы в физиологии и патологии беременности // Иммунология, 2005. - Т.9. - №2. - С.103-108). Все вышеизложенное определяет необходимость разработки прогностических критериев невынашивания беременности при урогенитальной инфекции, что позволит снизить процент плодовых потерь за счет своевременного формирования групп риска и комплекса лечебно-профилактических мероприятий.

На сегодняшний день ранней диагностике и прогнозированию угрожающих состояний беременности посвящено значительное количество работ. При этом просматриваются два основных направления разрабатываемых методик: биохимические и иммунологические, с одной стороны и инструментальные - с другой. При этом к инструментальным в основном относятся методы УЗИ.

Из первой группы методов известен способ прогнозирования угрозы прерывания беременности в ранние сроки путем определения в периферической крови концентрации фактора угнетающего миграцию лейкоцитов до и после однократной иммунизации донорскими лейкоцитами (патент РФ №2014598, 1994).

Недостатками способа являются техническая сложность выполнения, а также невозможность динамического наблюдения за состоянием беременности с помощью этого метода.

Известен способ ранней диагностики невынашивания беременности путем определения в периферической крови относительного содержания нейтрофилов, имеющих на своей поверхности структуры, реагирующие с трофобластическим Х-гликопротеидом (патент РФ №2077729, 1997). К недостаткам метода относятся его трудоемкость и неспецифичность.

Известен способ доклинического прогнозирования невынашивания беременности путем определения в плазме крови содержания фибрин-мономерных комплексов. По их величине прогнозируют прерывание беременности в I, II или III триместрах (патент РФ №2123698, 1998). К недостаткам метода относится его неспецифичность.

Известен способ прогнозирования угрозы прерывания беременности по определению концентрации эстриола, плацентарного лактогена и интерлейкина (ИЛ)-6 в сыворотке крови (патент РФ №2285926, 2006).

Известен способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности путем определения содержания периферических Т-лимфоцитов до и после инкубации с АМГФ (патент №2077727, 1997).

Недостатком данных способов является их трудоемкость.

Известен способ прогнозирования невынашивания беременности путем ультразвукового исследования органов малого таза и определения в сыворотке крови прогестерона, хорионического гонадотропина и уровня альфа-2-микроглобулина в сыворотке крови (патент РФ №2004135161, 2006). Недостатком данного способа является его неспецифичность.

Известен способ прогноза невынашивания беременности путем определения содержания цитокинов в периферической крови и слизи цервикального канала у женщин с невынашиванием беременности инфекционного генеза по уровню ИФН- и ИЛ-8 в периферической крови и слизи цервикального канала, повышение которых служит маркерами неблагополучия на ранних этапах беременности (Т.Н.Сумеди, Л.В.Ганковская, Е.Н.Долгина и др. Содержание цитокинов в периферической крови и слизи цервикального канала у женщин с невынашиванием беременности инфекционного генеза // Российский журнал иммунологии, 2005 г. - т.9. - N2. - стр.93-102). Недостатком данного способа является то, что он не позволяет провести диагностику угрозы прерывания беременности во 2 триместре.

Из вышеизложенного очевидно, что на сегодняшний день основными недостатками способов прогнозирования невынашивания беременности являются неспецифичность и трудоемкость.

Известен способ определения в сыворотке крови беременных с сексуально-трансмиссивными и условно-патогенными инфекциями ИЛ-12 и ИЛ-10 (О.В.Шитова, Э.Ю.Хагина, Н.А.Осна и др. Уровень ИЛ-10 и ИЛ-12 у беременных с сексуально-трансмиссивными и условно-патогенными инфекциями. // Медицинская иммунология, 1999 г. - T.1 - N2. - стр.94). Повышение уровня ИЛ-12 рассматривается авторами как фактор риска протекания беременности.

Однако в данной работе не обозначены конкретные значения по прогнозированию невынашивания беременности. Другим недостатком данного способа является то, что для повышения точности прогнозирования исследуется два маркера: ИЛ-10 и ИЛ-12, тогда как наши исследования показали, что достаточно исследовать один значимый маркер воспаления ИЛ-12. Также следует принимать во внимание, что при урогенитальной инфекции особо значимыми являются показатели местного иммунитета. В связи с этим, более целесообразно исследовать ИЛ-12 не в сыворотке крови, а в цервикальной слизи.

Данный способ принят нами за прототип.

Недостатки прототипа устраняются в заявляемом способе.

Задача изобретения - прогнозирование угрозы невынашивания беременности в 1 и 2 триместре при урогенитальной инфекции для назначения своевременных лечебных мероприятий.

Поставленная задача решается тем, что у беременных женщин с выявленной урогенитальной инфекцией в 1 и 2 триместре проводят определение в слизи цервикального канала уровня интерлейкина 12 (ИЛ-12) и при значении уровня ИЛ-12 в цервикальной слизи выше 102,0 пг/мл прогнозируют высокий риск невынашивания беременности в 1 и 2 триместрах.

Нами доказано, что данный способ обладает высокой точностью, чувствительностью и специфичностью.

ИЛ-12 является стимулятором выработки интерферона (ИФН- ), что дает возможность на более ранних сроках прогнозировать угрозу невынашивания беременности при наличие урогенитальной инфекции для проведения своевременных профилактических и лечебных мероприятий.

Нами в доступной литературе не выявлено использование определения уровня ИЛ-12 в цервикальной слизи в качестве скринингового маркера для доклинического прогнозирования угрозы невынашивания беременности при урогенитальной инфекции.

Известно, что ИЛ-12 является индуктором цитотоксических клеток и стимулятором выработки цитокинов (I.J.Elenkov, R.L.Wilder, V.К.Bakalov, et all. IL-12, TNF- and Hormonal Changes during Late Pregnancy and Early Postpartum: Implications for Autoimmune Disease Activity during These Times. // The Journal of Clinical Endocrinology, 2001. - Vol. - 86. - N.10. - p.4933-4938).

ИЛ-12 продуцируется макрофагами, дендритными клетками и В-лимфоцитами под влиянием стимуляции бактериальными продуктами типа ЛПС бактерий, тейхоевых кислот, пептидогликана, неметилированных CpG-последовательностей бактериальной ДНК. ИЛ-12 служит важнейшим связующим звеном между механизмами неспецифической защиты и специфического иммунитета. В процессе инициации иммунного ответа играет ключевую роль в направлении дифференцировки Т-хелперов в направлении Тh1, что опосредовано повышением продукции IFN-y. (A.C.Zenclussen, S.Fest, P.Busse, et all. Questioning the Th1/Th2 paradigm in reproduction: peripheral levels of IL-12 are down-regulated in miscarriage patients// Am J Reprod Immunol, 2002. - N 4. - p.245-51).

ИЛ-12 стимулирует цитолитическую активность NK-клеток, является фактором их пролиферации, обуславливает дифференцировку цитотоксических Т-лимфоцитов, увеличивает образование ЛАК-клеток.

Изучение местных компонентов иммунной системы позволит оценить уровень иммунологической резистентности и направленность иммунного ответа при воздействии урогенитальных патогенов. Все вышеуказанное явилось основанием к исследованию изменений уровня ИЛ-12 в слизи цервикального канала для прогноза невынашивания беременности при урогенитальной инфекции. Наши исследования позволили установить очень важные количественные величины ИЛ-12, которые являются определяющими для отбора беременных в группу риска.

Способ осуществляется следующим образом:

У беременной 1 или 2 триместра исследуют цервикальную слизь.

Смыв секрета цервикального канала производится 1 мл физиологического раствора, после чего аспират помещается в пробирку для гомогенизации. Определение уровня ИЛ-12 проводят методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем BIOSOURCE (Бельгия). Учет реакции проводят на мультискане (ORGANON TEHNIKA, Финляндия) при длине волны 450 нм. При выявлении уровня ИЛ-12 в цервикальной слизи 102,0 пг/мл и выше прогнозируют угрозу прерывания беременности, что позволяет акушеру-гинекологу своевременно назначить адекватную терапию.

Пример 1

Беременная И-ва, 22 лет. Беременность 2-я, в анамнезе самоаборт в сроке 10 недель. На учете в женской консультации состоит с 6 недель. При наружном осмотре - матка увеличена до 8 недель беременности, шейка размягчена по периферии, эндоцервицит. При ПЦР диагностике выявлены Herpes virus, Chlamidia trachomatis. Определен уровень ИЛ-12 в цервикальной слизи - 119,5 пг/мл. Заключение: прогнозируется высокий риск угрозы прерывания беременности. В сроке 11 недель появились клинические признаки угрозы прерывания беременности: боли внизу живота. Беременная госпитализирована в отделение патологии беременных с диагнозом: угроза самоаборта. При пальпации матка приходит в тонус, при осмотре шейка матки длиной 1,5 см, размягчена на всем протяжении. По данным УЗИ - участок отслойки ветвистого хориона.

В стационаре проведена антибактериальная и метаболическая терапия, однако боли внизу живота усилились, появились кровянистые выделения из половых путей. В сроке 12 недель произошло прерывание беременности, что подтвердило прогноз, сделанный по заявляемому способу.

Пример 2

Беременная Х-ва., 28 лет. Беременность 2-я, в анамнезе медицинский аборт в сроке 7 недель, хронический пиелонефрит, при предгравидарной подготовке - терапия трихомониаза, уреаплазмоза. Обратилась для планового обследования. Жалоб нет. При осмотре тело матки увеличено до 6-7 недель беременности, что соответствует периоду аменореи, наружный зев закрыт, шейка матки с признаками эндоцервицита. При ПЦР диагностике выявлены Ureaplasma urealiticum, HPV. Беременная обследована по заявляемому способу. ИЛ-12 в цервикальной слизи 101,8 пг/мл. Заключение: риск прерывания беременности отсутствует. Дальнейшее наблюдение за данной беременной не выявило осложнений в течение беременности. Роды произошли в срок. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3

Беременная Б-ко., 25 лет. Беременность 3-я, в анамнезе медицинский аборт. На учете в женской консультации по беременности состоит с 8 недель. Обследована, жалоб не предъявляла. При наружном осмотре - эндоцервицит, гипертрофия шейки матки. При ПЦР диагностике выявлены Ureaplasma urealiticum, Trichomonas vaginalis, Cytomegalovirus. Определен уровень ИЛ-12 в цервикальной слизи - 102,0 пг/мл. Заключение: прогнозируется высокий риск угрозы прерывания беременности. В сроке 14 недель беременности появились клинические признаки угрозы прерывания беременности: кровянистые выделения из половых путей, тянущие боли внизу живота. Беременная госпитализирована в специализированный стационар с диагнозом при поступлении: угроза самоаборта. При осмотре матка легко возбудима, размягчена на всем протяжении. По данным УЗИ - гипертонус задней стенки матки. Несмотря на проводимую сохраняющую и антибактериальную терапию, тянущие боли внизу живота усилились, перешли в схваткообразные. В сроке 15 недель произошло прерывание беременности, что подтвердило сделанный прогноз.

Достоверность способа подтверждена клинико-лабораторными исследованиями. По заявляемому способу было обследовано 50 женщин в 1 и 2 триместрах беременности с маркерами урогенитальной инфекции.

У 30 из них (1 группа) уровень ИЛ-12 в цервикальной слизи составил 102,0 пг/мл и выше, что свидетельствовало о риске невынашивания беременности и было подтверждено в процессе дальнейшего клинико-лабораторного наблюдения. У 20 беременных (2 группа) данные показатели были ниже, что предполагало благоприятное течение беременности. В первой группе процент угрозы прерывания составил 90%, в сравнении с 15% во 2-й группе.

Результаты статистического анализа в среде пакета прикладных программ STATISTIKA 6 позволили разработать прогностическое правило формирования групп риска среди беременных с выявленными маркерами урогенитальной инфекции с использованием метода логистической регрессии (Ребров О.Ю. "Статистический анализ медицинских данных", Москва, Медиа сфера, 2003). Полученное правило обеспечивает высокую точность, чувствительность и специфичность метода.

ТОЧНОСТЬ (ИП + ИО)/(ИП + ИО + ЛП + ЛО)		88,00%
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ИП/(ИП + ЛО)		90,00%
СПЕЦИФИЧНОСТЬ ИО/(ИО + ЛП)		85,00%
ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ ДОЛЯ ДИАГНОЗОВ	ЛП/(ЛП + ИО)	15,00%
ЛОЖНООТРИЦАТЕЛЬНАЯ ДОЛЯ ДИАГНОЗОВ	ЛО/(ИП + ЛО)	10,00%
ТОЧНОСТЬ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ	ИП/(ИП + ЛП)	90,00%
ТОЧНОСТЬ ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ	ИО/(ЛО + ИО)	85,00%

Преимущество заявляемого метода состоит в том, что у беременных с урогенитальной патологией на основании высокочувствительных современных лабораторных маркеров производится прогнозирование невынашивания беременности, с целью раннего назначения адекватной терапии. В клинической практике это позволит снизить угрозу перинатальных потерь за счет своевременного выявления беременных группы риска и начала адекватных лечебных мероприятий.

Данный способ неинвазивен, обладает быстротой исполнения с использованием стандартных тест-систем, что позволяет широко использовать его в практическом здравоохранении.