способ коррекции биологической активности молока и применение имунофана и амиксина для такой коррекции

Формула изобретения

1. Способ коррекции биологической активности молока путем введения самкам млекопитающих средства, индуцирующего обогащение продуцируемого ими молока биологически активными ингредиентами, отличающийся тем, что в качестве средства, индуцирующего обогащение молока иммуноглобулином, лейкоцитами или мононуклеарными клетками, используют иммуностимуляторы.

2. Способ по п.1. отличающийся тем, что в качестве иммуностимулятора используют имунофан, который вводят лактирующим самкам внутримышечно в начальный период лактации в дозе 0,0006-0,0008 мг/кг массы тела.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве иммуностимулятора используют амиксин, который вводят лактирующим самкам перорально в начальный период лактации в дозе 0,0017-0,0018 г/кг массы тела.

4. Применение имунофана в качестве средства коррекции биологической активности молока у самок млекопитающих.

5. Применение амиксина в качестве средства коррекции биологической активности молока у самок млекопитающих.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области сельского хозяйства, к ветеринарии.

Молоко - совершенный продукт природы. Среди продуктов питания человека оно играет важную роль. Человек употребляет в пищу молоко многих млекопитающих - коров, кобылиц, коз, лосей и реже - молоко других млекопитающих. В состав молока входят различные ингредиенты, обеспечивающие его высокую биологическую активность. Однако в процессе длительной селекции сельскохозяйственных животных произошло существенное снижение биологической активности, например, молока коров, что связано с отбором по признаку количества и жирности молока без учета его биологической активности. Поэтому задача коррекции биологической активности молока актуальна.

Известен способ коррекции биологической активности продуктов питания человека путем введения в них биологически активных ингредиентов, например витаминов, микроэлементов (Д.Тэтчел, Д.Веллс. Ты и твое питание. М., Росмэн, 1996, с.12-17) [1].

Данным известным способом биологически активные ингредиенты вводят в продукты экзогенно. Коррекции подлежат лишь некоторые составляющие биологической активности продуктов питания. Например, в молоко вводят витамины, микроэлементы, макроэлементы, но не описаны способы коррекции биологической активности молока за счет введения в него таких важных ингредиентов как иммуноглобулины, лейкоциты или мононуклеарные клетки. Введение в молоко таких ингредиентов обеспечит возможность использовать его в целях профилактики и лечения широкого спектра заболеваний при его употреблении в пищу.

Известен способ коррекции биологической активности молока путем введения самкам млекопитающих средства, индуцирующего обогащение продуцируемого ими молока биологически активными ингредиентами (Sarker S.A. at al. Successful treatment of rotavirus diarrhea in children with immunoglobulin from immunized bovine colostrum. Pediatr. Infect. Dis. J., 1998; 17:1149-1154) [2].

Данным известным способом коров иммунизируют ротавирусом, что приводит к коррекции биологической активности их молока - в нем повышается содержание антител к ротавирусу.

Однако коррекция биологической активности молока данным известным способом недостаточна.

Известен способ коррекции биологической активности молока путем введения самкам млекопитающих средства, индуцирующего обогащение продуцируемого ими молока биологически активными ингредиентами (Casswall Т.Н. at al. Treatment of Heliobacter pylori infection in infants in rural Bangladesh with oral immunoglobulins from hyperimmune bovine colostrums. Aliment. Pharmacol. Ther., 1998; 12:563-568) [3].

Данным известным способом предусмотрено введение самкам млекопитающих культуры клеток Heliobacter pylori (иммунизация самок), в результате чего в молоке самок повышается содержание антител к данному возбудителю инфекционного заболевания. Обогащение продуцируемого самками молока важными биологически активными ингредиентами в данном известном способе происходит эндогенно, естественным путем, что повышает качество целевого продукта, исключает риск внесения в него посторонней микрофлоры, что может происходить при экзогенном введении биологически активных ингредиентов в молоко.

Однако молоко, полученное от самок данным известным способом, обладает невысокой биологической активностью.

Известен гексапептид аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинин, получивший наименование имунофан, применяемый в качестве иммуностимулятора (Лесков В.П. Клиническая иммунология для врачей. М., «Медицина», 2005, [4] стр.126).

Однако применение имунофана в качестве средства, индуцирующего изменение биологической активности молока у самок млекопитающих, не описано.

Известно применение амиксина в качестве иммуностимулятора ([4], стр.126-128).

Однако его применение в качестве средства, индуцирующего изменение биологической активности молока у самок млекопитающих, не описано.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является повышение эффективности коррекции биологической активности молока, расширение ассортимента средств, индуцирующих коррекцию биологической активности молока.

Достигается указанный технический результат за счет того, что в способе коррекции биологической активности молока путем введения самкам млекопитающих средства, индуцирующего обогащение продуцируемого ими молока биологически активными ингредиентами, в качестве средства, индуцирующего обогащение молока иммуноглобулином, лейкоцитами или мононуклеарными клетками, используют иммуностимуляторы.

Целесообразно в качестве иммуностимулятора использовать имунофан, который вводят лактирующим самкам внутримышечно в начальный период лактации в дозе 0,0006-0,0008 мг/кг массы тела.

В качестве иммуностимулятора можно также использовать амиксин, который вводят лактирующим самкам перорально в начальный период лактации в дозе 0,0017-0,0018 г/кг массы тела.

Достигается указанный технический результат также рекомендацией применения имунофана по новому назначению - в качестве средства коррекции биологической активности молока у самок млекопитающих.

Достигается указанный технический результат также рекомендацией применения амиксина по новому назначению - в качестве средства коррекции биологической активности молока у самок млекопитающих.

Ниже приведены примеры, иллюстрирующие изобретение.

Пример 1.

10 особей лактирующих мышей - самок F ₁ (CBA×C57BL) разделили на две группы (опытную и контрольною) по 5 мышей в каждой группе. Самкам опытной группы в начальный период лактации (через сутки после родов) вводили внутримышечно иммуностимулятор имунофан в дозе 0,0006 мг/кг массы тела. Мышам контрольной группы иммуностимуляторы не вводили. На шестые сутки после родов в крови опытных животных содержание мононуклеарных клеток - продуцентов гамма-интерферона составляло 110·10 ⁶ кл./мл, а в крови контрольных животных - 46,67·10 ⁶ кл./мл. В молоке животных на третьи и шестые сутки после родов определяли содержание иммуноглобулина IgG, лейкоцитов и мононуклеарных клеток - продуцентов интерферонов. На третьи и на шестые сутки после родов содержание IgG в молоке повысилось, соответственно, на 8,2% и на 12,6% относительно его содержания в молоке контрольных животных. Повышение содержания лейкоцитов в молоке опытных животных по сравнению с их содержанием в молоке контрольных животных составило на третьи и на шестые сутки после родов, соответственно, 7,9% и 18,6%. В эти же сроки повысилось и содержание мононуклеарных клеток, соответственно, на 9,2% и на 21,8% по сравнению с контролем.

Пример 2.

10 особей лактирующих мышей - самок F₁ (CBA×C57BL) разделили на две группы (опытную и контрольную) по 5 мышей в каждой группе. Самкам опытной группы через сутки после родов вводили внутримышечно иммуностимулятор имунофан в дозе 0,0008 мг/кг массы тела. Мышам контрольной группы иммуностимуляторы не вводили. На шестые сутки после родов в крови опытных животных содержание мононуклеарных клеток - продуцентов гамма-интерферона составляло 122,67·10 кл./мл, а в крови контрольных животных - 54,61·10⁶ кл./мл. В молоке животных на третьи и шестые сутки после родов определяли содержание иммуноглобулина IgG, лейкоцитов и мононуклеарных клеток - продуцентов интерферонов. На третьи и на шестые сутки после родов содержание IgG в молоке повысилось, соответственно, на 8,4% и на 12,8% относительно его содержания в молоке контрольных животных. Повышение содержания лейкоцитов в молоке опытных животных по сравнению и их содержанием в молоке контрольных животных составило на третьи и шестые сутки после родов, соответственно, 8,4% и 18,88%. В эти же сроки повысилось и содержание мононуклеарных клеток, соответственно, на 9,6% и на 22,1% по сравнению с контролем.

Пример 3.

10 особей лактирующих мышей - самок F₁ (CBA×C57BL) разделили на две группы (опытную и контрольную) по 5 мышей в каждой группе. Самкам опытной группы через сутки после родов вводили перорально иммуностимулятор амиксин в дозе 0,0017 г/кг массы тела. Мышам контрольной группы иммуностимуляторы не вводили. На шестые сутки после родов в крови опытных животных содержание мононуклеарных клеток - продуцентов гамма-интерферона составляло 108·10⁶ кл./мл, а в крови контрольных животных - 45,67·10⁶ кл./мл. В молоке животных на третьи и шестые сутки после родов определяли содержание иммуноглобулина IgG, лейкоцитов и мононуклеарных клеток - продуцентов интерферонов. На третьи и на шестые сутки после родов содержание IgG в молоке повысилось, соответственно, на 8,3% и на 12,4% относительно его содержания в молоке контрольных животных. Повышение содержания лейкоцитов в молоке опытных животных по сравнению и их содержанием в молоке контрольных животных составило на третьи и шестые сутки после родов, соответственно, 7,7% и 18,8%. В эти же сроки повысилось и содержание мононуклеарных клеток, соответственно, на 9,5% и на 21,5% по сравнению с контролем.

Пример 4.

10 особей лактирующих мышей - самок F₁ (CBA×C57BL) разделили на две группы (опытную и контрольную) по 5 мышей в каждой группе. Самкам опытной группы через сутки после родов вводили перорально иммуностимулятор амиксин в дозе 0,0018 г/кг массы тела. Мышам контрольной группы иммуностимуляторы не вводили. На шестые сутки после родов в крови опытных животных содержание мононуклеарных клеток - продуцентов гамма-интерферона составляло 122,27·10⁶ кл./мл, а в крови контрольных животных - 54,65·10⁶ кл./мл. В молоке животных на третьи и шестые сутки после родов определяли содержание иммуноглобулина IgG, лейкоцитов и мононуклеарных клеток - продуцентов интерферонов. На третьи и на шестые сутки после родов содержание IgG в молоке повысилось, соответственно, на 8,2% и на 12,6% относительно его содержания в молоке контрольных животных. Повышение содержания лейкоцитов в молоке опытных животных по сравнению и их содержанием в молоке контрольных животных повысилось, соответственно, на 8,8% и на 18,5%. В эти же сроки повысилось и содержание мононуклеарных клеток, соответственно, на 9,5% и на 22,3% по сравнению с контролем.

Пример 5.

В экспериментах использовали 15 черно-пестрых коров Холмогорской породы весом 450-550 кг, возраст 4-6 лет через месяц после отела. Коров разбили на три группы по 5 коров в группе. 1 группе коров (№№1-5) вводили имунофан 0,15 мг, в/м, 10 инъекций ежедневно. Второй группе (№№6-10) вводили глутоксим по 20 мг, в/м, 10 инъекций ежедневно. Третья группа (№№11-15) - контроль. Через 10 дней после последней инъекции оценивали содержание в молоке лейкоцитов и IgG. Для подсчета лейкоцитов 10 мл молока центрифугировали 10 мин при 1100 об/мин. Затем в том же режиме трижды отмывали физиологическим раствором. После отмывания к осадку добавляли до 1 мл физиологического раствора и генцианвиолета. Число окрашенных лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева. Содержание IgG определяли методом ИФА с использованием моноклональных антител к IgG коровы. Результаты исследований представлены в таблице 1.

№	Кличка животного	Белок %	С. В-ВА%	Пл-ть	Кол-во Лейкоцитов В 100 мл	IgGМг/л
1	Сводка	3,7	9,71	27,3	8	290
2	Точка	3,1	11,5	29,0	6	295
3	Тихоня	3,2	11,53	31,3	7	300
4	Темень	3,7	11,84	26,8	6	320
5	Сережка	3,1	11,4	29,8	8	300
6	Селянка	2,82	10,00	28,0	11	285
7	Свеча	2,8	10,68	26,9	13	290
8	Опилка	2,83	10,28	27,9	12	270
9	Рогожа	2,99	9,58	29,5	9	280
10	Пехота	2,6	13,84	22,3	10	282
11	Тихая	3,0	9,50	29,7	8	220
12	Петунья	3,02	11,10	29,9	8	280
13	Синелька	3,08	10,50	30,5	7	240
14	Пестрянка	3,1	10,80	30,6	6	265
15	Титания	2,91	11,00	28,7	9	270

В таблице 2 представлены средние значения содержания в молоке лейкоцитов и IgG

ТАБЛИЦА 2
№ группы	Используемый иммуностимулятор	Содержание клеток в молоке в тыс./ 100 мл	Содержание IgG, мг/л
1	Имунофан	7±0,9	300±10
2	Глутоксим	11±1,4	282±6,6
3	Нет (контроль)	7,6±1	265±22
Примечание: ± - доверительный интервал.

Из таблиц видно, что через десять дней после прекращения введения иммуностимуляторов содержание лейкоцитов в молоке коров, которым вводили глутоксим, статистически достоверно повышается. Содержание IgG статистически достоверно повышается у коров, которым вводили иммунофан. Предполагается, что совместное введение этих препаратов может повысить содержание в молоке как лейкоцитов, так и IgG.

В таблице 3 приведены результаты введения коровам амиксина в сравнении с контрольными особями.

Таблица 3
№	Кличка животного	Кол-во Лейкоцитов В 100 мл	IgG Мг/л
АМИКСИН
1	Рогатка	8	295
2	Пестрая	6	295
3	Петелька	7	300
КОНТРОЛЬ
4	Тихая	8	220
5	Петунья	8	280
6	Синелька	7	240
7	Пестрянка	6	265
8	Титания	9	270

Пример 6.

Мышам-самкам F₁ (CBA×C57BL) (no 5 мышей в группе) через сутки после родов вводили диуцифон 250 мкг/животное. Через сутки оценивали содержание клеток-продуцентов гамма-интерферона методом Elisspot. Показали, что количество клеток-продуцентов гамма-интерферона увеличивается с 46,67±7,94 на 10⁶ мононуклеарных клеток в контроле до 88±10,5 у животных, которым вводили диуцифон.

Из представленных выше результатов видно, что под действием иммуностимуляторов увеличивается иммунологический потенциал молока. Об этом свидетельствует увеличение содержания в молоке IgG и лейкоцитов. IgG - основной иммуноглобулин, ответственный за нейтрализацию патогенных микроорганизмов. Лейкоциты - клетки, выделяющие субстанции (интерфероны, интерлейкины, лактоферрин и т.п.), способствующие становлению иммунной и кроветворной систем, снижающие аллергизацию организма.

Таким образом, изобретение позволяет расширить ассортимент средств, способствующих коррекции биологической активности молока млекопитающих животных в сторону ее повышения. Применение этих средств для коров обеспечит получение молока с улучшенными биологическими свойствами. Эти средства обеспечивают повышение содержания в молоке иммуноглобулинов, которые способствуют укреплению иммунитета человека при употреблении в пищу такого молока. Средства повышают также содержание в молоке лейкоцитов, поглощающих клетки болезнетворных микроорганизмов. Повышается в молоке и содержание мононуклеарных клеток, которые являются продуцентами интерферонов. Применение этих средств способом согласно изобретению позволяет исключить использование приемов по экзогенному пополнению молока необходимыми, важными для человека биологически активными ингредиентами. Рекомендуемые изобретением средства являются средствами изменения, улучшения состава молока, повышения его биологической активности, обогащения его качественным и количественным составом важных биологически активных ингредиентов.