1,4,5,6-тетрагидро-6-оксо-5-(2-пиперазиноэтил)-4-фенил-3-(4-хлорфенил)пирроло[3, 4-с]пиразола дигидрохлорид, проявляющий гипотензивную и антикоагулянтную активности

Формула изобретения

1,4,5,6-Тетрагидро-6-оксо-5-(2-пиперазиноэтил)-4-фенил-3-(4-хлорфенил)пирроло[3,4-с]пиразола дигидрохлорид формулы

обладающий гипотензивной и антикоагулянтной активностями.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новому биологически активному веществу ряда пирроло[3,4-с]пиразола, а именно к 1,4,5,6-тетрагидро-6-оксо-5-(2-гиперазиноэтил)-4-фенил-3-(4-хлорфенил)пирроло[3,4-с]пиразола дигидрохлориду формулы:

обладающему гипотензивной и антикоагулянтной активностью, что позволяет предполагать возможность использования его в медицине в качестве препарата, эффективно снижающего артериальное давление и свертываемость крови и тем самым оказывающего лечебное действие и предотвращающего развитие различных осложнений при гипертонической болезни.

Ближайшим структурным аналогом заявляемого соединения является 5-(2-аминоэтил)-1,4,5,6-тетрагидро-3-метил-6-оксо-4-фенилпирроло[3,4-с]пиразола гидрохлорид (Касимова Н.Н. Синтез, свойства и биологическая активность 1-аминоалкил- и 1-диалкиламиноалкил-4-ацил-5-арил-3-гидрокси-3-пирролин-2-онов: Дисс. ... канд. фармацевт. наук / Перм. гос. фармацевт. акад. - Пермь, 2002. - с.119) формулы:

который взят за прототип и не обладает гипотензивным и антикоагулянтным действием.

Эталонами сравнения являются гепарин (Машковский М.Д. Лекарственные средства: Практ. пособие. - 15 изд. - М.: «Новая волна», 2005. - с.475), который применяется в медицинской практике и является аналогом по антикоагулянтному действию, и папаверин (там же, с.412) формулы:

который применяется в медицинской практике и является аналогом по гипотензивному действию.

Сущность изобретения - поиск в ряду пирроло[3,4-с]пиразолов соединения с выраженной гипотензивной и антикоагулянтной активностью, снижающего артериальное давление и свертываемость крови. Это достигается синтезом 1,4,5,6-тетрагидро-6-оксо-5-(2-пиперазиноэтил)-4-фенил-3-(4-хлорфенил)пирроло[3,4-с]пиразола дигидрохлорида, обладающего гипотензивным и антикоагулянтным действием.

Заявляемое соединение получают взаимодействием 1-(2-пиперазиноэтил)-5-фенил-4-(4-хлорбензоил)-3-гидрокси-3-пирролин-2-она дигидрохлорида с гидразин гидратом по схеме:

Пример получения заявляемого соединения.

Пример

1,4,5,6-Тетрагидро-6-оксо-5-(2-пиперазиноэтил)-4-фенил-3-(4-хлорфенил)пирроло[3,4-с]пиразола дигидрохдорид.

К раствору 4.99 г (0.01 М) 1-(2-пиперазиноэтил)-5-фенил-4-(4-хлорбензоил)-3-гидрокси-3-пирролин-2-она дигидрохлорида в 5 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 0.54 мл (0.011 М) 98%-го гидразин гидрата и кипятят в течение 1.5 ч. После охлаждения реакционную смесь выпаривают, остаток перекристаллизовывают из этанола. Выход 1.63 г (33%). Т.пл.: >310°С. Найдено, %: С 55.79; Н 5.25; N 14.11. С₂₃Н ₂₆Cl₃N₅O. Вычислено, %: С 55.82; Н 5.30; N 14.15.

Заявляемое соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в воде, этаноле, диметилформамиде, диметилсульфоксиде.

ИК спектр (SPECORD, вазелиновое масло, , см^-1): 1703 (CON), 3100 (NH), 3400 (N⁺H, N⁺H ₂).

ПМР спектр (MERCURY 300, 300.055 МГц, DMSO-D ₆, GMDS, , м.д.): 2.75 (1Н, m, C₍₁₎H _AH_B), 3.32 (10H, m, N(CH ₂)₅), 3.95 (1H, m, C ₍₁₎H_AH_B), 6.07 (1H, s, С₍₄₎H), 7.32 (7H, H _аром), 7.43 (2Н, Н_пром), 9.56 (2Н, b.s, N⁺H₂), 14.13 (1H, b.s, NH).

Заявляемое соединение и аналог по структуре испытывали на гипотензивную активность. Эксперименты проведены на наркотизированных мединалом (400 мг/кг, внутрибрюшинно) кошках. Вещества испытывали в одинаковой дозе 5 мг/кг, вводили растворенными в 3 мл изотонического раствора хлорида натрия в бедренную вену в течение 2 мин. Артериальное давление измеряли в сонной артерии прямым способом с помощью ртутного манометра, фиксируя уровень давления на ленте кимографа через определенные промежутки времени. В качестве эталона сравнения использовали известное гипотензивное лекарственное средство папаверина гидрохлорид, который испытывали в дозе 3 мг/кг (1/10 ЛД₅₀). Результаты обрабатывали с использованием коэффициента Стъюдента (Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии, М., 2000, с.312-313).

Таблица 1 Гипотензивная активность соединения МС-13 в дозе 5 мг/кг
Стат. показат.	АД исх.	5 мин	15 мин	30 мин	60 мин	120 мин	180 мин	240 мин	300 мин
М	114.9	67.2	70.3	71.1	72.6	70.9	70.3	86.6	91.7
м	8.91	10.85	11.38	11.82	9.76	12.37	12.60	12.94	13.07
p	-	<0.01	<0.01	<0.02	<0.01	0.02	<0.02	>0.05	>0.05
р - в сравнении с исходным АД

Как видно из табл.1, заявляемое соединение оказывает выраженное гипотензивное действие, снижая артериальное давление с 5 мин после введения (р<0.01), при этом гипотензивный эффект сохраняется на протяжении всего времени наблюдения (более 6 часов). Максимальное снижение давления наблюдается через 5-15 мин после введения и составляет 41.5-38.8%.

Аналог по структуре активности не проявил.

Результаты испытания эталона сравнения приведены в табл.2, из которой видно, что под влиянием папаверина гидрохлорида артериальное давление снижается максимально на 34.4% и сохраняется на протяжении только 2 мин.

Таблица 2 Гипотензивная активность папаверина гидрохлорида в дозе 3 мг/кг (1/10 ЛД 50)
Стат. показатель	АД исх.	минуты
		1	2	5	10	15	20	30
М	112.8	91.2	74.0	101.6	111.6	112.0	111.2	110.8
м	3.49	3.49	5.75	8.48	1.85	3.01	2.48	2.58
p	-	<0.01	<0.01	>0.05	>0.05	>0.05	>0.05	>0.05
р - в сравнении с исходным АД

Заявляемое соединение и аналог по структуре исследовали на наличие антикоагулянтной активности. Опыты проведены с помощью коагулометра «Минилаб 701». Для исследования использовали цитратную (3.8%) кровь (9:1) собаки. Влияние соединений на свертываемость крови испытывали в концентрации 1 мг/мл крови. В качестве эталона антикоагулянтной активности использовали раствор гепарина, который испытывали в концентрации 1 ЕД/мл крови. В каждой серии опытов было использовано восемь животных. Степень антикоагулянтной активности соединений определяли по изменению времени свертывания цитратной крови в сравнении с контролем и эталоном. Результаты обрабатывали с использованием коэффициента Стъюдента. (Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии, М., 2000, с.312-313). Результаты испытаний представлены в таблице 3.

Таблица 3 Влияние на свертывающую систему крови заявляемого соединения и эталона сравнения
Соединение	Время свертывания, с		% изменения свертываемости	Р
	контроль	опыт
1,4,5,6-Тетрагидро-6-оксо-5-(2-пиперазиноэтил)-4-фенил-3-(4-хлорфенил)пирроло[3,4-с]пиразола дигидрохлорид	34.3±2.18	41.5±2.03	-21.0	<0.05
5-(2-Аминоэтил)-1,4,5,6-тетрагидро-3-метил-6-оксо-4-фенилпирроло[3,4-с]пиразола гидрохлорид	45.1±1.69	50.1±2.35	-11.0	>0.05
Гепарин	29.9±0.48	36.6±1.82	-22.4	<0.01

Как видно из табл.3, заявляемое соединение проявляет прямое антикоагулянтное действие, так как достоверно увеличивает время свертывания цитратной крови на 30.4%. Его структурный аналог достоверным антикоагулянтным эффектом не обладает. Эталон сравнения гепарин замедляет свертывание на 22.4%.

Таким образом, заявляемое соединение проявляет 2 вида активности - гипотензивную и прямую антикоагулянтную. Такое сочетание активностей имеет большое практическое значение, т.к. при гипертонической болезни помимо повышения артериального давления обычно наблюдается повышение свертывающей активности крови, что приводит к различным тромбоэмболических осложнениям (инфаркт миокарда, ишемический инсульт).

Острую токсичность заявляемого соединения определяли на беспородных белых мышах обоего пола массой 16-18 г. Соединение вводили внутрибрюшинно и внутривенно в виде водного раствора из расчета 0.1 мл на 10 г массы животного в возрастающих дозах. Результаты обрабатывали по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы ЛД ₅₀ при Р=0.05 (Прозоровский, В.Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки / В.Б.Прозоровский, М.П.Прозоровская, В.М.Демченко // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т.41, №4. - с.497-502).

Установлено, что острая токсичность (ЛД₅₀ ) заявляемого соединения при внутрибрюшинном введении составляет 1460.0 (610.4-2734.4) мг/кг, а при внутривенном - 467.2 (195.3-875.0) мг/кг.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект №04-03-96042).

Источники информации

1. Касимова Н.Н. Синтез, свойства и биологическая активность 1-аминоалкил- и 1-диалкиламиноалкил-4-ацил-5-арил-3-гидрокси-3-пирролин-2-онов: Дисс. ... канд. фармацевт. наук / Перм. гос. фармацевт. акад. - Пермь, 2002. - с.119.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Практ. пособие. - 15 изд. - М.: Новая волна, 2005. - с.475.

3. Там же, с.412.

4. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии, М., 2000, с.312-313.

5. Прозоровский, В.Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки / В.Б.Прозоровский, М.П.Прозоровская, В.М.Демченко // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т.41, №4. - с.497-502.